一种抗肿瘤药物、制备方法及其用途
【专利摘要】本发明提出了一种抗肿瘤药物、制备方法及其用途，所述抗肿瘤药物由如下重量比的各成分组成，阿魏:蟾蜍：马宝：白花蛇舌草=30：30：50：150。将各成分粉碎、过筛、混匀即可制备得到。可用于抗肿瘤，比如肝癌、胃癌或食道癌。抗癌效果好，对肿瘤细胞可达90%左右的抑制。远远好于目前市面上药物的抗癌效果。
【专利说明】—种抗肿瘤药物、制备方法及其用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，尤其涉及一种抗肿瘤药物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002]癌症是严重威胁人类健康和社会发展的重大疾病之一，也是目前威胁我国居民健康的重大疾病。最近统计数据显示，我国癌症发病率呈逐年上升趋势，其中消化系统癌症如胃癌、结肠癌等癌症占全部癌症构成的10%以上，均为危害较大的常见肿瘤。目前临床上常用的放化疗方法治疗肿瘤，在杀伤肿瘤细胞的同时，也造成机体骨髓抑制和免疫功能低下，毒副作用大。因此从天然的动物、植物及矿物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物或活性成分是近年来国内外学者研究的热点。中医药是我国特有的传统医药宝库，在我国用于防病治病已有2000多年的历史，为抗癌药物的研发提供了十分丰富的资源。
[0003]目前国内同类药物检测过的最高癌细胞抑制率仅有50%左右，而人尽皆知的名贵抗癌药材红豆杉的抑癌率也仅有30%左右。
[0004]因此，急需开发更有效的抗肿瘤药物。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种更有效的抗肿瘤中药药物。
[0006]为实现上述目的，本发明提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，由如下重量比的各成分组成，为阿魏:蟾蜍:马宝:白花蛇舌草=30:30:50:150。
[0007]所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，称取各成分、将各成分粉碎、过筛、混匀即可。所述过筛所得抗肿瘤药物各成分的直径为300-800目。所述各具体步骤按照常规方法即可。
[0008]本发明还保护所述抗肿瘤药物用于抗肿瘤的用途。包括将所述抗肿瘤药物用水或者黄酒送服的步骤。
[0009]所述肿瘤为肝癌、胃癌、食道癌。
[0010]本发明的抗肿瘤药物也即“李氏膈食散”是根据祖辈行医经验并吸取历代各家治疗食管癌的理论精髓，形成的具有独特疗效的经验方。“李氏膈食散”由阿魏、蟾蜍、马宝、白花蛇舌草等中药根据中医理论配伍而成，临床应用已数十年，经观察对食道癌、胃癌等消化道癌症有显著疗效，能有效消除癌症肿块、减轻病人痛苦，并能促进食欲，延长癌症病人寿命。
[0011]“李氏膈食散”复方主要由阿魏、蟾蜍、白花蛇舌草等传统中药配伍而成。阿魏是一味常用中药，早在《新修本草》中就有记载。阿魏有特殊的臭气，味苦而辛，有理气消肿、活血消疲、祛痰和兴奋神经的功效。赵贝等通过整体、细胞、分子三个水平初步证明阿魏药酒有一定的抗肿瘤作用，主要是通过阻止肿瘤的浸润和转移，提高机体免疫能力。蟾蜍首载于《名医别录》，早在《神农本草经》就载有“虾蟆”的性味与主治。古今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。现已有蟾酥镇痛膏、蟾酥注射液、华蟾素注射注和复方蟾皮胶囊等制剂应用于临床抗肿瘤、镇痛、利水消肿等。白花蛇舌草味甘、淡，性凉，归胃、大肠、小肠经，具清热解毒、消肿镇痛的功效，主治阑尾炎、气管炎、尿道感染、毒蛇咬伤、肿瘤、肠风下血等。体外实验证明白花蛇舌草乙醇提取物对人低分化胃腺癌细胞(BGC)、人类口腔表皮样癌细胞(KB)、人肝癌细胞(SMMC)、人宫颈癌细胞(HELA)、人肺癌细胞(A549)有一定的抑制作用。体内证明白花蛇舌草乙醇提取物对小鼠移植性S180实体瘤有一定抑制作用。以白花蛇舌草为君药的医院制剂中肝合剂，在治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效显示能显著提高III期原发性肝癌患者的生活质量，延长生存时间。“李氏膈食散”的主要药味无论临床试用还是实验研究均具有良好的抗肿瘤效果，表明“李氏膈食散”复方配伍具有理论和和实践应用的基础。
[0012]“李氏膈食散”复方既有动物药又有植物药，各味药的主要活性成分各不相同，蟾蜍抗肿瘤主要活性成分为蟾毒内酯类成分，属强心苷类物质，包括蟾毒灵(bufalin)、脂蟾蜍配基(resibufogenin)、华蟾酥毒基(又称华蟾毒精cinobufagin)等；阿魏主要活性成分为挥发油、香豆素和苯丙素等，白花蛇舌草的主要活性成分有黄酮、三萜、有机酸及多糖等多种成分，马宝可解毒去恶疮，这些不同活性成分从肿瘤不同靶点发挥作用，充分体现中药的多成分、多靶点作用特点，从整体调节机体功能达到去除疾病的目的。
[0013]“李氏膈食散”临床试用时使用的是散剂，即将药材粉碎，过筛，混匀，即用于胃癌、食道癌等消化道肿瘤病人的治疗，病人服用方法通常采用黄酒送服。由于体外细胞实验时药材粉末是不能进入细胞的，必须对药材进行提取。本发明对“李氏膈食散”进行水提取和醇提取两种方法，并对两种提取物均进行了体外抗肿瘤活性研究。实验结果表明两种提取物对肝癌细胞(HpeG-2)、胃癌细胞(MKN-45)、食道癌细胞(EC-10)三种消化系统肿瘤细胞株均有体外抗肿瘤效果，以乙醇提取物效果更好。乙醇提取物对三种肿瘤细胞株最大抑制率在90%左右。本发明的研究结果初步表明“李氏膈食散”脂溶性成分可能具有更好的抗肿瘤活性，也间接证明临床试用中采用黄酒服用是有一定的科学依据。
[0014]本发明的抗肿瘤药物，经过体外抗肿瘤试验研究报告，检测数据显示:“李氏膈食散”水提取物和乙醇提取物对肝癌细胞(HpeG-2)、胃癌细胞(MKN-45)、食道癌细胞(EC-109)三种消化系统细胞株有明显的体外抗肿瘤效果。乙醇提取物效果更好，对三种细胞株的最大抑制率接近或超过90%。对肝癌细胞最大抑制率达88.40%，对食道癌细胞最大抑制率达91.88%，对胃癌细胞最`大抑制率达93.98%。国内同类药物检测过的最高癌细胞抑制率仅有50%左右，而人尽皆知的名贵抗癌药材红豆杉的抑癌率也仅有30%左右。而本发明的癌细胞最大抑制率远远高于此。
[0015]由于中医里面十分讲究药的剂量的精准度、君臣佐使配伍理论等，因而当一味药的剂量发生变化时，会对整个处方的效果产生相应的影响。实施例2的效果验证中可以看出，当配方中的任一成分发生变化时，效果也受到很大的影响，抗癌效果将大打折扣。因此更加证明本发明的配方是经过 申请人:多年经验和创造性劳动才得出的。具有非常好的抗癌效果。
【具体实施方式】
[0016]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0017]实施例所用材料商购来源:
[0018]细胞:人肝癌细胞(HepG-2)、胃癌细胞(MKN-45)、食道癌细胞(EC-109)，均购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
[0019]试剂:95%乙醇(分析纯，北京化工厂)，DMSO (分析纯，北京化工厂)RPMI 1640培养基(Solarbio公司，中国),胰蛋白酶(Solarbio公司，中国),胎牛血清(Gibco公司，美国)，磷酸盐缓冲液(Thermo公司，德国)，MTT试剂(Gibco公司，美国)；
[0020]仪器:纯水仪(Millipore公司，美国),96孔细胞培养板(Thermo公司，德国),倒置显微镜(OLYMPUS公司，日本)，二氧化碳培养箱(Thermo公司，德国)，连续波长酶标仪(B10-TEK，美国)。
[0021]实施例1:本发明抗肿瘤药物(李氏膈食散)的制备方法
[0022]成分:阿魏30g蟾蜍30g马宝50g白花蛇舌草150g。
[0023]步骤:称取药材，粉碎、过筛得到300-800目的粉末、混匀即可。
[0024]I)李氏膈食散水提物的制备方法
[0025]李氏膈食散生药粉末IOgJP 100ml水回流提取三次，每次30min，过滤，滤液合并，真空干燥，得到李氏膈食散水提物，得率为16.8%。
[0026]2)李氏膈食散醇提物的制备方法
[0027]称取李氏膈食散生药粉末`IOgJP 100ml95%乙醇溶液回流提取三次，每次30min，过滤，滤液合并，真空干燥，得到李氏膈食散乙醇提取物，得率为10.5%。
[0028]实施例2:抗肿瘤效果实验
[0029]取对数生长期的肝癌细胞株(HepG-2)、胃癌细胞株(MKN-45)以及食道癌细胞株(EC-109),消化计数后分别接种于96孔培养板中，每孔约8000-10000个细胞，恒温37度培养12小时，弃去培养液，加入不同浓度的含药培养基(用RPMI1640培养基配置)100 ii L继续恒温37度培养24小时，吸出培养液，每孔加入150 u L磷酸盐缓冲溶液和100 u L0.5g ? L—1的MTT溶液，继续恒温37度培养4小时后弃去MTT溶液和磷酸盐缓冲溶液，每孔加入150 y LDMSO溶解，平板震荡仪震荡15min，在酶标仪上用波长570nm，参比波长为450nm的条件测定各孔吸光度值(OD)，计算抑制率:[抑制率(％)=( I 一实验组OD值/对照组OD组)X 100%]，并求出各浓度半数抑制浓度(IC5tl)实验结果以x±s表示，经SPSS17.0统计软件处理并进行t检验和单因素方差分析，以P < 0.05为有统计学意义。
[0030]其中实验组的配方为实施例1中的配方，
[0031]对照I的配方为阿魏20g蟾蜍25g马宝40g白花蛇舌草140g ；
[0032]对照2的配方为阿魏40g蟾蜍35g马宝60g白花蛇舌草160g ；
[0033]提取方法参照实施例1。
[0034]空白对照就只加培养基即可。
[0035]李氏膈食散水提物(实施例1的配方)的实验结果见表1、2和3.[0036]表1“李氏膈食散”(实施例1的配方)水提物对肝癌细胞IfepG-2的抑制作用(X土S，n=3)
【权利要求】
1.一种抗肿瘤药物，其特征在于，由如下重量比的各成分组成，为阿魏:蟾蜍:马宝:白花蛇舌草=30:30:50:150。
2.权利要求1的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，称取权利要求1中的各成分、将各成分粉碎、过筛、混匀即可。
3.权利要求2所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于，所述过筛所得抗肿瘤药物各成分的直径为300-800目。
4.权利要求1所述抗肿瘤药物用于抗肿瘤的用途。
5.权利要求4所述抗肿瘤药物用于抗肿瘤的用途，其特征在于，所述肿瘤为肝癌、胃癌、食道癌。
6.权利要求4所述抗肿瘤药物用于抗肿瘤的用途，其特征在于，包括将所述抗肿瘤药物用水或者黄酒送服的步骤`。
【文档编号】A61K36/748GK103655822SQ201310711596
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】李徐钦 申请人:李徐钦, 马丹霞