一种络新妇属蜘蛛有效部位的制备及抗革兰氏菌医药用途
【专利摘要】本发明涉及一种络新妇属蜘蛛有效部位的制备及抗革兰氏菌医药用途。具体而言，该有效部位由粉碎或未粉碎的蜘蛛目络新妇亚科络新妇属（genus?Nephila）虫体用溶剂提取、浓缩提取回收溶剂、大孔吸附树脂柱层析、水洗、醇水溶液梯度洗脱方法纯化，再经减压浓缩、冷冻干燥而得到的有效部位。该络新妇属蜘蛛有效部位具有明显的抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌活性，可制备成水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂形式，用于制备防治人及禽畜患革兰氏菌感染疾病的药物、日化用品以及医疗器械、药用辅料、外伤敷料或饲料添加剂。
【专利说明】一种络新妇属蜘蛛有效部位的制备及抗革兰氏菌医药用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，具体而言，本发明涉及一种具有防治细菌感染性疾病功能的络新妇属蜘蛛有效部位及其制备方法和医药用途。该有效部位主要含多肽类活性物质，可制备成水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂等形式，用于制备治疗人及禽畜防治革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染相关疾病的药物、日化用品以及医疗器械、药用辅料、外伤敷料或饲料添加剂。
【背景技术】
[0002]自然界存在大量细菌。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称“金葡菌”)是格兰氏阳性球菌，是一种最常见且是对人体健康影响极大的致病菌种，引起人的主要感染有疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿。抗甲基西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)是20世纪80年代开始出现的耐药菌株，它是医院内和临床上微生物流行病的主要病源。链球菌(Streptococcus species)是成链状排列、兼性厌氧的格兰氏阳性杆菌。医学上常见的致病性链球菌大部分属于β溶血型，它们存在于人的皮肤、呼吸道、消化道以及尿殖道的黏膜上，能够引起皮肤、呼吸道以及软组织感染如肺炎、菌血症、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道炎症以及关节炎等疾病。
[0003]大肠杆菌(或称大肠 埃希氏杆菌)是中等大小杆菌，革兰氏染色阴性，其大小为(1-3)微米X (0.5-0.7)微米，有鞭毛、无芽胞，有的菌株可形成荚膜，需氧或兼性厌氧，生化反应活泼、易于在普通培养上增殖，适应性强。该菌对一般消毒剂敏感，但对抗生素及磺胺类药等极易产生耐药性。大肠杆菌病是由大肠杆菌埃氏菌的某些致病性血清型菌株引起的疾病总称，其是由一定血清型的致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种肠道传染病。一年四季均可发生，临床症状及解剖特点以下痢为主要特征，排出黄棕色水样稀粪。急性致死性感染病例一般1-2天死亡，亚急性1周左右死亡。治疗上常采用螺旋霉素、多粘菌素Ε、庆大霉素、硫酸卡那霉素、恩诺沙星等肌肉注射，每天2-3次连续3-5天(以上三者交替应用或合用效果更好)。
[0004]大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致病物质为其内毒素。在抗感染药物中，抗生素占90%。其它抗真菌药物、抗病毒药物和抗寄生虫病药物仅占10%。然而，在抗生素的应用中，大多数格兰仕阳性菌对青霉素敏感，而革兰氏阴性菌则大多对链霉素和氯霉素等敏感。因此，发现既能抑制革兰氏阳性菌同时又能抑制革兰氏阴性菌生长的抗菌物质，将是广谱抗菌药物开发的重要目标之一。
[0005]本世纪以来，随着现代社会的日益发达，细菌感染的机会越来越大，受感人群活动越来越频繁，造成大规模感染的几率越来越大。因此也造成了抗生素的大量使用，甚至滥用。随着多种抗生素耐药性的出现、以及超级细菌的初现端倪，使得现有一线使用的抗生素面临不能满足临床需要而全面崩溃的局面。这使得欧美发达国家投入巨资研发新的抗生素药物。除了医师自觉抵制滥用抗生素之外，确实还需要储存一大批针对变异的耐药株的抗菌药物，以便在真正发生大规模耐药菌株流行传播时人们不至于束手无策、坐以待毙。然而，随着医院临床耐药菌的增多，以及研发出的抗生素毒性和副作用越来越大，使得人们不得不将眼光转向广谱、低毒、使用安全的“绿色抗生素”。不断研发出新的植物和动物天然绿色抗生素，是十几亿人口的人口大国必须执行的一个既定政策。
[0006]本研究团队以前从植物中发现许多对革兰氏阳性菌和/或阴性菌有效的植物提取部位和有效成分，更加增添了我们研发新的“绿色抗生素”、发现新的抗菌天然药物的信心。(赵昱等，具抗病毒、抗炎、和/或抗菌作用的六棱菊属提取物及其用途，ZL200510077457.3 ；赵昱等，生姜中单萜苷类化合物及其抗菌用途和药物组合物，CN101012255 ;蒲公英中的两个黄酮苷及其抗格兰氏阳性菌的医药用途，ZL200710067180.5 ;蒲公英中的木质素及其抗菌活性和医药用途，ZL200710067458.9 ;黑紫橐吾中的含氯原子艾里莫芬烷及其抗菌和细胞毒活性，ZL200710067460.6 ;蒲公英中的倍半萜内酯及其抗格兰氏阳性菌的用途，ZL200710067776.5 ;黑紫橐吾素A及其抑制格兰氏阳性菌的医药用途，ZL200710068539.0 ；蒲公英木质素抑制格兰氏阳性菌的制药用途，ZL200810165728.4)
[0007]络新妇蛛，Nephila, silk spider,属节肢动物门(Arthropoda)蛛型纲(Arachnida)络新妇亚科络新妇属昆虫，云贵高原广泛分布。结大型金黄色网，网的直径可达一公尺以上，以拉丝悬于树间，生活在温暖地区。约60种，云南省分布有3种。该属蛛体色艳丽，雌成蛛个体较大、雄蛛小数倍。
[0008]蜘蛛入药在我国早已有之。《唐本草》云:“主蛇毒，温疟，霍乱，止呕逆”；《日华子本草》云:“冷，无毒；斑蜘蛛治疟疾 ，疔肿”；《长沙药解》云:“炒枯存性研细用；破瘀消肿”；《本草纲目》云:“主口，脱肛，疔肿，胡臭”;《吉林中草药》云:“治瘰疬，疔疮，蜂、蝎蜇伤”;《中药大辞典》云:“祛风，消肿，解毒。治狐疝偏坠，中风口，小儿慢惊、口噤。疳积；疔肿，瘰疬，疮疡，蜈蚣、蜂、蝎蜇伤”。以上历史记录表明其体内必应具有某些特殊的物质和其特有的作用机制。在对云贵高原的药用昆虫抗菌活性系列研究过程中，我们对蛛型纲络新妇属进行了综合采集、种属鉴定和抑制革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌生长活性的药效学研究。
[0009]根据相关文献，在针对药物应用方面，“蜘蛛”多为复方中的一味，公开资料中没有蜘蛛作为单方应用于防治细菌感染相关疾病的报导。1995年王仁学公开的“一种速效口疮散”(申请号94103402.X)，是由蜘蛛等5种药材构成，主治口腔性溃疡，兼治一般疥疮癣、丹毒等。2005年王化金的专利“一种治疗皮肤溃烂和口腔溃疡的药液及加工工艺”(ZL02138994.2)，公开了由蜈蚣、蜘蛛、蜂王浆和酒精4种材料组成抗口腔溃疡的药液。2007年姚茂龙公开的“喉净散配方及制作方法”(CN1895290A)，是由锅底灰、蜘蛛等3种材料组成，主治白喉和扁桃体炎。2010年黄国登公开了“一种治疗疔疮的药剂及其制备方法”(CN101953873A)，是由草蜘蛛、明矾、等5种材料组成的糊剂。2012年闻恪玉公开的“一种治疗脓毒的药物”(CN101632690A)，由蟾蜍、麝香、蜗牛、蜘蛛等7种药材组成，主治扁桃体炎、慢性咽炎、过敏性鼻炎、口腔炎。显然，蜘蛛作为单味药单独使用于抑制细菌生长的医药用途在开发新的抗菌药物物质基础方面仍是空白，故而本发明专门针对蛛型纲络新妇属进行抗菌活性研发尚属首次且十分必要。
[0010]根据《中药大辞典》，其基元是指园网蛛科大腹园网蛛等全虫。动物分类学中，将此属归为圆蛛总科络新妇亚科络新妇属，是云南省优势资源。为明确云贵高原药源广泛分布的络新妇属蜘蛛是否具有抗革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌活性，及其抗菌有效部位，指导进一步弄清其中起主要药理作用的物质结构基础，从分子药理学基础上阐明络新妇属蜘蛛多种生物活性的作用机制，发明人对民间习用的络新妇属进行了综合采集和药效学活性研究。本发明使用不同溶剂系统，测试了该生药材的大孔树脂提取物抑制革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌的药理活性。试验结果发现:络新妇属蜘蛛提取物有效部位既能抑制革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌)、又能抑制革兰氏阴性菌(大肠杆菌)生长。且具有较强的抑制活性，可以作为抗革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌天然药物进一步深入开发，从而构成本发明。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是提供了一种络新妇属蜘蛛具有抗菌活性的有效部位，其特征是:该有效部位是用溶剂提取经粉碎或未粉碎的络新妇属蜘蛛虫体、浓缩提取回收溶剂、大孔吸附树脂柱层析、水洗、醇水溶液梯度洗脱方法纯化；得到的抑制革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌活性有效部位经减压浓缩、冷冻干燥，粉碎而得产品。 [0012]本发明的又一目的是提供了一种制备络新妇属蜘蛛具有抗菌活性的有效部位的方法；具体而言，该有效部位通过以下方法获得:
[0013]a)用溶剂提取经粉碎或未粉碎的络新妇属蜘蛛虫体，浓缩提取回收溶剂；其溶剂是指极性溶剂，即醇类、醇水混合溶液、丙酮、丙酮水混合溶液中的一种或多种；其中醇类是指甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种；
[0014]b)将步骤a得到的浓缩液经大孔吸附树脂材料柱层析，水洗，然后用醇水溶液梯度洗脱；
[0015]c)将步骤b得到的洗脱液减压浓缩至无醇味，减压浓缩或冷冻干燥，粉碎得产品。其中:提取时间优选1小时至72小时，提取次数优选1-5次，每次用1-8倍量体积的溶剂；粉碎虫体时温度不超过25°C ;蜘蛛虫体极性溶剂减压浓缩时的温度不超过100°C。
[0016]本发明的另一目的是提供了将络新妇属蜘蛛提取物有效部位在制备抑制革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌感染的药物中的用途。
[0017]本发明的再一目的是提供了一种以络新妇属蜘蛛提取物有效部位在制备治疗金黄色葡萄球菌感染所致的病症如疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿中的一种或多种以及对大肠杆菌感染所致的肠道炎症或下痢药物中的用途。
[0018]本发明的又一目的是提供了一种防治由革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌感染的药物或药物组合物，其含有治疗有效量的络新妇属蜘蛛提取物有效部位和可药用辅料。其制剂形式包括水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、散剂、口服液、喷雾剂、冲剂、贴膜、注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、透皮吸收制剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂，及其控释或缓释剂型或纳米制剂。
[0019]本发明的另一目的是提供了将络新妇属蜘蛛提取物有效部位用于制备既能抗革兰氏阳性菌又能抗革兰氏阴性菌感染的广谱抗菌药物、日化用品、医疗器械、药用辅料、外伤敷料或饲料添加剂的用途。
[0020]本发明中提供络新妇属蜘蛛抗菌活性有效部位的动物药材可以选用络新妇属蜘蛛虫体的任一部位，或它们的混合物。可以是干燥全虫，也可以是未经干燥的全虫或活体全虫。
[0021]本发明中所述及的经大孔吸附树脂柱层析精致纯化得到的络新妇属蜘蛛抗菌活性有效部位可以与药学上常用的辅料或载体结合，制备得到具有广谱抗菌功效的水凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂、泡沫凝胶，还可以采用现代制药界所公知的控释或缓释剂型或纳米制剂。
[0022]本发明的经大孔吸附树脂柱层析精致纯化得到的络新妇属蜘蛛抗菌活性有效部位及其制剂或其可药用盐还可以与现已上市的金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌抑制剂和/或其他治疗类似革兰氏阳性菌感染相关病症的治疗药物及其原料药如头孢类、大环内酯类、以及磺胺类如沙星等药物品种联合使用或交叉使用，制备得到具有抗病菌感染的组合物或复方制剂，可预期成为治疗革兰氏阳性菌感染疾病药品、保健品、日化用品和医疗器械。上述各类药物组合物或者药品、保健品、日化用品和医疗器械可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，包括采用现已公认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型或纳米制剂。
[0023]本发明的经大孔吸附树脂柱层析精致纯化得到的络新妇属蜘蛛抗菌活性有效部位及其制剂或其可药用盐还可以与现已上市的大肠杆菌抑制剂和/或其他治疗类似革兰氏阴性菌感染相关病症的治疗药物及其原料药如螺旋霉素、多粘菌素E、庆大霉素、硫酸卡那霉素、恩诺沙星等药物品种联合使用或交叉使用，制备得到具有抗病菌感染的组合物或复方制剂，可预期成为治疗革兰氏阴性菌感染疾病药品、保健品、日化用品和医疗器械。上述各类药物组合物或者药品、保健品、日化用品和医疗器械可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物，包括采用现已公 认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型或纳米制剂。
[0024]至今为止，以往文献中并未发现有以此工艺对络新妇属蜘蛛进行提取的文献报道，本大孔树脂提取法具有意想不到的新的效果。并且，迄今为止，中外文献并无针对云南采集到的络新妇属蜘蛛进行针对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌生长抑制活性研究的报道，本针对性的研究尚属首次，络新妇属蜘蛛大孔树脂提取物具有显著的抑制革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌生长的活性也属于意想不到的结果，因而可以预期进一步开发成为治疗革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌感染类疾病的药物或药物组合物。由此完成了本发明。
[0025]本发明的有益之处在于:首次用大孔树脂分离材料制备出络新妇属蜘蛛提取物有效部位，并首次发现了其在开发防治革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌感染药物领域中的潜力，对于开发治疗人及禽畜受金黄色葡萄球菌感染所致的病症如疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿中的一种或多种以及对人及禽畜受大肠杆菌感染所致病症即肠道炎症或下痢的药物提供了新的蛛形类动物药物之物质基础。本发明再一特点是:该属蜘蛛生长繁殖能力旺盛，在云贵高原广泛分布，便于养殖，每头雌蛛每年可以孵育600-800只子代，有利于成为稳定的生物药物资源，同时也有利于贫困山区农民养殖此类药源性动物达到脱贫目的。具有潜在的巨大社会效益和经济效益。该药物原料来源于天然养殖的蛛形纲动物，制备步骤简便，绿色天然，成本低，污染小，利于大规模生产。
具体实施方案
[0026]为了更好地理解本发明的实质，下面分别用该类络新妇属蜘蛛经大孔吸附树脂柱层析精致纯化过程，以及得到的络新妇属蜘蛛抗菌活性有效部位对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌抑制作用的药理实验结果，说明其在抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌研究领域中的新用途。本发明还用该活性提取物进行了 ICR小鼠的口服灌胃急性毒性试验，说明该有效部位对动物的毒性，由此来反映在人体使用时的安全性。若无特别说明，本发明的百分比指的是重量百分比。必须说明，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
[0027]实施例1:用D-101大孔吸附树脂富集斑络新妇有效部位
[0028]1.1斑络新妇醇提物的制备
[0029]新鲜捕捉到的斑络新妇蜘蛛120头(采自思茅地区，活体标本由大理学院云南省药用昆虫及蛛形类资源利用开发工程实验室杨自忠教授鉴定为斑络新妇Nephila pilipesFabricius)，先浸入温度为5°C的90%甲醇水溶液中半小时，取出在组织匀浆机下匀浆，虫体匀浆以75%甲醇水溶液130毫升，于10°C下浸泡提取3次，每次4小时。过滤出提取液，合并提取液，在10°C下减压浓缩至干，真空冷冻干燥，即得斑络新妇甲醇水溶液提取物。
[0030]1.2D-101大孔吸附树脂柱层析制备斑络新妇提取物有效部位
[0031]斑络新妇甲醇水`溶液提取物0.5克，用0.7克D-101大孔吸附树脂吸附拌样，上12克D-101大孔吸附树脂柱(柱内直径10毫米，高度25毫米)，先用双蒸水30毫升洗脱，续用30%乙醇-水溶液50毫升洗脱，续用80%乙醇-水溶液100毫升洗脱，取80%乙醇-水溶液洗脱液80毫升减压浓缩至干，冷冻真空干燥，即得斑络新妇提取物有效部位(NPE)26.8晕克。
[0032]实施例2:用AB-8大孔吸附树脂富集棒络新妇有效部位
[0033]2.1棒络新妇乙醇水溶液提取物的制备
[0034]将捕捉到的棒络新妇蜘蛛132头(采自大理地区，活体标本由大理学院云南省药用昆虫及蛛形类资源利用开发工程实验室杨自忠教授鉴定为棒络新妇Nephila clavataL.K°C h)，用沸水烫死，之后晒干，研钵磨粉，虫体粉以70%乙醇水溶液50毫升，于75°C下加热提取3次，每次1小时。过滤出提取液，合并提取液，在10°C下减压浓缩至干，真空冷冻干燥，即得棒络新妇乙醇水提取物。
[0035]2.2AB-8大孔吸附树脂柱层析制备棒络新妇提取物有效部位
[0036]棒络新妇甲醇水溶液提取物0.5克，用1克AB-8大孔吸附树脂吸附拌样，上15克AB-8大孔吸附树脂柱(柱内直径10毫米，高度25毫米)，先用双蒸水50毫升洗脱，续用25%乙醇-水溶液50毫升洗脱，续用80%乙醇-水溶液100毫升洗脱，取80%乙醇-水溶液洗脱液70毫升减压浓缩至干，冷冻真空干燥，即得棒络新妇提取物有效部位(NCE)32.3晕克。
[0037]实施例3:斑络新妇提取物有效部位样品抑制格兰氏阳性菌能力检测[0038]3.1 原理:
[0039]采用“管碟法”研究试验药物的体外抗菌活性，利用加在牛津杯中的试验药物扩散到接种有试验菌的培养基中，从而抑制细菌的生长。通过检测在牛津杯周围形成的抑菌圈的直径大小来确定试验药物的抗菌活性。
[0040]3.2 检测菌:
[0041]金黄色葡萄球菌26003-23，购自中国药品生物制品检定所。
[0042]乙型溶血性链球菌32210，购自中国药品生物制品检定所。
[0043]3.3试验药物及仪器:
[0044]3.3.1试验药物
[0045]DMSO:DMS0 溶剂对照；
[0046]阳性对照药物诺氟沙星:2.5毫克/毫升；
[0047]测试样品来自实施例1中制得的80%乙醇-水溶液洗脱液冻干粉样品(即斑络新妇提取物有效部位(NPE));样品用DMSO溶解并配置成2.5毫克/毫升。
[0048]3.3.2 仪器
[0049]CO2培养箱:美国Shellab公司产品；
[0050]XD-2倒置显微镜:重庆光电仪器有限公司产品；
[0051 ] 生物安全柜:美国LABC0NC0公司产品；
[0052]LDZX-40BI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器:上海申安医疗器械厂产品。
[0053]3.4方法与步骤:
[0054]3.4.1制备M-H琼脂、M-H肉汤及试验菌液。
[0055]3.4.2双碟的制备:
[0056](I)M-H琼脂底层:取灭菌M-H琼脂液体自然冷却凝固。
[0057](2) M-H琼脂菌层:取菌液150微升(ill)与30毫升(mL)的M-H琼脂混匀。取约5mL含菌液琼脂，均匀摊布在具有M-H琼脂底层的平皿内。
[0058]3.4.3待培养基凝固后，在每个平皿中均匀放立加满试验药液牛津杯。
[0059]3.4.4 置 37°C培养 24 小时。
[0060]3.4.5用游标卡尺测量抑菌圈直径。
[0061]3.5 结果:
[0062]测试样品及阳性对照药物诺氟沙星抑菌试验结果见表1。
[0063]表1.有效部位样品及诺氟沙星对标准致病菌的抑菌圈直径(毫米)
[0064]
【权利要求】
1.一种从络新妇属蜘蛛中提取的抗菌活性有效部位用于制备防治细菌感染性疾病的药物用途，其特征是:所述活性有效部位是经由大孔树脂提取和醇水溶剂洗脱下来的部位；细菌是指革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌；所述药物用途通过药物制剂、医疗器械、日化用品形式体现。
2.根据权利要求1的药物用途，其中细菌性感染性疾病是指革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄球菌或乙型溶血性链球菌感染所致的病症，或革兰氏阴性菌中的大肠杆菌感染所致病症。
3.根据权利要求2的药物用途，金黄色葡萄球菌感染所致的病症是指疖子、脓疱、毒性表皮腐解、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、乳腺炎、膀胱炎、前列腺炎、菌血症、中毒性休克综合症、淋巴结炎、咽炎、子宫颈炎、盆腔炎，以及肌肉、皮肤、尿殖道、中枢神经系统的脓肿中的一种或多种。
4.根据权利要求2的药物用途，乙型溶血性链球菌感染所致的病症是指皮肤、呼吸道或软组织感染引起的肺炎、菌血症、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道炎症或关节炎。
5.根据权利要求2的药物用途，大肠杆菌感染所致病症是指致病性大肠杆菌或其毒素引起的肠道炎症或下痢。
6.根据权利要求1的药物用途，其特征是:该用途是通过药物制剂、医疗器械、日化用品形式得以体现；所述药物制剂、医疗器械、日化产品的形式是水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、冻干粉、水剂、气雾剂 、栓剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂。
7.一种制备权利要求1中所述抗菌活性有效部位的方法，其特征是所述有效部位由以下步骤制备得到:a)用极性溶剂提取经粉碎或未粉碎的络新妇属蜘蛛虫体，浓缩提取回收溶剂；其中极性溶剂是指醇类、醇水混合溶液、丙酮、丙酮水混合溶液中的一种或多种；其中醇类是指甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或多种；b)将步骤a得到的浓缩液经大孔吸附树脂材料柱层析，水洗，然后用醇水溶液梯度洗脱；c)将步骤b得到的洗脱液减压浓缩至无醇味，减压浓缩或冷冻干燥，粉碎得产品。
8.根据权利要求7的方法，其特征为:用极性溶剂提取经粉碎的络新妇属蜘蛛虫体，提取时间为1小时至72小时，提取次数为1-5次，每次用1-8倍量体积的溶剂；粉碎虫体时温度不超过25°C;减压浓缩时的温度不超过100°C;大孔吸附树脂材料柱是指D-101大孔吸附树脂或AB-8大孔吸附树脂。
9.一种具有抗革兰氏阳性菌感染和/或抗革兰氏阴性菌感染的药物组合物，其特征是:该药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1的从络新妇属蜘蛛中提取的抗菌活性有效部位、药用辅料、可药用载体或外伤敷料。
10.一种具有抗革兰氏阳性菌感染和/或抗革兰氏阴性菌感染的饲料添加剂组合物，其特征是:该饲料添加剂组合物含有根据权利要求1所述的从络新妇属蜘蛛中提取的抗菌活性有效部位。
【文档编号】A61K35/64GK103638058SQ201310625286
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月1日 优先权日:2013年12月1日
【发明者】陈俊雅, 李启艳, 方春生, 巫秀美, 曹学信, 赵昱 申请人:大理学院