马替麦考酚酯或其盐类用于制备抗流感病毒之药物的用途的制作方法与工艺

本发明涉及马替麦考酚酯(MycophenolaeMofetil)或其药理上可接受的盐类等在制备用于抗流感病毒的药物中的用途。

背景技术：
流行性感冒病毒(简称流感病毒)是人类生命中最具威胁性的病毒之一，自20世纪就发生四次流行性感冒大流行，分别是1918～1919年(西班牙流感，H1N1)、1957年(亚洲流感，H2N2)、1968年(香港流感，H3N2)及1977年(俄罗斯流感，H1N1)。其中，又以1918年西班牙流感最为严重，其H1N1病毒株是由禽流感以及人类流感病毒突变而成，在全世界造成2～4千万人的死亡。而，2009年墨西哥爆发新型H1N1流感疫情，已怀疑有一百多万人感染，造成一万多人的丧命，目前也持续蔓延中(Neumann，G.；Noda，T.；Kawaoka，Y.EmergenceandPandemicPotentialofSwine-OriginH1N1InfluenzaVirus.Nature.459：931-939，2009)。另外，在2010年全国流感防控会中提出要特别注意季节性A型H3N2流感的侵袭，此病毒株也在过去造成不少的伤亡。流感病毒是一种造成人类与动物患流行性感冒的负链单股RNA病毒，是属于正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)，依据病毒核蛋白、遗传物质、基质蛋白抗原特性的不同，可分为A、B、C三个血清型。其中，A型流感病毒会导致不同宿主间的流行性感冒，因其病毒外表的两种抗原血凝素(hemagglutinin，HA)及神经胺酸酶(neuraminidase，NA)为多型性，目前已发现16种HA(H1～16)及9种NA(N1～N9)，可发生遗传性抗原变异；B型流感病毒抗原变异较少只会引起地区性感染，C型流感病毒主要是以猪为宿主，对人体的感染较少见，因此上述所说的世界性大流感就是由A型流感病毒所导致的疫情。A型流感病毒结构自外而内可分为外膜、基质蛋白及核心三个部分。外膜有约500个放射状向外排列的突起，为上述两种抗原类型：柱状突起(HA)及蘑菇状突起(NA)。HA能与多种动物红血球的表面受体吸附引起凝集，经裂解后可分为重链及轻链，使得病毒与宿主细胞相互融合；NA主要具有水解唾液酸的活性，切断病毒与宿主细胞最后的联系，使病毒从吸附的红血球脱落，防止病毒的聚集，促进在黏液中的移动。基质蛋白是由M1、M2所组成，有保护病毒核心及维系病毒的结构。另外核心是由8个负链单股RNA片段所组成，其与核蛋白(NP)及RNA聚合酶(PB1、PB2及PA)相结合缠绕成核糖核蛋白体。而流感病毒之所以会造成人们的恐慌主要是由于它的变异方式会产生新的亚型而让我们措手不及，其突变方式有两种，一为抗原飘移(antigenicdriff)，其是指流感病毒亚型的抗原(NA)胺基酸序列的点突变所产生小变异；另一个为抗原转变(antigenicshift)，是流感病毒变异最常见的类型，每隔十年就会发生一次抗原性大变异，造成的原因是由于宿主同时受到两种不同病毒株感染，病毒RNA进行基因重组而产生新的病毒株，影响甚大(陈鸿珊，张兴权，抗病毒药物及其研究方法，化学工业出版社，328-331，2006.)。流行性感冒大多发生在秋冬、早春，其侵袭的目标为呼吸道黏膜上皮细胞，并在宿主细胞内繁殖，导致黏膜充血、水肿及细胞变性、脱落等病变。潜伏期通常1至3天，开始出现发烧、发冷、头痛、鼻塞、全身酸痛等征状，当蔓延至下呼吸道，则可能引起支气管炎和间质性肺炎，由于流感病毒会降低呼吸道黏膜上皮细胞清除和黏附异物的能力，因此经常造成继发性肺炎感染，是其主要造成流感疾病死亡原因之一(Morens，D.M.；Taubenberger，J.K.；Fauci，A.S.PredominantRoleofBacterialPneumoniaasaCauseofDeathinPandemicInfluenza：ImplicationsforPandemicInfluenzaPreparedness.J.Infect.Dis.198：962-970，2008)。目前，对于流感的防疫与治疗大多采取小区隔离及支持性药物治疗，而使用治疗预防方式分为疫苗和抗病毒药物。但是对于日趋变异的病毒，疫苗防护还是有风险性；而目前抗病毒药物主要有三种，第一种为M2抑制剂(M2proteininhibitor)，作用于病毒穿膜蛋白M2离子信道，阻碍H+进入病毒内部，使得病毒外膜无法与核内体(endosome)融合，病毒便无法释放RNA，这类药物为金刚烷(Adamantan)衍生物，如金刚烷胺(amantadine)、金刚乙胺(rimantadine)；第二种为神经胺酸酶(NA)抑制剂(neuraminidaseinhibitors)，作用在神经胺酸酶，使病毒无法水解唾液酸，进而无法离开宿主细胞，阻止病毒扩散，这类药物有奥司他韦(oseltamivir，克流感)、札那米韦(zanamivir，瑞乐沙)、帕拉米韦(peramivir)和环戊烷(cyclopentane)或咯啶衍生物(pyrrolidinederivatives)；第三种为RNA聚合酶(RNApolymerase)抑制剂，主要抑制RNA聚合酶(PB1、PB2、PA)合成病毒蛋白质的路径，药物有2′-脱氧-2′-氟鸟苷(2′-deoxy-2′-fluoroguanosine，FdG)、T-705；另外也有利用干扰素及SiRNA(smallinterferingRNAs)等治疗方式来防止病毒的感染(Clercq，E.D.AntiviralAgentsActiveagainstInfluenzaAViruses.Nat.Rev.Drug.Discov.5：1015-1025，2006)。然而，上述的药物皆无法达到全面抑制各种类型的流感病毒，且有抗药性及药物副作用的缺失。A型流感病毒的抗原变异性大，传染性强，每年全球约有5亿人感染流感，常造成很高的死亡率，对于社会产生巨大的负担和经济损失，因此积极开发新的抗流感药物实为一重要课题。

技术实现要素：
本发明首次提出马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)或其盐类等具有对抗流感病毒的功效。因此在一方面，本发明提供马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类等在制备用于抗流感病毒的药物中的用途。在本发明的一较佳实施例中，该药物可接受的盐类等可为盐酸盐、溴酸盐或有机酸盐等。另一方面，本发明的药物可与一或多种抗流感病毒药剂并用，其中该药剂选自由M2抑制剂、NA抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、干扰素及SiRNA所组成的群。在本发明的一较佳实施例中，该药剂可为(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烷)-1-羧酸(奥司他韦，oseltamivirphosphate；克流感，Tamiflu)。另一方面，本发明非可预期的发现马替麦考酚酯或其盐类具有抑制抗药表现型的流感病毒的功效，因此，本发明提供一种马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类在制备用于对抗抗药表现型流感病毒的药物中的用途。其中，该抗药表现型的流感病毒可为H1N1或H3N2具抗药性的变种病毒株，在本发明的一较佳实施例中，该抗药表现型流感病毒为克流感抗药性流感病毒株。本发明也提供一种治疗个体流感疾病的方法，其包括将有效量的马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类投予有需要的个体。在一具体实施例中，本发明的方法是将有效量的药物投予感染H1N1、H3N2或其具抗药性的变种病毒株的个体。在一特定实施例中，本发明的方法是将有效量的药物投予感染对克流感具抗药性的流感病毒株的个体。根据本发明的方法，马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类可与其他一或多种抗流感病毒药剂并用。本发明的其他特征将经由以下详细说明、各个具体实例及申请专利范围而清楚呈现。附图说明前文所述以及实施方式可通过附加的图式达到更好的说明效果。为了加强本发明的说明，将适当的实施例的图式列举于此。图1为以荧光免疫染色法侦测不同浓度药物对抗抗药性流感病毒株的功效的荧光免疫染色结果图；图2为以小鼠动物模式分析各化合物对抗流感病毒的功效的结果图，其中(A)显示不同条件下小鼠的存活率；(B)为小鼠的体重变化图。具体实施方式本发明说明中的用词通常具有在本技术领域中、在本发明内容中、及各用语所在的特定内容中的原始意义。本文所使用的「一」一词，如未特别指明，是指至少一个(一个或一个以上)的数量。本文中所述的「流感病毒」是为流行性感冒病毒的简称，是为一种造成人类与动物患流行性感冒的负链单股RNA病毒，是属于正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)，依据病毒核蛋白、遗传物质、基质蛋白抗原特性的不同，可分为A型流感病毒、B型流感病毒及C型流感病毒，再根据血凝素和神经胺酸酶的抗原性分为不同的亚型。根据世界卫生组织(WHO)流感病毒株的命名包含6个要素：型别/宿主/分离地区/毒株序号/分离年份(HnNn)，其中对于人类流感病毒，省略宿主信息，对于乙型和丙型流感病毒省略亚型信息。本发明中所称的流感病毒包括A型流感病毒、B型流感病毒及C型流感病毒。在一特定实施例中，流感病毒特别为H1N1、H3N2或其具抗药性的变种病毒株，尤指对克流感(Tamiflu)具抗药性的变种病毒株。根据本发明，未可预期地发现马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)或其药物可接受的盐类等具有对抗流感病毒的功效，因此提供马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)或其药理上可接受的盐类在制备用于抗流感病毒的药物中的用途。本文中所述的「马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)」是指2-吗啉乙基(E)-6-(1，3-二氢-4-羟基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧代-5-异苯并呋喃)-4-甲基-4-己烯酸乙酯(2-morpholinoethyl(E)-6-(1，3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofuranyl)-4-methyl-4-hexenoate)，具有下列结构式：本文所使用的「药理上可接受的盐类」是指对于人类或哺乳动物服用具安全性且有效的盐类化合物，具有其所需的生物活性。药物上可接受的盐类包括但不限于本发明的马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)的酸性或碱性盐类，例如与盐酸、氢溴酸、碘酸、硝酸、硫酸、硫酸氢钠、磷酸、磷酸酯、醋酸、乳酸、水杨酸、柠檬酸、酒石酸、泛酸、重酒石酸、抗坏血酸、丁二酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、甲酸、苯甲酸、谷氨酸、甲基磺酸、对甲苯磺酸合成的碱性盐；或与铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌和二乙醇胺盐合成的碱性盐。在本发明的一较佳具体实施例中，该药理上可接受的盐可为盐酸盐。另一方面，该药物可与一或多种抗流感病毒的药剂并用，包含但不限于M2抑制剂(M2proteininhibitor)，如金刚烷衍生物的金刚烷胺(amantadine)与金刚乙胺(rimantadine)；神经胺酸酶(NA)抑制剂，如有奥司他韦(oseltamivir，克流感)、札那米韦(zanamivir，瑞乐沙)、帕拉米韦(peramivir)和环戊烷(cyclopentane)或咯啶衍生物(pyrrolidinederivatives)；RNA聚合酶(RNApolymerase)抑制剂，如2′-脱氧-2′-氟鸟苷(2′-deoxy-2′-fluoroguanosine，FdG)、T-705；以及干扰素或SiRNA等。在本发明的另一较佳具体实施例中，前述抗流感病毒的药剂为克流感(Tamiflu)，即(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烷)-1-羧酸((3R，4R，5S)-4-acetamido-5-amino-3-(1-ethylpropoxy)-1-cyclohexane-1-carboxylicacid；oseltamivirphosphate)。根据本发明，该药物可以包括但不限于非经肠道或口服投药。非经肠道投药的药物其形式包括溶液、悬浮液、乳液，及可在使用前刻溶解或悬浮于溶剂中的固体可注射组合物。可通过溶解、悬浮或乳化一或多种活性成分于稀释剂中来制备该注射液。前述稀释剂的实例为用于注射的蒸馏水、生理盐水、植物油、醇类及其组合。又，该注射液可含有安定剂、助溶剂、悬浮剂、乳化剂、平滑剂、缓冲液、保存剂等。该等注射液是在最终制剂步骤中灭菌或以无菌程序制备。本发明的药物亦可被制剂成无菌固体配制品，例如，通过冷冻干燥，并可在使用前刻灭菌或溶解于无菌可注射水或其他无菌稀释剂。该药物亦可经口投药，其中该组合物可为固体或液体形式。固体组合物包括锭剂、丸剂、胶囊、分散性粉剂、颗粒及其类似物。口服组合物亦包括漱口药及舌下片剂。胶囊包括硬胶囊及软胶囊。在此类口服固体组合物中，一或多种活性化合物可自行混合，或与稀释剂、结合剂、散解剂、润滑剂、安定剂、助溶剂混合，接着以习知方法制剂成配制品。当需要时，此等配制品可以涂布剂涂布，或可以二或多种涂布层涂布。另一方面，口服液体组合物包括医药上可接受的液态溶液、悬浮液、乳液、糖浆、药酒，及类似物。在此类组合物中，一或多种活性化合物可被溶解、悬浮或乳化在通用稀释剂中(如纯化水、乙醇或其等的混合物等等)。除了此类稀释剂，前述组合物亦可含有润湿剂、悬浮剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、香料、保存剂及缓冲液及其类似物。根据本发明，未可预期地发现马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)或其药物可接受的盐类具有对抗抗药表现型流感病毒的功效，因此提供一种马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类在制备用于对抗抗药表现型流感病毒的药物中的用途。其中，该抗药表现型的流感病毒可为H1N1或H3N2具抗药性的变种病毒株，在本发明的一较佳实施例中，该抗药表现型流感病毒为克流感抗药性流感病毒株。本发明也提供一种治疗个体流感疾病的方法，其包括将有效量的马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类投予有需要的个体。在一具体实施例中，本发明的方法是将有效量的药物投予感染H1N1、H3N2或其具抗药性的变种病毒株的个体。在一特定实施例中，本发明的方法是将有效量的药物投予感染对克流感具抗药性的流感病毒株的个体。本文所使用的「治疗」一词是指为了治愈、愈合、减轻、舒缓、改变、矫正、改善、改进或影响该疾病、该疾病的症状、该疾病引起的残疾或罹患该疾病的倾向的目的，而将包含一或多种活性剂的组合物施用或投与至患有该疾病、该疾病的症状或有罹患该疾病的倾向的个体。本文所使用的「有效量」一词是指相较于未接受该量的对应对象，药物或药剂可造成治疗、治愈、预防或减轻疾病、疾患或副作用的效果，或是降低疾病或疾患的进展速率。该词的范围亦包含对促进正常生理功能有效的量。药物或药剂的治疗上有效量取决于多个因素。例如动物的年龄及体重、需要治疗的实际情况及严重程度、剂型的本质、及投药途径等皆为须考虑的因素。本文所使用「对象」、「个体」和「病患」三个词汇可交互使用，是指任何需要进行治疗或医疗的哺乳类动物，特别是指人类。其他的对象可能包括牛、狗、猫、天竺鼠兔、大鼠、小鼠和马等。根据本发明的方法，马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类可与其他一或多种抗流感病毒药剂并用。该药剂可选自由M2抑制剂、NA抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、干扰素及SiRNA所组成的群。在本发明的一较佳实施例中，该药剂可为(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3-(1-乙基丙氧基)-1-环己烷)-1-羧酸(奥司他韦，oseltamivirphosphate；克流感，Tamiflu)。根据本发明，药物的并用可以将药物混合于相同剂型，或分别置于不同剂型中，如分开的胶囊、片剂、锭剂、注射剂。可同时(并行)或依序施用。在一具体实施例中，马替麦考酚酯或其药理上可接受的盐类是与奥司他韦同时以口服投予个体。无须进一步的阐述，成相信本发明所属技术领域中具有通常知识者基于前述说明即可利用本发明至最广的程度。下述实施例仅仅是作为例示说明的用，而非以任何方式限制其余的揭露内容。[实施例]细胞药理实验及免疫染色材料细胞株(Cellline)：MDCK：Madin-Darbycaninekidneycells(Madin-Darby氏狗肾小管细胞株)。细胞培养液：1.10％Fetalbovineserum(FBS)；2.TPCK培养液(tosylsulfonylphenylalanylchloromethylketone-treatedtrypsin)；3.DMEM(Dulbecco’smodifiedEaglemedium)。细胞生理缓冲液：Phosphate-bufferedsaline(PBS)。病毒株：InfluenzaA(H1N1/H3N2)(来源：姚振文教授，三军总医院病理部)。ELISA读数测定仪：BIOTEKCERES900EIRREADER。以MTT方法评估宿主细胞的存活率动物实验材料雄性6周龄的BALB/c小鼠是购自乐斯科生物科技股份有限公司实施例1.马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil，MPM)及其盐酸盐(MPM-N)的制备马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)可依下述方法制备：于冰浴中的麦考酚酸(mycophenolicacid)3.2g(10mmol)溶于30ml的二氯甲烷(dichloromethane)溶液中，加入草酰氯(oxalylchloride)1.5ml(17.5mmol)及二甲基甲酰胺(dimethylformamide)2滴，在室温下搅拌该混和液3小时。真空下蒸发该混和液而得11b化合物。制备反应流程如下：将11b化合物溶于20ml的乙酸乙酯(ethylacetate)溶液中，加入4-(2-羟乙基)吗啉(4-(2-hydroxyethyl)morpholine)2.6ml(20mmol)，在室温下搅拌该混和液30分钟，真空下蒸发该混和液而得马替麦考酚酯粗产物，接着添加50ml水并以0.1N盐酸中和至pH7.0以促进马替麦考酚酯纯化合物的沉淀(4.7g，81.0％，mp.95-96℃)。马替麦考酚酯的盐酸盐(MycophenolateMofetilhydrochloride)可依下述方法制备：于室温下将马替麦考酚酯(MycophenolateMofetil)2g(4.61mmol)溶于50ml的乙酸乙酯溶液中，搅拌该溶液并加入0.3ml(1.2当量)的醋酸及0.7ml(1.2当量)的三甲基氯硅烷(trimethylchlorosilane)，搅拌该混和液1小时并过滤沉淀物，将固态物质于室温下以乙酸乙酯洗涤三次并于真空下蒸发而获得2.11g的马替麦考酚酯盐酸盐(97.6％，mp.157.2℃)。实施例2.纯化物的最小抑制浓度及药物毒性实验抗病毒活性试验是以病毒宿主细胞的存活率来评估宿主细胞感染病毒的程度，而宿主细胞的存活率是以细胞存活率分析(MTTassay)的方法。原理为四甲基偶氮唑盐(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT)黄色水溶液固体可被活细胞的粒腺体(mitochondria)中的脱氢酵素(dehydrogenase)代谢，将tetrazoliumring还原呈紫色不溶性沉淀物formazan(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl-formazan)而堆积在细胞中，因活细胞的粒线体酵素才具有催化活性，故所测得的吸光值会与活细胞数量成正比关系，因此本实施例是利用formazan产量的多寡来评估细胞的存活率。具体地说明，本实施例选用H1N1及H3N2的病毒株进行抗流感病毒的活性试验，其细节如下：一、细胞培养细胞解冻后培养在37℃、5％二氧化碳培养箱中，等至细胞长满八成左右时，以磷酸缓冲液(PBS)清洗细胞，加入胰蛋白脢(trypsin)反应5分钟，使贴附在培养皿的细胞脱落，加入细胞培养基(DMEM)中和trypsin的反应，离心(1200rpm、5分钟)，吸除上清液，以少量培养基混匀细胞，计数细胞后加入细胞培养液(DMEM)稀释成实验所需的细胞浓度，以便进行抗流感病毒活性筛选。二、实验步骤1.将细胞稀释至指定浓度(2×104细胞/孔)植入96孔板(96-wellplate)中，于37℃、5％二氧化碳培养箱(incubator)培养20～24小时；2.每个孔内的细胞以100μl的细胞生理缓冲液(PBS)清洗两次，最后一次加入100μg/孔的TPCK培养液，置入培养箱，待测药物稀释完成后再给药；3.给药条件分为D+V、D、V、对照组(Mock)和空白组(Blank)给药，于37℃、5％二氧化碳培养箱(incubator)培养48小时；4.两天后以显微镜观察细胞凋亡情形；接着进行MTT检测，分别在D+V、D、V、Mock和Blank组中加入MTT试剂20μl(5mg/ml)，等待5小时；5.吸去培养液，在D+V、D、V、Mock和Blank中加入25μlglycine缓冲液以及100μl二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)。6.进行读盘，测量波长540nm处的吸光值。三、给药条件1.D+V：同时给予50μl不同浓度待测药物和50μl流感病毒(0.01MOI)；2.D：给予50μl不同浓度待测药物和50μlTPCK培养液；3.V：给予50μl流感病毒(0.01MOI)和50μlTPCK培养液；4.Mock：含MDCK细胞和100μlTPCK培养液；5.Blank：不含MDCK细胞和TPCK培养液。四、流感病毒(H1N1/H3N2/WSN)感染量施予0.01MOI(multiplicityofinfection)的流感病毒株。五、待测药物浓度纯化物：100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、1.563μg/ml、0.391μg/ml及0.098μg/ml八种浓度。六、阳性对照组抗病毒药物Ribavirin。七、MTT检测结果读取1.细胞存活率：2.0～25％细胞存活率(cellsurvival)纪录为+/-；25～50％cellsurvival纪录为+；50～75％cellsurvival纪录为++；75～100％cellsurvival纪录为+++；＞100％cellsurvival纪录为++++。其中，待测药物对于病毒造成细胞凋亡现象有回复作用者，+++以上为有效药物，且有效药物必须有两次或以上的相同结果。请参阅表1，在抗H1N1流感病毒活性试验中，马替麦考酚酯(MPM)及其盐酸盐(MPM-N)由高浓度(100μg/ml)至低浓度(0.391μg/ml)同时给予待测药物与H1N1流感病毒时，均可使MDCK细胞存活率达75％，显示具有抗流感病毒活性，并且对细胞无药物毒性。表1、各化合物抗流感病毒(H1N1)的最小抑制浓度及药物毒性*Ribavirin为对照组。表2、各化合物抗流感病毒(H3N2)的最小抑制浓度及药物毒性*Ribavirin是为对照组。此外，表3为抗病毒活性试验中不同浓度的马替麦考酚酯(MPM)及其盐酸盐(MPM-N)对于WSN流感病毒的抑制效果，结果显示由高浓度(100μg/ml)至低浓度(0.098μg/ml)均具有抗流感病毒活性。*Ribavirin是为对照组。实施例3.对抗药性病毒的最小抑制浓度依前述方法检测下列化合物针对流感病毒的抗药变种的最小抑制浓度(MIC)：MPM：马替麦考酚酯MPM-N：马替麦考酚酯的盐酸盐受测流感病毒株包括：H1N1T.R.-H1N1克流感(Tamiflu)抗性病毒株：A型流感病毒(H1N1)经变种，此一病毒株经定序后近似于InfluenzaA/Taiwan/937/2009H3N2-A型流感病毒株(H3N2)：经定序后近似于InfluenzaA/NewYork/469/2004WSN-InfluenzaA/WSN/33(H1N1)：经定序后近似于InfluenzaA/Honkong/470/97InfluenzaB-B型流感病毒株H1N1-A型流感病毒株(H1N1)表4、各化合物的半数有效浓度、半数细胞毒性浓度及选择指数的比较*Ribavirin为对照组。EC50：半数有效浓度，CC50：半数细胞毒性浓度，选择指数(S.I.)：CC50/EC50。表4的结果显示马替麦考酚酯(MPM)及其盐酸盐(MPM-N)对于具有抗药性的各流感病毒株其最小抑制浓度均优于对照组的Ribavirin。表5、各化合物对具抗药性的流感病毒株最小抑制浓度的比较根据表5的结果证实，马替麦考酚酯(MPM)及其盐酸盐(MPM-N)具有对抗具抗药性的流感病毒株的功效。实施例4.MPM-N有效抑制Tamiflu抗药性流感病毒株rWSNH274Y为评估马替麦考酚酯盐酸盐(MPM-N)对于抗药性流感病毒株的功效，使用细胞荧光免疫染色法侦测病毒核蛋白以确认是否有效抑制病毒感染。具体地说明，本实施例选用对Tamiflu具有抗药性的H1N1病毒株rWSNH274Y进行试验。请参阅图1，如荧光免疫染色的结果所示，需使用100μM的Ribavirin以抑制Tamiflu抗药性病毒株rWSNH274Y，相较于此，马替麦考酚酯盐酸盐(MPM-N)的浓度达5μM即可抑制病毒感染，优于Ribavirin。实施例5.MPM-N的单独或合并使用有效增加流感病毒感染小鼠的存活率以流感病毒感染的小鼠动物模式分析存活率，评估各化合物抗流感病毒的功效本实施例选用H1N1WSN病毒株进行抗流感病毒的动物试验，将雄性6周大的BALB/c小鼠以舒泰(Zoletil)麻醉后以鼻腔内注射(i.n.)的方式感染1×103PFU的病毒，而后以口服给药。给药条件分为(1)控制组：仅病毒感染；(2)病毒感染并投予Tamiflu，0.1mg/Kg，连续7天；(3)病毒感染并投予Tamiflu，1mg/Kg，连续7天；(4)病毒感染并投予MPM-N，0.3mg，连续7天；(5)病毒感染并投予Tamiflu0.1mg/Kg及MPM-N0.3mg，连续7天。于流感病毒感染后观察小鼠的存活率并测量体重变化，其结果如图2(A)及(B)所示。研究结果证实，未服用任何药物的小鼠于感染后存活率仅余5.4％(2/37)，若单独投予MPM-N小鼠存活率提高至23.3％(7/30)，单独投予低剂量的Tamiflu(0.1mg/Kg)，小鼠存活率为46.7％(14/30)，若投予高剂量的Tamiflu(1mg/Kg)其存活率可达100％(13/13)，而当合并投予低剂量Tamiflu(0.1mg/Kg)及MPM-N(0.3mg)时，小鼠存活率大幅提升为93.3％(28/30)。亦即通过单独投予或合并他种药物使用，MPM-N均展现对抗流感病毒的绝佳功效。虽然本发明以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习本发明技术者，当可在不脱离本发明的精神和范围内，作些许的更动与润饰，则应属本发明申请专利范围所界定的保护范围。