游离酸形式的ω-3多不饱和脂肪酸的富含dpa组合物的制作方法

游离酸形式的ω-3多不饱和脂肪酸的富含dpa组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供采用游离酸形式的多不饱和脂肪酸的富含DPA的药物组合物、它们应用的治疗方法、和从鱼油中精制这些组合物的工艺。还提供通过他汀类与本发明中所描述药物组合物的辅助给药来治疗高甘油三酯血症(200mg/dL-500mg/dL)的方法。其中更多的治疗方法包括：增加血浆EPA:AA比率的治疗、降低载脂蛋白CⅢ(Apo CⅢ)水平的治疗、和降低并防止对血小板聚集抑制剂的耐药性的治疗。
【专利说明】游离酸形式的Ω-3多不饱和脂肪酸的富含DPA组合物 1.相关申请的交叉引用
[0001] 依据35美国法典§ 119(e)，本申请要求2012年1月6日提交的美国临时专利申请 61/583,796、2012年6月25日提交的美国临时专利申请61/664,047、2012年7月10日提交 的美国临时专利申请61/669,940、2012年8月7日提交的美国临时专利申请61/680,622、 2012年10月5日提交的美国临时专利申请61/710, 517、和2012年10月12日提交的美国 临时专利申请61/713, 388的权益，这些专利申请的全部内容通过援引并入本文中。 2.【背景技术】
[0002] 业界正在开发富含Ω -3 (ω -3或η-3)多不饱和脂肪酸（PUFA)的药物组合物用以 治疗多种临床指征。
[0003] 从天然来源（通常是鱼油）中获得的这些产品是异质的组合物并且包含各种类的 Q-3PUFA、Q-6PUFA和其他小组分（包括单不饱和及饱和脂肪酸）。所观察的临床疗效通 常归因于该组合物整体，尽管存在于该混合物中的最普遍的PUFA种类（通常是EPA和DHA) 被认为贡献了所观察临床疗效中的大部分。因为它们是异质的组合物，所以定义这些产品 含有某些必要的多不饱和脂肪酸种类，各在规定的百分率容许（tolerance)范围内。进一 步定义该组合物限制某些不希望有的组分，包括来自天然来源（例如某些环境污染物）的 那些和有可能在精制工艺中产生的那些组分。
[0004] 最佳组成可能随将应用的临床指征而变化。然而，甚至对于第一个获批准的临床 指征，用于严重高甘油三酯血症（TGs>500mg/dl)的治疗的最佳组成仍未确定。
[0005] 因此，用于治疗严重高甘油三酯血症的第一个获批准的药物组合物以大约 46:38(EPA:DHA)的重量百分比含有采用乙基酯类形式的Q-3PUFA种类二十碳五烯酸 (EPA)和二十二碳六烯酸（DHA)，其中EPA与DHA -起占到该组合物中全部PUFA种类的大 约84%。相反，新近获批准的产品Vascepa? (以前称为AMR101)，其被批准用于相同的临床 指征，是乙基酯形式的纯EPA>96%的，基本上没有DHA。作为膳食补充剂销售并且部分宣传 有助于降低甘油三酯水平的营养食品产品0MAX3,以大约4. 1:1的重量比含有EPA和DHA， 其中EPA和DHA同样地采用乙基酯的形式，该制剂具有多于84%重量的EPA和DHA及大于 90%重量的Ω-3脂肪酸。
[0006] 组合物中的这些宽范围变化反映出用于此临床指征的最优组成的持续不确定性。
[0007] 该不确定性部分是由于相互矛盾的临床目的所致。例如，已知Q-3PUFA种类 DHA在降低血清甘油三酯方面比EPA更强效，但已知其在提高低密度脂蛋白（LDL)水平方 面具有更强的倾向，Mori 等人，Am. J. Clin. Nutr. 71:1085 - 94 (2000)，Grimsgaard 等人， Am. J. Clin. Nutr. 66:649 - 59(1997) ;LDL的升高被认为在临床上对于具有升高的心血管 病风险的受试者是不利的。尽管利用Q-3PUFA降低血小板聚集和血栓形成在临床上常常 是期望的，但可能的出血时间延长促使某些人提出向富含Q-3PUFA的药物组合物中添加 一定量的Q-6PUFA种类，花生四烯酸（AA)。参见美国核准前公开第2010/0160435号。
[0008] 确定最优组成的困难也部分是由于在某些Q-3PUFA种类中的酶互换、以及Ω-3 与Ω -6多不饱和脂肪酸之间在它们各自从中链膳食PUFA的生物合成途径中对公用酶的竞 争所致（见图1)。
[0009] 设计最优组成中的另一个问题是口服给药的PUFA组合物的生物利用度的变 化。已知采用乙基酯类形式的PUFA的吸收例如取决于胰脂肪酶的存在，该胰脂肪酶 响应脂肪的摄入而释放。因此PUFA乙基酯类的吸收是低效率的，并且在各受试者和 任何单独受试者中基于脂肪的饮食摄入量而有大幅变化。参见Lawson等人的"采用 甘油三酯类、游离酸类或乙基酯类形式的鱼油脂肪酸的人体吸收（Human absorption of fish oil fatty acids as triacyglycerols, free acids, or ethyl esters)，'， Biochem Biophys Res Commun. 152:328-35(1988) ;Lawson 等人，Biochem Biophys Res Commun. 156:960-3(1988)。尤其在低脂肪饮食的受试者中PUFA的吸收减少，该低脂肪饮食 是对具有升高的血清甘油三酯水平或患有心血管疾病的受试者提倡的饮食。
[0010] 就任何特别理想的PUFA药物组合物而言，通过设计精制工艺而生产最终产品，该 最终产品具有在预定百分率容许范围内的必要脂肪酸组分并且将某些不希望有的组分限 制到低于某些预定容许限的水平，并且具有足够的产率以便使该工艺可适用于工业规模生 产且在环境上是可持续的。期望的最终组成中的差异决定了精制工艺中的差异。
[0011] 然而，各种已知的工艺步骤中存在着权衡，该权衡使精制工艺的组成特定的调整 和优化变得困难。例如，在乙醇存在下的尿素包合络合（包合作用）经常用于去除饱和及 单不饱和长链脂肪酸，从而增加期望的长链Ω-3多不饱和脂肪酸在所形成组合物中的相 对比例。太少的尿素降低长链Q-3PUFA的富集。然而，过量的尿素可导致无用组分的浓度， 并且具有在任何给定的温度和反应时间下导致氨基甲酸乙酯的产生增加的可能性，氨基甲 酸乙酯是不允许超过某些规定低限的致癌物。然而，尿素包合的现有替代方法中存在着其 他困难。
[0012] 因此，对于富含特别是用于治疗高甘油三酯血症和混合性血脂异常的Ω-3多不 饱和脂肪酸的改进药物组合物存在着需求，并对从鱼油中精制这种组合物的改进工艺存在 着需求。 3.
【发明内容】

[0013] 在第一方面，本公开提供采用游离酸形式的Ω-3多不饱和脂肪酸的富含DPA药物 组合物。DPA含量的富集是工业规模生产过程的非预期和意外的后果。这些富含DPA的药 物组合物已被证明在体外实验和人类临床试验中具有优异的药理功效和临床疗效。
[0014] 因此，在另一方面，本公开提供治疗的方法。在一个系列的治疗实施方式中，提供 用于治疗严重高甘油三酯血症（TG>500mg/dL)的方法。在另一个系列的治疗实施方式中， 提供通过他汀类与本文中所描述药物组合物的辅助给药来治疗高甘油三酯血症（200mg/ dL-500mg/dL)的方法。其他治疗方法尤其包括：增加血浆EPA:AA比率的治疗、降低载脂蛋 白CIII (Ap0CIII)水平的治疗、和降低或防止对血小板聚集抑制剂的耐药性的治疗。
[0015] 本文中还公开了以工业规模制造所述药物组合物的方法，包括包含尿素包合步骤 的方法，在该尿素包合步骤中组成约束批次的经酯交换中间原料经历采用在由新工艺算法 所确定范围内的尿素量的尿素包合步骤。 4.【专利附图】

【附图说明】
[0016] 图1示出了由中间（中等）链长度必需脂肪酸生物合成Ω-3和Ω-6长链多不饱 和脂肪酸的已知人体内途径。
[0017] 图2是用于制备PUFA乙基酯类中间原料的示例性工艺的流程图。
[0018] 图3A中绘出了通过尿素包合步骤对各类脂肪酸的平均相对纯化，在该尿素包合 步骤中将算法确定量的尿素加入到PUFA乙基酯类的组成规定的中间原料中。
[0019] 图3B中示出了在将算法确定量的尿素加入到PUFA乙基酯类的组成规定的中间原 料中时各类Ω-3和Q-6PUFA乙基酯类的平均差别纯化。
[0020] 图4是说明实施例7中进一步描述的ECLIPSE临床研究的设计的治疗流程图。
[0021] 图5中对在高脂肪和低脂肪餐期中在L〇VaZa' s' 的单次给药（4g)后总EPA+DHA(基 线调整后变化）的生物利用度进行了比较。
[0022] 图6中对在高脂肪饮食期中在（4g)的Lovaza? ( "EE-FA"）或Epanova?的单次给 药后总EPA+DHA(基线调整后变化）的生物利用度进行了比较，Lovaz，或Epanwa11是一种 采用游离酸形式（"FFA"）的Q-3PUFA的富含DPA组合物。
[0023] 图7中对在低脂肪饮食期中在（4g)的Lovaza*或Epamwali单次给药后的总血浆 EPA+DHA浓度（基线调整后变化）进行了比较。
[0024] 图8中对在低脂肪饮食期中在（4g)的Lovaza1"或Epanovae单次给药后的总血浆 EPA浓度（基线调整后变化）进行了比较。
[0025] 图9中对在低脂肪饮食期中在（4g)的Lovaza+*或Epanova s单次给药后的总血浆 DHA浓度（基线调整后变化）进行了比较。
[0026] 图IOA和图IOB给出了在低脂肪和高脂肪餐期间单独受试者的AUCVt反应，以低 脂肪AUC Q_t与高脂肪AUCQ_t的比率（％ )表示。未绘出负的比率。
[0027] 图11是说明在实施例8中进一步描述的14天对比生物利用度试验的设计的治疗 流程图（时间线中未标上刻度）。
[0028] 图12A绘出了在实施例8中进一步描述的14天对比生物利用度试验中Lovazali的 治疗对比Epanovasi的治疗的平均未调整总EPA+DHA浓度与时间（线性刻度）的关系图。
[0029] 图12B是显示在图12A中括号中的点的未调整EPA+DHA(nmol/mL)的差异的柱状 图。
[0030] 图13中绘出了在14天对比生物利用度研究中Lovaza?的治疗相对于Epanova?的 治疗的EPA+DHA平均基线调整的血浆总EPA+DHA浓度与时间（线性刻度）的关系图。
[0031] 图14A是绘出在14天对比生物利用度研究的Lovaza*和Epaiiovas组中EPA+DHA的 未调整血浓度从基线增加到稳态的柱状图。
[0032] 图14B是绘出在14天对比生物利用度研究的L0vaza*:和Epanova?组中EPA+DHA的 未调整Cavg从基线增加到稳态的柱状图。
[0033] 图15A是绘出在14天对比生物利用度研究的Lovaza11'和Epanova?组中DHA的总血 浓度从基线增加到稳态的柱状图。
[0034] 图15B是绘出在14天对比生物利用度研究中Epanovas组群与L〇 vaza?组群比较 的DHACavg水平从基线增加到稳态的柱状图。
[0035] 图16A是绘出在14天对比生物利用度研究的u?vazaa:和Epanova v组中血中总EPA 水平从基线增加到稳态的柱状图。
[0036] 图16B中绘出了在14天对比生物利用度研究的Epamwae和Ltmmf:组群中 EPACavg水平从基线增加到稳态。
[0037] 图17提供说明在实施例10中进一步描述的EVOLVE研究的设计的治疗流程图。
[0038] 图18更详细地总结了 EVOLVE试验设计，其中进一步确定了研究访问的时间安排。
[0039] 图19示出了在EVOLVE试验中受试者的处置。
[0040] 图20A-图20D中示出了在EVOLVE试验中各治疗组的EPA (图20A)、DHA (图20B)、 DPA (图20C)和AA (图20D)的平均基线和治疗结束时（"EOT"）血浆水平（单位μ g/mL)。
[0041] 图20E中对实施例7中所描述ECLIPSE试验的平均基线和EOTEPA水平、实施例8 中所描述的14天生物利用度研究、实施例11中所描述他汀类的药物-药物相互作用研究 (STATINDDI)、实施例10中所描述EVOLVE试验的各治疗组及对照组、和使用不同的Ω -3组 合物的不相关JELIS试验（JELIS)的文献中早期报道值进行了比较。
[0042] 图 21A-图 21D 中绘出了在 EVOLVE 试验中 EPA(图 21A)、DHA(图 21B)、DPA(图 21C)和AA(图21D)的中值基线和治疗结束时（EOT)血浆水平（单位为μ g/mL)。
[0043] 图22A和图22B中绘出了 EVOLVE试验的每个治疗组的AA、DHA、EPA和DPA的绝对 血浆水平（单位为μ g/mL)从基线到EOT的变化。图22A绘出了平均值变化；图22B绘出 了中值变化。
[0044] 图23A中绘出了在EVOLVE试验的每个治疗组中AA、DHA、EPA和DPA从基线到EOT 的平均值变化，用基线值的百分率表示。图23B中绘出了从基线到EOT的中值百分率变化。
[0045] 图24A-图241中绘出了在EVOLVE试验中甘油三酯类（图24A)、非一 HDL-C(图 24B)、HDL-C (图 24C)、V-LDL-C (图 24D)、LDL-C (图 24E)、ApoB (图 24F)、ApoC III (图 24G)、 RLP (图24H)、LpPLA2 (图241)的平均基线和EOT血浆水平（单位为mg/dL，除了 LpPLA2以 ng/mL为单位表示）。
[0046] 图25A-图251中绘出了在EVOLVE试验中甘油三酯类（图25A)、非-HDL-C(图 25B)、HDL-C (图 25C)、V-LDL-C (图 2?)、LDL-C (图 25E)、ApoB (图 25F)、ApoC III (图 25G)、 RLP (图25H)、LpPLA2 (图251)的中值基线和EOT血浆水平（单位为mg/dL，除了 LpPLA2以 ng/mL为单位表示）。
[0047] 图26A和图26B中绘出了 EVOLVE试验的各治疗组的甘油三酯类（TG)、 非-HDL-C ( "NHDL-C"）、HDL-C、VLDL-C和LDL-C的绝对血浆水平（单位为mg/dL)从基线 至Ij EOT的变化，其中图26A中绘出了平均值变化并且图26B中示出了中值变化。
[0048] 图27中绘出了 2g剂量和4g剂量Epanova?的、由Y轴给出的EVOLVE试验中受试 者的百分比，这些受试者的甘油三酯水平降低了由X轴给出的标示百分率。
[0049] 图 28A 绘出了在 EVOLVE 试验的各治疗组中 TG、非-HDL-C (NHDL-C)、HDL-C、 VLDL-C、LDL-C、ApoB、ApoClII、LpLPA2和RLP从基线到EOT的平均值变化，该变化以基线值 的百分率表示，并且图28B中绘出了从基线到EOT的中值变化百分率。
[0050] 图 29 中绘出了在 EVOLVE 试验中 2g 和 4g 剂量的 Epaiuwat'之间EPA、DHA、DPA、AA、 TG、NHDL-C和HDL-C的血浆水平相对于基线的中值变化百分率的变化率（绝对值）。
[0051] 图30示出了在EVOLVE试验中测量的Epanova?在标示剂量下和由其他人报道的 AMR-101 (Vasc印a)的数据相对甘油三酯（TG)水平的比较数据。
[0052] 图31示出了 Epjnova :(如EVOLVE试验中所测量的）和AMR-101 (Vasc印a)对于 各种血脂参数的比较数据。AMR-101的数据是由其他人报道。（*)表示小于0. 05的p值， (**)表示小于0. 01的P值，〇**)表示小于0. 001的P值。
[0053] 图32示出了 Epanova? 2g和4g剂量（如EVOLVE试验中测定的）和L〇vaza? 4g齐[J 量对于各种血脂参数的比较数据。Lovaza*?的数据是由其他人报道。（*)表示小于0.05的 P值，（**)表示小于0. 01的P值，（***)表示小于0. 001的P值。
[0054] 图33示出了 Epanova? 2g和4g剂量（如EVOLVE试验中确定的）和Lwaza* 4g剂 量（由其他人报道）对于甘油三酯水平的比较数据。上标表示来源于（DEVOLVE试验、（2) 来自Lovaza?新药申请（NDA)的元分析、（3) Lovaza?的获FDA批准的产品标签、和（4)武田 (Takeda)研究的数据。〇)表示小于0. 05的p值，〇*)表示小于0. 01的p值，〇**)表示 小于0.001的p值。
[0055] 图34中绘出了在EVOLVE试验中测量的LDL的变化百分率与ApoC III的变化百分 率之间的相互关系。
[0056] 图35中绘出了如实施例10中进一步描述的EVOLVE研究的标示治疗组的具有大 于或等于750mg/dL的TG基线水平的EVOLVE试验受试者亚群中的相对于基线的最小二乘 (LS)平均值变化百分率。（*)表示小于0. 05的p值，（**)表示小于0. 01的p值，（***)表 示小于0.001的p值。
[0057] 图36中绘出了如实施例10中所描述的EVOLVE研究的指示治疗组的、患有II型糖 尿病的受试者亚群中的相对于基线的最小二乘（LS)平均值变化百分率。（*)表示小于0. 05 的P值，（**)表示小于〇. 01的P值，（***)表示小于〇. 001的P值。
[0058] 图37中绘出了如实施例10中所描述的EVOLVE研究的指示治疗组的、经历同时他 汀类治疗的受试者亚群中相对于基线的最小二乘（LS)平均值变化百分率。（*)表示小于 0. 05的p值，（**)表示小于0. 01的p值，（***)表示小于0. 001的p值。
[0059] 图38中绘出了相对于对照的甘油三酯类（TG)、非HDL胆固醇（NHDL-C)、HDL-C、 LDL-C、TC、VLDL-C和TC/HDL-C的最小二乘（LS)平均值变化百分率，图中对实施例10中所 描述EVOLVE研究的使用2g剂量Epanova?进行治疗同时接受（他汀）或者不接受（非他 汀）他汀类治疗的受试者进行了比较。（*)表示小于〇. 05的p值，（**)表示小于0. 01的 P值，（***)表示小于〇· 001的P值。
[0060] 图39中绘出了在实施例10中进一步描述的EVOLVE研究的指示治疗组中经历同 时他汀类治疗的受试者亚群的TG、NHDL-C、HDL-C、LDL-C、TC、VLDL-C和TC/HDL-C相对于基 线的中值变化百分率。（*)表示小于0. 05的P值，（**)表示小于0. Ol的P值，（***)表示 小于0.001的P值。
[0061] 图40提供了说明实施例12中进一步描述的ESPRIT研究的设计的治疗流程图。
[0062] 图41示出了在ESPRIT试验中受试者的处置。
[0063] 图42A和图42B中绘出了来自实施例12中进一步描述的ESPRIT研究的EPA(图 42A)和DHA(图42B)相对于基线的中值最小二乘变化百分率。（*)表示小于0. 05的p值， (**)表示小于0. 01的P值，〇**)表示小于0. 001的P值。
[0064] 图43中绘出了 TG、非-HDL-C和HDL-C相对于基线的最小二乘平均值变化百分率。 显示的数据是来自实施例12中进一步描述的ESPRIT研究。（*)表示小于0. 05的p值，（**) 表示小于〇. 01的P值，（***)表示小于〇. 001的P值。
[0065] 图44中绘出了 ApoB、LDL-C、VLDL-C和TC/HDL-C相对于基线的最小二乘平均值变 化百分率。显示的数据是来自实施例12中进一步描述的ESPRIT研究。（*)表示小于0.05 的P值，（**)表示小于〇. 01的P值，（***)表示小于〇. 001的P值。
[0066] 图45中绘出了 ESPRIT试验中受试者的相对于基线的TG中值变化百分率，其中基 于基线TG水平将受试者分组入三分位（tertile)。
[0067] 图46中绘出了 ESPRIT试验中受试者的非-HDL-C相对于基线的中值变化百分率， 其中基于基线非-HDL-C水平将受试者分组入三分位。
[0068] 图47中绘出了 ESPRIT试验中受试者的LDL-C相对于基线的中值变化百分率，其 中基于基线LDL-C水平将受试者分组入三分位。
[0069] 图48中绘出了 ESPRIT试验的各治疗组的TG相对于基线的中值变化百分率，其中 根据同时治疗中所服用他汀类的特征将受试者分组。
[0070] 图49中绘出了 ESPRIT试验的各治疗组的TG相对于基线的中值变化百分率，其中 根据低或高效能的同时他汀类治疗将受试者分组入两组。
[0071] 图50中绘出了 ESPRIT试验的各治疗组的非-HDL-C相对于基线的中值变化百分 率，其中根据低或高效能的同时他汀类治疗将受试者分组。
[0072] 图51中绘出了 ESPRIT试验的每个治疗组的LDL-C相对于基线的中值变化百分 率，其中根据低或高效能的同时他汀类治疗将受试者分组入两组。
[0073] 图52中绘出了 TG相对于基线的中值变化百分率，其中根据高基线TG、高基线 EPA、或者同时的罗苏伐他汀治疗将ESPRIAT试验的各治疗组中的受试者分组入三组。
[0074] 图53中绘出了根据如ESPRIT试验中所测定粒径进行分组的V-LDL颗粒的粒径分 布相对于基线的最小二乘平均值变化百分率。（*)表示小于0.05的p值，（**)表示小于 〇· 01的P值，（*#)表示小于〇· 001的P值。
[0075] 图54中绘出了 ESPRIT试验的各治疗组的根据粒径进行分组的LDL颗粒的粒径分 布相对于基线的最小二乘平均值变化百分率。（*)表示小于〇. 05的p值，（**)表示小于 〇· 01的P值，（*林）表示小于〇· 001的P值。
[0076] 图55中绘出了 LDL粒径中的最小二乘中值变化百分率，其中根据ESPRITE0T甘油 三酯水平将受试者分组入三组。
[0077] 图56A示出了实施例11中进一步描述的临床试验中的根据在rsl74546SNP处的 基因型进行分组的受试者的基线花生四烯酸（AA)血浆水平（单位μ g/mL)。图56B示出了 根据在rsl74546SNP处的基因型进行分组的受试者在用Epanova?治疗的第15天AA血浆水 平相对于基线的变化百分率。就各基因型而言，由方框表示四分位距，四分位方框内部的水 平线表示中值，由菱形框表示平均值。开放的圆表示离群值。触须线（whisker)延伸到最 小和最大非离群值的值。评分1标示在主要等位基因处是纯合子的受试者；评分3标示在 次要等位基因处是纯合子的受试者；评分2表示杂合子。 5.发明详述 5. 1.概述：游离酸形式的Ω-3多不饱和脂肪酸药物组合物，其意外地富含具有优异的 临床疗效的DPA
[0078] 尿素包合络合（包合作用（clathration))是鱼油精制中经常采用的标准步骤，用 于去除饱和及单不饱和长链脂肪酸，因此在所形成组合物中使期望的长链Ω-3多不饱和 脂肪酸富集。尽管有长期应用，但被设计用来描述各种生理化学参数对工艺影响的特征的 研究中，尿素包合使长链多不饱和脂肪酸的单独种类富集的程度仍然是不可预知的。尿素 包合步骤中的这种残余的不可预知性，外加产生不允许的高水平的氨基甲酸乙酯的可能性 (这将会使其他处理成为必须），这最初使得倾向于从用于生产符合某些理想组成规格的 游离酸形式的Q-3PUFA的医药级组合物的工业规模精制工艺中省略去尿素包合。
[0079] 然而，如实施例1中的进一步描述，开发无尿素工业规模工艺的早期努力已证明 这种工艺不能可靠地生产具有符合要求规格的组成的批次产品。因此，寻找到一种采用尿 素包合的工艺，据发现通过对存在于中间乙基酯原料中的PUFA种类实行严格的组成控制 外加使用算法确定量的尿素，可以可靠地生产符合要求规格且不超过可接受的氨基甲酸乙 酯限值的批次产品。
[0080] 如实施例2中所描述，利用尿素包合步骤制备四个示例性生产批次的采用游离酸 形式的多不饱和脂肪酸。将严格的组成控制应用于乙基酯中间原料，仅使用其中规定的多 不饱和脂肪酸种类落在定义的范围限值内的批次产品，并且采用落在尿素计算器算法所要 求范围内的尿素量。确定全部四个生产批次的药物组合物均符合期望的组成规格。
[0081] 正如预期的，尿素包合步骤大幅降低所形成组合物中饱和脂肪酸和单不饱和脂肪 酸的百分率，由此大幅地富集多不饱和脂肪酸。参见图3A。但意外地，实施使用落在算法确 定范围内的尿素量的尿素包合对Ω-3多不饱和脂肪酸和Ω-6多不饱和脂肪酸的特定种类 的富集具有差别的作用。
[0082] 如下面实施例3中的描述，发现富集了 Ω-3二十二碳五烯酸种类DPA(C22:5n_3)， 而具有相同链长度和不饱和度的相应的Ω-6种类二十二碳五烯酸（C22:5n-6)则占优势地 被减少。尿素包合对这两种异构体的富集的不同影响，连同它们在乙基酯中间原料中的相 对浓度的差异，导致它们在最终游离酸药物组合物（API)中的浓度产生对数级的差异。
[0083] 制备其他生产批次，并且如实施例4中所描述，对10个批次API的组成分析证明 最终组合物中存在可再现地升高水平的DPA。如实施例5中所描述，对利用尿素包合所制备 的21个批次的组成分析证明：与其Ω-6异构体二十二碳五烯酸（C22:5n-6)相比存在可再 现的Ω -3种类DPA的浓度中的10倍差异。
[0084] 在21个生产批次中，在4. 44% (a/a)的平均浓度下，DPA是API中第三最占 优势的多不饱和脂肪酸种类，仅被EPA和DHA超过。在此水平下，DPA浓度也是被称为 Purepa的采用游离酸形式的Ω-3多不饱和脂肪酸的较早的药物组合物所报道浓度的大 约10倍，Pur印a中据报道DPA是以0. 5 %的浓度存在。参见Belluzzi等人，Dig. Dis. Sci. 39(12) :2589-2594(1994)。
[0085] 尽管DPA是从EPA到DHA的生物合成途径中的一个中间体（见图1)，但出人意料 地对于DPA的具体生物学效应却了解不多。为了澄清DPA对所述药物组合物的临床疗效的 潜在贡献，进行了使用HepG2肝癌细胞的表达概况分析实验。
[0086] 正如实施例6中的进一步描述，DPA对肝细胞基因表达的影响预测富含DPA组合 物的更大临床疗效。
[0087] 表达概况分析实验表明DPA在相关的体外浓度下具有显著的生物活性。这些作用 明显不同于使用EPA和DHA所看到的作用。
[0088] 在相关的浓度下，观察到DPA在多种代谢途径中影响基因的表达，包括已知与 Ω-3多不饱和脂肪酸的临床疗效相关类别中的基因：与脂类代谢有关的基因、与心血管生 理有关的基因、和与炎症有关的基因。考虑到编码自身影响基因表达的蛋白质的基因表达 中、和在编码影响转录后修饰的蛋白质的基因中所观察到的变化，也可预测产生显著的二 级效应。
[0089] 对与脂类代谢有关的若干基因的表达的特定作用表明DPA，在类似的体内浓度下， 应当有贡献于各种临床相关脂类参数的改善。特别是，所观察到的DPA驱动的ACADSB(短 链/支链酰基辅酶A脱氢酶）的上调，预测较低的血清甘油三酯水平；DPA驱动的HMGCR的 下调，类似于他汀类对编码的HMG-辅酶A还原酶的抑制，将会被预测导致总胆固醇：HDL比 率的有利下降；由于DPA对SQLE (留醇合成中的速率限制步骤）的下调，类似地可预测总胆 固醇水平的下降。
[0090] 表达概况分析实验也揭示了 DPA作用的阈剂量。被选择用来模拟比较早的游离酸 Ω _3制剂（Pur印a)中的DPA浓度低10倍的较低的测试浓度，实现是较高DPA浓度的1/10 的基因表达，被选择用来模拟本文中所描述的预测来自药物组合物的暴露，从而证明较低 的DPA浓度提供阈下暴露，并且被期望能提供体内次治疗剂量。
[0091] 人临床试验确认了采用游离酸形式的Ω-3多不饱和脂肪酸的富含DPA药物组合 物具有优异的临床疗效。
[0092] 实施例7中给出了 ECLIPSE临床试验的结果，该临床试验是一项开放标签、单剂 量、随机分组4-通路交叉研究，该研究对在高脂肪和低脂肪膳食两种条件下4g剂量的 Lovaza?的生物利用度与4g剂量的本文中所描述采用游离酸形式的Ω -3PUFA的富含DPA 药物组合物（在下文中称为"Epawwa?"）的生物利用度进行了比较。根据获FDA批准的 产品标签，各1克Lwaza?胶囊中含有至少900mg来源于鱼油的Ω -3脂肪酸的乙基酯类，该 乙基酯类主要是二十碳五烯酸（EPA，大约465mg)与二十二碳六烯酸（DHA，大约375mg)的 乙基酯类的组合。该试验中所使用----的批次产品包含57. 3% (a/a)的EPA、19. 6% (a/a)的DHA、和6.2% (a/a)的DPA，各基本上是采用游离酸的形式。
[0093] 在高脂肪饮食期中，使用Epanova? (采用游离酸形式的Ω -3PUFA)的总EPA+DHA 及单独的EPA和DHA吸收曲线（AUC)中的基线调整后变化显著大于使用Lovazal (Ω-3-PUFA乙基酯类）的基线调整后变化，并且在低脂肪餐期中明显地更好。此外，膳食 中的脂肪含量对Lovaza?的生物利用度具有深刻的影响，但由于仅适度的食物效应因而 Epanova?的生物利用度的可预测性要高得多。
[0094] 鉴于NCEPATPIII建议患有高甘油三酯血症和血脂异常的受试者在辅助治疗期间 坚持低脂肪饮食，Epanova?比LOTaZa?优越的脂肪不依赖性生物利用度在临床上具有重要 意义。
[0095] 实施例8中给出了来自14天生物利用度研究的结果，该研究表明在2周的给药期 间在单剂量ECLIPSE试验中所观察到的生物利用度的提高得以维持，甚至被增强。另外，解 集的（disaggregated)受试者特定数据表明对Epanova?具有最小反应的受试者仍然具有 与对Lovaza?具有最佳反应的受试者相比更大的14天EPA+DHAC max。
[0096] 实施例10中给出了 EVOLVE试验的结果，该试验是基于在500-2, 000mg/dL范围内 高甘油三酯水平进行选择的患者（严重高甘油三酯血症）的12周、双盲、橄榄油对照研究。 主要研究终点是血浆甘油三酯水平从基线到治疗结束时（EOT)的变化百分率。次要研究终 点是血浆非高密度脂蛋白胆固醇（non-HDL-C)从基线到EOT的变化百分率。
[0097] 如图20-图23中所见,使用Epanova?的12周治疗导致EPA、DHA和DPA的血浆水 平显著增加。
[0098] EPA、DHA和DPA的血浆水平增加伴随着血浆AA水平的显著降低，并且4g给药方 案实现18%的平均值下降、25. 9%的中值下降、和23. 2%的最小二乘（LS)平均值下降。尽 管有外源性花生四烯酸的给药但观察到这些血浆花生四烯酸水平下降，花生四烯酸在此试 验中所使用Epanova^批次中是以2.446% (a/a)的含量而存在。
[0099] 在4g剂量的治疗结束时（EOT)，EPA血浆水平的增加连同同时发生的AA血 浆水平下降导致EPA/AA比的显著提高，在基线处从大约0. 10提高到大约0.67(平 均值）和0.62(中值）。已有报道EPA/AA比率构成冠状动脉粥样硬化的一个独立 危险因素，Nakamua&Maegawa, Endocrine Abstracts (2012) 290C19. 1，在用他汀类治 疗的冠状动脉疾病患者中较低的该比率与冠状动脉粥样硬化的发展有关，Nozue等 人，AmJCardiol. 2013Janl ;111 (1) :6-1 (印刷出版前的电子版）。
[0100] 而且，使用Epancwa*^^治疗导致甘油三酯水平的大幅下降（见图26A和图26B)、 非-HDL-C和VLDL-C的下降、和HDL-C的增加。LDL-C水平是升高的，这是在治疗时有助于 LDL粒径增加的观察（在实施例12中进一步论述）。
[0101] EVOLVE试验还表明Epantwav治疗大幅降低载脂蛋白C III (ApoC III)。已发现 ApoCIII的水平升高是心血管疾病（CHD)危险的一个独立预测因素，而在基因方面ApoCIII的 水平下降与心血管疾病的防护有关并且也与寿命增加相关。
[0102] Epmovae中Ω -3PUFA的极高生物利用度显示了以前未知且非预期的各种PUFA种 类中药代动力学反应中的差异。
[0103] 图 29 中绘出了在 2g 与 4g 剂量的 Epanwa"之间 EPA、DHA、DPA、AA、TG、#-HDL-C、 和HDL-C (绝对值）血浆水平相对于基线的中值变化百分率中的变化率。在将Epanova?的 齐U量从2g/日加倍到4g/日时DHA和DPA的血浆水平有小幅增加或者没有增加，相对于基 线的中值变化百分率的变化率（斜率）接近零，预测如果进一步增加剂量将会实现DHA和 DPA血浆水平进一步的小幅提高。在甘油三酯水平、HDL-C水平、和非-HDL-C水平（数据未 示出）中看到类似的反应稳定状态。
[0104] 相反，EPA的变化率仍然高，具有0. 59的斜率；预测通过将Epanova8的剂量增加到 超过4g/日可获得EPA血浆水平的进一步增加。显著地，当把Epamw,的剂量从2g加倍到 4g/日时AA水平的变化率（下降）甚至高于EPA;当把Epmova?的剂量增加到超过4g/日 时，预测AA的血浆水平会进一步下降。因此，Epanova'#在升高EPA水平、降低AA水平的能 力方面显示出前所未有的效能，并且提高EPA:AA比。
[0105] 如图38中所示，与2g治疗组中不接受同时他汀类治疗的受试者相比较，EVOLVE 试验的2g治疗组中正在接受同时他汀类治疗的受试者亚群相对于对照显示TG、非-HDL-C、 HDL-C、LDL-C、TC、VLDL-C和TC/HDL-C的更大幅度的变化百分率（最小二乘差平均值）。接 受同时他汀类治疗的受试者显示对Epanova?的剂量依赖性反应，如图39中Epanova+m 2g与 Epanova? 4g的比较数据中所示。
[0106] 实施例12描述了 ESPRIT临床试验，通过实施该临床试验对在基线他汀类治疗中 的患者进行研究，这些患者具有在200-500mg/dL之间的甘油三酯水平，该水平低于参加实 施例10中所描述EVOLVE研究的患有严重高甘油三酯血症的患者。
[0107] 当与橄榄油安慰剂进行比较时，观察到甘油三酯类的剂量依赖性下降、非-HDL-C 的下降、和HDL-C的增加（参见图43)。而且，观察到VLDL-C和TC/HDL-C的剂量依赖性下 降（参见图44)。合起来看，这些结果（汇总于图42-图44中）证明在甘油三酯水平在 200-500mg/dL之间的患者中Epanova?作为他汀类治疗的附加治疗的效能。
[0108] 图45-图52说明了在基线患者病症范围内Epanovae作为低效能和高效能他汀类 的附加治疗是有效的。如图48中所见，就接受同时罗苏伐他汀、阿托伐他汀、和辛伐他汀治 疗的患者而言，观察到甘油三酯水平的下降。无论是否有低效能或者高效能他汀类的联合 给药，均观察到对甘油三酯类、非-HDL-C和LDL-C水平的有统计学意义的作用，如图49-图 51中所示。 5. 2采用游离酸形式的富含DPA的Ω -3组合物
[0109] 因此，在第一方面，本公开提供采用游离酸形式的多不饱和脂肪酸（PUFA)的改进 组合物。在各种实施方式中，该组合物是适合于口服给药的药物组合物。在多种实施方式 中，该组合物是适合于口服给药的营养食品组合物。 5. 2. 1典型的实施方式
[0110] 所述组合物包含多种Q-3PUFA种类，各基本上以游离酸的形式存在。
[0111] 该组合物包含二十碳五烯酸（C20:5n_3) (EPA，也称为timnodonic acid)、二十二 碳六烯酸（C22:6n-3) (DHA，也称为 cervonic acid)、和二十二碳五烯酸（C22:5n-3) (DPA， 也称为clupodonic acid)，各自基本上采用游离酸的形式。
[0112] 所述组合物以至少约45% (45% (a/a))的量含有EPA,该量是以所述组合物中所 有脂肪酸的气相色谱的面积的百分比计算的。在各种实施方式中，该组合物以至少约46% (a/a)47% (a/a)、48% (a/a)、49% (a/a)、或至少约 50% (a/a)的量含有 EPA。在某些实施 方式中，该组合物以至少约51% (a/a)、至少约52% (a/a)、至少约53% (a/a)、至少约54% (&/&)、至少约55|%(3/^)、至少约56(%(3/^)、至少约57 (%(3/^)、至少约58(%(3/^)，甚至 至少约 59% (a/a)、至少约 60% (a/a)、至少约 61% (a/a)、62% (a/a)、63% (a/a)、64% (a/a)、或 65% (a/a)的量含有 EPA。
[0113] 在某些实施方式中，所述组合物以约45至约65% (a/a)的量含有EPA。在具体实 施方式中，EPA是以约50至约60% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，EPA是以约52 至约58.0% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，EPA是以约55% (a/a)至约56% (a/ a)的量而存在。在一些实施方式中，EPA是以约55% (a/a)的量而存在。
[0114] 在各种实施方式中，所述组合物以约50% (m/m)至约60% (m/m)的量含有EPA，该 量是以该组合物中所有脂肪酸的质量的百分率的形式进行计算(m/m))。在某些实施方 式中，EPA是以约55% (m/m)的量而存在。
[0115] 所述组合物以至少约13% (a/a)的量含有DHA。在各种实施方式中，所述组合物以 至少约14% (a/a)、至少约15% (a/a)、至少约16% (a/a)、至少约17% (a/a)、至少约18% (a/a)、至少约19% (a/a)、或者至少约20% (a/a)的量含有DHA。在所选择的实施方式中， 所述组合物以至少约21% (a/a)、至少约22% (a/a)、至少约23% (a/a)、至少约24% (a/ a)、甚至至少约25% (a/a)的量含有DHA。
[0116] 在各种实施方式中，所述组合物以约13% (a/a)至约25% (a/a)的量含有DHA。 在某些实施方式中，DHA是以约15% (a/a)至约25% (a/a)的量而存在。在若干个实施方 式中，DHA是以约17% (a/a)至约23% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DHA是以约 19% (a/a)至约20% (a/a)的量而存在。
[0117] 在各种实施方式中，所述组合物以约15% (m/m)至约25% (m/m)的量含有DHA。 在某些实施方式中，DHA是以约17% (m/m)至约23% (m/m)的量而存在。在某些实施方式 中，DHA是以约20% (m/m)的量而存在。
[0118] 所述组合物以至少约1% (a/a)的量含有DPA。在各种实施方式中，所述组合物以 至少约 1.5% (a/a)、2% (a/a)、2.5% (a/a)、3% (a/a)、3.5% (a/a)、4% (a/a)、4.5% (a/ a)、甚至至少约5% (a/a)的量含有DPA。在所选择的实施方式中，所述组合物以至少约6% (a/a)、至少约7% (a/a)、至少约8% (a/a)、或者至少约9% (a/a)的量含有DPA。
[0119] 在多种实施方式中，所述组合物以约1% (a/a)至约8% (a/a)的量含有DPA。在 某些实施方式中，所述组合物以约2% (a/a)至约7% (a/a)的量含有DPA。在所选择的实 施方式中，所述组合物以约3% (a/a)至约6% (a/a)的量含有DPA。在【具体实施方式】中，所 述组合物以约4% (a/a)至约5% (a/a)的量含有DPA。
[0120] 在各种实施方式中，以在该组合物中全部脂肪酸的质量的百分率的形式进行计 算，所述组合物以不小于约1% (m/m)的量含有DPA。在各种实施方式中，所述组合物以约 1% (m/m)至约8% (m/m)的量含有DPA。在【具体实施方式】中，所述组合物以不大于约10% (m/m)的量含有DPA。
[0121] 所述组合物以至少约60% (a/a)的总量含有EPA和DHA。在各种实施方式中，所 述组合物以至少约 61% (a/a)、62% (a/a)、63% (a/a)、64% (a/a)、65% (a/a)、66% (a/ a)、67% (a/a)、68% (a/a)、69% (a/a)、或至少约 70% (a/a)的总量含有 EPA 和 DHA。在具 体实施方式中，所述组合物以至少约71% (a/a)、72% (a/a)、73% (a/a)、74% (a/a)、75% (a/a)、76% (a/a)、77% (a/a)、78% (a/a)、79% (a/a)、甚至至少约 80% (a/a)的总量含有 EPA和DHA。在某些实施方式中，所述组合物以至少约81% (a/a)、82% (a/a)、至少约83% (a/a)、84% (a/a)、甚至至少约85% (a/a)的总量含有EPA和DHA。
[0122] 在各种实施方式中，所述组合物以约70. 0% (m/m)至约80. 0% (m/m)的量含有 EPA和DHA。在某些实施方式中，所述组合物包含约75% (m/m)的EPA加 DHA。
[0123] 所述组合物以至少约61% (a/a)的总量含有EPA、DHA和DPA。在典型的实施方式 中，所述组合物以至少约 62% (a/a)、63% (a/a)、64% (a/a)、65% (a/a)、66% (a/a)、至少 约67% (a/a)、至少约68% (a/a)、至少约69% (a/a)、或者至少约70% (a/a)的总量含有 EPA、DHA和DPA。在某些实施方式中，所述组合物以至少约71% (a/a)、72% (a/a)、73% (a/ a), 74 % (a/a),75% (a/a),76% (a/a),77% (a/a),78% (a/a),79% (a/a),80% (a/a), 甚至至少约 81% (a/a)、82% (a/a)、83% (a/a)、84% (a/a)、85% (a/a)、86% (a/a)、87% (a/a)、甚至至少约88% (a/a)的总量含有EPA、DHA和DPA。
[0124] 在各种实施方式中，所述组合物以在约70% (a/a)至约90% (a/a)之间的总量含 有 EPA、DHA 和 DPA。
[0125] 在一个特定系列的实施方式中，EPA是以约55% (a/a)至约56% (a/a)的量而存 在；DHA是以约19% (a/a)至约20 % (a/a)的量而存在；DPA是以约4% (a/a)至约5 % (a/ a)的量而存在。
[0126] 在某些实施方式中，所述组合物还包含选自以下组的一种或多种Ω-3多不饱和 脂肪酸种类：α -亚麻酸（C18:3n-3)、十八碳四烯酸（C18:4n-3,也称为十八碳四烯酸）、 二十碳三烯酸（C20:3n-3)、二十碳四烯酸（C20:4n-3)、和二i^一碳五烯酸（C21: 5n_3)。
[0127] 在【具体实施方式】中，所述组合物包含EPA、DHA、DPA和十八碳四烯酸，各自基本上 采用游离酸的形式。在多种实施方式中，所述组合物包含EPA、DHA、DPA、十八碳四烯酸、和 二i^一碳五烯酸，各自基本上采用游离酸的形式。在【具体实施方式】中，所述组合物包含EPA、 DHA、DPA、十八碳四烯酸、二i^一碳五烯酸、和二十碳四烯酸，各自基本上采用游离酸的形 式。在所选择的实施方式中，所述组合物包含EPA、DHA、DPA、α-亚麻酸（C18:3n-3)、十八 碳四烯酸（C18:4n-3)、二十碳三烯酸（C20:3n-3)、二十碳四烯酸（C20:4n-3)、和二i^一碳 五烯酸（C21:5n-3)。
[0128] 在各种实施方式中，定义为α-亚麻酸（C18:3n_3)、十八碳四烯酸（C18:4n_3)、 二十碳三烯酸（C20:3n-3)、二十碳四烯酸（C20:4n-3)、二十碳五烯酸（EPA) (C20:5n-3)、 二i 碳五烯酸（C21:5n-3)、二十二碳五烯酸（C22:5n-3)和二十二碳六烯酸（DHA) (C22:6n-3)的总和的总Ω-3脂肪酸构成所述组合物中所有脂肪酸的约80% (a/a)至约 95% (a/a)。在多种实施方式中，总Ω-3脂肪酸构成所述组合物中全部脂肪酸的约80至约 95% (m/m) 〇
[0129] 在各种实施方式中，所述组合物还包含一种或多种Q-6PUFA种类，各种类基本上 是以游离酸的形式存在。
[0130] 在某些实施方式中，所述组合物包含选自以下组的一种或多种Q-6PUFA的种类： 亚油酸（C18:2n-6)、Y-亚麻酸（C18:3n-6)、二十碳二烯酸（C20:2n-6)、二高-Y-亚麻 酸（C20:3n-6) (DGLA)、花生四烯酸（C20:4n-6) (AA)、和二十二碳五烯酸（C22:5n-6,也称为 osbond acid)ο
[0131] 在【具体实施方式】中，所述组合物包含亚油酸（C18:2n-6)、γ-亚麻酸（C18:3n-6)、 二十碳二烯酸（C20:2n-6)，二高-Y-亚麻酸（C20:3n-6) (DGLA)、花生四烯酸（C20:4n-6) (AA)、和二十二碳五烯酸（C22:5n-6)，各自基本上是采用游离酸的形式存在。
[0132] 在各种实施方式中，AA是以不大于所述组合物中脂肪酸的约5% (a/a)量而存在。 在某些实施方式中，AA构成不大于约4.5% (a/a)的所述组合物中的脂肪酸。在具体实施 方式中，AA是以不大于所述组合物中脂肪酸的约4% (a/a)的量而存在。
[0133] 在某些实施方式中，AA是以不大于所述组合物中脂肪酸的约5% (m/m)的量而存 在。在某些实施方式中，AA包含不大于约4.5% (m/m)的所述组合物中的脂肪酸。在具体 实施方式中，AA是以不大于所述组合物中脂肪酸的约4% (m/m)的量而存在。
[0134] 在某些实施方式中，被定义为亚油酸（C18:2n-6)、Y-亚麻酸（C18:3n-6)、二十碳 二烯酸（C20:2n-6)、二高-Y-亚麻酸（C20:3n-6)、花生四烯酸（C20:4n-6)和二十二碳五 烯酸（C22:5n-6)的总和的总Ω-6多不饱和脂肪酸构成不大于约10% (a/a)的所述组合 物中的脂肪酸。在某些实施方式中，被定义为亚油酸（C18:2n-6)、Y-亚麻酸（C18:3n-6)、 二十碳二烯酸（C20:2n-6)、二高-Y-亚麻酸（C20:3n-6)、花生四烯酸（C20:4n-6)和 二十二碳五烯酸（C22:5n-6)的总和的总Ω-6多不饱和脂肪酸构成不大于约10% (m/m)的 所述组合物中的脂肪酸。
[0135] 在【具体实施方式】中，由表11给出组成，并且本文中确定的PUFA的各种类分别落在 所列举平均值的约-3SD至约+3SD的范围内。在某些实施方式中，其中所确定的各PUFA种 类分别落在所列举平均值的约-2SD至约+2SD的范围内。在某些实施方式中，各种类分别 落在所列举平均值的约-ISD至约+ISD的范围内。
[0136] 在所选择的实施方式中，由表13给出组成，并且其中所确定的各PUFA种类分别落 在所列举平均值的约-3SD至约+3SD的范围内。在某些实施方式中，各种类分别落在所列 举平均值的约-2SD至约+2SD范围内。在某些实施方式中，各PUFA种类分别落在所列举平 均值的约-ISD至约+ISD的范围内。
[0137] 在某些实施方式中，除Ω-3和Ω-6多不饱和脂肪酸以外的多不饱和脂肪酸是以 不大于约5% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，除Ω-3和Ω-6多不饱和脂肪酸以外 的多不饱和脂肪酸是以不大于约5% (m/m)的量而存在。
[0138] 在多种实施方式中，所述组合物中多种Q-3PUFA种类中的各种类的至少90%是 采用游离酸的形式。在某些实施方式中，所述组合物中各Q-3PUFA种类的至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、甚至至少99%是以 游离酸的形式存在。在示例性实施方式中，所述组合物中Ω-3多不饱和脂肪酸总含量的至 少90%是以游离酸的形式存在。在某些实施方式中，所述组合物中总Ω-3多不饱和脂肪酸 含量的至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少 98%、甚至至少99 %是以游离酸的形式存在。
[0139] 在各种实施方式中，所述组合物中多种Q-6PUFA种类中的各种类的至少90%是 以游离酸的形式存在。在某些实施方式中，所述组合物中各Q-6PUFA种类的至少91%、至 少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、甚至至少99% 是以游离酸的形式存在。在示例性实施方式中，所述组合物中至少90%的总Ω-6多不饱和 脂肪酸含量是以游离酸的形式存在。
[0140] 在各种实施方式中，所述组合物中至少90%的总多不饱和脂肪酸是采用游离酸的 形式存在。在某些实施方式中，所述组合物中至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、 至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %、甚至至少99 %的总多不饱和脂肪酸是以游离酸 的形式存在。
[0141] 在典型的实施方式中，所述组合物包含不大于约3.0% (a/a)的饱和脂肪酸、和 不大于约5.0% (a/a)的单不饱和脂肪酸。在各种实施方式中，所述组合物包含不大于约 3.0% (m/m)的饱和脂肪酸、和不大于约5.0% (m/m)的单不饱和脂肪酸。
[0142] 在典型的实施方式中，所述组合物有用地还包含抗氧化剂。在某些实施方式中，抗 氧化剂是丁基羟基苯甲醚（BHA)。在一些实施方式中，抗氧化剂是α-生育酚。在一些实施 方式中，α -生育酚是以约〇. 20%至0. 40% (m/m)的量而存在。在各种实施方式中，α -生 育酚是以约0.25%至约0.35% (m/m)的量而存在。在【具体实施方式】中，α-生育酚是以约 0.27 %至约0.33% (m/m)的量而存在。
[0143] 在典型的实施方式中，所述组合物包含不大于约0. Ippm的氨基甲酸乙酯。在一些 实施方式中，所述组合物包含不大于〇. Ippm的氨基甲酸乙酯。在各种实施方式中，所述组 合物包含小于0. Ippm的氨基甲酸乙酯。 5. 2. 2其他实施方式
[0144] 在某些其他实施方式中，以所述组合物中所有脂肪酸的气相色谱的面积的百分比 计算，所述组合物以约45. 0% -约65. 0% (a/a)的量含有EPA，。在某些实施方式中，EPA 是以约50. 0%至约60. 0% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，EPA是以约52. 0%至约 58.0% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，EPA是以约55.0% (a/a)的量而存在。
[0145] 在某些实施方式中，EPA是以约55.0%至约58.4% (a/a)的量而存在。在各种实 施方式中，EPA是以约55. 6%至约57.9% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，EPA是以 约56.7% (a/a)的量而存在。
[0146] 在各种实施方式中，以全部脂肪酸在所述组合物中的质量百分率计算，所述组合 物以约50. 0 - 60. 0% (m/m)的量含有EPA。在某些实施方式中，EPA是以约55% (m/m)的 量而存在。
[0147] 在某些其他实施方式中，以所述组合物中的所有脂肪酸的气相色谱的面积的百 分比计算，所述组合物以约13.0%至约25.0% (a/a)的量含有DHA。在某些实施方式中， DHA是以约15. 0%至23. 0% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，DHA是以约17. 0%至 21.0% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DHA是以约19.0%至约20.0% (a/a)的量 而存在。
[0148] 在某些实施方式中，DHA是以约17. 7%至约22. 2% (a/a)的量而存在。在各种实 施方式中，DHA是以约18. 4%至约21.4% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DHA是以 约19.9% (a/a)的量而存在。
[0149] 在各种实施方式中，以所有脂肪酸在所述组合物中的质量百分率计算，所述组合 物以约15. 0 - 25. 0% (m/m)的量含有DHA。在某些实施方式中，DHA是以约20. 0% (m/m) 的量而存在。
[0150] 在各种其他实施方式中，以所述组合物中所有脂肪酸的气相色谱的面积的百分比 计算，所述组合物以约67. 0% -约81. 0% (a/a)的总量含有EPA和DHA。在某些实施方式 中，所述组合物包含约69.0 %至约79.0 % (a/a)的总量的EPA和DHA。在各种实施方式中， 所述组合物包含约71. 0% -约77. 0% (a/a)的总量的EPA加 DHA。在某些实施方式中，所 述组合物包含约74. 0% -约75. 0% (a/a)的总量的EPA+DHA。
[0151] 在各种实施方式中，以全部脂肪酸在所述组合物中的质量百分率的形式计算，所 述组合物以约70. 0-80.0% (m/m)的总量含有EPA+DHA。在某些实施方式中，所述组合物包 含约 75. 0% (m/m)的 EPA 加 DHA。
[0152] 在还包含α -亚麻酸（C18:3n_3)的其他实施方式中，α -亚麻酸是以约〇. 07%至 约1.10% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，α-亚麻酸是以约0.24%至约0.91% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，α-亚麻酸是以约0.40%至约0.80% (a/a)的量 而存在。在某些实施方式中，α-亚麻酸是以约0.50%至约0.600% (a/a)的量而存在。
[0153] 在还包含十八碳四烯酸（C18:4n_3)的其他那些实施方式，十八碳四烯酸是以约 0.01%-约7.90% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，十八碳四烯酸是以约0.25%-约 6.40% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，十八碳四烯酸是以约1.70%-约4. 90% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中，十八碳四烯酸是以约3.25% (a/a)的量而存在。
[0154] 在还包含二十碳三烯酸（C20:3n_3)的其他那些实施方式中，二十碳三烯酸是 以约0.75%-约3.50% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，二十碳三烯酸是以约 1.20%-约3.00% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，二十碳三烯酸是以约1.60%-约 2.60% (a/a)量而存在。在某些实施方式中，二十碳三烯酸是以约2.10% (a/a)的量而存 在。
[0155] 在还包含二十碳四烯酸（C20:4n_3)的其他那些实施方式中，二十碳四烯酸是 以约0.01%-约0.40% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，二十碳四烯酸是以约 0.01%-约0.30% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二十碳四烯酸是以约0.03%-约 0.22% (a/a)的而存在量。在一些实施方式中，二十碳四烯酸是以约0.12% (a/a)的量而 存在。
[0156] 在还包含二i^一碳五烯酸（C21:5n_3)的其他实施方式中，二i^一碳五烯酸 是以约0. 01 %-4. 10% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，二^^一碳五烯酸是以 约0.01% -约3.20% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中，二^^一碳五烯酸是以约 0. 60% -约2. 35% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，二^^一碳五烯酸是以约1. 50% (a/a)的量而存在。
[0157] 在各种其他实施方式中，DPA是以约0.90% -约7. 60% (a/a)的量而存在。在多 种实施方式中，DPA是以约2.00%-约6. 50% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DPA 是以约3. 10%-5.40% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，DPA是以约4. 25% (a/a) 的量而存在。
[0158] 在各种其他实施方式中，DPA是以约2. 13% -约8. 48% (a/a)的量而存在。在某 些实施方式中，DPA是以约3. 19%-约7. 42% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，DPA 是以约4. 25%-约6. 37% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，DPA是以约5.31% (a/ a)的量而存在。
[0159] 在各种实施方式中，总Ω -3脂肪酸构成约80. 0-约95% (m/m)的所述药物组合物 中的全部脂肪酸。
[0160] 在包含DGLA的其他实施方式中，以所述组合物中所有脂肪酸的气相色谱的面积 百分比计算，DGLA是以约0.01%至约4.40% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，DGLA 是以约0.01%至约3.30% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DGLA是以约0.01%至 约2.20% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，DGLA是以约1.10% (a/a)的量而存在。
[0161] 在一些实施方式中，DGLA是以约0.28%至约0.61% (a/a)的量而存在。在某些 实施方式中，DGLA是以约0.33%至约0.56% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，DGLA 是以约0.44% (a/a)的量而存在。
[0162] 在包含AA的其他实施方式中，AA是以约0.01%至约6.90% (a/a)的量而存在， 该量是以所述组合物中所有脂肪酸的气相色谱的面积百分比的形式进行计算。在各种实施 方式中，AA是以约0.01%至约5.40% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，AA是以约 0.70%至约3.80% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，AA是以约2.25% (a/a)的量 而存在。
[0163] 在各种实施方式中，AA是以约1.41%至约4.87% (a/a)的量而存在。在某些实 施方式中，AA是以约1.99%至约4.30% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，AA是以约 2. 57%至约3.72% (a/a)的量而存在。
[0164] 在各种实施方式中，所述组合物以不大于约4.5% (a/a)的量含有AA。在一些实 施方式中，所述组合物以不大于约3. 14% (a/a)的量含有AA。
[0165] 在还包含亚油酸（C18:2n_6)的其他那些实施方式中，亚油酸是以约0. 25%至约 1.30% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，亚油酸是以约0.40%至约1.20% (a/a)的 量而存在。在各种实施方式中，亚油酸是以约0.60%至约0.95% (a/a)的量而存在。在具 体实施方式中，亚油酸是以约0.80% (a/a)的量而存在。
[0166] 在还包含Y-亚麻酸（C18:3n_6)的其他实施方式中，Y-亚麻酸是以约0. 01%至 约0.65% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，Y-亚麻酸是以约0.03%至约0.51% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，Y-亚麻酸是以约0.15%至约0.40% (a/a)的量 而存在。在数个实施方式中，Y-亚麻酸是以约0.27% (a/a)的量而存在。
[0167] 在还包含二十碳二烯酸（C20:2n_6)的其他那些实施方式中，二十碳二烯酸是以 约0.01%至约0.30(a/a)的量而存在。在各种实施方式中，二十碳二烯酸是以约0.04%至 约0.24% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，二十碳二烯酸是以约0.09%至约0.20% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二十碳二烯酸是以约0.14% (a/a)的量而存在。
[0168] 在还包含二十二碳五烯酸（C22:5n_6)的其他那些实施方式中，二十二碳五烯酸 是以约0. 01%-0. 95% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，二十二碳五烯酸（C22:5n-6) 是以约0.01 % -约1.05% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二十二碳五烯酸 (C22:5n-6)是以约0. 05-约0. 71% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，二十二碳五烯 酸（C22:5n-6)是以约0. 01-约0. 48% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中，二十二碳五 烯酸（C22:5n-6)是以约0.24% (a/a)的量而存在。
[0169] 在一些实施方式中，二十二碳五烯酸（C22:5n_6)是以约0. 01%至约1. 19% (a/a) 的量而存在。在某些实施方式中，二十二碳五烯酸（C22:5n-6)是以约0.16%至约0.98% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中，二十二碳五烯酸（C22:5n_6)是以约0. 57% (a/a) 的量而存在。
[0170] 在某些实施方式中，所述组合物包含不大于约10. 0% (a/a)的总Ω-6脂肪酸。
[0171] 在这些其他实施方式中的典型实施方式中，所述组合物包含不大于约3.0% (a/ a)的饱和脂肪酸、不大于约5.0% (a/a)的单不饱和脂肪酸、和不大于约0. Ippm的氨基甲 酸乙酯。在一些实施方式中，所述组合物包含不大于0. Ippm的氨基甲酸乙酯。在各种实施 方式中，所述组合物包含小于〇. Ippm的氨基甲酸乙酯。 5. 3单位剂型
[0172] 在另一方面，将上面部分5. 2中描述的富含DPA的采用游离酸形式的Q-3PUFA的 药物或营养食品组合物有用地封装在用于口服给药的单位剂型中。
[0173] 在【具体实施方式】中，剂型是胶囊。在某些实施方式中，剂型是明胶胶囊。在具体实 施方式中，明胶胶囊是硬明胶胶囊。在其他实施方式中，剂型是软明胶胶囊。
[0174] 在各种实施方式中，胶囊包含A型明胶。在一些实施方式中，胶囊包含A型和B型 明胶两者。用于生产A型或B型明胶的胶原的来源包括但不限于牛、猪和鱼。
[0175] 在各种实施方式中，胶囊是软明胶胶囊，该胶囊包含足够的A型明胶使得在40°C 下贮存至少3个月后胶囊在纯化水中于37°C在不大于30分钟的时间段内崩解。在某些实 施方式中，胶囊是软明胶胶囊，该胶囊包含足够的猪A型明胶使得在40°C下贮存6个月后胶 囊在纯化水中于37°C在不大于30分钟的时间段内崩解。在某些实施方式中，胶囊是软明胶 胶囊，该胶囊包含充分的猪A型明胶使得在40°C下贮存12个月后胶囊在纯化水中于37°C 在不大于30分钟的时间段内崩解。
[0176] 在各种实施方式中，胶囊是软明胶胶囊，该胶囊包含足够的猪A型明胶使得在 30°C下贮存至少3个月后该胶囊在纯化水中于37°C在不大于30分钟的时间段内崩解。在 某些实施方式中，胶囊是软明胶胶囊，该胶囊包含足够的猪A型明胶使得在30°C下贮存6个 月后胶囊在纯化水中于37°C在不大于30分钟的时间段内崩解。在一些实施方式中，胶囊是 软明胶胶囊，该胶囊包含足够的猪A型明胶使得在30°C下贮存12个月后胶囊在纯化水中于 37°C在不大于30分钟的时间段内崩解。
[0177] 在某些实施方式中，胶囊是软明胶胶囊，该胶囊包含猪A型明胶和B型明胶的混 合物。在各种此类实施方式中，至少1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、 40%、甚至至少约50% (w/w)的明胶是猪A型明胶。在所选择的实施方式中，至少约55%、 60%、65%、70%、75% (w/w)的明胶是猪A型明胶。在【具体实施方式】中，至少80%、85%、 90%、甚至95% (w/w)的明胶是猪A型明胶。
[0178] 在各种实施方式中，胶囊是软明胶胶囊，其中明胶基本上是由猪A型明胶构成。
[0179] 在一些实施方式中，胶囊是还原的交联明胶胶囊，例如美国专利7, 485, 323中所 描述的，该专利的全部内容以参考的方式并入本文中。
[0180] 在某些实施方式中，胶囊包含琥珀酰明胶。
[0181] 在多种实施方式中，胶囊是由并非动物副产品的物质制成，例如琼脂、角叉菜聚 糖、果胶、魔芋、瓜尔胶、食物淀粉、改性玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉。可以用于制造可 用于本文中所描述口服单位剂型的胶囊的非动物来源材料描述于美国专利2011/0117180 中，该专利的内容以参考的方式并入本文中。在一些实施方式中，使用Vegic aps56胶囊 (Catalent) 〇
[0182] 在某些胶囊状口服单位剂型的实施方式中，胶囊未被包衣。
[0183] 在其他胶囊状口服单位剂型的实施方式中，胶囊被包衣。
[0184] 在某些包衣胶囊的实施方式中，以时间依赖性方式释放所述脂肪酸组合物。在各 种实施方式中，在摄入后至少30分钟内没有PUFA组合物的大量释放。在某些实施方式中， 当进行体外释放测试时，至少在30分钟内没有PUFA组合物的大量释放。在某些实施方式 中，当进行体外测试时，不大于约20%的PUFA组合物在前30分钟内被释放。在所选择的实 施方式中，当进行体外测试时，不大于约25 %、30 %、甚至不大于约35 %的PUFA组合物在前 30分钟内被释放。在【具体实施方式】中，依照由Bharat Mehta于2013年1月4日提交的名 称为"用于Ω-3多不饱和脂肪酸的释放测试方法"的临时专利申请61/749, 124中所描述 的步骤对体外释放性能进行评估，该专利申请的全部公开内容以参考的方式并入本文中。
[0185] 在【具体实施方式】中，到摄入后约60分钟时大量的PUFA组合物被释放。在某些实 施方式中，当进行体外测试时，到约60分钟时大量的PUFA组合物被释放。在所选择的实施 方式中，当进行体外测试时，到约60分钟时至少约40%的PUFA组合物被释放。在各种实施 方式中，当进行体外测试时，到约60分钟时至少约45 %、50 %、55 %、60 %、甚至至少约65 % 的PUFA组合物被释放。在【具体实施方式】中，依照由Mehta于2013年1月4日提交的题目 为" Ω-3多不饱和脂肪酸的释放测试的方法"的临时专利申请61/749, 124中所描述的步骤 对体外释放性能进行评估，该专利申请的全部公开内容以参考的方式并入本文中。
[0186] 在某些实施方式中，以如美国专利5, 792, 795和5, 948, 818中所描述的方式将 胶囊包衣，这些专利的公开内容以参考的方式并入本文中。在各种包衣的实施方式中， 包衣材料是聚（丙烯酸乙酯-丙烯酸甲酯）共聚物。在一些实施方式中，包衣材料是 EudragitNE30_D (Evonik Industries AG),该材料具有约 800, 000 的平均分子量。
[0187] 在其他包衣胶囊的实施方式中，将胶囊用肠溶包衣材料进行包衣，该包衣材料防 止胶囊在胃中溶解或崩解但在小肠中所遇到的PH值下溶解。
[0188] 在各种实施方式中，口服单位剂型含有约IOOmg至约2000mg的PUFA组合物。在一 些实施方式中，口服剂型含有约250mg的PUFA组合物。在一些实施方式中，口服剂型含有 约500mg的PUFA组合物。在某些实施方式中，口服剂型含有约750mg的PUFA组合物。在 一些实施方式中，口服剂型含有约IOOOmg的PUFA组合物。在其他实施方式中，口服进行含 有约1500mg的PUFA组合物。在某些实施方式中，单位剂型含有在IOOmg和2000mg之间的 非整数的重量的PUFA组合物。 5. 4给药套件
[0189] 在另一方面，可将如上所述的多个单位剂型有用地共同封装在一个给药套件中以 提高易用性和患者依从性。
[0190] 在某些实施方式中，给药套件是药瓶。在其他实施方式中，将多个剂型封装在泡罩 包装中，任选地可将多个泡罩包装共同封装在药盒或其他壳套（enclosure)中。通常，无论 是否在一个药瓶或者一个或多个泡罩包装中，多个单位剂型足够用于30天、60天、或90天 的给药。因此，在所选择的实施方式中，单位剂型是含有大约1克的如上所述的药物组合物 的胶囊，给药套件中包含30、60、90、120、150、180、240、270、或300粒这种胶囊。
[0191] 在各种实施方式中，在惰性气体（例如氮气或稀有气体）中将多个单位剂型进行 封装，或者在真空中进行封装。 5. 5治疗的方法
[0192] 在另一方面，提供治疗的方法。 5. 5. 1严重甘油三酯血症（>500mg/dL)的治疗
[0193] 在第一系列的治疗实施方式中，提供治疗严重高甘油三酯血症的方法。
[0194] 这些方法包括：以足以将血清或血浆甘油三酯水平降低到低于治疗前水平的量和 持续时间，向具有> 500mg/dL的治疗前血清或血浆甘油三酯水平的患者口服给予上面部 分5. 2中描述的药物组合物。在典型的实施方式中，以一个或多个的上面部分5. 3中所描 述单位剂型的方式给予各剂量的所述药物组合物。
[0195] 在各种实施方式中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低到比治疗前水平低至 少约5%、6%、7%、8%或者至少约9%的量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施 方式中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低到比治疗前水平低至少1〇%、11%、12%、 13%、14%、15%、16%、17%、18%或19%的量和持续时间给予所述组合物。在具体实施方 式中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低到比治疗前水平低至少约20%的量和持续时 间给予所述组合物。在各种实施方式中，以将血清或血浆甘油三酯类有效降低至比治疗前 水平低至少约25%、30%、35%、40%、45%、甚至至少约50%的量和持续时间给予所述药 物组合物。
[0196] 在一系列实施方式中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低至少约50mg/dL、 60mg/dL、70mg/dL、80mg/dL、90mg/dL、甚至至少约100mg/dL的量和持续时间给予所述药 物组合物。在某些实施方式中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低至少约llOmg/dL、 120mg/dL、130mg/dL、140mg/dL、甚至至少约150mg/dL的量和持续时间给予所述组合物。 在【具体实施方式】中，以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低至少约160mg/dL、170mg/dL、 180mg/dL、甚至至少约190mg/dL或200mg/dL的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0197] 在一些实施方式中，以将非-HDL-C水平有效降低到比治疗前水平低至少约1%、 2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、甚至至少约10%的量和持续时间给予所述药物组合 物。
[0198] 在各种实施方式中，以将HDL-C水平有效提高到比治疗前水平高至少约1%的量 和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以足以将HDL-C增加到比治疗前水 平高至少约2%、3%、4%、甚至至少约5%、6%、7%、8%、9%、或10%的量和持续时间给予 所述药物组合物。
[0199] 在某些实施方式中，以将总胆固醇：HDL_C(TC/HDL)比有效降低到比治疗前水平 低至少约1%的量和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以足以将TC/HDL 比降低到比治疗前水平低至少约2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、甚至至少约9%或至少 约10%的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0200] 在一些实施方式中，以将VLDL-c水平有效降低到比治疗前水平低至少约5%、 6%、7%、8%、9%、或者至少约10%的量和持续时间而给予所述药物组合物。在某些实施 方式中，以足以将VLDL-c水平降低至比治疗前水平低至少约11%、12%、13%、14%、15%、 16%、17%、甚至至少约18%、19%、或20%的量和持续时间给予所述药物组合物。在具体 实施方式中，以足以将VLDL-c水平降低到比治疗前水平低至少约21%、22%、23%、24%、 甚至至少约25%的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0201] 在多种实施方式中，以有效降低ApoC III水平的量和持续时间给予所述药物组合 物。在某些实施方式中，以足以将ApoCIII水平降低到比治疗前水平低至少约H213%、 4%、5%、6%、7%、甚至至少约8%、9%或10%的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0202] 在一些实施方式中，以将血浆EPA水平有效提高到比治疗前水平高至少100 %的 量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆EPA水平比治疗前水平 有效提高至少约200%、250%、300%、甚至至少约350%、400%、450%、或至少约500%的 量和持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆EPA水平比治疗前 水平有效提高至少约550%、600%、650%、甚至至少约700%的时间和量给予所述药物组 合物。
[0203] 在各种实施方式中，以将血浆DHA水平比治疗前水平有效提高至少约50%的量和 持续时间给予所述药物组合物。在【具体实施方式】中，以将血浆DHA水平比治疗前水平有效 提高至少约55 %、60 %、65 %、70 %、甚至至少约75 %、80 %、85 %、或90 %的量和持续时间 给予所述药物组合物。
[0204] 在一系列实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前水平有效提高至少约50%的量 和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前水平有 效提高至少约 55%、60%、65%、70%、75%，甚至至少约80%、85%、90%、95%、或100%的 量和持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前 水平有效提高至少约110%、120%、甚至至少约125%量和持续时间给予所述药物组合物。
[0205] 在一系列实施方式中，以将血浆中花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前水 平低至少约5%的量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆中的 花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前水平低至少约6%、7%、8%、9%、10%、甚至至 少约 11%，12%、13%、14%、甚至至少约15%、16%、17%、18%、19%、20%、或21%、22%、 23 %、24%、甚至至少约25 %的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0206] 在某些实施方式中，以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约25 μ g/mL量和持 续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以足以将血浆AA水平降低至少约50 μ g/ mL、55 μ g/mL、60 μ g/mL、65 μ g/mL、甚至至少约 70 μ g/mL、75 μ g/mL、80 μ g/mL、85 μ g/mL、 90 μ g/mL、甚至至少约95 μ g/mL或100 μ g/mL的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0207] 在某些实施方式中，有效量为至少约2g/日。在各种实施方式中，有效量为至少约 3g/日。在【具体实施方式】中，有效量为至少约4g/日。在典型的实施方式中，有效量为约2g/ 日。在某些实施方式中，有效量为约4g/日。
[0208] 在典型的实施方式中，将所述药物组合物给药至少30天。在某些实施方式中，将 所述药物组合物给药至少60天。在【具体实施方式】中，将所述药物组合物给药至少90天、120 天、180天、240天、或至少360天。在某些实施方式中，不确定地给予所述药物组合物。
[0209] 在一些实施方式中，每天给予所述药物组合物。在其他实施方式中，每隔一天给予 所述药物组合物。
[0210] 在【具体实施方式】中，以单一每日剂量给予每日剂量的药物组合物。在其他实施方 式中，以分剂量给予所述药物组合物，并且将每日剂量划分为一天中的二次给药、三次给 药、或者甚至四次给药。
[0211] 在某些实施方式中，与食物一起给予所述药物组合物。在某些实施方式中，与低脂 肪膳食一起给予所述药物组合物。在其他实施方式中，在无食物的情况下给予所述药物组 合物。在某些实施方式中，在禁食状态下给予所述药物组合物。
[0212] 在某些实施方式中，所述方法还包括给予他汀类。在【具体实施方式】中，他汀类药 物是选自以下：普伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、替伐他 汀、和匹伐他汀。 5. 5. 2高甘油三酯血症的治疗（200-500mg/dL)
[0213] 在另一系列治疗实施方式中，提供治疗具有约200mg/dL至约500mg/dL的治疗前 血清或血浆甘油三酯水平的患者的方法。在某些实施方式中，这些患者已接受他汀类治疗； 在这些患者中，治疗前血清或血浆甘油三酯水平是在上面部分5. 2中所描述药物组合物的 给药之前在他汀类治疗期间所测量的水平。
[0214] 所述方法包括口服给予有效量的他汀类，并且进一步以足以将血清或血浆甘油三 酯水平降低到低于用本文中所描述药物组合物治疗前测量水平的量和持续时间口服给予 本文部分5. 2中描述的药物组合物。在相同的给药计划中或者甚至在同一天，部分5. 2中 描述的药物组合物和他汀类药物无需在相同时间给药。可以在患者同时从这两种药物获得 治疗益处的充分接近的时间，给予这两种药物。
[0215] 在某些实施方式中，以足以将血清或血浆甘油三酯水平降低到比治疗前水平低至 少约5%的量和持续时间给予部分5. 2中所描述的药物组合物。在各种实施方式中，以足以 将血清或血浆甘油三酯水平降低到比治疗前水平低至少约6%、7%、8%、9%、10%、11%、 12%、13%、14%、15%、甚至至少约16%、17%、18%、19%、或至少约20%的量和持续时间 给予所述药物组合物。
[0216] 在一些实施方式中，以足以将非-HDL-胆固醇降低到比治疗前水平低至少约1%、 至少约2 %、至少约3 %、4%、5 %、甚至至少约7 %、8 %、9 %、或至少约10 %的量和持续时间 给予本文部分5. 2中所描述的药物组合物。
[0217] 在一系列实施方式中，以足以将HDL-c水平提高到至少比治疗前水平高约1%、 2%、3%、或更高的量和持续时间给予本文部分5. 2中所描述的药物组合物。
[0218] 在一些实施方式中，以将血浆EPA水平比治疗前水平有效提高至少100%的量和 持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆EPA水平比治疗前水平有效 提高至少约200%、250%、300%、甚至至少约350%、400%、450%、或至少约500%的量和 持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆EPA水平比治疗前水平 有效提高至少约550%、600%、650%、甚至至少约700%的时间和量给予所述药物组合物。
[0219] 在各种实施方式中，以将血浆DHA水平有效提高到比治疗前水平高至少约50%的 量和持续时间给予所述药物组合物。在【具体实施方式】中，以将血浆DHA水平比治疗前水平 有效提高至少约55%、60%、65%、70%、甚至至少约75%、80%、85%、或90%量和持续时 间给予所述药物组合物。
[0220] 在一系列实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前水平有效提高至少约50%的量 和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前水平有 效提高至少约 55%、60%、65%、70%、75%、甚至至少约80%、85%、90%、95%、或100%的 量和持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前 水平有效提高至少约110%、120%、甚至至少约125%量和持续时间给予所述药物组合物。
[0221] 在一系列实施方式中，以将血浆中的花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前 水平低至少约5%的量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆中的 花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前水平低至少约6%、7%、8%、9%、10%、甚至至 少约 11%、12%、13%、14%、甚至至少约15%、16%、17%、18%、19%、20%、或21%、22%、 23%、24%、甚至至少约25%的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0222] 在某些实施方式中，以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约25 μ g/mL的量 和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以足以将血浆AA水平降低至少 约 50μ g/mL、55y g/mL、60y g/mL、65y g/mL、甚至至少约 70μ g/mL、75y g/mL、80y g/mL、 85 μ g/mL、90 μ g/mL、甚至至少约95 μ g/mL或100 μ g/mL的量和持续时间给予所述药物组 合物。
[0223] 在各种实施方式中，在如上面部分5. 3中所描述的单位剂型中给予文中部分5. 2 中描述的药物组合物。
[0224] 在各种实施方式中，以至少约Ig/日的量给予所述药物组合物。在一些实施方式 中，以至少约2g/日的量给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以至少约3g/日的量给 予所述药物组合物。在【具体实施方式】中，以至少约4g/日的量给予所述药物组合物。在典 型的实施方式中，以约2g/日的量给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以约3g/日或 约4g/日的量给予所述药物组合物。 5. 5. 3增加血浆EPA: AA比的治疗
[0225] 还提供用于无论患者治疗前血浆甘油三酯水平如何均可提高EPA:AA比的方法。 所述方法包括：以足以将患者的EPA:AA比提高到至少约0. 25的量和持续时间，向具有低于 约0. 25的EPA = AA比的患者给予本文部分5. 2中描述的药物组合物。在一些实施方式中， 以足以将患者的EPA = AA比提高到至少约0. 3、至少约0. 35、至少约0. 40、至少约0. 45、至少 约0. 50、甚至至少约0. 55、0. 60、0. 61、0. 62、0. 63、0. 64、或0. 65的量和持续时间给予所述 药物组合物。
[0226] 在某些实施方式中，所述方法包括以将血浆EPA水平有效提高到比治疗前水平高 至少100%的量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆EPA水平比 治疗前水平有效提高至少约200%、250%、300%、甚至至少约350%、400%、450%、或至少 约500%的量和持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆EPA水平 比治疗前水平有效提高至少约550%、600%、650%、甚至至少约700%的时间和量给予所 述药物组合物。
[0227] 在各种实施方式中，以将血浆DHA水平比治疗前水平有效提高至少约50%的量和 持续时间给予所述药物组合物。在【具体实施方式】中，以将血浆DHA水平比治疗前水平有效 提高至少约55 %、60 %、65 %、70 %、甚至至少约75 %、80 %、85 %、或90 %的量和持续时间 给予所述药物组合物。
[0228] 在一系列实施方式中，以将血浆DPA水平有效提高到比治疗前水平高至少约50% 的量和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以将血浆DPA水平比治疗前 水平有效提高至少约55%、60%、65%、70%、75%、甚至至少约80%、85%、90%、95%、或 100%量和持续时间给予所述药物组合物。在所选择的实施方式中，以将血浆DPA水平比治 疗前水平提高至少约110%、120%、甚至至少约125%量和持续时间给予所述药物组合物。
[0229] 在一系列实施方式中，以将血浆中的花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前 水平低至少约5%的量和持续时间给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以将血浆中的 花生四烯酸（AA)浓度有效降低到比治疗前水平低至少约6%、7%、8%、9%、10%、甚至至 少约 11%、12%、13%、14%、甚至至少约15%、16%、17%、18%、19%、20%、或21%、22%、 23%、24%、甚至至少约25%的量和持续时间给予所述药物组合物。
[0230] 在某些实施方式中，以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约25 μ g/mL的量 和持续时间给予所述药物组合物。在一些实施方式中，以足以将血浆AA水平降低至少 约 50μ g/mL、55y g/mL、60y g/mL、65y g/mL、甚至至少约 70μ g/mL、75y g/mL、80y g/mL、 85 μ g/mL、90 μ g/mL、甚至至少约95 μ g/mL或100 μ g/mL的量和持续时间给予所述药物组 合物。
[0231] 在各种实施方式中，在如上面部分5. 3中描述的单位剂型中给予本文部分5. 2中 描述的药物组合物。
[0232] 在各种实施方式中，以至少约Ig/日的量给予所述药物组合物。在一些实施方式 中，以至少约2g/日的量给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以至少约3g/日的量给 予所述药物组合物。在【具体实施方式】中，以至少约4g/日的量给予所述药物组合物。在典 型的实施方式中，以约2g/日的量给予所述药物组合物。在某些实施方式中，以约3g/日或 约4g/日的量给予所述药物组合物。 5. 5. 4.用于降低血清或血浆ApoC III水平的治疗
[0233] 也提供用于无论患者治疗前血浆甘油三酯水平如何提高患者血清或血浆ApoC III 水平的方法。这些方法包括：以足以降低患者血清或血浆ApoC III水平的量和持续时间，向 需要较低ApoC III水平的患者给予本文部分5. 2中描述的药物组合物。在典型的实施方式 中，患者具有患心血管疾病的危险。
[0234] 在某些实施方式中，以足以将ApoC III水平降低到比治疗前水平低至少约1%、 2%、3%、4%、5%、6%、7%、甚至至少约8%、9%或10%的量和持续时间给予所述药物组 合物。 5. 5. 5.其他治疗方法
[0235] 在另一方面，将本文中描述的药物组合物用于治疗其他病症，包括非酒精性脂肪 肝炎（NASH)、商脂蛋白血症（包括III型1?脂蛋白血症）、和代谢综合症中的一种或多种疾 病。
[0236] 在某些实施方式中，将所述药物组合物用于降低对血小板聚集抑制剂（例如 Plavix)的耐药性，包括使用于美国专利申请13/620, 312中所描述方法的血小板聚集抑制 齐U，该专利的全部公开内容以参考的方式并入本文中。 5. 6方法
[0237] 在另一方面，提供一种用于将鱼油精制成包含采用游离酸形式的PUFA的药物组 合物，尤其是用于将鱼油精制成本文部分5. 2中所描述药物组合物的改进方法。 5.6. 1中间原料的制备
[0238] 中间原料是通过利用在本领域众所周知的标准技术对从鱼（例如来自鍉科、鲱科 和鲭科的鱼）中所获得鱼体油进行酯交换而制备，其中对方法参数进行调整以便获得落在 下面部分5. 6. 2中所描述容限内的组成。
[0239] 合适的标准方法步骤描述于例如美国专利5, 656, 667、5, 719, 302、5, 945, 318、 6, 204, 401、6, 518, 049、6, 528, 669、7, 491，522、7, 550, 613、7, 678, 930、7, 718, 698、 7,732,488 以及美国专利 5, 472, 705、5, 750, 572、5, 776, 978、5, 869, 714、7, 541，480、 7, 553, 870、和7, 619, 002,这些专利的内容以参考的方式并入本文中。
[0240] 在一个示例性方法中，从鱼（例如鍉鱼、沙丁鱼、鲭鱼和鲱鱼）中提取粗甘油三酯 油。然后对该粗甘油三酯油进行碱精制，例如使用氢氧化钠，并进行除臭、研磨和干燥。然 后通过酯交换将PUFA转变成酯类，例如甲基酯类或乙基酯类。可以例如通过在乙醇和乙醇 钠存在下的乙醇解反应来进行酯交换，以产生乙基酯类。在酯交换之后至少是一次通常多 次的蒸馏。
[0241] 在另一个示例性方法中，对甘油三酯油进行碱精制和除臭，与乙醇进行酯交换，例 如通过在乙醇和乙醇钠存在下的乙醇解反应，然后经过一次或多次的蒸馏。
[0242] 图2给出了用于生产中间原料的示例性方法的流程图。在此方法中，将鱼在水中 煮并且将所形成的液体与固体的混合物过滤，再将液体部分离心以去除水相。将从前面的 步骤余留下的油组分用碱处理以中和任何存在的游离脂肪酸，接着进行水洗。此后，例如通 过蒸馏对采用甘油三酯形式的碱精制鱼油进行除臭，并且减少环境污染物。利用与乙醇的 反应，通过使用乙醇钠进行催化，将干燥的除臭鱼油转变成乙基酯形式。反应结束后，通过 蒸馏去除过量的乙醇，将乙基酯类用柠檬酸溶液洗涤然后用水洗涤。在此示例性方法中，将 乙基酯类蒸馏以获得要求浓度的用作中间原料的EPA乙基酯类（EPA-EE)和DHA乙基酯类 (DHA-EE)。在一些实施方式中，实施多次蒸馏。基于输入乙基酯组合物的组成来调整所采用 的提取条件，从而获得要求浓度的用作中间原料的EPA-EE和DHA-EE，正如下面部分5. 6. 2 中的详细描述。
[0243] 这些方法步骤的替代步骤是众所周知的，并且只要所形成中间原料的组成落在下 面部分5. 6. 2中定义的容现内便可视情况而采用。 5. 6. 2中间原料组合物 5. 6. 2. 1典型实施方式
[0244] 中间原料组合物包含多种的Ω -3PUFA种类，各种类基本上采用乙基酯的形式存 在。
[0245] 中间原料组合物包含EPA、DHA和DPA，各种类基本上采用乙基酯的形式。
[0246] 在各种实施方式中，中间原料组合物以分别落在表9中所列举平均值的-3SD至 +3SD范围内的量含有EPA乙基酯类（EPA-EE)、DHA-EE、和DPA-EE，该量是以该组合物中所 有脂肪酸乙基酯类的气相色谱的面积百分比方式计算。在某些实施方式中，每个EPA-EE、 DHA-EE和DPA-EE分别落在所列举平均值的-2SD至+2SD内。在某些实施方式中，每个 EPA-EE、DHA-EE和DPA-EE分别落在所列举平均值的-ISD至+ISD内。在某些实施方式中， 中间原料组合物在由表8中所描述批次中的各自最小和最大面积百分比所设定范围内的 量含有 EPA-EE、DHA-EE 和 DPA-EE。
[0247] 在某些实施方式中，所述组合物还包含一种或多种Ω-3多不饱和脂肪酸，各自 基本上采用乙基酯的形式，选自以下：α -亚麻酸（C18:3n-3)、十八碳四烯酸（C18:4n-3)、 二十碳三烯酸（C20:3n-3)、二十碳四烯酸（C20:4n-3)、和二i^一碳五烯酸（C21: 5n_3)。在 各种实施方式中，一种或多种其他Ω-3-EE种类，若存在，是以分别落在表9中所列举平均 值的-3SD至+3SD范围内的量而存在，该量是以组成中所有脂肪酸乙基酯类的气相色谱的 面积百分比的形式而计算。在某些实施方式中，各种类分别落在所列举平均值的-2SD至 +2SD内。在某些实施方式中，各种类分别落在所列举平均值的-ISD至+ISD的范围内。在 某些实施方式中，一种或多种其他Ω-3-ΕΕ种类，若存在，是以落在由表8中所描述批次中 的各自最小和最大面积百分比所设定范围内的量而存在，该量是以组合物中所有脂肪酸乙 基酯类的气相色谱的面积百分比的形式而计算。
[0248] 在某些实施方式中，中间原料组合物还包含至少一种Q-6PUFA种类。在各种实 施方式中，所述组合物包含选自以下组的一种或多种Ω-6多不饱和脂肪酸的乙基酯类：亚 油酸（C18:2n-6)、Y-亚麻酸（C18:3n-6)，二十碳二烯酸（C20:3n-6)、二高-Y-亚麻酸 ("DGLA"）（C20:3n-6)、花生四烯酸（C20:4n-6) ( "AA"）、和 DPA(C22:5n-6)。各 Q-6PUFA 种类基本上是以乙基酯形式存在。
[0249] 在各种实施方式中，Ω-6-ΕΕ的一种或多种种类，若存在，是以分别落在表9中所 列举平均值的-3SD至+3SD范围内的量而存在，该量是以组合物中所有脂肪酸乙基酯类的 气相色谱的面积百分比的形式进行计算。在某些实施方式中，各种类分别落在所列举平均 值的-2SD至+2SD内。在某些实施方式中，各种类分别落在所列举平均值的-ISD至+ISD 内。在某些实施方式中，一种或多种其他的Ω-3-ΕΕ种类，若存在，是以落在由表8中所描 述批次的各自最小和最大面积百分比所设定的范围内的量而存在，该量是以组合物中所有 脂肪酸乙基酯类的气相色谱的面积百分比的方式而计算。 5. 6. 2. 2其他实施方式
[0250] 在各种其他实施方式中，中间原料组合物以约45. 0%至约53. 0% (a/a)的量含有 EPA乙基酯类（EPA-EE)，该量是以组合物中所有脂肪酸乙基酯类的气相色谱的面积百分比 的方式进行计算。在某些实施方式中，EPA-EE是以约48. 40%至约50.04% (a/a)的量而 存在。在各种实施方式中，EPA-EE是以约48. 67%至约49. 77% (a/a)的量而存在。在一 些实施方式中，中间原料组合物以约48. 95%至约49.49% (a/a)的量含有EPA-EE。在某些 实施方式中，中间原料组合物以约49. 22% (a/a)的量含有EPA-EE。
[0251] 在各种实施方式中，EPA-EE是以约44. 20% (a/a)至约46. 92% (a/a)的量而存 在。在一些实施方式中，EPA-EE是以约45. 56% (a/a)的量而存在。
[0252] 在各种实施方式中，EPA-EE是以约425_460mg/g的量而存在。
[0253] 在各种其他实施方式中，中间原料组合物以约13. 0%至约20. 0% (a/a)的量含有 DHA乙基酯类（DHA-EE)，该量是以组合物中所有脂肪酸乙基酯类的气相色谱的面积百分比 的形式而计算。在各种实施方式中，DHA-EE是以约16. 43%至18. 28% (a/a)的量而存在。 在各种实施方式中，中间原料以约16. 74%至约17. 98% (a/a)的量含有DHA-EE。在一些实 施方式中，中间原料组合物以约17. 05%至约17. 67% (a/a)的量含有DHA-EE。在某些实施 方式中，中间原料以约17.4% (a/a)的量含有DHA-EE。
[0254] 在一些实施方式中，中间原料以约14. 77% (a/a)_约17. 87% (a/a)的量含有 DHA。在一些实施方式中，中间原料以约16. 32% (a/a)的量含有DHA。
[0255] 在一些实施方式中，中间原料以150至170mg/g的量含有DHA。
[0256] 在各种其他实施方式中，DPA-EE是以约4. 10%至约6. 74% (a/a)的量而存在。在 一些实施方式中，DPA-EE是以约4. 54%至约6.30% (a/a)的量而存在。在各种实施方式 中，DPA-EE是以约4. 98%至约5.86% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，DPA-EE是以 约5.42% (a/a)的量而存在。
[0257] 在各种实施方式中，DPA-EE是以约0.41 %至约0.70% (a/a)的量而存在。在某 些实施方式中，DPA-EE是以约0.56% (a/a)的量而存在。
[0258] 在各种实施方式中，中间原料组合物还包含花生四烯酸（C20:4n_6)的乙基酯。在 各种实施方式中，AA-EE是以约1.72%至约2.81% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中， 花生四烯酸乙基酯是以约1.9%至约2.63% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，花生 四烯酸乙基酯是以约2. 09%至约2.45% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，花生四烯 酸乙基酯是以约2.27% (a/a)的量而存在。
[0259] 在某些实施方式中，花生四烯酸乙基酯是以不大于3.0% (a/a)的量而存在。在一 些实施方式中，花生四烯酸乙基酯是以不大于4.0% (a/a)的量而存在。
[0260] 在还包含α-亚麻酸乙基酯的中间原料的实施方式中，在某些实施方式中，α-亚 麻酸乙基酯是以约0.3%至约0.45% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，α-亚麻酸 乙基酯是以约0.4% (a/a)的量而存在。
[0261] 在一些实施方式中，α -亚麻酸乙基酯是以约〇· 24% (a/a)至0· 62% (a/a)的量 而存在。
[0262] 在一些实施方式中，α-亚麻酸乙基酯是以约0.43% (a/a)的量而存在。
[0263] 在还包含十八碳四烯酸（C18:4n_3)乙基酯的中间原料的某些实施方式中，十八 碳四烯酸乙基酯是以约0.60%至约2.03% (a/a)的量而存在，该量是以组合物中所有脂肪 酸乙基酯类的气相色谱的面积百分比的形式而计算。在一些实施方式中，十八碳四烯酸乙 基酯是以约0.84%至约1.80% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中，十八碳四烯酸乙基 酯是以约1. 10%至约1.60% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中，十八碳四烯酸乙基酯 是以约L 32% (a/a)的量而存在。
[0264] 在各种实施方式中，十八碳四烯酸乙基酯是以约0. 64%至约1. 93% (a/a)的量而 存在。在【具体实施方式】中，十八碳四烯酸乙基酯是以约1.28% (a/a)的量而存在。
[0265] 在还包含二十碳三烯酸（C20:3n_3)乙基酯的中间原料的多种实施方式中，二十 碳三烯酸乙基酯是以小于约〇. 1% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二十碳三烯酸乙 基酯是以小于约0.4% (a/a)的量而存在。
[0266] 在还包含二十碳四烯酸（C20:4n_3)乙基酯的中间原料的实施方式中，在某些实 施方式中二十碳四烯酸乙基酯是以约1.57%至约2.10% (a/a)的量而存在。在一些实施 方式中，二十碳四烯酸乙基酯是以约1.66至约2.02% (a/a)的量而存在。在某些实施方 式中，二十碳四烯酸乙基酯是以1.75至约1.93% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中， 二十碳四烯酸乙基酯是以约1.84% (a/a)的量而存在。
[0267] 在某些实施方式中，二十碳四烯酸乙基酯是以约1.42%至约2.49% (a/a)的量而 存在。在一些实施方式中，二十碳四烯酸乙基酯是以约1.95% (a/a)的量而存在。
[0268] 在还包含二i^一碳五烯酸（C21:5n_3)乙基酯的中间原料的多种实施方式中， 二i^一碳五烯酸乙基酯是以约2. 25%至约2.36% (a/a)的量而存在。在各种实施方式中， 二i^一碳五烯酸乙基酯是以约2. 27%至约2. 34% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中， 二i^一碳五烯酸乙基酯是以约2. 29%至约2. 32% (a/a)的量而存在。在【具体实施方式】中， 二i^一碳五烯酸乙基酯是以约2. 31% (a/a)的量而存在。
[0269] 在一些实施方式中，二i^一碳五烯酸乙基酯是以约1. 42%至约2. 76% (a/a)的量 而存在。在【具体实施方式】中，二i^一碳五烯酸乙基酯是以约2.09% (a/a)的量而存在。
[0270] 在还包含Q-6PUFA即亚油酸（C18:2n-6)乙基酯（亚油酸一 EE)的中间原料的一 系列实施方式中，亚油酸乙基酯是以约0.53%至约0.56% (a/a)的量而存在。在一些实施 方式中，亚油酸乙基酯是以约0.53%至约0.55% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中， 亚油酸乙基酯是以约0.54%至约0.55% (a/a)的量而存在。在某些实施方式中，亚油酸乙 基酯是以约0.54% (a/a)的量而存在。
[0271] 在一些实施方式中，亚油酸乙基酯是以约0. 38%至约0. 83% (a/a)的量而存在。 在某些实施方式中，亚油酸乙基酯是以约0.60% (a/a)的量而存在。
[0272] 在还包含Y-亚麻酸（C18:3n_6)乙基酯U-亚麻酸一EE)的中间原料的实施方 式中，在示例性实施方式中，Y-亚麻酸乙基酯是以小于0.1% (a/a)的量而存在。在还包 含Y-亚麻酸（C18:3n-6)的乙基酯的中间原料的实施方式中，Y-亚麻酸乙基酯是以小于 0.4% (a/a)的量而存在。
[0273] 在还包含二十碳二烯酸（C20:2n_6)乙基酯（二十碳二烯酸一 EE)的中间原料的 实施方式中，在各种示例性实施方式中二十碳二烯酸乙基酯是以约〇. 〇〇%至约〇. 63% (a/ a)的量而存在。在一些实施方式中，二十碳二烯酸乙基酯是以约0.00%至约0.45% (a/a) 的量而存在。在某些实施方式中，二十碳二烯酸乙基酯是以约〇.〇〇%至约0.27% (a/a)的 量而存在。在【具体实施方式】中，二十碳二烯酸乙基酯是以约0.09% (a/a)的量而存在。
[0274] 在某些实施方式中，二十碳二烯酸乙基酯是以约0. 00%至约0. 54% (a/a)的量而 存在。在【具体实施方式】中，二十碳二烯酸乙基酯是以约0.25% (a/a)的量而存在。
[0275] 在还包括二高-Y-亚麻酸（C20:3n-6)乙基酯（DGLA-EE)的中间原料的多个实 施方式中，DGLA-EE是以约0.35%至约0.68% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二 高-Y-亚麻酸乙基酯是以约0.41 %至约0.63% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中， 二高-Y-亚麻酸乙基酯是以约0.46%至约0.57% (a/a)的量而存在。
[0276] 在一些实施方式中，二高-Y-亚麻酸乙基酯是以约0.26%至约0.55% (a/a)的 量而存在。在一些实施方式中，二高-Y-亚麻酸乙基酯是以约0.40% (a/a)的量而存在。
[0277] 某些其他实施方式还包含采用乙基酯形式的二十二碳五烯酸（C22:5n_6)的中间 原料。在多种这些实施方式中，二十二碳五烯酸-EE是以约0.54%至约0.80% (a/a)的量 而存在。在一些实施方式中，二十二碳五烯酸-EE是以约0.59%至约0.76% (a/a)的量而 存在。在各种实施方式中，二十二碳五烯酸-EE是以约0.63%至约0.72% (a/a)的量而存 在。在【具体实施方式】中，二十二碳五烯酸-EE是以约0.67% (a/a)的量而存在。
[0278] 在一些实施方式中，二十二碳五烯酸（C22:5n-6)_EE是以约1. 45%至约7. 21% (a/a)的量而存在。在一些实施方式中，二十二碳五烯酸（C22:5n-6)-EE是以约4. 33% (a/ a)的量而存在。 5. 6. 3尿素包合
[0279] 具有如上定义组成的中间经酯交换的原料进行尿素包合。在典型实施方式中，用 于包合的尿素的量落在算法确定的范围内。
[0280] 因此，在另一方面，提供一种用于将鱼油精制成包含采用游离酸形式的PUFA的药 物组合物的改进方法、尤其是用于将鱼油精制成本文中所描述药物组合物的改进方法。改 进包括使在规定百分率范围内含有各种Ω-3和Q-6PUFA种类的乙基酯类的酯交换鱼油 的中间原料经历尿素包合步骤，其中用于包合的尿素的量是在根据（i)式1(a)、或（ii)根 据式1(b)、或者（iii)根据式I (a)和式1(b)两者，并且将尿素量设定为在由公式I (a)和 1(b)的结果所设定范围内（包括端值）的值，例如其平均值，其中公式如下：
[尿素 ]=F富集-丽*((DHA 目标一DHA-EE输入 VDHA-EEfi^)) (Ia)
[尿素 ]=F 富集-EPA* ((EPA 目标一EPA-EE输入）/EPA-EE输入）） （Ib)。
[0281] 基于期望的最终组成来选择DHA和EPA目标值。富集因子FSft_DHA和F Sft_EPA可以 是相同或不同的。在一个典型的实施方式中，FSft_ DHA与FSft_EPA是相同的，具有约100/0. 34 或者约300的值。
[0282] 使用算法确定量的尿素并按照标准技术进行包合。参见例如美国专利4, 377, 526、 5, 106, 542、5, 243, 046、5, 679, 809、5, 945, 318、6, 528, 669、6, 664, 405、7, 541，480、 7, 709, 668、和8, 003, 813,这些专利的公开内容以参考的方式并入本文中。
[0283] 在一个示例性实施方式中，将中间原料与尿素的乙醇溶液混合。于60°C-80°C下 进行包合，然后使该混合物冷却，此后将该混合物过滤或离心以取出尿素包合物。通过蒸馈 去除乙醇，将油用水洗脱数次。 5. 6. 4.包合后的后处理
[0284] 在取出尿素包合物后，通过标准技术将未包合的PUFA酯类水解成游离脂肪酸。在 水解之前或者之后通过蒸馏将该组合物进一步纯化，并且利用一种或多种的以下标准技术 做进一步处理：使用活性炭的处理、层析纯化、溶剂去除、漂白（例如用漂白粘土）、和超临 界提取。添加抗氧化剂，例如BHA或α-生育酚。 6. 实施例 6. 1实施例1 :满足规格要求的采用游离酸形式的Q-3PUFA组合物的可靠生产需要尿 素包合
[0285] 尿素包合络合（包合）是鱼油精制中经常采用的标准步骤，用以去除饱和及单不 饱和长链脂肪酸，因此在所形成组合物中富集期望的长链Ω-3多不饱和脂肪酸。尽管长期 应用，但（参见例如美国专利4, 377, 526)，和设计用来表征各种生理化学参数对工艺的影 响的特征的研究（参见例如Hayes等人的"Triangular Phase Diagrams To Predict The Fractionation Of Free Fatty Acid Mixtures Via Urea ComplexFormation，'，Separation Sci.Technol.36(l):45_ 58(2001)和 Hayes 的"Purirfication of Free Fatty Acids via Urea Inclusion Compounds，' 〈<功會生月旨类白勺手册(Handbook of Functional Lipids))) (Taylor &Francis Group) (2005))，尿素包合富集包含 Q-3PUFA 和 Q-6PUFA 两种类的长 链多不饱和脂肪酸的单独种类的程度仍然是不可预测的。尿素包合步骤中此残余的不可预 测性、和尿素包合产生不允许水平的氨基甲酸乙酯（这将会必须做进一步处理）的可能性， 最初使得倾向于从用于生产符合下面表1中所述规格的采用游离酸形式的Q-3PUFA的医 药级组合物的工业规模精制工艺中省略尿素包合。
【权利要求】
1. 一种药物组合物，其包含： 以至少约50% (a/a)的量含有基本上是游离酸形式的EPA ; 以至少约15% (a/a)的量含有基本上是游离酸形式的DHA ; 以至少约1% (a/a)的量含有基本上是游离酸形式的DPA。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DPA是以至少约2% (a/a)的量存在。
3. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DPA是以至少约2. 5% (a/a)的量存在。
4. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DPA是以至少约3% (a/a)的量存在。
5. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DPA是以至少约3. 5% (a/a)的量存在。
6. 如权利要求1所述的药物组合物，其中EPA是以至少约51% (a/a)的量存在。
7. 如权利要求1所述的药物组合物，其中EPA是以至少约52% (a/a)的量存在。
8. 如权利要求1所述的药物组合物，其中EPA是以至少约53% (a/a)的量存在。
9. 如权利要求1所述的药物组合物，其中EPA是以至少约54% (a/a)的量存在。
10. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DHA是以至少约16% (a/a)的量存在。
11. 如权利要求1所述的药物组合物，其中DHA是以至少约17% (a/a)的量存在。
12. 如权利要求1所述的药物组合物，其中 EPA是以约55% (a/a)至约56% (a/a)的量存在； DHA是以约19% (a/a)至约20% (a/a)的量存在；和 DPA是以约4% (a/a)至约5% (a/a)的量存在。
13. -种药物组合物，其包含： 以约50% (m/m)至约60% (m/m)的量，基本上是游离酸形式的EPA ; 以约15% (m/m)至约25% (m/m)的量，基本上是游离酸形式的DHAJP 以不小于约1% (m/m)的量，基本上是游离酸形式的DPA。
14. 如权利要求13所述的药物组合物，其中： EPA和DHA是以约70% (m/m)至约80% (m/m)的总量存在。
15. 如权利要求14所述的药物组合物，其中： Ω-3多不饱和脂肪酸是以80% (m/m)至约95% (m/m)的总量存在。
16. 如权利要求15所述的药物组合物，其中： Ω-6多不饱和脂肪酸是以不大于约10% (m/m)的总量存在。
17. 如权利要求1所述的药物组合物，其中： 氨基甲酸乙酯，若存在，是以不大于约0. Ippm的量的氨基甲酸乙酯存在。
18. 适合于口服给药的单位剂型，其包含： 月父囊； 其中所述胶囊中包封至少250mg的权利要求1所述的药物组合物。
19. 如权利要求18所述的单位剂型，其中： 所述胶囊包封至少500mg的权利要求1所述的药物组合物。
20. 如权利要求18所述的单位剂型，其中： 所述胶囊包封约IOOOmg的权利要求1所述的药物组合物。
21. 如权利要求18所述的单位剂型，其中所述胶囊壳包含明胶。
22. 如权利要求21所述的单位剂型，其中所述胶囊是软明胶胶囊。
23. 如权利要求22所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊壳包含猪A型明胶。
24. 如权利要求23所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊壳包含充足的猪A型明胶，使 得在40°C下贮存至少3个月后所述胶囊在纯化水中于37°C在不大于30分钟的时间段内崩 解。
25. 如权利要求23所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊壳的明胶包含至少5%的猪 A型明胶。
26. 如权利要求23所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊壳的明胶包含至少25%的猪 A型明胶。
27. 如权利要求26所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊壳包含至少50%的猪A型明 胶。
28. 如权利要求22所述的单位剂型，其中所述软明胶胶囊具有外部包衣。
29. 如权利要求28所述的单位剂型，其中所述包衣不是pH敏感的。
30. 如权利要求29所述的单位剂型，其中所述包衣包含聚（丙烯酸酯-甲基丙烯酸甲 酯）共聚物。
31. 如权利要求30所述的单位剂型，其中所述聚（丙烯酸酯-甲基丙烯酸甲酯）共聚 物是 EudragitNE_30D。
32. 如权利要求29所述的单位剂型，其中在摄入后30分钟之内无包封药物组合物的大 幅度释放。
33. 如权利要求32所述的单位剂型，其中在摄入后约60分钟之内有包封药物组合物的 显著释放。
34. 如权利要求28所述的单位剂型，其中所述包衣是pH依赖性肠溶衣。
35. 剂量套件，其包含： 多个如权利要求18所述的单位剂型。
36. 如权利要求35所述的剂量套件，其中： 所述剂量套件含有至少60个单位剂型。
37. 如权利要求35所述的剂量套件，其中： 所述剂量套件含有至少120个单位剂型。
38. 治疗严重高甘油三酯血症的方法，其包括： 以将血清或血浆甘油三酯有效降低到低于治疗前水平的量和持续时间， 向具有> 500mg/dL的治疗前血清或血浆甘油三酯水平的患者口服给予如权利要求1 所述的药物组合物。
39. 如权利要求38所述的方法，其中所述有效量为至少约每日2g。
40. 如权利要求38所述的方法，其中所述有效量为至少约每日3g。
41. 如权利要求38所述的方法，其中所述有效量为至少约每日4g。
42. 如权利要求38所述的方法，其中所述有效量为约每日2g。
43. -种治疗严重高甘油三酯血症的方法，其包括： 以将血清或血浆甘油三酯水平有效降低到低于治疗前水平的量和持续时间， 向具有> 500mg/dL的治疗前血清或血浆甘油三酯水平的患者口服给予如权利要求13 所述的药物组合物。
44. 如权利要求43所述的方法，其中所述有效量为至少约每日2g。
45. 如权利要求38所述的方法，其中每日给予所述药物组合物达至少30天。
46. 如权利要求43所述的方法，其中每日给予所述药物组合物达至少30天。
47. 如权利要求38所述的方法，其中采用一个或多个如权利要求20所述的单位剂型的 形式而给予所述药物组合物。
48. 如权利要求38所述的方法，还包括： 口服给予有效量的他汀类。
49. 如权利要求48所述的方法，其中所述他汀类选自：普伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、 阿托伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、和匹伐他汀。
50. 通过他汀类疗法来治疗具有约200mg/dL至约500mg/dL的血清或血浆甘油三酯水 平的患者的方法，其包括： 口服给予有效量的他汀类，和 口服给予有效量的权利要求1所述的药物组合物。
51. 在通过他汀类疗法来治疗具有约200mg/dL至约500mg/dL的血清或血浆甘油三酯 水平的患者的方法中，所述改进包括： 辅助地给予有效量的权利要求1所述的药物组合物。
52. 如权利要求50所述的方法，其中权利要求1所述的药物组合物的有效量为至少约 每日2g。
53. 如权利要求50所述的方法，其中权利要求1所述的药物组合物的有效量为至少约 每日3g。
54. 如权利要求50所述的方法，其中权利要求1所述的药物组合物的有效量为至少约 每日4g。
55. 如权利要求50所述的方法，其中权利要求1所述的药物组合物的有效量为约每日 2g。
56. -种治疗具有升高的治疗前血清或血浆甘油三酯的患者的方法，所述方法包括： 以将血浆中花生四烯酸（AA)浓度有效降低至少约5%的量和持续时间，给予权利要求 1所述的药物组合物。
57. 如权利要求56所述的方法，其中以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约10%的 量和持续时间给予所述药物组合物。
58. 如权利要求56所述的方法，其中以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约20%的 量和持续时间给予所述药物组合物。
59. 治疗具有升高的治疗前血清或血楽甘油三酯的患者的方法,所述方法包括： 以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约50 μ g/mL的量和持续时间给予权利要求1 所述的药物组合物。
60. 如权利要求59所述的方法，其中以将血浆花生四烯酸浓度有效降低至少约75 μ g/ mL的量和持续时间给予所述药物组合物。
61. 治疗具有升高的治疗前血清或血浆甘油三酯的患者的方法，所述方法包括： 以将血浆EPA/AA的比率有效提高到至少约0. 25的量和持续时间给予权利要求1所述 的药物组合物。
62. 如权利要求61所述的方法，其中以将血浆EPA/AA的比率有效提高到至少约0. 50 的量和持续时间给予所述药物组合物。
63. 如权利要求62所述的方法，其中以将血浆EPA/AA的比率有效提高到至少约0. 65 的量和持续时间给予所述药物组合物。
64. 降低血清或血浆ApoC III水平的方法，其包括： 以足以从治疗前水平降低血清或血浆ApoC III的量和持续时间给予权利要求1所述的 药物组合物。
65. 在制备游离酸形式的多不饱和脂肪酸的药物组合物的方法中，所述改进包括： 使经酯交换鱼油的中间原料经过尿素包合络合的步骤，所述鱼油包含下列的乙基酯 类： EPA，至少约44% (a/a)的量 DHA，至少约14% (a/a)的量，和 DPA，至少约1% (a/a)的量， 其中用于络合的尿素的量是根据式I (a)、或者根据式I (b)、或者根据式I (a)和式I (b) 两者进行计算，其中所述尿素量被设定为在由式1(a)和1(b)的结果所设定并包括其的范 围内的值， [尿素 ]=F 富集_DHAX ((DHA 目标一DHA-EE输入 VDHA-EE输入）） (Ia) [尿素]=F 富集-EPAX (GiPA 目标-EPA-EE 输入）/EPA-EE 输入）） （Ib), 其中F富集-醒和F富集-EPA各自为约100/0· Μ。
66. 如权利要求65所述的方法，其中： EPA-EE是以至少约45% (a/a)的量存在于所述中间原料中， DHA-EE是以至少约15% (a/a)的量存在于所述中间原料中，和 DPA-EE是以至少约2.5% (a/a)的量存在于所述中间原料中。
67. 如权利要求65所述的方法，其中所述药物组合物是根据权利要求1所述的药物组 合物。
68. 根据权利要求1所述的药物组合物，其通过权利要求66所述的方法制造。
【文档编号】A61P9/00GK104321055SQ201380012754
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2013年1月4日 优先权日:2012年1月6日
【发明者】T.J.迈恩斯, B.N.M.马基尔斯, B.M.梅塔, G.维斯勒, M.戴维森, P.R.伍德 申请人:翁特拉制药公司, 克利塞利斯医药有限公司