一种构建哮喘动物模型的方法
【专利摘要】一种构建哮喘动物模型的方法，取新鲜家蚕蚕蛹15-20克，加液氮研磨至变为粉末，加25ml的PBS蚕蛹蛋白冲洗下来，在匀浆器中研磨1-2h，取出匀浆器中的蚕蛹蛋白，4℃离心8000rpm/15min，取上清液，重复离心三次，BCA法测蛋白浓度达标，得家蚕蛋白。应用5-6周龄Babl/c小鼠，腹腔注射蚕蛹蛋白50μg/只加氢氧化铝4mg致敏，一周一次，连续腹腔注射三周。最后一次致敏后，连续激发一周（蚕蛹粗蛋白50μg/只每天滴鼻）。最后1天滴鼻后24h，进行气道高反应检测和病理学检查。本发明解决了构建哮喘动物模型难的问题，该动物模型稳定可控，可用于哮喘发病机制的研究和哮喘治疗药物的疗效评价。
【专利说明】一种构建哮喘动物模型的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，更具体地，本发明涉及一种构建哮喘动物模型的方法。【背景技术】
[0002]过敏性哮喘是严重影响人类健康，且其发病率每年以5%的速度增长。根据联合国世界卫生组织的估算，世界范围内哮喘患者达三亿之多，并波及到各个层次包括不同年龄或不同经济状况的人群中。在过去的二十年中，像哮喘等过敏性疾病呈稳定的上升趋势。这不仅影响人们的生活质量，特别是幼儿哮喘，直接影响了儿童身体的正常发育，还对国家经济的发展造成一定阻碍作用。
[0003]目前，国内外对过敏性哮喘的研究日益加深，但是针对过敏性哮喘的有效的特异性治疗手段却相对甚少。现在国际上通用的过敏性哮喘动物模型只有鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型。由于鸡卵清白蛋白并不是一个在人体引发疾病的过敏原，通过此模型所获得的研究结果，并不能很好地反映人体内哮喘的病理状态。因此，建立一种能模拟人体哮喘病理状态的动物模型，可用于抗过敏药物的筛选以及研究哮喘的发病机制有重要的科学意义和潜在的临床应用价值。
[0004]而且虽然肾上腺糖皮质激素仍然是比较有效的治疗和预防过敏性哮喘发作的药物，但其较大的副作用限制了临床的应用。鉴于直接进行人体试验的局限性，有关病因的确定、发病机制的探索、新治疗方法的评价、新药的研究与开发在相当程度上均需通过动物实验进行。因此，哮喘动物模型对于哮喘的研究具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种以家蚕蛋白诱导形成的构建哮喘动物模型的方法，使动物模型稳定可控，用于哮·喘发病机制的研究和哮喘治疗药物的疗效评价。
[0006]本发明的技术方案是:一种构建哮喘动物模型的方法，其特征在于该方法使用家蚕蛋白诱导形成。
[0007]本发明进一步的技术方案是:由家蚕蚕蛹15-20克，加液氮研磨至变为粉末，再加25ml的PBS蚕蛹蛋白冲洗下来，在匀浆器中研磨l_2h，取出匀浆器中的蚕蛹蛋白，低温离心后取上清液，得家蚕蛋白。
[0008]本发明更进一步的技术方案是:家蚕蚕蛹为新鲜的家蚕蚕蛹。
[0009]本发明再进一步的技术方案是:匀浆器中的蚕蛹蛋白重复离心三次后取上清液，得家蚕蛋白。
[0010]本发明以家蚕蛋白诱导形成的哮喘动物模型，有效解决了构建哮喘动物模型难的问题，与现有的鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型相比，本发明以家蚕蛋白诱导形成的哮喘动物模型稳定可控，能很好地反映人体内哮喘的病理状态，可用于哮喘发病机制的研究和哮喘治疗药物的疗效评价。【具体实施方式】
[0011]以下结合【具体实施方式】对发明的详细结构作进一步描述。
[0012]1、家蚕蛋白的准备:
取新鲜家蚕蚕蛹15-20克，加液氮研磨至变为粉末，加25ml的PBS蚕蛹蛋白冲洗下来，在匀衆器中研磨l_2h,取出匀衆器中的蚕蛹蛋白，4°C离心8000rpm/15min,取上清液,重复离心三次，BCA法测蛋白浓度达标，得家蚕蛋白。
[0013]2、造模:
应用5-6周龄Babl/c小鼠，腹腔注射蚕蛹蛋白50 μ g/只加氢氧化铝4 mg致敏，一周一次，连续腹腔注射三周。最后一次致敏后，连续激发一周(蚕蛹粗蛋白50yg/只每天滴鼻)。最后I次激发24 h后，进行气道高反应检测和病理学检查。
[0014]3、模型的鉴定:
本发明构建的哮喘动物模型以出现典型哮喘样发作、病理组织出现多种炎症细胞浸润(包括嗜酸细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞)为特征；其临床典型特征有:气道炎症和气道高反应性为主。
[0015]①模型组激发后的反应哮喘鼠可闻及明显的喘鸣，在吸入蚕蛹蛋白后出现明显抓鼻，烦躁不安，进而出现呼吸增快，腹肌抽搐，四肢瘫软，反应迟钝，有的出现张口呼吸，并逐渐俯伏在一起，取出动物后可见遗留较多排泄物。对照组鼠未出现上述表现，偶见抓鼻，
并一直保持常态。
[0016]②模型组BALF中白细胞分类情况与对照组比较，模型组BALF中中性细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞百分比对照组明显升高，差异均有统计学意义(P〈0.05)。
[0017]③模型组鼠肺组织病理学改变肺组织病理显示哮喘组大鼠支气管黏膜损伤明显，支气管、血管周围嗜酸性粒细胞浸润显著增多；对照组支气管上皮完整，支气管管壁和血管周围无嗜酸性粒细胞浸润。
[0018]④模型组出现明显的气道高反应。
【权利要求】
1.一种构建哮喘动物模型的方法，其特征在于该方法使用家蚕蛋白诱导形成。
2.根据权利要求1所述的构建哮喘动物模型的方法，其特征是由家蚕蚕蛹15-20克，加液氮研磨至变为粉末，再加25ml的PBS蚕蛹蛋白冲洗下来，在匀浆器中研磨1-2h，取出匀浆器中的蚕蛹蛋白，低温离心后取上清液，得家蚕蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的构建哮喘动物模型的方法，其特征是家蚕蚕蛹为新鲜的家蚕蚕蛹。
4.根据权利要求1或2所述的构建哮喘动物模型的方法，其特征是匀浆器中的蚕蛹蛋白重复离心三次后取上清液，得家蚕蛋白。
5.根据权利要求3所述的构建哮喘动物模型的方法，其特征是匀浆器中的蚕蛹蛋白重复离心三次后取上清液，得家蚕蛋白。
【文档编号】A61K38/02GK103566353SQ201310541794
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】刘志刚, 左建宏, 李维中 申请人:刘志刚, 左建宏, 李维中