抑制c-MET二聚化的新型抗体及其用途
【专利摘要】本发明涉及抑制c-MET二聚化的新型抗体及其用途。具体地，本发明涉及选择能够抑制c-Met的配体依赖性和配体非依赖性激活的抗c-Met抗体的方法。更具体地，所述的方法基于对c-Met二聚化的抑制。另一方面，本发明涉及用于制备治疗恶性肿瘤的药物的这种抗体和包含这种抗体的组合物。诊断方法和试剂盒也是本发明的一部分。
【专利说明】抑制c-MET 二聚化的新型抗体及其用途
[0001]本申请是申请号为200880024368.4，申请日为2008年7月10日，发明名称为“抑制c-MET 二聚化的新型抗体及其用途”的中国专利申请的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及能够特异性结合人C-Met受体和/或能够特异性抑制所述受体的酪氨酸激酶活性的新型抗体，特别是鼠的，嵌合的和人源化来源的单克隆抗体，以及编码这些抗体的氨基酸和核苷酸序列。更具体而言，本发明所述的抗体能够抑制c-Met 二聚化。本发明也包含这些抗体作为药物在预防性和/或治疗性处理恶性肿瘤或与所述受体过表达有关的任何病变中的用途，以及在诊断与c-Met过表达有关的疾病的过程中和试剂盒中的用途。本发明最后包含含有所述抗体联合针对在肿瘤进展或转移中涉及的其他生长因子的其他抗体和/或化学化合物，和/或化合物和/或抗恶性肿瘤制剂或与毒素结合的制剂的产品和/或组合物，以及它们在预防和/或治疗某些恶性肿瘤中的用途。
【背景技术】
[0003]已经显示，受体酪氨酸激酶(RTK)靶向剂如曲妥单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、伊马替尼和吉非替尼抑制剂有利于以该蛋白质类为靶标用于治疗选定的恶性肿瘤。
[0004]c-Met是RTK亚家族的原型成员，该亚家族也包括RON和SEA。c_Met RTK家族与其他RTK家族在结构上有区别并且是 肝细胞生长因子(HGF，也称离散因子，SF)的唯一已知的高亲和性受体[D.P.Bottaro et al, Sciencel991, 251:802-804;L.Naldini et al, Eur.Mol.Biol.0rg.J.1991，10:2867-2878]。c-Met 和 HGF 在多种组织中广泛表达，它们的表达一般分别限定于上皮和间充质来源的细胞[M.F.DiRenzo et al., 0ncogenel991, 6:1997-2003;E.Sonnenberg et al.，J.Cell.Biol.1993，123:223-235]。两者对于正常的哺乳动物的发育都是必需的，并且已经表明它们在细胞迁移、形态分化和三维管状结构的组织以及生长和血管发生中特别重要[RBaldt et al., Naturel995, 376 =768-771; C.Schmidt et al., Nature.1995:373:699-702;Tsarfaty et al.,Sciencel994, 263:98-101]。已经表明，c-Met和HGF受控制的调节在哺乳动物发育、组织保持和修复中是重要的[Nagayama T, Nagayama M, Kohara S，Kamiguchi H, Shibuya M, Katoh Y, ItohJ,Shinohara Y., Brain Res.2004, 5;999(2):155-66;Tahara Y, Ido A, Yamamoto S, MiyataY, Uto H, Hori T, Hayashi K, Tsubouchi H., J Pharmacol Exp Ther.2003, 307 (I):146-51]，它们的失调涉及到恶性肿瘤的进展。
[0005]c-Met的不适当的激活导致的异常信号传导是在人的恶性肿瘤中观察到的最常见的改变之一，在肿瘤发生和转移中起关键作用[Birchmeier et al., Nat.Rev.Mol.CellBiol.2003，4:915-925 ; L.Trusolino 和 Comoglio P.M., Nat Rev.Cancer.2002, 2 (4):289-300]。
[0006]不适当的c-Met激活可通过配体依赖性和非依赖性机制(包括c-Met过表达，和/或旁分泌或自分泌激活)发生，或通过获得性功能突变发生[J.G.Christensen, BurrowsJ.and Salgia R., Cancer Latters.2005，226:1-26]。然而，在配体存在或不存在情况下的c-Met受体的寡聚化在调节激酶对ATP和含酪氨酸的肽底物的结合亲和力和结合动力学中是必需的[Hays JL, Watowich SJ, Biochemistry, 2004Augl7, 43: 10570-8]。激活的c-Met募集信号传导效应物到它位于胞质区中的多停泊位点(multidockingsite)，导致几个关键的信号传导途径的激活，这些信号传导途径包括Ras-MAPK、PI3K、Src 和 Stat3[Gao CF, Vande Woude GF, Cell Res.2005, 15(1):49-51;Furge KA, ZhangYW, Vande Woude GF, Oncogene.2000, 19 (49):5582-9]。这些途径对于肿瘤细胞的增殖、浸润和血管生成和对于逃避细胞凋亡是必需的[Furge KA, Zhang Yff, Vande WoudeGF, Oncogene, 2000,19 (49):5582-9;Gu H, Neel BG,Trends Cell Biol.2003Mar, 13(3):122-30; Fan S，Ma YXj Wang JA，Yuan RQ，Meng Q，Cao Yj Laterra JJj Goldberg ID, RosenEMj Oncogene.2000Apr27, 19(18):2212-23]。此外，相对于其他 RTK，c_Met 信号传导的独特之处在于已经报道的它与粘着斑复合物和非激酶结合伙伴如α6β4整合素[TrusolinoLj Bertotti A,Comoglio PM，Cell.2001，107:643-54]，CD44v6[Van der Voort Rj TaherTE, Wielenga VJj Spaargaren Mj Prevo R，Smit Lj David G，Hartmann G，GherardiEj Pals STjJ Biol Chem.1999，274 (10):6499-506]，Plexin BI 或信号素(semaphorin)[Giordano S，Corso S，Conrotto P，Artigiani S，Gilestro G，Barberis D，TamagnoneLj Comoglio PM，Nat Cell Biol.2002，4 (9):720-4;Conrotto Pj Valdembri Dj CorsoS，Serini G，Tamagnone L，Comoglio PM, Bussolino F，Giordano S，Blood.2005，105 (11):4321-9;Conrotto P，Corso S，Gamberini S，Comoglio PM，Giordano S，Oncogene.2004，23:5131-7]之间的相互作用，这可进一步增加了这一受体调节细胞功能的复杂性。最后，近期的数据证明，c-Met可能涉及肿瘤对吉非替尼和埃罗替尼的抵抗，这提示联合靶向EGFR和c-Met 两者的化合物可能有重要意义[Engelman JA at al.，Science, 2007，316:1039-43]。
[0007]在过去几年中，已开发出许多不同策略用来减弱恶性肿瘤细胞系中的c-Met信号传导。这些策略包括i)抗c-Met或HGF/SF的中和抗体[Cao B，Su Y，OskarssonMj Zhao P,Kort EJj Fi sher RJj Wang LMj Vande Woude GFj Proc Natl Acad Sci U SA.2001，98(13):7443-8;Martens T，Schmidt NO, Eckerich C，Fillbrandt Rj MerchantMj Schwall Rj Westphal Mj Lamszus K，Clin Cancer Res.2006，12 (20):6144-52]或使用 HGF/SF 的拮抗剂 NK4 来阻止配体结合 c-Met [Kuba K, Matsumoto K，Date K, ShimuraH，Tanaka M，Nakamura T，Cancer Res.，2000，60:6737-43] ；ii) c-Met 的小 ATP 结合位点抑制剂来阻断激酶活性[Christensen JGj Schreck Rj Burrows Jj Kuruganti P，Chan E，LeP，Chen Jj Wang X，Ruslim L，Blake R，Lipson KE，Ramphal J，Do S，Cui JJ，CherringtonJMj Mendel DB, Cancer Res.2003，63:7345-55] ；iii)影响通向多停泊位点的工程化的 SH2区多肽，和降低受体或配体表达的RNAi或核酶。这些方法中的大部分表现出c-Met的选择性抑制，从而导致肿瘤的抑制，并且表明c-Met在恶性肿瘤的治疗性干预中可能是令人感兴趣的。
[0008]所产生的靶向c-Met的分子中，有些是抗体。
[0009]最广泛描述的是Genentech[W096/38557]生产的抗c_Met5D5抗体，其在多种模型中单独加入时作为强力激动剂起作用，当用作Fab片段时作为拮抗剂起作用。这一抗体的单价的工程化的形式被描述为单臂(0AOT5)，在大肠杆菌中作为重组蛋白质而产生，这也是Genentech专利申请[W02006/015371]的主题。然而，这一分子由于它特定的支架(scarfold)而不能被认为是抗体,它也表现出能产生对于人具有免疫原性的突变。在活性方面，这一未糖基化的分子不具有效应物的功能，并且最后没有清楚的数据证明，0A5D5抑制c-Met的二聚化。此外，当在G55体内模型(表达c-Met但不表达HGF mRNA和蛋白质的成胶质细胞瘤细胞系，其不依赖于配体而生长)中试验时，单臂抗c-Met对G55肿瘤生长无显著效应，这提示0A5D5主要通过阻断HGF结合起作用，并且不能够靶向不依赖于HGF而激活的肿瘤[Martens T.et al, Clin.Cancer Res., 2006, 12(20):6144-6152]。
[0010]Pfizer描述的另一个祀向c_Met的抗体是通过“主要作为c_Met拮抗剂,并且在有些情况下作为c-Met激动剂”起作用的抗体[W02005/016382]。该申请没有描述显示Pfizer抗体对c-Met 二聚化的任何效应的数据。
[0011]本发明的一个新的方面是产生没有内在的激动活性并且抑制C-Met 二聚化的鼠单克隆抗体。除了靶向配体依赖性肿瘤外，该方法也破坏由于c-Met过表达或细胞内区突变的配体非依赖性c-Met激活，这种激活依旧依赖于寡聚化以进行细胞信号传导。这种抗体活性的另一方面可能是对c-Met和其伙伴之间的相互作用的产生空间位阻从而破坏c-Met的功能。除了与特异性阻断c-Met受体有关的功能之外，优选地这些抗体是人源化的和工程化的作为人IgGl以获得效应物功能如ADCC和⑶C，但不限于此。
【发明内容】
[0012]令人惊讶地， 发明人第一次设法产生了能够结合c-Met也能够抑制c-Met 二聚化的抗体。在现有技术中，有时候提示能够抑制c-Met与其伙伴二聚化的抗体可能是令人感兴趣的抗体，如果这是真的话，也从来没有公开过，或清楚的提示有抗体能够做到这一点。此外，关于抗体的特异性，成功产生这种活性抗体根本是不明显的。
[0013]第一方面，本发明的主题是产生和选择本发明所述的抗体的方法。
[0014]更具体地，本发明涉及选择能够抑制配体依赖性和配体非依赖性C-Met激活的抗c-Met抗体或其功能片段之一或衍生物的方法，所述的方法包含下述步骤:
[0015]i)筛选所产生的抗体,选择能够特异性结合c-Met的抗体；
[0016]ii)体外评价步骤i)中选定的抗体，并且选择能够至少50%,优选至少60%, 70%或80%地抑制至少一种肿瘤类型的肿瘤细胞增殖的抗体；
[0017]iii)试验步骤ii)中选定的抗体,选择能够抑制c_Met 二聚化的抗体。
[0018]如前面所解释的，由于这种抗体对于更大人群的病人具有实际的意义，抑制C-Met二聚化是本发明的首要方面。不仅配体依赖性激活的c-Met恶性肿瘤(正如直到本发明的情况)，而且配体非依赖性激活的c-Met恶性肿瘤也能通过本发明所述的方法产生的抗体进行治疗。
[0019]抗体的产生可通过本领域技术人员已知的任何方法来实现，例如，将骨髓瘤细胞与从免疫小鼠或任何其他与选定的骨髓瘤细胞相容的物种获得的脾细胞融合[Kohler&Milstein, 1975，Nature, 256:495-497]。免疫动物可包括带有人免疫球蛋白质位点的转基因鼠，其然后能直接产生人抗体。其他可能的【具体实施方式】可能在于使用噬菌体显示技术以筛选文库。
[0020]筛选步骤i)可通过本领域技术人员已知的任何方法或过程来实现。作为非限制性例子，可以提及的是ELISA、BIAcore、免疫组化、FACS分析和功能性筛选。优选的方法在于通过ELISA对c-Met重组蛋白质进行筛选，并且然后通过FACS分析至少一种肿瘤细胞系，以确定所产生的抗体也能够识别肿瘤细胞上天然的受体。这一方法将在下述的实施例中进行更精确的描述。
[0021]同样，步骤ii)也可通过已知的方法或过程来经典地实现，例如使用3H-胸腺嘧啶或任何其他DNA染色剂、MTT、ATP评价等。本发明中优选的肿瘤细胞模型可为BxPC3模型。
[0022]通过抑制c-Met 二聚化，必须理解它优选地为c_Met同二聚化。
[0023]在本发明所述的选择方法的步骤iii)的优选【具体实施方式】中，所述的步骤iii)在于通过BRET分析表达c-Met-RLuc/c-Met-YFP两者的细胞来评价抗体，并且选择能够至少30%，优选35%、40%、45%、50%、55%或最优选60%地抑制BRET信号的抗体。
[0024]BRET技术为已知技术，其是蛋白质二聚化的代表性技术[Angers etal, PNAS, 2000，97:3684-89]。
[0025]在该方法的步骤iii)中使用的BRET技术是本领域技术人员熟知的，并且将会在下述实施例中进行详细描述。更具体地，BRET(生物发光共振能量转移)是发生在生物发光供体(海肾荧光素酶(Renilla LuciferasejRluc))和荧光受体，GFP (绿色荧光蛋白质)或YFP(黄色荧光蛋白质)的突变体之间的非放射性能量转移。在本案中使用了 EYFP(增强型黄色荧光蛋白质)。转移的效率依赖于供体和受体之间的方向和距离。因此，只有当两个分子临近(1-1Onm)时才可能发生能量转移。这一属性用来进行蛋白质-蛋白质相互作用分析。实际上，为研究两个伙伴间的相互作用，第一个通过基因工程使其融合到海肾荧光素酶中，并且第二个融合到GFP的黄色突变体中。融合蛋白质一般但不是一定在哺乳动物细胞中表达。在其膜具有通透 性的底物(腔肠素(coelenterazine))存在条件下，Rluc发射蓝光。如果GFP突变体与Rluc接近大于10nm，可发生能量转移，并且可检测到另外的黄色信号。测量的BRET信号为受体发射的光和供体发射的光的比率。因此，当使两个融合蛋白接近或如果构象变化使Rluc和GFP突变体更近时，BRET信号将会增加。
[0026]如果BRET分析是一个优选的【具体实施方式】的话，本领域技术人员已知的任何方法可用来测量c-Met 二聚化。非限制性地，下述技术可被提及:FRET (荧光共振能量转移)，HTRF(均相时间分辨荧光)，FUM(荧光寿命成像显微镜)或SW-FCCS ((单波长荧光相关光谱法(single wavelength fluorescence cross-correlation spectroscopy))。
[0027]也可使用其他经典的技术，如免疫共沉淀，α筛选，化学交联，双杂交，亲和层析，ELISA 或远端 western 印迹(Far western blot)。
[0028]第二方面，本发明的主题为通过所述的方法获得的分离的抗体或其功能片段之一或衍生物。所述的抗体或其所述的功能片段之一或衍生物能够特异性结合到人c-Met，并且，如果必要，优选地还能够抑制其配体HGF的天然结合和/或能够特异性抑制所述c-Met的酪氨酸激酶活性，所述的抗体也能够抑制c-Met的二聚化。更具体地，所述的抗体能够抑制c-Met的配体依赖性和配体非依赖性激活。
[0029]“功能性片段和衍生物”的表述此后会在本说明书中进行详细的限定。
[0030]在此必须理解，本发明不涉及天然形式的抗体，也就是说，这些抗体不是在其天然的环境中，而是它们能够从天然来源中通过纯化被分离或获得，或还可通过基因重组获得，或通过化学合成获得，因此，它们含有非天然氨基酸，这一点会进一步描述。[0031]更具体地，根据本发明所述的另一方面，其要求保护抗体或其功能片段之一或衍生物，所述的抗体的特征在于其包含至少一个互补决定区⑶R，所述⑶R选自包含氨基酸序列 SEQ ID N0.1 至 17 和 56 至 61 的 CDR。
[0032]含有至少一个⑶R，该⑶R的序列在与序列SEQ ID N0.1至17和56至61进行优化比对后，至少具有80%的同一性，优选地85%、90%、95%或98%的同一性的任何抗体或片段或衍生物，都应理解为本发明的等同物，因此，也是本发明的一部分。
[0033]⑶R区或⑶R的意思是指IMGT限定的免疫球蛋白质的重链和轻链的高变区。
[0034]IMGT特有编号(IMGT unique numbering)被限定用来比较可变区，而不论抗原受体、链的类型或物种[Lefranc M.-P., Immunology Todayl8, 509 (1997) /LefrancΜ.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) /Lefranc, M.-P., Pommie, C, Ruiz, Μ., Giudicelli, V., Foulquier, Ε., Truong, L., Thouvenin-Contet, V.和 Lefranc, Dev.Comp.1mmunol，27，55-77 (2003)]。在MGT特有编号中，保守氨基酸总是具有相同的位置，例如半胱氨酸23 (第1-CYS)，色氨酸41 (保守-TRP (C0NSERVED-TRP))，疏水氨基酸89，半胱氨酸104(第2-CYS)，苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。MGT特有编号提供了对框架区(FR1-1MGT:位置 I 至 26，FR2-1MGT:39 至 55、FR3-1MGT:66 至 104 和 FR4-1MGT:118 至 128)和其互补决定区:CDRHMGT:27 至 38、CDR2-1MGT:56 至 65 和 CDR3-1MGT:105至117的标准限定。由于缺口代表未占据的位置，⑶R-1MGT的长度(在括号中显示用并点分开，例如[8.8.13])是重要的信息。MGT特有编号用2D图表示，称为MGTColliers de Perles [Ruiz, M.and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002)/Kaas, Q.and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)],并且在 IMGT/3D结构-DB[Kaas, Q., Rui z, M.and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structuraldata.Nuc1.Acids.Res.，32，D208-D210 (2004)]中用 3D 结构表示。
[0035]存在3个重链⑶R和3个轻链⑶R。根据情况的不同，此处使用的术语⑶R或多个CDR用于表示这些区(含有大部分负责抗体对抗原或其识别的表位的亲和性结合的氨基酸残基的区)中的一个或几个，或甚至全部。
[0036]本发明意义上的两条核酸或氨基酸序列之间的“同一性百分数”是指将要比较的两个序列之间的核苷酸或同样的氨基酸残基的百分数，该百分数在进行最优比对(优化比对)后获得，这一百分数是纯粹统计上的，并且两个序列间的差异随机分布并在全长上分布。传统上，对两个核酸或氨基酸序列的比较是通过将他们以优化的方式比对后进行比较，所述的比较可通过区段或“比较窗口”进行。除了手工方式之外，进行比较的序列的优化比对可通过 Smith 和 Waterman (1981) [Ad.App.Math.2:482]的局部同源性算法，Neddleman和 Wunsch (1970) [J.Mol.Biol.48:443]的局部同源性算法，Pearson 和 Lipman (1988)[Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444)的相似性检索法，通过使用这些算法的计算机软件(威斯康辛遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机组(GeneticsComputer Group), 575Science Dr.，Madison, WI,或通过BLAST N或 BLAST P 比较软件的别的方式)的方式进行。
[0037]两条核酸或氨基酸序列之间的同一性百分数通过以优化方式比较这两个序列来确定，并且其中进行比较的核酸或氨基酸序列可包含相对于参考序列的加入序列或删除序列，该参考序列用于在这两条序列之间进行优化比对。同一性百分数的计算是通过确定两个序列间相同核苷酸或氨基酸残基的同样位置的数目，将这一同样位置的数目除以所比较窗口的总位置数目，将所获得的结果乘以100，从而获得这两条个序列间的同一性百分数。
[0038]例如，可能使用BLAST程序对2个序列进行BLAST (Tatusova et al, "Blast2sequences - a new tool for comparing protein 和 nucleotide sequences",FEMSMicrobiol Lett.174:247-250),该程序可在网址 http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html上获得,使用那些缺省给定的参数(特别是参数“开放空缺罚分(open gappenalty)”:5,和“扩展空缺罚分(extension gap penalty)”:2 ;选择作为矩阵,例如该程序建议的“BL0SUM 62”矩阵)，将要比较的两条序列的同一性百分数直接通过该程序计算得出。
[0039]相对于参考氨基酸序列具有至少80%，优选85%、90%、95%或98%的同一性的氨基酸序列，那些相对于参考序列具有某些修饰，特别是删除、加入或替换了至少一个氨基酸，截短或延长是优选的。在替换一个或多个连续或不连续氨基酸的情况下，该替换优选为所替换的氨基酸被“等同”氨基酸所替换。“等同氨基酸”(equivalent amino acids)的表述在此处的目的是表示任何能够多个氨基酸之一所替换的任何氨基酸，替换上去的氨基酸具有相应抗体的基本结构却不会对其生物活性进行实质上修饰，并且这些氨基酸将在以后限定，特别是在实施例中限定。这些等同氨基酸的确定可基于它们与被它们替换的氨基酸的结构同源性，或基于能够进行的不同抗体间生物活性的比较性试验。
[0040]通过举例的方式提及能够进行的可能的替换，该替换不导致相应的修饰抗体的生物活性的较大修饰。
[0041]作为非限制性的例子，下述表1给出了考虑到保持修饰抗体的生物活性的可能的替换。在同样条件下，相反的替换当然也是可能的。
[0042]表1
[0043]
【权利要求】
1.一种分离的抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于其包含重链和轻链，所述的重链包含氨基酸序列分别为SEQ ID N0.7、8和9的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3 ;所述的轻链包含氨基酸序列分别为SEQ ID N0.15、16和17的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于其包含氨基酸序列SEQ ID N0.20的重链和氨基酸序列SEQ ID N0.23的轻链。
3.—种能够分泌如权利要求1所述的抗体的鼠杂交瘤，其特征在于所述杂交瘤是于2007年7月6日保藏在巴黎巴斯德研究所CNCM，保藏号为1-3786的鼠杂交瘤。
4.根据权利要求1和2任一项所述的抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于其是单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于所述的抗体为嵌合抗体，其中轻链和重链恒定区来自于与小鼠异源的物种的抗体。
6.根据权利要求5的嵌合抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于所述异源的物种是人。
7.根据权利要求6的人源化抗体或其功能性二价片段之一，其特征在于源自人抗体的轻链和重链恒定区分别是轻链K区和重链Y-1、Y-2或Y-4区。
8.根据权利要求1、2和4-7任一项所述的抗体，其中抗体能够抑制配体依赖的和配体非依赖的C-Met激活。
9.根据权利要求8所述的抗体，其中抗体能够特异地结合c-Met。
10.根据权利要求9所述的抗体，其中抗体能够抑制至少一个肿瘤类型的至少50%肿瘤细胞增殖。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中抗体能够抑制C-Met二聚化。
12.根据权利要求1、2和4-11任一项所述的抗体，其中抗体是二价的。
13.一种分离的核酸，其特征在于其选自下述核酸: a)编码如权利要求1、2和4-12之一所述的抗体或其功能性二价片段之一的核酸；
b)序列SEQ ID N0.30、SEQ ID N0.31、SEQ ID N0.32 和序列 SEQ ID N0.38、SEQ IDN0.39 和 SEQ ID N0.40 的 DNA 核酸序列； c)DNA核酸，其包括 包含序列SEQ ID N0.43和SEQ ID N0.46的核酸序列； d)b)或c)中限定的核酸相对应的RNA核酸；和 e)a),b)和c)中限定的核酸的互补核酸。
14.一种包含如权利要求13的a)、b)和c)部分所述的DNA核酸的载体。
15.—种包含如权利要求14所述的载体的宿主细胞。
16.—种产生如权利要求1、2和4-12之一所述的抗体或其功能性二价片段之一的方法，其特征在于其包含下述阶段: a)在培养基中和在适当的培养条件下培养如权利要求14所述的细胞；以及 b)从培养基或所述的培养细胞中收获产生的所述抗体或其功能性二价片段之一。
17.如权利要求1、2和4-12所述的或通过权利要求16所述的方法获得的抗体或其功能性二价片段之一用于制备预防或治疗c-Met激活相关的恶性肿瘤的药物的用途。
18.—种包含化合物作为有效成分的组合物，所述的化合物由如权利要求1、2和4-12之一所述的，或通过如权利要求16所述的方法获得的，抗体或其功能性二价片段之一组成。
19.根据权利要求17所述的组合物，其特征在于其进一步包含作为组合产品以同时、分别或相继使用的一种制剂，其中所述制剂是抗肿瘤抗体。
20.根据权利要求18或19所述的组合物，其特征在于其进一步包含作为组合产物以同时、分别或相继使用的至少一种制剂，其中所述制剂是细胞毒性剂/细胞抑制剂。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述的细胞毒性剂/细胞抑制剂化学偶联至所述抗体或所述二价功能性片段或其衍生物用于同时使用。
22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述的细胞毒性剂/细胞抑制剂选自烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素或免疫调节剂。
23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述的细胞毒性剂/细胞抑制剂是有丝分裂抑制剂。
24.根据权利要求18或19所述的组合物，其特征在于至少一种所述的抗体或其功能性二价片段之一与细胞毒素和/或放射性元素结合。
25.如权利要求18-23之一所述的组合物用于制备预防或治疗c-Met激活相关的恶性肿瘤的药物的用途。
26.如权利要求1、2和4 -12之一所述的，或通过如权利要求16的方法获得的抗体或其功能性二价片段之一，或如权利要求18-24之一所述的组合物，在制备用于预防或治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
27.根据权利要求26所述的用途，其特征在于所述的恶性肿瘤选自前列腺癌、骨肉瘤、肺癌、乳癌、子宫内膜癌、成胶质细胞瘤或结肠癌。
28.根据权利要求25、26或27所述的用途，其特征在于所述恶性肿瘤是cMet激活相关的恶性肿瘤，其选自HGF依赖性和/或非依赖性的恶性肿瘤。
【文档编号】A61K39/395GK103509113SQ201310478556
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2008年7月10日 优先权日:2007年7月12日
【发明者】L·格奇 申请人:皮埃尔法布雷医药公司