抗辐射和辅助抗肿瘤药物及应用的制作方法

文档序号:1270346阅读:470来源:国知局
抗辐射和辅助抗肿瘤药物及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗辐射和辅助抗肿瘤药物及应用,是由从天然植物人参、香菇和松茸中通过水提醇沉法提取获得的人参多糖、香菇多糖和松茸多糖作为活性成分以1:1:1质量比混合制得。以该活性成分辅以任何药学上可接受的载体或辅料制成任何一种常规的口服剂型,如片剂、口服液、胶囊等。本发明药物具有提高机体免疫功能、辅助抗肿瘤和抗辐射作用,与化疗药物联合应用的抗肿瘤疗效明显优于单独使用化疗药物,并且能够治疗化学治疗引起的机体损伤,能清除体内自由基,保护造血功能,适用于预防和治疗辐射引起的机体损伤。
【专利说明】抗辐射和辅助抗肿瘤药物及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种由天然植物提取物作为活性成分的抗辐射和辅助抗肿瘤药物,特别是一种能辅助抗肿瘤、调节机体免疫功能、对辐射危害有保护功能的多糖合剂。
【背景技术】:
[0002]恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大疾病之一,在我国,近20年来肿瘤死亡率上升近3成,已成为死亡率最高的疾病。据世界卫生组织估计,随着世界人口日趋老龄化,预计全世界癌症死亡人数将继续上升,到2030年可能将超过1310万。由于恶性肿瘤发病原因不明,目前尚无有效的预防办法,加之环境恶化,人群寿命延长,恶性肿瘤的发病率居高不下。恶性肿瘤的治疗目前仍以手术治疗、放疗、化疗为主要方法。然而放射治疗和化学治疗存在着特异性较差,且能够对机体免疫功能造成损伤的弊端。因此研制出毒性低、疗效好的抗癌活性成分且可提高肿瘤患者免疫功能,尤其是提高患者的细胞免疫功能,进而减轻放、化疗的毒副作用的制剂,对于预防肿瘤的发生,提高肿瘤的治疗效果具有重要意义。
[0003]多糖广泛存在于动物、植物及微生物的细胞壁中,是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起的天然大分子物质,是所有生命有机体的重要组成成分,并与维持生命所必须的多种功能有关。大量的研究表明,植物多糖具有抗肿瘤作用,这些多糖在发挥抗肿瘤作用的同时,对正常的动物细胞几乎没有杀伤作用。故多糖已成为当今抗肿瘤新药发展的主要方向之一。香菇多糖是典型的T淋巴细胞激活剂,体内外均能增强正常或免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应、促进细胞毒T淋巴细胞的产生、提高CTL的杀伤活力。同时,香菇多糖还能诱导产生一种具有免疫活性的细胞因子,激活补体系统,促进抗体生成,使巨噬细胞溶酶体酶和IL-1分泌量增加,从而起到对肿瘤细胞的防御与杀伤作用。人参多糖能诱生内源性肿瘤坏死因子,增强NK细胞和CTL细胞的活性,对正常小鼠及荷瘤小鼠机体免疫功能有增强和激活作用,减轻肿瘤放化疗引起的副作用。松茸多糖生物活性国内外虽有报道,但都未进行系统的分析研究。本课题组的前期动物实验研究结果显示松茸多糖对辐射所致的小鼠免疫功能损伤有明显的保护作用。由于不同的多糖通过不同的机制提高机体的抗肿瘤作用,为此我们提出这样的假设,把不同的多糖按一定的比例配制成混合物,进入机体后将通过不同的途径提高机体的抗肿瘤和抗辐射作用。

【发明内容】

[0004]本发明的目的在于提供一种能辅助抗肿瘤、抗辐射和调节机体免疫功能且无毒副作用的抗辐射和辅助抗肿瘤药物。
[0005]人参(Panax ginseng)为五加科多年生宿根性草本植物,具有抗炎症、抗应激、福射防护、抗疲劳、免疫调节和抗衰老等作用。香燕(lentinus edodes),亦称香蕈、冬燕、花燕等,属担子菌纲伞菌科,是食用菌兼药用菌之一,具有高蛋白、低脂肪、多糖、多种氨基酸和多种维生素特性。松鸾(Tricholoma matsutake)在真菌分类系统中隶属于担子菌门,口蘑属,属药食两用植物,味道鲜美独特,富含多种氨基酸、维生素、微量元素和多糖,营养价值丰富,已有研究表明松茸具有免疫增强活性及较强的抗辐射活性。
[0006]本发明人通过大量实验研究发现,人参中的人参多糖能诱生内源性肿瘤坏死因子(TNF),对肿瘤细胞有杀伤和抑制作用,对正常小鼠及荷瘤小鼠机体免疫功能有增强和激活作用,减轻肿瘤放化疗引起的副作用。香菇中的香菇多糖进入机体后诱导产生一种具有免疫活性的细胞因子,在这些细胞因子的综合作用下,机体免疫系统功能增强,能够对肿瘤细胞起防御与杀伤作用。松茸中的松茸多糖对辐射所致的小鼠免疫功能损伤有明显的保护作用。据此,提出本发明抗辐射和辅助抗肿瘤药物。
[0007]本发明抗辐射和辅助抗肿瘤药物,由从天然植物人参、香菇和松茸中通过水提醇沉法提取获得的人参多糖、香菇多糖和松茸多糖作为活性成分以1:1:1质量比混合制得。
[0008]以该活性成分辅以任何药学上可接受的载体或辅料制成任何一种常规的口服剂型,如片剂、口服液、胶囊等。
[0009]本发明药物具有提高机体免疫功能、辅助抗肿瘤和抗辐射作用,与化疗药物联合应用的抗肿瘤疗效明显优于单独使用化疗药物,并且能够治疗化学治疗引起的机体损伤,能清除体内自由基,保护造血功能,适用于预防和治疗辐射引起的机体损伤。
[0010]本发明药物的药效学试验如下:
[0011]一、体外抗肿瘤作用药效学实验
[0012](一)受试药物对CTL杀伤活性的影响
[0013]1.实验材料
[0014]RPM1-1640培养液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH试剂盒、P815细胞等。
`[0015]2.实验步骤
[0016]无菌取出小鼠脾脏,将其磨碎,过200目细胞筛,加入氯化氨裂解红细胞后,加入PBS洗三遍,离心弃上清。加入含10%FBS的RPM1-1640培养基制备脾淋巴细胞悬液,分别将低(Low dose, 300 μ g/ml )、中(Medium dose, 600 μ g/ml )、高(High dose, 1200 μ g/ml)三个剂量的药物与淋巴细胞共同孵育24h,并设立空白对照组(Control),用培养液调整细胞浓度1父107(^118/1111,将脾细胞悬液加入96孔板中,10(^1/孔。以小鼠肥大细胞瘤细胞(P815)作为检测T细胞毒活性的靶细胞,按照效靶比20:1加入96孔板,同时设靶细胞自然释放孔和最大释放孔,于C02培养箱中共培养24h后,收集细胞上清液,加入LDH试剂,待反应完全后,检测490nm处的光吸收值。使用SPSS统计软件进行统计处理。
[0017]细胞毒活性(%) = [(实验释放孔-自发释放孔)/(最大释放孔-自发释放孔)]X100
[0018]3.实验结果
[0019]受试物对CTL杀伤活性的影响实验结果详见图1。图中所示,*表示与Control组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与Medium dose组相比,P〈0.05,有显著性差异。与Control组相比,低剂量、中剂量和高剂量药物均能够显著增强CTL的杀伤活性(P〈0.05),中剂量药物组的CTL的杀伤活性显著高于低剂量和高剂量组(P〈0.05),因此以中剂量药物组的效果最明显。
[0020](二)受试药物对NK杀伤活性的影响
[0021]1.实验材料
[0022]RPM1-1640培养液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH试剂盒、YAC-1细胞等。[0023]2.实验步骤
[0024]祀细胞为小鼠淋巴瘤细胞株(YAC-1),其余步骤同(一)。
[0025]3.实验结果
[0026]受试物对对NK杀伤活性的影响实验结果详见图2。图中所示,*表示与Control组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与Medium dose组相比,P〈0.05,有显著性差异。与ContiOl组相比,低剂量、中剂量和高剂量药物均能够显著增强NK细胞的杀伤活性(P〈0.05),中剂量药物组的NK细胞的杀伤活性显著高于低剂量和高剂量组(P〈0.05),因此以中剂量药物组的效果最明显。 [0027]二、体内抗肿瘤作用药效学实验
[0028](一)受试物对荷瘤小鼠的抑瘤作用
[0029]1.实验材料
[0030]ICR小鼠,H22细胞,RPM1-1640培养液,小牛血清,胰蛋白酶等。
[0031]2.实验步骤
[0032]清洁级ICR小鼠,雌雄各半,购于吉林大学基础医学部动物中心,20±2g,40只,将H22瘤细胞悬液接种于小鼠背部皮下,1.5X105H22cells/只,将小鼠随机分为4组,每组10只,即肿瘤模型对照组(mode I)、化疗药组(FU )、药物组(PM)、药物+化疗药组(PM+FU );肿瘤细胞移植后24h,分别给予不同的处理因素,化疗药通过腹腔注射给药(30mg/kg),药物通过灌胃的方式给药。20天后,眼球取血,脱白处死小鼠,取出肿瘤,称重并测量其体积,取脾组织用于后续免疫功能的检测实验。使用SPSS统计软件进行统计处理。
[0033]3.实验结果
[0034]受试物对荷瘤小鼠的抑瘤作用实验结果详见图3。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相t匕,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组、FU组和FU+PM组肿瘤重量和体积显著减少(Ρ〈0.05),FU+PM组的抑瘤效果明显优于PM组和FU组(Ρ〈0.05)。
[0035](二)受试物对荷瘤小鼠的免疫功能的影响
[0036]1.实验材料
[0037]RPM1-1640培养液、小牛血清、胰蛋白酶、LDH试剂盒、Ρ815细胞、YAC-1细胞等。
[0038]2.实验步骤
[0039](I)受试药物对CTL杀伤活性的影响:实验步骤同“一、(一)”。
[0040](2)受试药物对NK杀伤活性的影响:实验步骤同“一、(一)”。
[0041]3.实验结果
[0042](I)受试药物对CTL杀伤活性的影响实验结果见图4。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相比,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组的CTL杀伤活性显著升高(P〈0.05), FU组CTL杀伤活性显著降低(P〈0.05)。PM能够显著增强CTL杀伤活性。
[0043](2)受试药物对NK杀伤活性的影响实验结果见图5。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相t匕,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组的NK细胞杀伤活性显著升高(P〈0.05),FU组NK细胞杀伤活性显著降低(P〈0.05)。PM能够显著增强NK细胞杀伤活性。
[0044](三)受试物对荷瘤小鼠的免疫功能相关细胞因子活性的影响
[0045]1.实验材料
[0046]TNF- a ELISA 试剂盒、IL-2ELISA 试剂盒、IL-4ELISA 试剂盒和 IFN- y ELISA 试剂盒等
[0047]2.实验步骤
[0048]将小鼠眼球取血,离心,获得血清。测定血清中的TNF- a,IL_2,IL_4和IFN- Y水平。使用SPSS统计软件进行统计处理。
[0049]3.实验结果
[0050](I)受试物对荷瘤小鼠血清中TNF-α水平的影响实验结果见图6。图中所示,*表示与model组相比,Ρ〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,Ρ〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相比,Ρ〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组血清中TNF-α水平显著升高(Ρ〈0.05),FU组TNF-α水平显著降低(Ρ〈0.05)。PM能够显著提高荷瘤小鼠体内的TNF-α水平。
[0051](2)受试物对荷瘤小鼠血清中IL-2水平的影响验结果见图7。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相比,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组血清中IL-2水平显著升高(P〈0.05),FU组IL-2水平显著降低(P〈0.05)。PM能够显著提高荷瘤小鼠体内的IL-2水平。
[0052](3)受试物对荷瘤小鼠血清中IL-4水平的影响验结果见图8。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相比,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组血清中IL-4水平显著降低(P〈0.05),FU组IL-4水平显著升高(P〈0.05)。PM能够显著降低荷瘤小鼠体内的IL-4水平。
[0053](4)受试物对荷瘤小鼠血清中IFN-Y水平的影响验结果见图9。图中所示,*表示与model组相比,P〈0.05,有显著性差异;#表示与PM组相比,P〈0.05,有显著性差异;+表示与FU组相比,P〈0.05,有显著性差异。与model组相比,PM组和FU+PM组血清中IFN- Y水平显著升高(P〈0.05),FU组IFN-Y水平显著降低(P〈0.05)。PM能够显著提高荷瘤小鼠体内的IFN-Y水平。
[0054]三、体内抗辐射作用药效学实验
[0055](一)受试药物对Y射线照射小鼠氧化功能的保护作用
[0056]1.实验材料
[0057]MDA、SOD 和 CAT 试剂盒,ICR 小鼠。
[0058]2.实验步骤
[0059]清洁级ICR小鼠,雌雄各半,购于吉林大学基础医学部动物中心,20±2g,150只,随机分为正常对照组(NC)、辐射对照组(IC)和药物低剂量组(600mg/kg)、中剂量组(1200mg/kg)、高剂量组(2400mg/kg)三个受试药物组,每日灌胃给药;正常对照组和辐射对照组给予等量的生理盐水,连续给药14天,第15天除正常对照组外均接受4Gy剂量的、射线照射,于照射后第1、3、7天每组各取10只,共50只,眼球取血,离心,获得血清。测定血清中的MDA、SOD和CAT水平。使用SPSS统计软件进行统计处理。
[0060]3.实验结果
[0061]受试物对Y射线照射小鼠氧化功能的保护作用实验结果详见表1至表3。
[0062]表1-3中所示,*表示与正常对照组相比,Ρ〈0.05,有显著性差异;#表示与辐射对照组相比,Ρ〈0.05,有显著性差异。
[0063]表1说明,接受Y射线照射后第1、3天,与正常对照组相比,辐射对照组和三个剂量药物治疗组的MDA水平均显著升高(Ρ〈0.05),且照射对照组的MDA水平显著高于各个剂量的药物治疗组(Ρ〈0.05)。接受Y射线照射后第7天,与正常对照组相比,辐射对照组和低剂量药物治疗组的MDA水平均显著升高(Ρ〈0.05),中剂量和高剂量药物治疗组无显著性差异(PM).05)。
[0064]表2说明,接受Y射线照射后第1、3、7天,与正常对照组相比,辐射对照组和三个剂量药物治疗组的SOD水平均显著降低(Ρ〈0.05),且照射对照组的SOD水平显著低于各个剂量的药物治疗组(Ρ〈0.05)。
[0065]表3说明,接受Y射线照射后第1、3天,与正常对照组相比,辐射对照组和三个剂量药物治疗组的CAT水平均显著降低(Ρ〈0.05),且照射对照组的CAT水平显著低于各个剂量的药物治疗组(Ρ〈0.05)。接受Y射线照射后第7天,与正常对照组相比,辐射对照组和低剂量药物治疗组的CAT水平均显著降低(Ρ〈0.05),中剂量和高剂量药物治疗组无显著性差异(PM).05)。
[0066]表1.受试药物对Y射线照射小鼠血清中MDA水平的影响(? 土 s,nmol/mL)
[0067]
【权利要求】
1.一种抗辐射和辅助抗肿瘤药物,其特征在于,由从天然植物人参、香菇和松茸中通过水提醇沉法提取获得的人参多糖、香菇多糖和松茸多糖作为活性成分以1:1:1质量比混合制得。
2.根据权利要求1所述的抗辐射和辅助抗肿瘤药物,其特征在于辅以任何药学上可接受的载体或辅料制成任何一种常规的口服剂型。
3.权利要求1所述的抗辐射和辅助抗肿瘤药物在制备具有能辅助抗肿瘤、抗辐射和调节机体免疫功 能药物中的应用。
【文档编号】A61P37/02GK103599125SQ201310600627
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月22日 优先权日:2013年11月22日
【发明者】李娟 , 任明, 叶伶艳, 徐坤, 齐燕飞, 曲笑峰, 佟瑶, 吕琳 申请人:吉林大学
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