用于供应饮食脂肪酸需要的方法、组合物和装置制造方法

用于供应饮食脂肪酸需要的方法、组合物和装置制造方法
【专利摘要】本发明提供了包含长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的营养配方食品，连同用于制备和/或施用营养配方食品的方法和装置。在一些实施例中，营养配方食品中的LC-PUFA百分比采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，营养配方食品不含添加的脂肪酶。本发明还提供的是用于给受试者提供营养的方法，用于改善脂肪吸收的方法，用于改善认知能力的方法，用于预防慢性肺病的方法，以及用于减少患者需要全肠胃外营养的时间长度的方法。
【专利说明】用于供应饮食脂肪酸需要的方法、组合物和装置

【技术领域】
[0001] 本专利申请根据35U.S.C. § 119要求于2012年2月17日提交的美国临时申请号 61/600, 207和于2012年10月26日提交的美国临时申请号61/719, 173的优先权。

【背景技术】
[0002] 长链脂肪酸对于人健康和发育是关键的。在饮食中消耗的长链脂肪酸主要以甘 油三酯（TG)的形式，其中三个长链脂肪酸经由酯连接与甘油分子结合。长链甘油三酯的 吸收首先需要脂肪酶（例如胰脂肪酶）的酶促作用，所述脂肪酶通过水解消化甘油三酯， 将其分解成甘油单酯并且进一步分解为游离脂肪酸。一旦可获得，这些甘油单酯和游离 脂肪酸就被小肠中的内皮细胞吸收，在其中它们经历再酯化，随后转运至肝并且最终至 体内组织用于多种生理学目的。D.Kasper等人，Harrison' s Principles of Internal Medicine第16版（2004)。虽然中链甘油三酯可在肠腔被吸收，但长链甘油三酯不能， 因此胰脂肪酶对于适当的长链脂肪酸水解和吸收是关键的。C. Jensen等人，Am. J. Clin. Nutr. 43:745-751 (1986)。然而，一些人不能充分分解长链甘油三酯，例如患有妥协的胰输 出、吸收不良或胰功能不全的患者，并且因此可遭受不足以维持健康的脂肪酸吸收。
[0003] 商购可得的脂肪酶补充物可加入饮食中，以改善长链甘油三酯的水解。然而，由于 众多原因，脂肪酶补充物不一定解决所有人中的弱脂肪酸吸收的问题，所述所有人遭受分 解长链甘油三酯的能力减少或在其他方面需要接受基本脂肪酸的缺点。例如，大多数商业 脂肪酶补充物由动物胰脂肪酶制备，所述动物胰脂肪酶已知在PH 7以下具有显著减少的 稳定性。参见例如 US2010/0239559;D. Kasper 等人，Harrison's Principles of Internal Medicine第16版（2004)。到此类脂肪酶经过胃的时候，显著的量可能已失活。此外，并非 所有脂肪酶对于给定长链脂肪酸水解均工作至相同程度，从而指示脂肪酶特异性是重要考 虑。RJensen等人，Lipids 18(3) :239-252(1983)。另外在具有胰功能不全的一些人群中， 例如在早产儿或重症监护室中的患者中，营养配方食品得到严格调控。对于这些控制人群， 用另外成分补充已批准的配方食品可能是不希望或不可行的。此外，尽管许多脂肪酸补充 配方食品可含有中链甘油三酯，但存在长链脂肪酸的饮食摄取的不同医学益处。因此，存在 增强长链甘油三酯水解的改良方法的需要。
[0004] 长链多不饱和甘油三酯（TG-LCPUFA)的适当水解由于几个原因是特别重要的。长 链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA)对于神经和视网膜发育是关键的。此外，一些视为"必需脂肪 酸"，意指人不能合成它们并且必须从饮食源获得它们。n-3LC-PUFA二十二碳六烯酸（DHA) 和二十碳五烯酸（EPA)的主要饮食源是其前体α-亚麻酸（ALA)，所述ALA为必需脂肪酸。 然而，内源酶在将ALA转换为DHA和EPA方面是高度低效的。根据国际脂肪酸和脂质研究 协会（International Society for the Study of Fatty Acids and Lipids) (ISSFAL) 的官方声明，ALA至DHA的转换在婴儿中为约I %并且在成人中显著更低。Brenna等人， Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 80 (2-3) :85-91 (2009)。因此，尽管 DHA 和 EPA本身不是必需脂肪酸，但DHA和EPA的饮食源是重要的。n-6LC-PUFA花生四烯酸（ARA 或AA)的主要饮食源是亚油酸（LA),所述LA是必需脂肪酸。


【发明内容】

[0005] 本发明的实施例通过下述解决这些各种问题：（i)提供令人惊讶地在水解某些长 链甘油三酯和酯类例如长链多不饱和甘油三酯和酯类方面比其他酶更有效的脂肪酶，（ii) 提供包含LC-PUFA甘油三酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他长链甘油三酯或长链脂肪酸酯 的预水解组分（即甘油单酯和/或游离脂肪酸）的营养配方食品，例如医学营养配方食品 或婴儿配方食品，（iii)提供产生此类营养配方食品的方法，包括其中含有LC-PUFA甘油三 酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的配方食品暂时暴露于脂 肪酶的方法，和（iv)提供设计为提供营养配方食品的装置，所述营养配方食品包含甘油单 酯和/或游离脂肪酸，例如LC-PUFA甘油三酯和/或LC-PUFA脂肪酸酯。在其中配方食品 暂时暴露于脂肪酶并且脂肪酶在摄取前从配方食品中去除或分离的实施例中，本发明提供 了无需摄取外源脂肪酶确保LC-PUFA甘油三酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他长链甘油三 酯或长链脂肪酸酯分解的优点。
[0006] 相应地，本发明的一些实施例提供了营养配方食品。在一些实施例中，营养配方食 品包含LC-PUFA。在一些实施例中，超过2 %的总LC-PUFA采取甘油单酯和游离脂肪酸的形 式，即小于98%的总LC-PUFA采取甘油三酯或酯形式。在一些实施例中，LC-PUFA甘油单酯 和游离脂肪酸包含营养配方食品中超过2. 5%、超过3%、超过4%、超过5%、超过6%、超过 7%、超过8%、超过10%、超过12%、超过15%、超过20%、超过25%、超过30%、超过40%、 超过50%或超过75%的总LC-PUFA。在某些实施例中，LC-PUFA甘油单酯和游离脂肪酸与 甘油三酯和酯类的比率为至少〇. 08:1、至少0. 09:1、至少0. 1:1、至少0. 25:1、至少0. 5:1、 至少1: 1、至少2:1、至少3:1、至少4:1、至少5:1、至少8:1、至少10:1或至少20:1。
[0007] 在某些实施例中，营养配方食品配制用于施用于早产儿。由本发明包含的其他营 养配方食品配制用于婴儿、学步儿童、儿童或成人，其具有减少的水解LC-PUFA甘油三酯、 LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的能力，或只需要另外的基本 饮食LC-PUFA和/或其他长链脂肪酸。在一些实施例中，本发明的营养配方食品用于小于 1岁的受试者。在一些实施例中，受试者是1-4岁。在一些实施例中，受试者是1-6岁。
[0008] 在某些实施例中，本发明的营养配方食品是医学营养配方食品，即配制在医学监 督下经口或肠内消耗或施用的配方食品，例如通过医院或药房在处方下分配的配方食品。 通常，医学营养配方食品配制用于对于其存在独特营养需要的特定医学障碍、疾病或异常 病症的饮食管理。医学营养配方食品必须具有"一般认为安全的"状况，并且顺应与标签、 产品声明和制造有关的FDA条例。
[0009] 在一些实施例中，营养配方食品不含添加的脂肪酶。在其他实施例中，营养配方食 品含有脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶选自粘稠色杆菌（Chromobacterium viscosum)、突 光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens)、洋葱伯克霍尔德菌（Burcholderia cepacia)和 米根霉（Rhizopus oryzae)脂肪酶。
[0010] 在一些实施例中，营养配方食品包含EPA、DHA、ARA、LA和/或ALA。
[0011] 因为游离多不饱和脂肪酸是不稳定和快速降解的，所以本发明还提供了在由受试 者摄取前不久制备本发明的营养配方食品的方便和有效方法。在某些实施例中，该方法包 括在由需要另外的饮食LC-PUFA和/或其他长链脂肪酸的个人摄取之前，使包含LC-PUFA 甘油三酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他长链甘油三酯和/或长链脂肪酸酯的液体营养组合 物暴露于脂肪酶。在一些实施例中，液体营养组合物在摄取前暴露于脂肪酶至少一分钟、至 少2分钟、至少3分钟、至少5分钟、至少8分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少30分钟、 至少45分钟或至少60分钟。在一些实施例中，液体营养组合物在摄取前暴露于脂肪酶不 超过一分钟、不超过2分钟、不超过3分钟、不超过5分钟、不超过8分钟、不超过10分钟、 不超过15分钟、不超过30分钟、不超过45分钟或不超过60分钟。在一些实施例中，使液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过24小时。在某些实施例中，脂肪酶选自粘稠色杆菌、荧 光假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌和米根霉脂肪酶。在某些实施例中，脂肪酶可在摄取前从营 养配方食品中去除。在其他实施例中，使包含LC-PUFA甘油三酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或 其他长链甘油三酯和/或酯类的液体营养组合物在摄取前暴露于固定至固体支持物的脂 肪酶。在一些实施例中，通过共价结合、离子结合或交联使脂肪酶固定至固体支持物。在某 些实施例中，固定的脂肪酶封装在可透性膜内或附着至可透性膜。
[0012] 本发明的另一个方面是通过施用本发明的配方食品将营养提供给需要饮食 LC-PUFA和/或其他长链脂肪酸的受试者的方法，所述受试者例如遭受分解肠中的长链甘 油三酯或长链脂肪酸酯的能力减少的人，患有胰功能不全的人，患有营养不良的人，和已接 受全胃肠外营养的人。在一些实施例中，受试者是早产儿。在其他实施例中，受试者是足月 儿或学步儿童。在某些实施例中，受试者超过50岁、超过60岁或超过70岁。在一些实施例 中，受试者患有胰功能不全。在其他实施例中，通过饲管施用配方食品。在一些实施例中， 施用本发明的营养配方食品以改善任何年龄的个人中的认知能力，以预防早产儿中的慢性 肺病，以增强早产儿的神经发育，或者以治疗或预防与来自长链脂肪酸例如EPA、DHA、ARA、 LA和ALA的摄取增加的改善相关的许多其他病症。此类病症包括但不限于阿尔茨海默氏 病、双相障碍、抑郁症、败血症、急性呼吸窘迫、伤口愈合、癌症、心血管疾病、中风、帕金森氏 病、精神分裂症、糖尿病、多发性硬化、营养不良、GI功能受损和慢性炎性疾病例如类风湿性 关节炎、系统性红斑狼疮和炎性肠病。
[0013] 本发明的另一个实施例提供了通过施用本发明的营养配方食品用于减少患者需 要全胃肠外营养的时间的方法。因此，此类患者暴露于肠萎缩和其他与延长（超过24小 时）的全胃肠外营养相关的并发症的危险减少。此类方法可用于缩短患有下述的患者的恢 复时间：GI功能受损例如吸收不良、短肠综合征、IBD、胰功能不全、在手术前或后的营养不 良、化学疗法或放射疗法、或其他营养不良的原因、癌症、伤口和压力性溃疡。此类患者可经 由鼻胃管接受本发明的营养配方食品。在其中患者患有改变的肠运动性、由于系统性炎症 应答综合征的胰酶分泌受损或其他导致LC-PUFA甘油三酯、LC-PUFA脂肪酸酯和/或其他 长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的切割和吸收受损的病症的情况下，该喂养方法可以是有利 的。在可替代实施例中，当绕过胃是有利的时，本发明的营养配方食品可通过鼻空肠管施 用。其他类型的喂养器械也可用于递送本发明的配方食品。
[0014] 因为健康受试者也可例如通过减少心血管疾病的危险而获益于增加的LC-PUFA 吸收。相应地，在一些实施例中，本发明提供了改善健康受试者中的脂肪吸收的方法，其包 括给受试者喂养本发明的营养配方食品。
[0015] 本发明还提供了用于制备本发明的营养配方食品的装置。在一些实施例中，该装 置包括含有至少一种脂肪酶的室，其中所述室能够容纳液体营养组合物，使得它暴露于脂 肪酶。在一些实施例中，容器中的脂肪酶固定至容器的内表面。在其他实施例中，脂肪酶固 定至室内的支持物。在一些实施例中，该装置包括由可透性膜组成并且包含在室内的固定 的脂肪酶的室，使得液体营养组合物可流动经过可透性膜并且与脂肪酶接触，但脂肪酶不 能经过可透性膜。在一些实施例中，在本发明的装置的室内含有的脂肪酶是微生物脂肪酶。 在一些实施例中，脂肪酶选自细菌脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶选自粘稠色杆菌脂肪 酶、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。在一些实施例中，月旨 肪酶选自粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。在一些实施例中，脂肪 酶是米根霉脂肪酶。

【专利附图】

【附图说明】
[0016] 图1示出了根据某些实施例，用于给婴儿提供营养的装置和方法。
[0017] 图2A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0018] 图2B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0019] 图2C示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0020] 图3A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0021] 图3B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0022] 图3C示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0023] 图4A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0024] 图4B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0025] 图5A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0026] 图5B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0027] 图6A是在聚合物珠上固定的米根霉脂肪酶小瓶的照片。
[0028] 图6B示出了根据某些实施例用于处理和施用营养配方食品的装置。
[0029] 图6C示出了根据某些实施例用于处理和施用营养配方食品的装置。
[0030] 图6D示出了图6C中所述的装置的关闭。
[0031] 图7描述了通过米根霉（RO)脂肪酶的DHA甘油三酯水解。
[0032] 图8描述了通过米根霉脂肪酶的ARA甘油三酯水解。
[0033] 图9A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0034] 图9B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0035] 图9C示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0036] 图IOA示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0037] 图IOB示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0038] 图IOC示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0039] 图IlA示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0040] 图IlB示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0041] 图IlC示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0042] 图12示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0043] 图13A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0044] 图13B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0045] 图14示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0046] 图15示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0047] 图16示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0048] 图17A示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0049] 图17B示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置的局部剖视图。
[0050] 图18示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置。
[0051] 图19示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置的局部剖视图。
[0052] 图20示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置的局部剖视图。
[0053] 图21示出了根据某些实施例，用于处理配方食品的装置的局部剖视图。
[0054] 图22A显示了在对照周（"对照周"，在其过程中猪喂养TG-LCPUFA强化婴儿配方 食品）相对于处理周（"处理周"，在其过程中猪喂养非水解（"C0NT"）的、由粘稠色杆菌 脂肪酶预水解（"CV"）的、或由米根霉脂肪酶预水解（"R0"）的相同强化配方食品）过程 中的EPI猪中的粪便重量。图22B显示了在相同3组猪中经过处理周的最后3天的粪便总 脂肪含量，并且图22C显示了脂肪吸收系数CFA)。
[0055] 图23显示了喂养非水解的配方食品（"C0NT"）、由CV脂肪酶预水解的配方食品 ("CV"）、或由RO脂肪酶预水解的配方食品（"R0"）的EPI猪的粪便中的ARA(A)、EPA⑶ 和DHA (C)水平。星号指示p〈0. 001。
[0056] 图24显示了在用非水解的配方食品（"C0NT"）、由CV脂肪酶预水解的配方食品 ("CV")、或由RO脂肪酶预水解的配方食品（"R0"）喂养7天后，EPI猪的血浆中的ARA(A) 和DHA⑶水平。星号指示p〈0. 05。
[0057] 图25显示了在用非水解的配方食品（"C0NT"）、由CV脂肪酶预水解的配方食品 ("CV"）、或由RO脂肪酶预水解的配方食品（"R0"）喂养7天后，EPI猪的视网膜㈧和 脂肪组织（B)中的ARA和DHA水平。星号指示p〈0. 05。
[0058] 图26显示了在用非水解的配方食品（"C0NT"）、由CV脂肪酶预水解的配方食品 ("CV"）、或由RO脂肪酶预水解的配方食品（"R0"）喂养7天后，EPI猪的心脏㈧和肾 组织⑶中的ARA和DHA水平。星号指示p〈0. 05。
[0059] 图27显示了在Enfalac配方食品中的DHA和ARA由IOOmg⑷、500mg (B)、 IOOOmg(C)或2000mg〇))固定的RO脂肪酶的水解百分比。
[0060] 图28显示了 DHA(A)和ARA⑶由RO脂肪酶或胰酶的水解百分比。
[0061] 图29描述了用于实例10中所述的6周猪研究的研究设计。
[0062] 图30显示了从喂养TG-LCPUFA强化婴儿配方食品的健康猪（"健康"）、喂养 TG-LCPUFA强化婴儿配方食品的具有手术诱导的胰外分泌功能不全的猪（"EPI"）、和喂养 已通过固定的RO脂肪酶预水解的TG-LCPUFA强化婴儿配方食品、具有手术诱导的胰外分泌 功能不全的猪（"EPI+iRO"）收集的红细胞中的ARA和DHA水平。

【具体实施方式】
[0063] 长链多不饱和脂肪酸
[0064] 长链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA)是含有两个或更多个双键的烃链。取决于相对于 甲基末端的第一双键的位置，LC-PUFA可分类为ω-3 (n-3)或ω-6 (n-6)脂肪酸。ALA和 LA分别是n-3和n-6PUFA家族的亲本脂肪酸。它们视为"必需脂肪酸"，意指人不能合成它 们，相反，必须通过饮食获得它们。这是因为哺乳动物缺乏在超出碳9和10的脂肪酸中引 入双键的能力。Blosover 等人 Cell Biology:A Short Course, John Wiley&Sons, Inc. at 39 (2011)。然而，人可由ALA和LA开始制备另外的长链PUFA。
[0065] ALA和LA两者均通过一系列去饱和以及延伸（elogation)步骤进行代谢，以生成 其他长链PUFA。例如，ALA代谢为EPA和最终的DHA。LA代谢为ARA，n-6脂肪酸。然而，ALA 至DHA和EPA以及LA至ARA的转换是相对低效的。L. Arterburn等人,Am. J. Clin. Nutr. 8 3 (suppl) : 1467S-1476S (2006)。研究已估计在人中 ALA 至 DHA 的转换小于 5%。B. Anderson 和 D. Ma, Lipids Health Dis. 8:33(2009)。肝含有用于将 ALA 转换为 DHA 和 LA 转换为 ARA 的最活性的组织，并且因此在对活性较少的组织或器官例如脑提供DHA和ARA中起关键作 用。M. Martinez 等人，J. Pediatr. 120: S129-S138 (1992)。作为另外一种选择，这些 LC-PUFA 可直接由饮食消耗。DHA和EPA在鱼、核桃和亚麻籽油中发现，而ARA可得自动物脂肪源、玉 米油、大豆油和向日葵籽油。
[0066] n-3脂肪酸
[0067] n-3脂肪酸DHA对于神经和视网膜发育和功能是关键的。它是神经膜中的主要 长链PUFA，并且对于脑功能、脑回路构建和神经冲动传递是必需的。作为整合膜组分，DHA 促成对于维持突触结构、神经传递和突触可塑性重要的膜流动性。G. Jicha等人，Clin. Interv. Aging 5:45-61 (2010)。DHA还影响对神经元分化和存活必需的信号传导事件，并且 对神经递质和类花生酸的水平和代谢具有作用。脑中的大多数DHA累积在妊娠末三个月开 始直到生命第二年发生。已证实在啮齿类动物和灵长类动物中，在该时期n-3PUFA的供应 不足导致学习能力和神经传递受损。M. Martinez等人，J. Pediatr. 120: S129-S138 (1992)。 在先前局限于DHA缺乏的饮食的大鼠中的DHA补充援救记忆和学习任务中的表现。W. Chung 等人，J. Nutr. 138(6) :1165-1171 (2008)。另外在健康青春期男孩的研究中，与安慰剂相 比较，8周DHA补充在活跃任务执行过程中显著增加背外侧额叶前皮质中的功能性活动。 R. McNamara等人,Am. J. Nutr. 91:1060-7(2010)。因此，DHA不仅在发育中，还在神经元功能 的维持中视为重要的。
[0068] DHA也高度集中于视网膜中，并且对视色素视紫红质的光感受器分化和活化具 有重要作用。H. Lauritzen 等人，Prog. Lipid Res. 40:1-94(2001) ;M. Clandinin 等人， J. Pediatr. 125:S25-32(1994)。在灵长类动物和啮齿类动物发育早期DHA的供应不足导致 异常的视网膜生理学和视敏度减退。MReisbick等人，Dev. Psychol. 33:387-395(1997); J. McCann等人，Am. J. Clin. Nutr. 82:281-295(2005)。类似地，在人中，对于生命的前十二 个月喂养不含DHA的配方食品的婴儿已显示具有比喂养DHA补充配方食品的婴儿更低的视 敏度。E. Birch 等人，Am. J. Clin. Nutr. 91 (4) :848-859(2010)。DHA 缺乏也已与胎儿酒精综 合征、注意缺陷多动障碍、囊性纤维化、苯丙酮尿、单相抑郁症、攻击性敌意和肾上腺脑白质 营养不良相关。A. Horrocks 等人，Pharmacological Res. 40 (3) : 211-225 (1999)。
[0069] DHA及其他n-3脂肪酸的摄取增加的益处已对于多种疾病得到描述，所述疾病包 括例如阿尔茨海默氏病（AD)、双相障碍（BP)、抑郁症包括重性抑郁障碍（MDD)和产后抑郁 症、败血症、急性呼吸窘迫、伤口愈合、癌症、心血管疾病、中风、帕金森氏病、精神分裂症、糖 尿病、多发性硬化和慢性炎性疾病例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和炎性肠病。
[0070] 例如，使用AD患者的临床试验已证实DHA提供治疗益处。关于评估DHA在AD中的 作用的研究综述，参见 G. Jicha 和 W. Markesbery, Clin. Interv. Aging 5:45-61 (2010)。来 自AD的体外测定法、细胞培养系统和鼠模型的数据支持n-3PUFA在脑中的淀粉样蛋白加工 中的直接作用。另外在产淀粉样蛋白的AD转基因模型中，补充有DHA导致更低的α β水 平。Μ. Oksman 等人，Neurobiol. Dis. 23(3) :563-572(2006)。除在具有 AD 的患者中的阳性 临床试验数据之外，在具有轻度记忆问题的健康老年人中的大型研究显示，与接受安慰剂 的受试者相比较，施用DHA的受试者在六个月后在学习和记忆测试方面表现更佳。（Martek Press Release, May 4, 2010)。因此，DHA也可在预防AD中起有益作用。
[0071] DHA的治疗用途也已在具有BP和MDD的患者中进行研究。关于BP中的DHA的 综述，参见 V. Balencia-Martinez 等人，Expert. Rev. Neurother. 11 (7) : 1029-1047 (2011)。 由于评价来自人患者的脑组织中的DHA水平中的困难，已评估了来自血样的红细胞膜中 的脂肪酸组成，并且发现在具有BP和MDD的患者中含有比健康对照中显著更少的DHA。 R.McNamara 等人，J. Affect. Disord. 126(1-2) :303-311 (2010)。在死后研究中，与正常对 照相比较，眶额皮质的脂肪酸组成在BP患者中具有显著更低的DHA水平。R. McNamara等 人，Psychiatry Res. 160(3) :285-299(2008)。另外在4个月、双盲、安慰剂对照的研究中， 接受n-3脂肪酸的BP患者具有比安慰剂组显著更长的缓解期。A. Stoll等人，Arch. Gen. Psychiatry 56(5) :407-412(1999)。这些研究暗示，DHA在BD和MDD中是治疗上有益的， 特别是由于其情绪稳定效应。
[0072] DHA也已显示使患有其他形式的抑郁症的患者获益。关于综述，参见A. Logan等 人，Lipids Health Dis. 3:25-32(2004)。许多研究已发现在具有抑郁症的患者血液中降低 的n-3水平。类似地，血浆DHA中的增加与报告产后抑郁症症状的女性中的减少相关。一 些安慰剂对照的研究已发现n-3治疗改善抑郁症症状。关于n-3水平和抑郁症之间的关系 的综述，参见 A. Logan 等人，Lipids Health Dis. 3:25-32(2004)。
[0073] 在败血症中，富含EPA、Y-亚麻酸和抗氧化剂的肠内饮食改善住院结果，并减少 具有需要机械通气的严重败血症或败血性休克患者中的死亡率。A. Pontes-Arruda等人， Crit. Care Med. 34 (9) : 2325-2333 (2006)。在无呼吸机天数、无 ICU天数、减少新器官功能 障碍和降低的死亡率中的相似益处已在喂养富含长链PUFA和抗氧化剂的饮食的具有急性 呼吸窘迫的患者中报告。J. Gadek 等人 Crit. Care Med 27 (8) :1409-1420 (1999)。
[0074] n-3脂肪酸也已报告在伤口愈合中具有有益效应。通过改变脂质微 环境，n-3脂肪酸增强上皮细胞的重构，并且还可帮助减少炎症。D. Ruthig和 K. Meckling-Gill，J. Nutr. 129:1791-1798(1999) ;J.McDaniel 等人 Wound Repair Regen. 19(2):189-200(2011)。
[0075] EPA和DHA已显示在癌症例如前列腺癌和乳腺癌中的保护效应。有益效应可以是 由于抗炎特性，以及例如通过NF-κ B的下调来降低增殖并促进细胞凋亡的机制。关于癌症 中的 n_3 脂肪酸的讨论，参见 B. Anderson 和 D. Ma, Lipids Health Dis. 8:33 (2009)。
[0076] n-3脂肪酸已与具有心血管疾病的患者和减少健康人中的心血管疾病危险中的 有益效应相关。类似正面效应已在中风中得到报告。相应地，美国心脏协会以及其他健康 机构已发布增加饮食中的n-3脂肪酸摄取的建议。P. Kris-Etherton等人Circulation 106:2747-2757 (2002)。关于观察到的n-3脂肪酸对心血管健康的作用的可能机制包括低 甘油三酯血症效应、降血压效应、血小板聚集中的减少和对心肌自身的稳定作用。
[0077] 在一些病症中n-3脂肪酸的益处可归于广泛抗炎作用。EPA和DHA引起消退 素（resolvin)，所述消退素是具有炎症消退和免疫调节功能的抗炎介质。例如，EPA和 DHA显示出对白细胞趋化性的抑制作用，并且通过减少免疫细胞中的NF-κ B活化来改 变炎症细胞因子的产生。P. Calder, Int. Rev. Immunol. 28:506-534(2009)。一般而言， n-3PUFA与减少的促炎T细胞应答相关。当n-3脂肪酸在动物饮食中增加时，脂筏中的 T细胞膜微结构域组成改变，导致降低的NF-κ B活化、IL-2产生和细胞增殖。具体地， n-3PUFA影响T细胞活化的最早信号传导介质例如蛋白激酶C的分布和分隔。Y. Fan等 人，J. Immunol. 173:6151-6160(2004)。n-3脂肪酸也已显示减少树突状细胞上的MHC II类表达，从而有效降低对T细胞的抗原呈递，而n-6脂肪酸与增加的抗原呈递活性相 关。Sanderson等人，J.Leukoc.Biol. 62:771-777(1997)。在单核细胞细胞系和腹膜内 巨噬细胞中，DHA和EPA具有通过G蛋白偶联受体120(GPR120)介导的抗炎特性。因此， 这些脂肪酸展示经由抑制巨噬细胞诱导的组织炎症的体内抗糖尿病效应。D. Oh等人， Celll42 (5) :687-698(2010)。n-3PUFA的多种免疫调节功能指示它们可影响许多人疾病。
[0078] n-6脂肪酸
[0079] 如同n-3脂肪酸，n-6脂肪酸例如ARA在神经发育和脑功能中起关键作用，其 中ARA累积在分娩前和分娩后发育过程中在脑中出现。B. Koletzo等人，J. Perinat. Med. 36 (1) : 5-14 (2008)。n-6脂肪酸一般对于正常发育和免疫是重要的，并且还刺激皮肤和 毛发生长、维持骨健康、调节代谢并维持生殖系统。
[0080] 长链PUFA补充物
[0081] 对于过去十年，由于其健康益处，健康机构已推荐在饮食中消耗n-3脂肪酸。DHA 和EPA作为甘油三酯或者营养补充物或处方产品（例如LOVAZA?、OMACOR?:和 Vascepa?)中的酯化形式商购可得。DHA补充物可源自鱼油或素食源例如亚麻籽油或藻类。 补充物可以是粉末、液体饮料或管饲配方食品。
[0082] 对婴儿配方食品实施联邦食品、药品和化妆品法案（Federal Food, Drug, and Cosmetic Act)，所述联邦食品、药品和化妆品法案将婴儿配方食品定义为"由于其模拟人 乳或者其作为人乳的完全或部分替代物的适合性的原因，声称是或代表单独作为用于婴儿 的食物的专门饮食用途的食物"。FDA将婴儿定义为不超过12个月的人。21CFR 105. 3(e)。 人乳中的主要n-3脂肪酸是DHA，平均为7-8mg/dL(范围为0. 17%至1.0%的总脂肪酸）。 R-Yuhas等人，Lipids 41(9):851-858(2006)。人乳中的DHA量主要是母源DHA摄取的反 映。
[0083] 商购可得的TG-LCPUFA补充的婴儿配方食品包括Enf ami 1配方食品例如 Enfamil LIPIL?:和 Enfamil PREMIUM?、Bab。。、Earth，s Best Organic、Nestle 配 方食品例如 Nestle Gerber GOOD START?和 Nestle NAN?、Nutricia 配方食品例如 NEOCATE?和APTAMIL?、Parent，s Choice Organic、Pfizer，s SMA GOLD?、 Similac配方食品例如SimilacADVANCE?、Similac EARLY SHIELD?和ISOMIL?, 以及Ultra Bright Beginnings。其他婴儿配方食品也可补充有TG-LCPUFA。TG-LCPUFA补 充的配方食品可以是基于乳的或基于大豆的，并且可以是有机的。在美国，TG-LCPUFA补充 的婴儿配方食品占大约90%的产品销售（Mead Johnson Nutrition)。
[0084] TG-LCPUFA也可加入用于学步儿童、老人及其他需要由长链脂肪酸的营养支持 或饮食补充的人的后继配方食品（f〇ll〇w-〇n formula)和饮料。此类产品的例子包括 ENSURE?、PEDIASURE?、CARNATION?、BOOST?、CERELAC? 和 SOUVENAID?。外，补充有TG-LCPUFA或LC-PUFA酯的专门配方食品可与本发明的方 法和装置结合用于需要管饲的患者中。例如，肠内配方食品通常用于早产儿，具有肾衰竭、 胃肠疾病或引起GI功能受损的病症、肠切除、脂肪吸收不良、营养不良、胰腺炎、高血糖症/ 糖尿病、肝衰竭、急性和慢性肺病或免疫妥协状态的患者中。关于商购可得的肠内配方食品 的综述，参见A. Malone, Pract. Gastr. 29 (6) : 44-74 (2005)。基于患者的疾病或病症，营养 配方食品可以是标准、基本或专门的。常用的标准配方食品包括例如TSOCAL,?、NUTREN 1.0?、NUTREN 1.5?、NUTREN 2.0?、0S0MLITE 1.0?、0SM0LITE 1.2?、FIBERS0URCE 1.2?、JEVITY 1,2?、JEVITY 1.5?、PROBALANCE?、IS0S0URCE 1.5?、DELIVER 2.0?、N0V0S0URCE 2.0?和TWOCAL HN?。基本配方食品可含有大量营养素源包括聚 合和水解的配方食品，并且可以是纤维增强的。疾病特异性配方食品包括例如肾配方食品 例如 MAGNACAL· RENAL?、NEPRO?、N0VAS0URCE RENAL?、SUPLENA? 和 NUTRI-REN AL?。
[0085] 胃肠（GI)配方食品可用于具有GI功能受损的患者的营养管理，所述患者包括 具有严重蛋白质或脂肪吸收不良、广泛性肠切除、囊性纤维化、脑瘫、短肠综合征、IBD、胰 腺炎、克罗恩氏病、腹泻、GI瘘、乳糜泻、吸收不良综合征、创伤/手术、放射性肠炎、肠衰 竭、乳糜胸的患者。这些配方食品也用于术后早期喂养、营养喂养、全胃肠外营养（TPN) 替代物和用TPN的双重喂养。GI配方食品包括例如PEPTAMEN? (其由降低脂肪吸 收不良的可能性的70%中链甘油三酯和30%长链甘油三酯构成）、VIV0NEX PLUS?:和 VIV0NEX PEDIATRIC?。
[0086] 不幸的是，对于遭受水解长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的能力受损的人，例如具 有妥协的胰输出的人或患有胰功能不全的人，即使用DHA、EPA及其他n-3脂肪酸补充此类 配方食品也可能不足以实现与这些化合物相关的益处。长链甘油三酯或脂肪酸酯必须代谢 为甘油单酯和/或游离脂肪酸，以便在肠中适当吸收。本发明提供了利用现有商购可得的 长链PUFA补充物或新近设计的补充有长链PUFA的配方食品的方法，以提供含有明显更高 的长链甘油单酯和/或游离脂肪酸浓度的即用型配方食品。在一些实施例中，该方法在提 供由DHA、EPA和ARA甘油三酯或酯化DHA、EPA和ARA产生的长链甘油单酯和/或游离脂肪 酸方面是特别有效的，使得配方食品对否则不能水解和吸收它们的人提供与这些关键脂肪 酸相关的最大益处。
[0087] 水解长链甘油三酯和脂肪酸酯的能力ΜΦ
[0088] 胰功能不全是导致水解长链甘油三酯的能力减少的病症之一。胰功能不全的特征 在于外分泌胰酶包括胰脂肪酶的生产不足。胰功能不全可在人生命的多个阶段过程中自然 发生。例如，胰脂肪酶的分泌在约30周妊娠时以低水平开始并且在生命的第一年过程中保 持很低。因此，婴儿且尤其是早产儿可经历胰功能不全。因此，如果它们不能母乳喂养，则 这些婴儿对弱脂肪酸水解和吸收敏感，并且剥夺与DHA、EPA及其他LC-PUFA摄取相关的益 处。
[0089] 在该系列的另一端，由于作为自然衰老过程的一部分而出现的胰中的变化，在 其他方面健康的老人也可经历胰功能不全或其他减少的水解LC-PUFA甘油三酯或酯化 LC-PUFA的能力。这些变化可包括胰的萎缩、纤维化、硬化症或脂肪过多症。因此，由于外分 泌胰酶分泌的减少，老人可经历消化不良的症状，包括营养不良、脂肪泻、腹泻、腹痛和重量 减轻。K. Herzig 等人，BMC Geriatrics 11:4-8(2011)。
[0090] 胰功能不全或其他减少的水解LC-PUFA甘油三酯或酯化LC-PUFA的能力也可起 因于疾病或创伤。例如，胰腺炎是导致胰功能不全的胰中的炎症病症。胰腺炎可以是急 性或慢性的，并且包括由酒精中毒引起的胰腺炎、特发性慢性胰腺炎、遗传性胰腺炎、创伤 性胰腺炎、急性坏死性胰腺炎和自身免疫性胰腺炎。囊性纤维化也是胰功能不全的原因， 特别是在儿童和青少年中。导致十二指肠内PH降低的障碍例如胃泌素瘤（卓-艾二氏 (Zollinger-Ellison)综合征）可使脂肪酶失活,并且引起胰功能不全。胰功能不全还可通 过其中去除胃或胰腺的一部分的胃肠道手术，胰腺癌，胃肠疾病例如胃溃疡、乳糜泻或克罗 恩氏病，或自身免疫障碍例如系统性红斑狼疮（SLE)或炎性肠病（IBD)引起。
[0091] 其他消化TG-LCPUFA、酯化LC-PUFA和/或其他长链甘油三酯和脂肪酸酯的能力减 少的原因包括例如肠激惹综合症、高甘油三酯血症、营养不良包括重度蛋白质-热量营养 不良、胰和十二指肠肿瘤、腹部放射疗法、血色病、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬 变、舒瓦克曼氏综合征（Shwachman's syndrome)、胰蛋白酶原缺乏症、肠激酶缺乏症或单一 性脂肪酶缺乏症。D. Kasper 等人，Harrison' s Principles of Internal Medicine 第 16 版（2004)。消化长链甘油三酯或酯化长链PUFA的能力减少还可起因于肠切除、囊性纤维 化、脑瘫、短肠综合征、IBD、胰腺炎、克罗恩氏病、腹泻、GI瘘、乳糜泻、吸收不良综合征、创伤 /手术特别是GI创伤或手术、放射性肠炎、肠衰竭、乳糜胸、癌症特别是胰腺癌或GI癌、和/ 或伤口愈合。尽管确切原因未知，但具有注意缺陷多动障碍（ADHD)的儿童也具有减少水平 的 LC-PUFA。Burgress 等人，Am. J. Clin. Nutri. 71 (suppl) :327S - 30S(2000)。
[0092] 囊性纤维化（CF)患者例如已显示具有减少水平的LC-PUFA。Peretti等人， Nutrition&Metabolism 2:11-28 (2005)。接受胰酶替代疗法的CF患者频繁地继续患有脂肪 吸收不良°Kalivianakis, American Journal of Clinical Nutrition 69:127-134(1999)。 在一些实施例中，本发明提供了用于改善CF患者中的脂肪例如LC-PUFA吸收的配方食品和 方法。在一些实施例中，本发明提供了用于减少CF患者中的重量增加的配方食品和方法。 [0093] 虽然由于晚期中组织的分解代谢状态、营养素的改道和吸收不良，恶病质和重量 减轻在许多癌症的晚期是常见的，但胰腺癌（PC)是例外的，因为重量减轻和吸收不良在 诊断时存在于80% -90%患者中。来自外分泌缺乏的吸收不良在很大程度上负责重量 减轻，并且是由于胰腺实质的丧失、阻止酶到达肠的胰管阻塞和手术操作。所有这些机制 的常见最后结果是脂肪泻和重量减轻。Damerla等人，J of Support Oncology 6:393 -396(2008)。PC中的重量稳定与改善的存活和生活质量相关。Davidson等人，Clinical Nutrition 23,239 - 247(2004)。在一些实施例中，本发明提供了用于改善PC患者中的脂 肪例如LC-PUFA吸收的配方食品和方法。在一些实施例中，本发明提供了用于诱导PC患者 中的重量增加的配方食品和方法。
[0094] 本发明的一些实施例改善用于胰功能不全及其他减少水解TG-LCPUFA、酯化 LC-PUFA和/或其他长链甘油三酯和脂肪酸酯的能力的病症的目前治疗选项。在具有水解 TG-LCPUFA、酯化LC-PUFA和/或其他长链甘油三酯和脂肪酸酯的能力减少的患者中，仅仅 增加这些营养素的消耗而不改善水解可引起脂肪泻、腹痛、腹部绞痛、腹泻及其他胃肠并发 症。胰酶替代疗法也可导致并发症。已观察到大量胰消化酶可损害大肠，导致纤维形成性 结肠病（fibrosing colonopathy)。D. Bansi 等人，Gut 46:283-285(2000) ;D. Borowitz 等 人J. Pediatr. 127:681-684(1995)。由脂肪酶补充物造成的另一个显著危险是变态反应，因 为许多商业脂肪酶补充物源自动物源。因此，提供含或不含添加的脂肪酶的预水解长链甘 油三酯或长链PUFA酯的本发明实施例，提供了用于治疗胰功能不全或其他减少的消化长 链甘油三酯或酯化长链PUFA的能力的更佳和更安全的方法。
[0095] 虽然n-3和n-6脂肪酸两者在发育过程中均为重要的，但n-3脂肪酸被认为在 生命晚期比n-6脂肪酸更关键。在一些受试者特别是一些成人中，可能期望增加（DHA和 EPA) :ARA的比率。特别地，囊性纤维化患者可获益于增加其血浆中的（DHA和EPA) :ARA比 率。不幸的是，目前可获得的成人配方食品一般具有低n-3:n-6脂肪酸比率。此外，在具有 TG-LCPUFA水解受损的受试者中，只增加 n-3TG-LCPUFA的消耗不太可能显著改善受试者中 的（DHA和EPA) :ARA比率，并且所得的在未消化的TG-LCPUFA中的增加可引起胃肠问题。 [0096] 相应地，本发明的一些实施例提供了用于增加受试者特别是成人受试者中的（DHA 和EPA) :ARA比率的配方食品和方法。例如，一些实施例提供了制备成人配方食品的方法， 其中使包含η-甘油三酯和/或酯类的配方食品暴露于水解η-甘油三酯和/或酯类的脂 肪酶。在一些实施例中，制备的配方食品包含比相应不含脂肪酶处理的配方食品中更高的 n-3: n-6甘油单酯和/或游离脂肪酸比率，例如更高的游离DHA和EPA与游离ARA比率。在 一些实施例中，配方食品包含比n-6甘油单酯和/或游离脂肪酸更多的n-3甘油单酯和/ 或游离脂肪酸，例如比游离ARA更多的游离DHA和EPA。在一些实施例中，配方食品通过使 其暴露于脂肪酶进行制备，所述脂肪酶具有针对n-3甘油三酯和/或酯类比n-6甘油三酯 和/或酯类更高的活性。在一些实施例中，酶是RO酶。本发明还提供了其中n-3:n-6游离 脂肪酸和/或甘油单酯的比率高于受试者血浆中发现的n-3:n-6脂肪酸比率的配方食品， 例如其中游离DHA和EPA与游离ARA的比率高于受试者的血浆中的配方食品。本发明还提 供了其中将此类配方食品施用于成人受试者的方法。在一些实施例中，受试者具有囊性纤 维化。
[0097] 在早产儿中水解长链脂肪酸的能力减少
[0098] 长链PUFA在婴儿中对于正常神经系统和视网膜发育是关键的，并 且在30周妊娠时开始在脑和视网膜的细胞膜中高度累积。C. Martin等人， J. Pediatr. 159(5) :743-749(2011) ;A. Lapillone 等人，Leukotrines Ess. Fatty Acids81: 143-150 (2009) ;J. McCann 等人，Am. J. Clin. Nutr. 82:281-295 (2005); M. Martinez 等人，J. Pediatr. 120: S129-S138 (1992)。通常脂肪酸包括 DHA、EPA 和 ARA以及将这些脂肪酸分解为甘油单酯和游离脂肪酸所需的脂肪酶通过胎盘提供给胎 儿，并且随后通过母乳提供给婴儿。由于缩短的妊娠时间和随后其在出生后对外部脂 肪酸源的依赖性，早产儿处于明显更高的脂肪酸供应不足的危险中。c. Martin等人， J. Pediatr. 159(5) :743-749(2011)。另外，因为早产儿不产生足够水平的胰脂肪酶，它们因 而具有水解在其配方食品中提供的任何长链脂肪酸的困难。
[0099] 已证实与足月儿相比较，早产儿具有在脑和视网膜两者中更少的DHA和降低的 DHA/ARA 比率。MMartinez 等人，J. Pediatr. 120: S129-S138 (1992)。另外，在早产儿的脂 肪酸概况的回顾性研究中，长链PUFA的水平不足与慢性肺病和败血症的增加相关，这可能 是由于失调的免疫应答。C. Martin等人，J. Pediatr. 159(5) :743-749(2011)。这些及其他 研究提示，即使使用补充有DHA及其他长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的配方食品，确保早 产儿中的长链PUFA水平足够也是显著和可能未满足的需要。本发明的配方食品、方法和装 置将允许早产儿接受足够量的长链脂肪酸，以实现相关医学益处。
[0100] 在喂养配方食品的婴儿中水解长链脂肪酸的能力减少
[0101] 喂养已补充有脂肪酸的配方食品的婴儿也可经历长链PUFA的缺乏。与喂养母乳 的婴儿相比较，发现长链PUFA的水平在喂养未补充的配方食品的婴儿中下降。B. Koletzo 等人，J. Perinat. Med. 36(1) :5-14(2008)。即使喂养母乳的婴儿也可经历n-3脂肪酸的缺 乏，因为母乳中的DHA量不同并且与母亲饮食摄取关联。母乳中的DHA量与母乳喂养的婴 儿中的视力和语言发育之间的正相关已得到描述。S. Innis，J. Pediatr. 143: S1-S8 (2003)。 因此，对于母乳喂养的女性推荐含有DHA的饮食。对于喂养配方食品的婴儿，所有主要配方 食品制造商均已将含有DHA和ARA的脂肪引入优质婴儿配方食品中。然而，关于这些富含 DHA和ARA的配方食品的益处的报告已混乱。一些研究已显示当婴儿接受含长链PUFA的 配方食品时，认知发育中的显著优点，而其他研究则未显示。B. Koletzo等人，J. Perinat. Med. 36(1):5-14(2008) ;E. Sarkadi-Nagy 等人，J.Lipid Res. 45:71-80(2004)。近来，与 喂养不含脂质的相同配方食品的婴儿相比较，在生命的第一年过程中喂养含有DHA和ARA 的Enfamil LIPIL?怕婴儿经历改善的免疫结果，包括改善的呼吸健康。E. Birch等人， J. Pediatr. 156(6) :902-906 (2010)。然而，总的来说，迄今为止的临床前证据未显示目前长 链PUFA补充配方食品对于婴儿发育的一致益处。
[0102] 这些研究中的不一致结果的一种解释是：即使当摄取补充有长链甘油三酯或长链 脂肪酸酯的配方食品时，一些婴儿也不能通过肠吸收必要量的关键脂肪酸。这种吸收脂肪 酸的无能可能是由于婴儿低水平的内源胰脂肪酶。因为脂肪酶通常通过母乳转移至婴儿， 所以喂养配方食品的婴儿可能不具有足够水平的脂肪酶，以将长链PUFA或PUFA酯分解为 甘油单酯和/或游离脂肪酸，用于由肠吸收。因此，与喂养母乳的婴儿相比较，喂养LC-PUFA 补充的配方食品的婴儿仍具有较少的LC-PUFA吸收。再一次，存在不是只提供脂肪酸补充 物，而是使这些脂肪酸能够水解和吸收的明确需要。
[0103] 将脂肪酶加入政府监管的婴儿配方食品（或例如医学营养配方食品）中可能需要 显著的开发工作，以筛选、稳定并配制合适的脂肪酶补充物。在未得到监管的配方食品中， 没有足够的测试，涉及脂肪酶稳定性、特异性缺乏、纯度和/或其他材料干扰的问题可导致 过量或潜在有害水平的酶的使用。添加超出监管障碍的大量新物质也引入另一个变量，所 述另一个变量可影响具有水解长链甘油三酯的能力减少的个人特别是婴儿将如何良好地 耐受配方食品。该问题在例如美国专利5, 902, 617(Pabst)和美国专利4, 944, 944(Tang) 中所述的配方食品中继续存在。
[0104] 本发明的实施例通过提供营养配方食品解决了这些各种问题，当喂养时，所述营 养配方食品提供了增加量的必需甘油单酯和游离脂肪酸，所述甘油单酯和游离脂肪酸可容 易地通过婴儿的肠吸收。因此，喂养配方食品的受试者可提供DHA、EPA和ARA的益处。在 一些实施例中，营养配方食品不引入新成分，除了在现有配方食品中存在的预水解的脂肪 之外。在某些实施例中，喂养配方食品的婴儿提供通过母乳喂养婴儿获得的脂肪酸益处，而 无需暴露于脂肪酶补充物。在其他实施例中，本发明的营养配方食品含有高度特异性脂肪 酶，使得允许使用最低限度量的加入婴儿配方食品中的脂肪酶，以提供增加量的长链甘油 单酯和游离脂肪酸，特别是DHA、EPA和ARA。
[0105] 在一些实施例中，营养配方食品导致改善的脂肪酸吸收。在一些实施例中，受试者 摄取营养配方食品3天、5天、7天、10天、14天、30天、60天或更久。在一些实施例中，此类 本发明的营养配方食品的摄取减少粪便中的总脂肪，且特别可减少粪便中的DHA、ARA和/ 或EPA水平。在一些实施例中，该减少相对于在开始摄取营养配方食品前的受试者的粪便 组成进行测量。在一些实施例中，该减少相对于喂养营养配方食品的受试者的粪便组成进 行测量，所述营养配方食品在摄取前未暴露于脂肪酶，例如目前可获得的营养配方食品。粪 便中的总脂肪、DHA、ARA和/或EPA水平可减少至少10 %、至少20 %、至少30 %、至少40 %、 至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %或更多。在某些实施例中，粪便中的 总脂肪、DHA、ARA和/或EPA水平减少50-80 %。在一些实施例中，粪便中的总脂肪水平减 少至少50 %。在一些实施例中，粪便中的至少一种LC-PUFA (例如DHA、ARA或EPA)水平减 少至少50 %。在一些实施例中，粪便中的至少一种LC-PUFA (例如DHA、ARA或EPA)水平减 少至少60 %。在一些实施例中，粪便中的DHA、ARA和EPA水平各自减少至少50 %。在一些 实施例中，粪便中的DHA、ARA和EPA水平各自减少至少60 %。在一些实施例中，营养配方 食品的摄取改善脂肪水平包括DHA和ARA水平的血浆、红细胞和组织堆积。组织可包括视 网膜、心脏、脂肪和肾组织。在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加血浆、红细胞或两者 中的DHA、ARA或两者的水平。在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加视网膜中的DHA、 ARA或两者的水平。在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加心脏中的DHA、ARA或两者 的水平。在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加甘油三酯、胆固醇、HDL和/或LDL的 血浆水平。在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加受试者的血浆中的HDL与LDL比率。
[0106] 在一些实施例中，营养配方食品的摄取增加维生素 A和/或维生素 E的血浆水平。 不预期受理论束缚，认为该增加是由于维生素 A和E通常作为必须被水解的酯提供的事实。 在本发明的多种方法和组合物中，对脂肪酶的暴露认为改善这些维生素酯的水解，从而导 致维生素 A和E在血浆中的更大累积。
[0107] 在一些实施例中，营养配方食品的摄取具有有益效应，而无脂肪在肝中显著增加 的累积。脂肪肝病（FLD)的特征在于肝细胞中增加的脂肪尤其是甘油三酯累积。该病症还 与影响脂肪代谢的其他疾病相关。肝含有一些脂肪是正常的，并且单独地，这不引起症状。 在一些患者中，脂肪肝可伴随肝脏炎症和肝细胞死亡（脂肪性肝炎）。还存在与肝癌（肝细 胞癌）的相关。胰岛素抗性以及增加的碳水化合物和饱和脂肪酸的消耗，以及纤维和ω-3 脂肪酸的低摄取均与FLD的发病机理正相关。
[0108] FLD的原因包括饮食、用药、疾病和医学病症。过量卡路里的消耗可引起FLD ;过量 卡路里摄取压倒肝以正常方式代谢脂肪的能力，这导致肝中的脂肪累积。许多用药包括如 它莫西芬、胺碘酮注射液、口服胺碘酮和氨甲蝶呤与FLD相关。脂肪肝还与II型糖尿病、月巴 胖症和血液中的高甘油三酯水平、乳糜泻和威尔森氏病（铜代谢异常）、快速重量减轻和营 养不良相关。
[0109] 脂肪酶
[0110] 胰功能不全及其他与水解长链甘油三酯或长链脂肪酸酯的能力减少相关的病症 目前用补充性消化酶包括胰脂肪酶进行治疗。然而，这些补充物中存在的胰酶且特别是 胰脂肪酶通常对通过胃酸和胃蛋白酶的降解是敏感的，使得仅小部分的摄取酶以活性形 式到达十二指肠。E. Ville等人，Digesti〇n65:73-81 (2001)。不幸的是，许多酸保护性 涂层具有对于婴儿人群或免疫妥协的患者的潜在安全问题，因为显著部分的递送重量是 塑料涂层。此外，尽管酸保护性涂层具有帮助，但一定程度的吸收不良持续，促使具有胰 功能不全的患者要求增加酶补充物的剂量。该肠包衣酶的脂肪酸吸收不良的持续可能 是由于下述事实：具有胰功能不全的患者中的十二指肠和上空肠通常是酸性环境，使得 未实现pH的预期升高，并且保护性涂层未适当溶解以释放酶。D. Graham, New England J. Med. 296 (23) : 1314-1317 (1977)。这两个问题均已通过增加施用的脂肪酶剂量得到解决。 不幸的是，如先前指出的，高剂量的胰酶补充物已发现与纤维形成性结肠病相关。因此，本 发明的一些实施例提供了包含更高百分比的长链甘油单酯和/或游离脂肪酸的营养配方 食品，而不含添加的脂肪酶。如本文描述的，一些实施例提供了包含最佳脂肪酶剂量的营养 配方食品。
[0111] 脂肪酶可得自动物、植物和许多天然或遗传工程微生物。许多（如果不是大多数） 商购可得的饮食脂肪酶补充物源自动物，并且对通过消化酶的降解特别敏感。较不频繁使 用的替代物是微生物脂肪酶，即在细菌或真菌例如酵母中产生的脂肪酶。微生物脂肪酶在 比动物或作物脂肪酶更广泛的PH范围保留活性，因此消除肠包衣片的需要。然而，微生物 酶趋于由小肠中的胰蛋白酶降解，由此减少其分解肠中的甘油三酯和酯类的可用性。在某 些实施例中，本发明的配方食品、方法或装置中使用的脂肪酶是细菌脂肪酶、真菌脂肪酶或 两者。
[0112] 个别脂肪酶的特异性和动力学可显著不同。脂肪酶的特异性受酶的分子特性、底 物结构和影响酶与底物的结合的因素控制。特异性类型包括底物特异性，即给定脂肪酶在 分解一类脂肪酸方面比另一种脂肪酶更有活性；和位置特异性，其涉及甘油三酯的甘油主 链的第1位和/或第3位中的酯键的优先水解。
[0113] 目前已测定通过粘稠色杆菌、荧光假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌和米根霉产生 的脂肪酶对于DHA、EPA和ARA具有比其他脂肪酶更大的特异性，所述其他脂肪酶例如由 皱裙假丝酵母（Candida rugosa)、米赫根毛霉（Rhizomucor miehei)、沙门柏干酪青霉 (Penicilium camemberti)、黑曲霉（Aspergillus niger)和米曲霉（Aspergilis oryzae) 产生的脂肪酶。因此，包含粘稠色杆菌、荧光假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌和/或米根霉的 脂肪酶补充物或补充有脂肪酶的营养产品将提供增加的TG-DHA、TG-EPA和/或TG-ARA水 解。相应地，本发明的一个方面提供了包含粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱 伯克霍尔德菌脂肪酶和/或米根霉脂肪酶的脂肪酶补充物或补充有脂肪酶的营养产品。在 一些实施例中，脂肪酶是粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶或米根霉脂肪酶。在某些 实施例中，脂肪酶是米根霉脂肪酶。
[0114] 提及某些物种的脂肪酶例如粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克 霍尔德菌脂肪酶和米根霉脂肪酶，不一定意指脂肪酶直接由天然宿主物种制备。例如，相同 脂肪酶可在另一种宿主细胞中重组产生。
[0115] 本发明的另一个方面是通过施用作为饮食补充物的粘稠色杆菌、荧光假单胞菌、 洋葱伯克霍尔德菌和米根霉脂肪酶中的一种或多种，或通过用这些酶中的一种或多种预水 解含有DHA、EPA和/或ARA的配方食品，来增加 DHA、EPA和/或ARA吸收的方法。在一些 实施例中，脂肪酸是粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶或米根霉脂肪酶。本发明的 另外方面提供了对于DHA、EPA和/或ARA具有比活性的脂肪酶，如通过反相高效液相色谱 (RP-HPLC)测定和实例1中所述的，所述比活性与粘稠色杆菌、荧光假单胞菌、洋葱伯克霍 尔德菌和米根霉中的一种或多种的比活性可比较。在一些实施例中，脂肪酶对于DHA、EPA 和/或ARA具有比活性，所述比活性与粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶或米根霉脂 肪酶中的一种或多种的比活性可比较。本发明的一个实施例是含有小于5, 000单位脂肪酶 (其中单位在例如 Pharmaceutical Enzymes:Properties and Assay Methods, R. Ruyssen 和 A. Lauwers (编辑）Scientific Publising Company, Ghent, Gelgium(1978)中所述的标 准橄榄油测定法中评价）的营养配方食品。在其他实施例中，营养配方食品含有小于3, 000 单位的脂肪酶。在一些实施例中，营养配方食品含有小于1，〇〇〇单位。在某些实施例中，含 有小于5, 000、小于3, 000或小于1，000单位的脂肪酶的配方食品是婴儿配方食品或医学营 养配方食品。
[0116] 固定的脂肪酶
[0117] 用于将酶及其他蛋白质固定至不溶性支持物的过程是众所周知和文献中描述 的。脂肪酶的固定可改善酶的稳定性，致使其可再使用，并且允许产品容易与酶分开，而 不被脂肪酶污染。在一些实施例中，脂肪酶与固体支持物共价结合，然而，还可使用非共 价结合。合适的脂肪酶固定方法包括例如吸附、离子结合、共价结合、交联、封装和诱陷到 疏水性或亲水性聚合物和无机基质上。参见Y. Ren等人，BMC Biotechnol. 11:63(2011); V.R. Murty 等人，Biotechnol. Bioprocess Eng. 7:57-66 (2002)。脂肪酶可通过与支持物 材料直接结合或通过接头结合而得到固定。参见例如Stark和Holmberg, Biotechnol. and Bioeng. 34(7) :942-950(1989)。
[0118] 通过吸附的固定是可逆的，并且通常涉及疏水性力。它是简单和廉价的， 但具有不完全固定或酶从不溶性支持物渗漏的缺点。使用该方法固定的脂肪酶的 例子可在 E. Lie 等人，Chem. Technol. and Biotechnol. 50:549-553 (1991)(柱状 假丝酵母脂肪酶（Candida cyIindracea)，沸石支持物）；M. Basri等人，]\〇16111· Technol. and Biotechnol. 59:37-44 (1994)(皱裙假丝酵母脂肪酶；聚合物支持物）； H.Gunnlaughsdottir 等人，Enzyme and Microbiol. Tech. 22:360-367 (1998)(柔毛腐质霉 (Humicola lanuginose)脂肪酶；玻璃珠支持物）中找到。适合于通过吸附固定的支持物 包括例如陶瓷珠例如 Toyonite (Toyo Denka Kogyo Co. ,Ltd·)。
[0119] 离子结合基于脂肪酶和基质上的不同荷电的离子基团例如固体支持物上的 DEAE-纤维素或DEAE-Sephadex之间的静电相互作用。离子结合对脂肪酶的构象引起最低 限度变化，并且获得在大多数情况下具有高活性的固定脂肪酶。然而，应当记住尽管酶和支 持物之间的结合力比使用吸附时更强，但它不象共价结合一样强，并且因此可能发生脂肪 酶从支持物中渗漏。
[0120] 共价结合基于支持物材料和脂肪酶表面上的氨基酸上的官能团之间的共价 键。在酶与支持物的这种结合中可发生的官能团可以是对于脂肪酶的催化活性不是 必需的氨基、羧基、硫氢基、羟基、咪唑或酚基。为了保护活性位点，固定可在底物或 竞争抑制剂的存在下进行。使用脂肪酶与支持物材料的共价结合的显著优点是键的 强度，即固定的稳定性。关于通过共价结合固定的脂肪酶的例子，参见S. Emi等人， European Polymer Journal30(5) :589-595(1994)。适合于共价结合的支持物包括例如 Immobead?(ChiralVision) 〇
[0121] 交联涉及使脂肪酶与自身连接以形成三维结构，或使用交联剂使脂肪酶与固 体结构连接。例如，脂肪酶可与壳聚糖珠交联。参见S.H. Chiou等人，Prep. Biochem. Biotechnol. 37(3) :265-275(2007)。通过封装的脂肪酶固定通常涉及在脂肪酶周围形 成多孔涂层或半透性膜，使得脂肪酶包含在多孔材料内部，但甘油三酯和酯类可自由经 过。通过诱陷的脂肪酶固定涉及通过使脂肪酶诱陷在晶格结构中来限制酶的运动。海 藻酸盐珠可用于这类固定。I.Bushan 等人，J.Bioactive and Compatible Polymers 23(6) :552-562(2008)。还可使用合成和天然聚合物。还参见G. Fernandez-Lorente等人， J. Am. Oil Chem. Soc. (2010 年 12 月 14 日在线公开）和 G. Fernandez-Lorente 等人，J. Am. Oil Chem. Soc. 88:1173-1178(2011)。
[0122] 在某些实施例中，本发明的配方食品、方法和装置利用如美国专利 6, 541，606 (Margolin)中所述的，已结晶并交联用于增加稳定性的脂肪酶，含或不含另一种 固定形式例如封装。
[0123] 在一些实施例中，将脂肪酶固定至磁性纳米颗粒（MNP)。这些MNP可由含有脂肪酶 与之反应的氨基或环氧官能团的接头或聚合物涂布。例如一种用于MNP的合适涂层是聚多 巴胺。参见例如Y.Ren等人，BMC Biotechnologyll:63(2011)。MNP用于脂肪酶固定的用 途具有诸如生物相容性、超顺磁性、小尺寸和低毒性的优点。纳米颗粒的磁性特性促进脂肪 酶从溶液中去除，并且还提供了用于使MNP-脂肪酶附着至固体支持物的另一种方式。
[0124] 在一些实施例中，固定的脂肪酶是微生物脂肪酶。在一些实施例中，固定的脂肪酶 选自细菌脂肪酶。在一些实施例中，固定的脂肪酶是选自粘稠色杆菌、荧光假单胞菌、洋葱 伯克霍尔德菌和米根霉的一种或多种脂肪酶。
[0125] 在某些实施例中，脂肪酶（无论是固定还是不固定的）加入配方食品中1、2、3、4、 5、10、20、30分钟或更久。LC-PUFA甘油三酯和酯类的水解通过RP-HPLC进行测量。在某些 实施例中，LC-PUFA甘油三酯和酯类的水解百分比到30分钟时是10%、20%、30%、40%、 50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在实施例中，LC-PUFA甘油三酯和酯类的水解百分比 到 20 分钟时是 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或 100%。在实施例中， LC-PUFA甘油三酯和酯类的水解百分比到10分钟时是10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90%或100%。在某些实施例中，脂肪酶是米根霉脂肪酶。
[0126] 何含固定的脂肪酶的裝置
[0127] 根据多个实施例，本公开内容提供了用于制备营养产品的装置和方法。该装置和 方法可用于在消耗前使婴儿配方食品或其他营养产品暴露于脂肪酶。脂肪酶相应地分解脂 肪和油，伴随游离脂肪酸和甘油单酯的后续释放。该装置和方法允许用于制备配方食品或 其他营养产品的方便方法。在一些实施例中，该装置和方法允许婴儿或消耗该产品的其他 人避免消耗外源脂肪酶。在一些实施例中，该装置和方法允许产生这样的配方食品，所述配 方食品含有甘油三酯和/或游离脂肪酸，但不含任何显著量的脂肪酶（如通过ELISA测定 的）。
[0128] 图 1、2A-2C、3A-3C、4A-4B、5A-5B、9A-9C、10A-10C、11A-11C、12、13A-13B、14、15、 16、17A-17B、18、19、20和21示出了根据本公开内容的多个实施例的装置。如图1中所示， 本公开内容的装置100可包括构造为容纳婴儿配方食品120或其他液体营养产品的容器 110。如下文详细描述的，容器110可包括固定的脂肪酶，使得通过鼻胃管114或其他喂养 机构（例如婴儿奶瓶）喂养给婴儿的配方食品120不含任何可估计量的脂肪酶。例如，月旨 肪酶可固定在沿容器的壁发现的结构150上或其中或以其他方式在容器内，使得脂肪酶与 容器内的配方食品120流体接触。此外，如关于下文的多个实施例讨论的，配方食品可以多 种方式加入容器110内，以允许脂肪酶在容器110内的酶促处理。例如，流体可通过管112 喂养或倾入容器内，并且随后可经过鼻胃管或其他装置用于喂养。
[0129] 本公开内容自始至终，该装置和方法涉及用于处理或制备营养配方食品，例如婴 儿配方食品和医学营养配方食品。应当理解该装置和方法可用于处理或制备任何类型的营 养配方食品，对于所述营养配方食品在消耗前提供脂肪酶处理可以是有益的。此类产品可 包括待由某人消耗的任何营养配方食品，所述某人具有胰功能不全或其他减少的水解长链 甘油三酯或酯化长链PUFA的能力。
[0130] 图2A-2C和3A-3C示出了根据多个实施例更详细的装置。如所示的，装置200-202、 300-302可包括容器210、310用于容纳液体配方食品。容器210、310可包括多种不同类型 和构型。例如，容器210、310可包括玻璃或塑料罐或小瓶、袋（例如硅酮或其他柔性材料如 IV盐水袋）、圆柱状容器例如注射器筒、或其他尺寸和形状形成为容纳所需量的配方食品 或其他产品的容器。
[0131] 如所示的，本公开内容的装置可允许配方食品暴露于脂肪酶，以获得所需酶促效 应，同时允许配方食品随后方便地被消耗而不消耗脂肪酶。相应地，在多个实施例中，脂肪 酶固定在容器210、310内，使得当配方食品被取出时（例如通过鼻胃管、婴儿奶瓶的奶嘴、 或通过将配方食品转移至另一个容器），脂肪酶保留在容器210、310内，或可在消耗前从配 方食品中去除。在其他实施例中，脂肪酶固定在容器210、310内例如固定在可去除的固体 支持物上，使得脂肪酶可容易地从容器中去除，同时将配方食品留在容器中用于以后消耗。
[0132] 图2A-2C显示了容器210的一种构型，连同用于将脂肪酶固定在容器210内的某 些实施例。如所示的，容器210可包括多种不同材料、尺寸和形状。另外，容器210可包括 一个或多个访问口 220、230用于控制配方食品260进入和离开容器的流动。
[0133] 脂肪酶可以多种方式固定在容器210内。例如，脂肪酶可固定或包含在位于容器 210内部的结构250、252内（图2A和2C)。另外或可替代地，脂肪酶215可固定在容器210 的壁上或包含在容器210的壁内（图2B)。相应地，当配方食品260置于容器内部时，配方 食品260与脂肪酶接触以产生所需酶促效应。
[0134] 如所示的，脂肪酶可通过使脂肪酶与容器内的结构250、252和/或容器的壁251 结合而固定在容器内。容器内的结构可具有多种构型。例如，在某些实施例中，结构可包括 珠、球或任何其他结构，所述任何其他结构自身在容器内可以是活动的，使得结构在配方食 品内流动。例如，如图4A中所示，结构250可包括具有表面壁256的珠或球，脂肪酶257可 与所述表面壁256键合。此外，应当理解结构250、252可具有多种不同形状或构型（例如 立方形、卵形、杆状）。
[0135] 容器210的结构250、252和/或壁的构型可构造为提供所需表面积，使得配方食 品能够在可接受的时间段过程中与足够量的脂肪酶接触。例如，结构250、252可包括众多 珠250 (图2A)或杆状结构252 (图2C)，以提供高表面积用于结合足够量的脂肪酶。作为另 外一种选择，如果更长的时间段可用于在消耗前使配方食品与脂肪酶一起温育和/或使用 具有高酶促活性的脂肪酶，则更少量的脂肪酶可以是合适的。
[0136] 在多个实施例中，构建结构250、252和/或容器，使得当配方食品260从容器中取 出用于消耗或贮存时，脂肪酶不保留在配方食品260内。例如，珠250或杆状结构的尺寸可 形成为使得它们不通过相对小的访问口 230。作为另外一种选择或另外地，结构可附接至容 器壁和/或容器可包括尺寸形成为阻止配方食品260对结构的运动的筛或滤器。此外，结 构250、252可具有促进其与配方食品的分离的其他特性。例如，结构250可由磁珠形成，所 述磁珠可通过与磁性滤器结合而去除。
[0137] 在一些实施例中，不是通过附着至容器210内的结构和/或容器壁固定脂肪酶，月旨 肪酶257'包含在结构250、252和/或容器壁251内。图4B示出一个此类实施例。如所示 的，结构250'可包括具有壁256'的珠或其他形状。壁可由半透性材料形成，使得允许配方 食品260而不是脂肪酶257'的进入和离开。此类封装可类似地用于其他结构（例如252) 和/或容器壁，使得壁的表面具有脂肪酶可包含在其内的半透性材料。
[0138] 容器可类似地具有提供增加量的脂肪酶和/或增加的脂肪酶与配方食品260的接 触的表面构型。例如，容器的壁可具有脊或其他表面修饰以增加表面积。此外，不是包括单 个开放空间，容器可包括在流动路径中的变化，例如长弯曲路径以允许延长或更长的对脂 肪酶的暴露和/或脂肪酶固定至其并且配方食品可流动通过其的通道或管的集合。参见例 如，图1，元件150和图21，元件2101。
[0139] 在某些实施例中，在本文描述的实施例中的任一个中，容器可与脂肪酶一起制造 和预包装。在使用过程中，可打开容器，并且配方食品可置于容器内以接触脂肪酶足够时 间，以产生所需酶促效应。在其他实施例中，结构例如珠250或杆状结构具有固定至其表面 或包含和/或封装在其内的脂肪酶，可包装并分配，并且这些结构可置于含有配方食品的 分开容器内。在一些实施例中，振荡或搅动包含固定的脂肪酶和配方食品的容器一段时间 可以是有益的。
[0140] 如所示的，配方食品260可经由多个访问口置于容器210内。例如，容器可包括顶 部访问口 220和/或底部访问口 230。口 220、230可分别用于配方食品的进入和离开。另 夕卜，可使用单个口，或可使用多个口。口可包括构造为接合其他装置的结构，所述其他装置 可用于流体的喂养或转移。例如，口可包括可接合鼻胃管的连接器例如鲁尔锁定连接、螺 纹和/或导管或管。另外，口可构造为接合婴儿奶瓶、婴儿奶瓶奶嘴或任何其他结构，以促 进流体转移至另一个容器或帮助喂养。此外，一个或两个口 220、230可包括阀140(图1)、 240 (图2A)或其他流体流动控制机构。
[0141] 图3A-3C示出了根据某些实施例的本公开内容的装置。如所示的，装置300-302 包括容器310用于接受配方食品260。另外，容器310可包括盖322或其他关闭装置，例如 用于罐或瓶的螺纹顶部。类似于图2A-2C中所示的实施例，装置可包括包含固定至其表面 和/或封装在其内的脂肪酶的结构350、351、351'和353。
[0142] 图3A-3C的实施例可提供配方食品与含有脂肪酶的结构的更快速分离。例如，如 图3A中所示，杆状结构350可包含脂肪酶，并且在配方食品的酶促处理后，盖322可去除， 以同时去除结构350和脂肪酶。此外，盖322可替换为另一个盖、奶瓶奶嘴或其他流体连 接。类似地，具有其他构型如球或珠351、351'的结构（图3B)的尺寸可形成为容易从配方 食品260中去除。例如，如所示的，珠351、351'的尺寸形成为使得它们可容易地手动或通 过过滤去除。此外，容器310可提供固定至或包含在其内表面353的脂肪酶，并且在酶促处 理后，配方食品260可转移至另一个容器，或通过用奶瓶奶嘴或与喂养系统的其他连接替 换盖322进行消耗。
[0143] 作为另外一种选择或另外地，结构350、351、351'可具有含另外的部件的可透性外 壁，所述另外的部件提供包含在其内的固定的脂肪酶。另外，结构35Γ (图3B)示出了一个 实施例，其中结构35Γ具有封闭众多珠250的可透性外壁。外壁可包括允许配方食品容易 移动进入和离开结构35Γ的网目或其他构型，以提供与珠250的接触。此外，珠可提供脂 肪酶，所述脂肪酶可固定至其表面或封装在其中，如上文多个实施例中所述的。
[0144] 如上所述，含有脂肪酶的结构可作为预包装部件连同容器310-起制造并分配。 作为另外一种选择或另外地，结构可与容器分开包装并分配。例如，可制造并分配含有杆状 结构350或珠351、351'或者另外具有包含在其中或固定至其的脂肪酶的盖322。盖可构造 用于与标准婴儿奶瓶、水瓶或者可含有配方食品的其他容器或装置连接。
[0145] 在其他实施例中，脂肪酶可提供为使得当配方食品置于容器内时和/或在喂养或 从容器中取出的过程中，脂肪酶接触配方食品。例如，图5A示出了根据示例性实施例的一 种装置500。装置500可包括标准奶瓶奶嘴，并且脂肪酶可固定至奶嘴边缘或奶嘴自身的内 表面510。像这样，配方食品将在正常使用过程中与脂肪酶接触。类似地，脂肪酶可包含在 其他结构内或上，所述其他结构可用于喂养，例如鼻胃喂养装置的流体管。
[0146] 作为另外一种选择，脂肪酶可在分开的元件中提供，所述分开的元件构造为允许 配方食品在正常流体流动过程中与脂肪酶接触。例如，在一个实施例中，脂肪酶可包含在构 造用于与瓶关闭物例如奶嘴（图5A)或瓶盖/顶部（图5B)接合的壳体520内。壳体520 可包括允许配方食品流动经过其体积并接触其中提供的脂肪酶的可透性壁。
[0147] 壳体520内包含的脂肪酶可以多种形式提供。例如，在一些实施例中，如先前描述 的，脂肪酶通过键合或封装固定在壳体520内的珠550上。此外，壳体520可包括允许配 方食品流动经过其的开放网目或其他构型。例如，对于图5A中所示的瓶构型，当配方食品 在喂养过程中离开瓶时，通过壳体520的开放网目或流动路径允许配方食品接触脂肪酶。 作为另外一种选择，如图5B中所示，配方食品可倾入壳体的顶部530内或离开壳体的顶部 530,以允许配方食品在容器310的填充或倒空过程中与脂肪酶接触。壳体520的顶部530 和/或任何其他部分可由多种材料形成。例如，壳体520可由允许受控流体流动的膜形成。 此外，顶部530可由半透性膜形成，所述半透性膜允许流体（配方食品）流动通过其，但不 允许脂肪酶通过。相应地，形成顶部530的膜可作用于将脂肪酶固定在容器310内，而无需 脂肪酶在容器310内的另外结合或固定。
[0148] 在多个实施例中，上文描述的装置可包括改善或以其他方式控制脂肪酶活性的修 饰。另外，容器110、210、310可包括搅拌系统以允许配方食品在温育期过程中的连续运动， 由此允许脂肪酶与流体体积各处发现的脂肪酸接触。此外，该装置可包括控制温度以改善 或控制脂肪酶活性的系统。
[0149] 本发明的某些实施例提供含有营养配方食品和脂肪酶的容器。在一些实施例中， 脂肪酶与容器中的营养配方食品接触。在其他实施例中，脂肪酶和营养配方食品在容器中 不接触。在一些实施例中，营养配方食品和脂肪酶包含在容器内的分开的区室中。在一些 实施例中，营养配方食品采用干燥形式。在一些实施例中，营养配方食品采用液体形式。在 一些实施例中，通过将脂肪酶释放到含有营养配方食品的区室内，使脂肪酶与营养配方食 品接触。在一些实施例中，通过将脂肪酶和营养配方食品转移到另一个容器内（例如通过 将脂肪酶区室和营养配方食品区室倒空到其他容器内），使脂肪酶与营养配方食品接触。在 一些实施例中，在将脂肪酶和营养配方食品转移到其他容器之前或之后，将液体加入其他 容器中。
[0150] 根据本公开内容的装置可具有众多不同形状和/或构型。例如，图9A-9C、 10A-10C、11A-11C、12、13A-13B、14、15、16、17A-17B、18、19、20、21 示出 了多种另外形状和构 型。在关于这些图描述的各个构型中，脂肪酶可使用上文描述的方法中的任一种进行固定 (例如通过将脂肪酶固定在结构例如装置内的珠上，和/或通过将脂肪酶固定在装置的壁 或其他表面内或上）。此外，具体构型可选择为提供多种不同特点，例如表面积、体积、脂肪 酶的量和/或材料对酶的暴露时间。
[0151] 图 9A-9C、10A-10C、11A-11C、12、13A-13B、14、15、16、17A-17B、18、19、20、21 中示 出的装置可构造为允许以多种方式的脂肪酶接触。例如，在多个实施例中，装置的一部分或 全部可插入包括配方食品的容器内，以便允许配方食品和脂肪酶之间的接触。在其他实施 例中，该装置构造用于配方食品的线内（in-line)处理。
[0152] 图9A-9C示出了可置于容器内以处理配方食品的装置的多种构型。如所示的，装 置900、920(图9A和9C)可具有由封闭脂肪酶的外壁901、901"形成的多种不同形状。如 上所示，脂肪酶902可以多种不同方式包括通过附着至珠进行固定。此外，装置910(图9B) 可包括在一个或多个壁90Γ中形成的超过一个袋或开口 903。具体构型、袋或开口数目、以 及脂肪酶的量和/或装置的体积可取决于预期用途和/或控制脂肪酶活性的速率而改变。
[0153] 在某些实施例中，该装置可构造为允许其尺寸和/或形状中的改变。例如，图 10A-10C示出了在使用前可压缩例如用于贮存于容器1001内的装置1000。需要时，容器 1001可打开，并且装置的壁1003可展开以产生脂肪酶体积1002与容器体积的所需比率。 在一些实施例中，装置1000包括线圈或弹簧1004,以提供结构支撑和/或帮助装置维持所 需形状和/或体积。
[0154] 在一些实施例中，该装置可包括杆状延伸以促进脂肪酶在配方食品体积内的放置 和去除。例如，图11A-11C、12、13A-13B、14和15示出了关于具有杆状延伸的装置的多种示 例性构型。如所示的，装置1100、1100'、1100"、1200、1300、1400、1500可包括在多种构型 中放置接近杆状延伸1102、1202、1302、1402、1502的远侧区的一个或多个袋或开口 1101、 1201、1301、1401、1501。在一些实施例中，如例如图13A-13B中所示，袋或开口 1301的定向 可以是可调整的，例如以允许在使用过程中插入窄开口内和/或使贮存空间降到最低。
[0155] 在多个实施例中，脂肪酶可附着至瓶或罐的盖或关闭物的一部分，使得当盖或关 闭物置于瓶或罐上时，脂肪酶可接触瓶或罐内包含的流体。例如，本文所示的装置中的任 一种均可附接至盖或关闭物的表面，以允许与瓶或罐中的配方食品容器接触。在图16、 17八-178、18、19和20中示出了包括附着至盖或关闭物1602、1702、1802、1902、2002的脂肪 酶的装置1600、1700、1800、1900、2000的多个构型。如所示的，脂肪酶可包含在具有多种形 状或构型的袋或开口 1601、1705、1805、1901、2001内。此外，在一些实施例中，盖或关闭物 1902、2002可包括开口 1910、2010用于插入流体或从容器中去除流体，并且此类开口 1910、 2010可包括用于流体管的连接器例如鲁尔型连接器。
[0156] 在一些实施例中，可能期望在配方食品流动经过管（例如在喂养过程中，如图1中 所示，或在从一个容器转移到另一个的过程中）时处理配方食品。图21示出了用于脂肪酶 的线内处理的另一个装置2100。装置2100可包括含有脂肪酶的袋或开口 2101，所述脂肪 酶可以是固定的，如上文讨论的。此外，袋或开口 2101可具有扭曲或弯曲路径，以允许脂肪 酶和配方食品之间的更长接触时间。另外，装置2100可包括在两个端部处的开口 2110,以 允许与管或导管的连接用于配方食品的进入和离开。
[0157] 在多个实施例中，该装置可包括充当筛或网目以阻止脂肪酶进入由患者摄取的配 方食品的材料。例如，图19和21中所示的装置可包括一个或多个筛或网目1906、2106,以 阻止固定在珠或其他结构上的脂肪酶运动到待摄取的配方食品内。
[0158] 在一些实施例中，脂肪酶可固定在容器的部件内或上，使得脂肪酶直到采取进一 步步骤时才与配方食品接触。例如，在一个实施例中，脂肪酶可包含在盖或关闭物的一部分 内或上，并且盖或关闭物可包括用于将固定的脂肪酶释放到容器内的机构。例如，脂肪酶可 包含在珠或其他结构（参见例如图18中的元件1805)上或内，所述珠或其他结构进一步附 接至盖或包含在盖内，并且需要时，脂肪酶可滴入容器内（例如通过扭动盖或去除障碍/附 接机构）。类似地，脂肪酶可附着至容器的壁或其他结构，或包含在容器的壁或其他结构内， 并且固定在珠或其他材料上，并且脂肪酶可仅在需要时才允许接触配方食品（例如通过将 脂肪酶释放到容器内或去除在脂肪酶上的障碍）。
[0159] 图6A是含有固定在聚合物珠上的米根霉脂肪酶的小瓶的照片。固定的脂肪酶采 取干燥颗粒形式，其可加入根据本发明的装置例如图6B-D中所述的装置的容器或室。固定 的脂肪酶可诱陷在装置的室中，同时通过只提供在室的出口端部处的滤器，仍允许配方食 品流动经过和离开室，所述室的出口端部含有足够大以允许配方食品经过但将固定的脂肪 酶保留在室内的孔。作为另外一种选择，脂肪酶可通过例如涂布装置的内部通道或室进行 固定，使得配方食品在经过室时暴露于脂肪酶。由于增加的脂肪酶稳定性和可复用性，在此 类装置中的固定的脂肪酶可用于延长时期的连续喂养。
[0160] 营养配方會品
[0161] 本发明的某些实施例提供了营养配方食品。在一些实施例中，营养配方食品是婴 儿配方食品。在一些实施例中，营养配方食品是医学营养配方食品。在一些实施例中，营养 配方食品在摄取前暴露于脂肪酶。在一些实施例中，该暴露允许营养配方食品中的至少一 些脂质的预水解。因此，在一些实施例中，营养配方食品是"喂养时（as-fed)"配方食品，即 如紧在由受试者摄取前组成的液体配方食品，其在组成中不同于如由制造商销售的配方食 品。术语"营养配方食品"不包含在摄取后存在于受试者体内的组合物。
[0162] 在一些实施例中，营养配方食品包含长链脂肪酸。在一些实施例中，营养配方食品 包含一种或多种LC-PUFA，例如DHA、ARA和EPA。在一些实施例中，营养配方食品包含DHA。 在一些实施例中，营养配方食品包含ARA。在一些实施例中，营养配方食品包含DHA和ARA。 在一些实施例中，营养配方食品包含DHA、ARA和EPA。
[0163] 在一些实施例中，营养配方食品中超过5%的总长链脂肪酸采取甘油单酯和/或 游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，营养配方食品中超过5%的总LC-PUFA采取甘油单 酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，超过5%的DHA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。在一些实施例中，超过5%的ARA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。 在一些实施例中，超过5%的EPA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。
[0164] 在一些实施例中，营养配方食品中超过10%、超过15%、超过20%、超过30%、超 过40 %、超过50 %、超过60 %、超过70 %、超过80 %、超过85 %、超过90 %、超过95 %或 100%的总长链脂肪酸采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，营养配方 食品中超过10%、超过15%、超过20%、超过30%、超过40%、超过50%、超过60%、超过 70%、超过80%、超过85%、超过90%、超过95%或100%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/ 或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，超过10 %、超过15 %、超过20 %、超过30%、超过 40%、超过50%、超过60%、超过70%、超过80%、超过85%、超过90%、超过95%或100% 的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，超过10%、超过15%、超 过20%、超过30%、超过40%、超过50%、超过60%、超过70%、超过80%、超过85%、超过 90 %、超过95 %或100 %的ARA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中， 超过10%、超过15%、超过20%、超过30%、超过40%、超过50%、超过60%、超过70%、超 过80 %、超过85 %、超过90 %、超过95 %或100 %的EPA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的 形式。在一些实施例中，超过10%、超过15%、超过20%、超过30%、超过40%、超过50%、 超过60%、超过70%、超过80%、超过85%、超过90%、超过95%或100%的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在特定实施例中，超过90 %的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在特定实施例中，超过95 %的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。
[0165] 在一些实施例中，营养配方食品中至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至 少40%、至少50%、至少60 %、至少70%、至少80%、至少85 %、至少90%、至少95%或 100%的总长链脂肪酸采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，营养配方 食品中至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少 70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/ 或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少 40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100% 的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，至少10%、至少15%、至 少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少 90%、至少95%或100%的ARA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中， 至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至 少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %或100 %的EPA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的 形式。在一些实施例中，至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、 至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在特定实施例中，至少90 %的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在特定实施例中，至少95 %的DHA和ARA两 者均采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。
[0166] 在本发明的一些实施例中，本发明的营养配方食品的大约一份大小为对于早产 儿配方食品约IOO-IlOmU对于足月儿配方食品90-150mL(例如148mL)、对于肠内喂养 230-500mL (例如235-250mL)、以及对于儿童配方食品和成人配方食品230-250mL。在一些 实施例中，每份包含约l〇_35mg ARA游离脂肪酸和甘油单酯（如将得自目前可获得的早产 儿和足月儿配方食品中的TG-ARA的完全水解），或约40-50mg ARA游离脂肪酸和甘油单酯 (如将得自目前可获得的成人配方食品中的TG-ARA的完全水解）。在一些实施例中，每份 包含约7-20mg DHA游离脂肪酸和甘油单酯（如将得自目前可获得的早产儿和足月儿配方 食品中的TG-DHA的完全水解），或约10-40mgDHA游离脂肪酸和甘油单酯（如将得自目前 可获得的儿童和成人配方食品中的TG-DHA的完全水解）。在一些实施例中，230-250mL的 成人份包含约1，IOOmg EPA游离脂肪酸和甘油单酯以及约240mg DHA游离脂肪酸和甘油单 酯（如得自一些目前可获得的成人配方食品例如PiOSure ;中的TG-EPA和TG-DHA的完全 水解）。在本发明的一些实施例中，然而，在摄取前预水解TG-LCPUFA的能力允许制备具有 比目前可获得的配方食品中更高水平的LC-PUFA的配方食品。相应地，在一些实施例中， ARA和/或DHA的游离脂肪酸和/或甘油单酯的量超过可得自目前可获得的配方食品中 的TG-LCPUFA完全水解的量。在一些实施例中，一份本发明的营养配方食品包含50-100mg LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。在一些实施例中，一份本发明的营养配方食品包含 100-200mg LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。在一些实施例中，一份本发明的营养配方 食品包含200-300mg LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。在一些实施例中，一份本发明 的营养配方食品包含250-500mg LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。在一些实施例中， 一份本发明的营养配方食品包含500-1000mg LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。在一 些实施例中，一份本发明的营养配方食品包含1-2克LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油单酯。 在一些实施例中，一份本发明的营养配方食品包含2-3克LC-PUFA游离脂肪酸和/或甘油 单酯。
[0167] 在一些实施例中，营养配方食品包含脂肪、碳水化合物和蛋白质（或氨基酸）。在 一些实施例中，本发明的婴儿配方食品包含下述中的一种、超过一种或全部：脱脂乳、乳糖、 植物油（例如棕榈油精、椰子、大豆和高油酸向日葵油中的一种或多种）、乳清蛋白浓缩物、 糖、LC-PUFA、维生素和矿物质。在一些实施例中，营养配方食品包含由中链脂肪酸组成的脂 肪以及由长链脂肪酸组成的脂肪。在一些实施例中，营养配方食品包含由n-6脂肪酸组成 的脂肪以及由n-3脂肪酸组成的脂肪。在一些实施例中，营养配方食品包含LA和ALA。
[0168] 在一些实施例中，本发明的营养配方食品不含添加的脂肪酶。在一些实施例中，本 发明的装置和/或方法用于使营养配方食品暴露于脂肪酶，但营养配方食品在喂养前与脂 肪酶分离，使得喂养时营养配方食品不含添加的脂肪酶。不含添加的脂肪酶的营养配方食 品指其中脂肪酶是无法检测的或仅以极低水平存在的配方食品，由于例如固定的脂肪酶从 固体支持物浸出到配方食品内。在一些实施例中，营养配方食品包含不超过0.02% (w/w) 脂肪酶、不超过0.01 % (w/w)脂肪酶、不超过0.005% (w/w)脂肪酶、不超过0.002% (w/ w)脂肪酶、不超过0.001 % (w/w)脂肪酶、不超过0.0005% (w/w)脂肪酶、不超过0.0002% (w/w)脂肪酶或不超过0.0001% (w/w)脂肪酶。在一些实施例中，营养配方食品包含小于 0. 02% (w/w)脂肪酶、小于0.01 % (w/w)脂肪酶、小于0.005 % (w/w)脂肪酶、小于0.002 % (w/w)脂肪酶、小于0.001 % (w/w)脂肪酶、小于0.0005 % (w/w)脂肪酶、小于0.0002 % (w/ w)脂肪酶或小于0.0001% (w/w)脂肪酶。
[0169] 在一些实施例中，营养配方食品包含脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶选自粘稠色 杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。在一些实施 例中，脂肪酶选自粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。在一些实施例 中，脂肪酶是粘稠色杆菌脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶是荧光假单胞菌脂肪酶。在一些 实施例中，脂肪酶是米根霉脂肪酶。
[0170] 在一些实施例中，一份营养配方食品含有小于5, 000单位脂肪酶（其中单位在例 如Pharmaceutical Enzymes:Properties and Assay Methods, R. Ruyssen和 A. Lauwers (编 辑）Scientific Publishing Company, Ghent, Belgium(1978)中所述的标准撤揽油测定法 中评价）。在其他实施例中，一份营养配方食品含有小于3, 000单位的脂肪酶。在一些实施 例中，一份营养配方食品含有小于1，〇〇〇单位。在某些实施例中，每份含有小于5, 000、小于 3, 000或小于1，000单位的脂肪酶的配方食品是婴儿配方食品或医学营养配方食品。
[0171] 在一些实施例中，营养配方食品包含0. Olmg至1克脂肪酶/克营养配方食品中的 总脂肪（无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至500mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至250mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至200mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至150mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至IOOmg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养 配方食品包含〇. 1至50mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养配 方食品包含1至50mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养配方食 品包含25至75mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养配方食品 包含1至IOOmg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，营养配方食品包 含不超过50mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。
[0172] 在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至IOmg脂肪酶/毫克营养配方食品中 的总LC-PUFA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实施例 中，营养配方食品含有0. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实 施例中，营养配方食品含有〇. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一 些实施例中，营养配方食品含有〇. 001至Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。 在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至0. 5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总 LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有0.001至0. Img脂肪酶/毫克营养配方食品 中的总LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克营养配 方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有0. 01至0. Img脂肪酶/毫克 营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有0. 02至0. 08mg脂肪酶 /毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有0. 04至0. 06mg 脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，营养配方食品含有不超过 0. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。
[0173] 在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至IOmg脂肪酶/毫克营养配方食品中 的总DHA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至0. 5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中， 营养配方食品含有0. 001至0. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例 中，营养配方食品含有0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实 施例中，营养配方食品含有〇. 01至〇. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些 实施例中，营养配方食品含有〇. 02至0. 08mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一 些实施例中，营养配方食品含有〇. 04至0. 06mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。
[0174] 在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至IOmg脂肪酶/毫克营养配方食品中 的总ARA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至0. 5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实施例中， 营养配方食品含有0. 001至0. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实施例 中，营养配方食品含有0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些实 施例中，营养配方食品含有〇. 01至〇. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一些 实施例中，营养配方食品含有〇. 02至0. 08mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。在一 些实施例中，营养配方食品含有〇. 04至0. 06mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总ARA。
[0175] 在一些实施例中，营养配方食品含有0. 001至IOmg脂肪酶/毫克营养配方食品中 的总EPA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实施例中，营 养配方食品含有0. 001至0. 5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实施例中， 营养配方食品含有0. 001至0. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实施例 中，营养配方食品含有0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些实 施例中，营养配方食品含有〇. 01至〇. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一些 实施例中，营养配方食品含有〇. 02至0. 08mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。在一 些实施例中，营养配方食品含有〇. 04至0. 06mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总EPA。
[0176] 在一些实施例中，营养配方食品通过本文公开的方法进行制备。在一些实施例中， 营养配方食品使用本文公开的装置进行制备。
[0177] 制各营养配方會品的方法
[0178] 根据多个实施例，本公开内容还提供了制备营养配方食品的方法。在一些实施例 中，营养配方食品是婴儿配方食品。在一些实施例中，营养配方食品是医学营养配方食品。 在一些实施例中，营养配方食品是用于成人的营养饮料（例如完全营养饮料，例如ENSURE、 PEDIASURE)〇
[0179] 在一些实施例中，制备营养配方食品的方法包括使液体营养组合物暴露于脂肪 酶。在一些实施例中，液体营养组合物包含LC-PUFA甘油三酯或LC-PUFA酯。在一些实施 例中，液体营养组合物包含选自DHA、ARA和EPA的一种或多种LC-PUFA的甘油三酯或酯类。
[0180] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于选自粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌 脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶和米根霉脂肪酶的脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶选自 粘稠色杆菌脂肪酶、荧光假单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶是粘稠 色杆菌脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶是荧光假单胞菌脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶 是米根霉脂肪酶。
[0181] 这些方法中涉及的组分可以各种次序混合。在一些实施例中，将脂肪酶加入液体 营养组合物中，由此使液体营养组合物中的脂质暴露于脂肪酶。在一些实施例中，通过将可 饮用的液体加入固体或粉末形式的营养组合物来制备液体营养组合物。在一些实施例中， 脂肪酶在添加可饮用的液体之前存在于固体或粉末形式的营养组合物中。在其他实施例 中，在制备液体营养组合物后加入脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶和固体或粉末形式的营 养组合物同时加入可饮用的液体中。
[0182] 在一些实施例中，液体营养组合物在摄取前暴露于脂肪酶至少一分钟、至少2分 钟、至少3分钟、至少5分钟、至少8分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少30分钟、至少45 分钟、或至少60分钟。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30秒、不超 过1分钟、不超过2分钟、不超过3分钟、不超过5分钟、不超过8分钟、不超过10分钟、不 超过15分钟、不超过30分钟、不超过45分钟、不超过60分钟、不超过2小时、不超过4小 时、不超过6小时、不超过12小时、或不超过24小时。
[0183] 在一些实施例中，该方法导致这样的营养配方食品，其中营养配方食品中的至少 10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、或100%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离脂 肪酸的形式。在一些实施例中，至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少 50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或100%的DHA采取 甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，至少10%、至少15%、至少20%、至 少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少 95 %、或100 %的ARA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，至少10 %、 至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至 少85%、至少90%、至少95%、或100%的EPA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。
[0184] 为了本专利申请的目的，营养组合物或配方食品对脂肪酶的暴露指其中液体营养 组合物或液体配方食品与脂肪酶接触的时间段，所述脂肪酶可处于溶液中或是固定的。为 了本专利申请的目的，当配方食品由受试者摄取时，或当脂肪酶通过分离液体配方食品与 脂肪酶与之固定的固体支持物去除时，对脂肪酶的暴露终止。在一些实施例中，液体营养组 合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的DHA采取甘油 单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10 分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的ARA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品 中至少20%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。
[0185] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养 配方食品中至少40%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0186] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养 配方食品中至少50%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少50%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少50%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0187] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养 配方食品中至少60%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少60%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少60%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0188] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养 配方食品中至少70%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少70%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过10分钟，并且所得的营养配方食品中至少70%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0189] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养 配方食品中至少20%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0190] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养 配方食品中至少40%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0191] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养 配方食品中至少50%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少50%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少50%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0192] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养 配方食品中至少80%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少80%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少80%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0193] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养 配方食品中至少90%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少90%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过20分钟，并且所得的营养配方食品中至少90%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0194] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养 配方食品中至少20%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少20%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0195] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养 配方食品中至少40%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少40%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0196] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养 配方食品中至少60%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少60%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少60%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0197] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养 配方食品中至少70%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少70%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少70%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0198] 在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养 配方食品中至少80%的DHA采取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液 体营养组合物暴露于脂肪酶不超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少80%的ARA采 取甘油单酯和/或游离脂肪酸的形式。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于脂肪酶不 超过30分钟，并且所得的营养配方食品中至少80%的总LC-PUFA采取甘油单酯和/或游离 脂肪酸的形式。
[0199] 在一些实施例中，当营养配方食品喂养给受试者时，脂肪酶保留在营养配方食品 中。在其他实施例中，在液体营养组合物喂养给受试者前，脂肪酶从液体营养组合物中去 除。在一些实施例中，通过下述去除脂肪酶：使包含脂肪酶的液体营养组合物暴露于固定至 分子的固体支持物，所述分子与脂肪酶结合，由此使脂肪酶与固体支持物结合，并且使液体 营养组合物与固体支持物分离。因为脂肪酶固定至固体支持物，所以使液体营养组合物与 固体支持物分离具有从液体营养组合物中去除脂肪酶的效应。在一些实施例中，在脂肪酶 暴露于液体营养组合物前，使脂肪酶固定至固体支持物，并且通过使液体营养组合物与固 体支持物分离来去除脂肪酶。在一些实施例中，脂肪酶固定至室的内面或室内包含的固体 支持物的至少一部分，并且液体营养组合物通过经过室而瞬时暴露于脂肪酶。在一些实施 例中，室是柱。在一些实施例中，液体营养组合物暴露于含有固定至固体支持物的脂肪酶的 容器，并且容器内表面的至少一部分由这样的材料组成，所述材料对甘油三酯和酯类是可 渗透的，但对于固体支持物是不可渗透的。
[0200] 在一些实施例中，该方法产生不含添加的脂肪酶的营养配方食品。在一些实施例 中，使营养配方食品暴露于脂肪酶，但营养配方食品在喂养前与脂肪酶分离，使得喂养时营 养配方食品不含添加的脂肪酶。不含（或含有）添加的脂肪酶的营养配方食品指其中脂肪 酶是无法检测的或仅以极低水平存在的配方食品，由于例如固定的脂肪酶从固体支持物浸 出到配方食品内。在一些实施例中，营养配方食品包含不超过0.02% (w/w)脂肪酶、不超过 0. 01% (w/w)脂肪酶、不超过0.005% (w/w)脂肪酶、不超过0.002% (w/w)脂肪酶、不超过 0.001% (w/w)脂肪酶、不超过0.0005% (w/w)脂肪酶、不超过0.0002% (w/w)脂肪酶、或 不超过0.0001 % (w/w)脂肪酶。在一些实施例中，营养配方食品包含小于0.02 % (w/w)脂 肪酶、小于0.01 % (w/w)脂肪酶、小于0.005% (w/w)脂肪酶、小于0.002% (w/w)脂肪酶、 小于0.001% (w/w)脂肪酶、小于0.0005% (w/w)脂肪酶、小于0.0002% (w/w)脂肪酶、或 小于0.0001% (w/w)脂肪酶。
[0201] 在一些实施例中，该方法包括使每份营养配方食品暴露于小于5, 000单位脂肪酶 (其中单位在例如 Pharmaceutical Enzymes:Properties and Assay Methods, R. Ruyssen 和 A. Lauwers (编辑）Scientific Publising Company, Ghent, Gelgium(1978)中所述的标 准橄榄油测定法中评价）。在其他实施例中，使每份营养配方食品暴露于小于3, 000单位的 脂肪酶。在一些实施例中，使每份营养配方食品暴露于小于1，〇〇〇单位的脂肪酶。在某些 实施例中，每份暴露于小于5, 000、小于3, 000或小于1，000单位的脂肪酶的配方食品是婴 儿配方食品或医学营养配方食品。
[0202] 在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于0. Olmg至1克脂肪酶/克 营养配方食品中的总脂肪（无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在 一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于0. 1至500mg脂肪酶/克营养配方食 品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于〇. 1至250mg脂肪 酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于 0. 1至200mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营 养配方食品暴露于0. 1至150mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中， 本发明的方法使营养配方食品暴露于〇. 1至IOOmg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。 在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于0. 1至50mg脂肪酶/克营养配方食 品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于1至50mg脂肪酶/ 克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食品暴露于25至 75mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方法使营养配方食 品暴露于1至IOOmg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。在一些实施例中，本发明的方 法使营养配方食品暴露于不超过50mg脂肪酶/克营养配方食品中的总脂肪。
[0203] 在一些实施例中，该方法使营养配方食品暴露于0.001至IOmg脂肪酶/毫克营 养配方食品中的总LC-PUFA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。 在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总 LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食 品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至Img脂肪酶/毫克营 养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至0. 5mg脂肪 酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至 〇. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露 于0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例中，使营养 配方食品暴露于〇. 01至〇. Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在一些实施例 中，使营养配方食品暴露于〇. 02至0. 08mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总LC-PUFA。在 一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 04至0. 06mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总 LC-PUFA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于不超过0. Img脂肪酶/毫克营养配方食 品中的总LC-PUFA。
[0204] 在一些实施例中，该方法使营养配方食品暴露于0. 001至IOmg脂肪酶/毫克营养 配方食品中的总DHA(无论采用游离脂肪酸、甘油单酯、酯类还是甘油三酯形式）。在一些实 施例中，使营养配方食品暴露于〇. 001至5mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一 些实施例中，使营养配方食品暴露于〇. 001至3mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。 在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至Img脂肪酶/毫克营养配方食品中的总 DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至0. 5mg脂肪酶/毫克营养配方食品 中的总DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0.001至0. Img脂肪酶/毫克营养配 方食品中的总DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 001至0. 05mg脂肪酶/毫克 营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 01至0. Img脂肪酶 /毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 02至0. 08mg 脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。在一些实施例中，使营养配方食品暴露于0. 04至 〇. 〇6mg脂肪酶/毫克营养配方食品中的总DHA。
[0205] 在一些实施例中，制备营养配方食品的方法包括使液体营养组合物暴露于如本文 描述的装置。
[0206] 实例1 :脂肪酶对于DHA和ARA的比活性
[0207] 为了评估多种脂肪酶对DHA和/或ARA甘油三酯的酶促活性，在含有0. IM Tris缓冲液，pH 7. 7和底物DHA或ARA甘油三酯的两mL玻璃小瓶（具有磁性搅拌 棒）中进行实验。通过添加脂肪酶溶液起始反应。脂肪酶得自如下的商业来源：米根霉 (Amano DF-15, Amano Enzymes Inc. ,Nagoya,日本）、粘稠色杆菌（EMD CalBiochem, EMD Biosciences, Billerica, MA)和突光假单胞菌（Amano AK, Amano Enzymes Inc. , Nagoya, 日本）。其他脂肪酶也可得自商业来源，例如皱裙假丝酵母（Amano AY 30或Amano 30, Amano Enzymes Inc.，Nagoya,日本）、黑曲霉（Amano DS, Amano Enzymes Inc. , Nagoya, 日本）、沙门柏干酪青霉（Amano 50,Amano Enzymes Inc. ,Nagoya,日本）、米赫根毛 霉（L4277, Sigma-Aldrich)、米曲霉（62285, Sigma-Aldrich)和洋葱伯克霍尔德菌 (534641, Sigma-Aldrich)。脂肪酶溶液由这些商购可得的脂肪酶进行制备，而无需另外的 纯化，除了洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶纯化至同质性之外。
[0208] 将小瓶转移至置于磁搅拌器上的37 °C下水浴。在不同时间间隔-0、15、30、45、60、 90和120分钟获得50 μ 1样品，并且加入含有950 μ 1运行缓冲液（30% IOmM磷酸铵缓冲 液，pH 3.0和70%乙腈）的HPLC小瓶。随后使用Agilent HPLC1100系列和C8RP柱，并 且在215和220nm处监控，通过反相高效液相色谱（RP-HPLC)就DHA游离酸或ARA游离酸 分析样品。使用商购可得的标准，根据保留时间鉴定游离酸峰：DHA甘油三酯（Nu-check Pr印，Inc.批号 T-310-D7-V)、ARA 甘油三酯（Nu-check Pr印，Inc.批号 T-295-JY14-V)、 DHA 游离酸形式（Nu-check Prep, Inc.批号 U-84A-AU20-U)和 ARA 游离酸形式（Nu-check Pr印，Inc.批号U-71A-N11-U)。表1中概括了该测定法中的脂肪酶实验对象组对于DHA和 ARA的比活性。在本发明人的掌握中（in the inventors'hands)，与测试的其他脂肪酶包括 皱褶假丝酵母（CR)相比较，粘稠色杆菌（CV)、洋葱伯克霍尔德菌（BC)、荧光假单胞菌（PF) 和米根霉（RO)具有基本上更高的针对DHA和/或ARA的比活性。
[0209] 表1 :脂肪酶对于DHA和ARA的比活性
[0210]

【权利要求】
1. 一种包含长链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA)的营养配方食品，其中超过5 %的所述 LC-PUFA采取甘油单醋和/或游离脂肪酸的形式。
2. 根据权利要求1所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含选自DHA、ARA和EPA 的一种或多种LC-PUFA。
3. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含DHA。
4. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含EPA。
5. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含ARA。
6. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含DHA和EPA。
7. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含DHA和ARA。
8. 根据权利要求2所述的营养配方食品，其中所述LC-PUFA包含DHA、EPA和ARA。
9. 根据权利要求1-8中任一项所述的营养配方食品，其中所述营养配方食品是婴儿配 方食品。
10. 根据权利要求1-9中任一项所述的营养配方食品，所述营养配方食品还包含选自 粘稠色杆菌脂肪酶、英光假单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶的脂肪酶。
11. 根据权利要求10所述的营养配方食品，所述营养配方食品包含不超过0. 1毫克脂 肪酶/毫克LC-PUFA。
12. 据权利要求1-9中任一项所述的营养配方食品，其中所述营养配方食品不含添加 的脂肪酶。
13. -种营养配方食品，所述营养配方食品包含选自粘稠色杆菌脂肪酶、英光假单胞菌 脂肪酶和米根霉脂肪酶的脂肪酶。
14. 根据权利要求13所述的营养配方食品，所述营养配方食品还包含DHA，其中超过 5 %的所述DHA采取甘油单醋和/或游离脂肪酸的形式。
15. 根据权利要求13或权利要求14所述的营养配方食品，所述营养配方食品还包含 ARA，其中超过5%的所述ARA采取甘油单醋或游离脂肪酸的形式。
16. 根据权利要求13-15中任一项所述的营养配方食品，所述营养配方食品还包含 EPA，其中超过5 %的所述EPA采取甘油单醋或游离脂肪酸的形式。
17. 根据权利要求13-16中任一项所述的营养配方食品，所述营养配方食品包含不超 过0. 1毫克脂肪酶/毫克LC-PUFA。
18. -种在通过受试者摄取前制备营养配方食品的方法，所述方法包括使包含 LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋的液体营养组合物暴露于脂肪酶。
19. 根据权利要求18所述的方法，其中所述脂肪酶是选自粘稠色杆菌脂肪酶、英光假 单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶中的一种或多种。
20. 根据权利要求18或权利要求19所述的方法，其中所述液体营养组合物在摄取前暴 露于脂肪酶至少1分钟。
21. 根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述液体营养组合物在摄取前暴 露于脂肪酶不超过60分钟。
22. 根据权利要求18-21中任一项所述的方法，所述方法包括通过下述制备液体组合 物；将可饮用的液体加入包含LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋和脂肪酶的固体或粉末 组合物，由此使包含LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋的液体组合物暴露于所述脂肪酶。
23. 根据权利要求18-21中任一项所述的方法，所述方法包括： (a)通过将可饮用的液体加入包含LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋的固体或粉末 组合物，来制备液体组合物，和 化）将脂肪酶加入所述液体组合物中， 由此使所述LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋暴露于所述脂肪酶。
24. 根据权利要求18-23中任一项所述的方法，所述方法还包括在使所述LC-PUFA甘油 H醋和/或LC-PUFA醋暴露于所述脂肪酶后，从所述液体组合物中去除所述脂肪酶。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述脂肪酶通过包括下述步骤的过程去除： (a)使所述液体组合物中的所述脂肪酶暴露于与所述脂肪酶结合的分子，其中所述分 子固定至固体支持物，由此使所述脂肪酶与所述固体支持物结合；和 化）使所述液体组合物与所述固体支持物分离。
26. 根据权利要求24所述的方法，其中使所述液体组合物中的所述LC-PUFA甘油H醋 和/或LC-PUFA醋暴露于固定至固体支持物的脂肪酶，并且通过使所述液体组合物与所述 固体支持物分离来去除脂肪酶。
27. 根据权利要求24所述的方法，其中使所述液体组合物中的所述LC-PUFA甘油H醋 和/或LC-PUFA醋暴露于所述脂肪酶，并且随后通过使所述液体组合物经过室而与所述脂 肪酶分离，其中所述脂肪酶固定至所述室的内面的至少一部分。
28. 根据权利要求24所述的方法，其中使所述液体组合物中的所述LC-PUFA甘油H醋 和/或LC-PUFA醋暴露于所述脂肪酶，并且随后通过包括使所述液体组合物经过室的步骤 的过程而与所述脂肪酶分离，其中所述脂肪酶固定至所述室内包含的固体基材。
29. 根据权利要求28所述的方法，其中所述室是柱。
30. 根据权利要求26所述的方法，其中使包含所述LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋 的所述液体组合物暴露于所述脂肪酶，并且随后通过包括下述步骤的过程而与所述脂肪酶 分离；使包含所述LC-PUFA甘油H醋和/或LC-PUFA醋的所述液体组合物暴露于包含固定 至固体支持物的脂肪酶的容器，其中所述容器的内表面的至少一部分由该样的材料组成， 所述材料对LC-PUFA甘油H醋和LC-PUFA醋是可渗透的，但对于所述固体支持物是不可渗 透的。
31. 根据权利要求18-30中任一项所述的方法，其中所述制备的营养配方食品中超过 5%的所述LC-PUFA采取甘油单醋和/或游离脂肪酸的形式。
32. 根据权利要求18-31中任一项所述的方法，其中所述LC-PUFA包含选自DHA、ARA和 EPA中的一种或多种。
33. 根据权利要求18-20和22-32中任一项所述的方法，其中所述液体营养组合物在摄 取前暴露于脂肪酶不超过60分钟。
34. 根据权利要求18-33中任一项所述的方法，其中所述液体营养组合物暴露于不超 过0. 1毫克脂肪酶/毫克液体营养组合物中的LC-PUFA。
35. 根据权利要求18-34中任一项所述的方法，其中所述液体营养组合物在摄取前暴 露于脂肪酶不超过30分钟。
36. -种营养配方食品，所述营养配方食品通过根据权利要求18-35中任一项所述的 方法进行制备。
37. -种给受试者提供营养的方法，所述方法包括给所述受试者喂养根据权利要求 1-17和36中任一项所述的营养配方食品。
38. 根据权利要求37所述的方法，其中所述营养配方食品是婴儿配方食品。
39. -种改善受试者中的脂肪吸收的方法，所述方法包括给所述受试者喂养根据权利 要求1-17和36中任一项所述的营养配方食品。
40. 根据权利要求39所述的方法，其中所述方法使所述受试者的粪便中的总脂肪水平 减少至少50%。
41. 根据权利要求39或权利要求40所述的方法，其中所述方法使所述受试者的粪便中 的选自DHA、ARA和EPA的至少一种LC-PUFA水平减少至少50%。
42. 根据权利要求39-41中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的血浆 中的DHA、ARA或两者的水平。
43. 根据权利要求39-42中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的视网 膜中的DHA、ARA或两者的水平。
44. 根据权利要求39-43中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的也脏 中的DHA、ARA或两者的水平。
45. 根据权利要求39-44中任一项所述的方法，其中所述受试者患有膜功能不全、妥协 的膜输出、减少的水解LC-PUFA甘油H醋或LC-PUFA醋的能力、或者减少的吸收LC-PUFA甘 油H醋或LC-PUFA醋的能力。
46. 根据权利要求39-45中任一项所述的方法，其中所述营养配方食品通过饲管喂养 给所述受试者。
47. 根据权利要求39-46中任一项所述的方法，其中所述受试者是早产儿。
48. 根据权利要求39-46中任一项所述的方法，其中所述受试者是至少50岁。
49. 根据权利要求39-46中任一项所述的方法，其中所述受试者是6岁或更年幼。
50. -种用于改善超过50岁的受试者中的认知能力的方法，所述方法包括给所述受试 者喂养根据权利要求1-17和36中任一项所述的营养配方食品。
51. -种用于预防婴儿中的慢性肺病的方法，所述方法包括给所述婴儿喂养根据权利 要求1-17和36中任一项所述的营养配方食品。
52. -种包括至少第一区室和第二区室的容器，其中所述第一区室包含营养配方食品， 并且所述第二区室包含脂肪酶。
53. 根据权利要求52所述的容器，其中所述脂肪酶选自粘稠色杆菌脂肪酶、英光假单 胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。
54. 根据权利要求52或权利要求53所述的容器，其中所述营养配方食品采取粉末形 式。
55. 根据权利要求52或权利要求53所述的容器，其中所述营养配方食品采取液体形 式。
56. 根据权利要求52-55中任一项所述的容器，其中所述第二区室包含不超过0. 1毫克 脂肪酶/毫克在所述第一区室中包含的所述营养配方食品中的LC-PUFA。
57. -种用于制备配方食品的装置，所述装置包括： 包括用于包含流体的本体壁的容器；和 在所述容器内包含的至少一种脂肪酶。
58. 根据权利要求57所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶固定在所述容器内。
59. 根据权利要求58所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶附着至与所述容器的内部 流体连通的结构。
60. 根据权利要求59所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶通过共价结合、离子结合 或在结构内的交联中的至少一种而附着至所述结构。
61. 根据权利要求59或权利要求60所述的装置，其中所述结构包括所述容器的内表 面。
62. 根据权利要求59或权利要求60所述的装置，其中所述结构包括所述容器的盖。
63. 根据权利要求59或权利要求60所述的装置，其中所述结构包括在所述容器内的表 面突出。
64. 根据权利要求59或权利要求60所述的装置，其中所述结构包括在所述容器内的颗 粒。
65. 根据权利要求64所述的装置，其中所述颗粒包含球或珠。
66. 根据权利要求61-65中任一项所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶封装在对于 脂肪酸可渗透但对于所述脂肪酶不可渗透的材料中。
67. 根据权利要求57-66中任一项所述的装置，其中所述容器还包括在所述容器中的 至少一个开口。
68. 根据权利要求67所述的装置，其中所述开口构造用于与饲管连接。
69. 根据权利要求67或权利要求68所述的装置，所述装置还包括阀。
70. -种用于制备配方食品的装置，所述装置包括用于关闭瓶的盖，其中所述盖包含至 少一种脂肪酶，所述至少一种脂肪酶固定至放置成与所述瓶的内部流体接触的表面上或所 述表面中。
71. 根据权利要求70所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶通过共价结合、离子结合 或在所述结构内的封装中的至少一种而固定至所述表面上或其中。
72. 根据权利要求70或权利要求71所述的装置，其中所述表面包括所述盖的内表面。
73. 根据权利要求70-72中任一项所述的装置，其中所述表面包括构造为延伸到容器 内的突出。
74. 根据权利要求70-73中任一项所述的装置，其中所述至少一种脂肪酶封装在对于 脂肪酸可渗透但对于所述脂肪酶不可渗透的材料中。
75. -种用于水解营养配方食品中的甘油H醋和/或脂肪酸醋的装置，其中所述装置 包含附着至固体支持物的脂肪酶。
76. 根据权利要求57-75中任一项所述的装置，其中所述脂肪酶选自粘稠色杆菌脂肪 酶、英光假单胞菌脂肪酶和米根霉脂肪酶。
77. 根据权利要求75所述的装置，所述装置包括容器，其中所述脂肪酶固定至所述室 的内表面的至少一部分。
78. 根据权利要求75所述的装置，所述装置包括容器，其中所述脂肪酶固定至所述容 器内包含的固体支持物。
79. 根据权利要求77或权利要求78所述的装置，其中所述脂肪酶通过共价结合或交联 进行固定。
80. 根据权利要求75-79中任一项所述的装置，所述装置还包括附接至所述容器的饲 管。
81. -种用于减少患者需要全肠胃外营养的时间长度的方法，所述方法包括肠内施用 根据权利要求1-17和36中任一项所述的营养配方食品的步骤。
82. 根据权利要求39-49中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述受试者的红细 胞中的DHA、ARA或两者的水平。
83. 根据权利要求39-51中任一项所述的方法，其中所述方法增加选自甘油H醋、胆固 醇、皿L和LDL的一种或多种血浆组分的水平。
84.根据权利要求39-51中任一项所述的方法，其中所述方法不显著增加所述肝中的 脂肪累积。
85. 根据权利要求1-8或10-17中任一项所述的营养配方食品，其中所述配方食品是成 人营养配方食品。
86. 根据权利要求49所述的方法，其中所述受试者小于1岁。
87. 根据权利要求49所述的方法，其中所述受试者是1-6岁。
88. 根据权利要求39-49中任一项所述的方法，其中所述方法增加所述血浆中的维生 素A、维生素E或两者的水平。
89. -种用于增加选自维生素和维生素E的至少一种维生素的血浆水平的方法，所述 方法包括给所述受试者喂养根据权利要求1-17和36中任一项所述的营养配方食品。
【文档编号】A61K9/50GK104470508SQ201380014489
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年2月14日 优先权日:2012年2月17日
【发明者】A·L·玛戈林 申请人:阿尔克雷斯塔股份有限公司