蜈蚣三七提取物在制备痛风药物中的应用及其药物的制作方法
【专利摘要】本申请公开了蜈蚣三七提取物在制备治疗痛风药物中的应用及其药物组合物。所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七总皂苷。所述蜈蚣三七提取物用水煎法制备。经药理试验和临床试验证实其具有较好的治疗痛风作用，具备高效低毒的优势。蜈蚣三七提取物对高尿酸血症大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通过抑制黄嘌呤氧化酶的表达发挥治疗效果的。蜈蚣三七提取物对高尿酸血症小鼠具有降低血清尿酸水平作用。
【专利说明】蜈蚣三七提取物在制备痛风药物中的应用及其药物
【技术领域】
[0001]本发明涉及蜈蚣三七提取物的医药用途及其药物组合物。
【背景技术】
[0002]痛风(Gout)已成为严重威胁人类健康的代谢性疾病，近年的研究发现高尿酸血症(Hyperuricemia)不仅是痛风最重要的生化基础，同时与代谢紊乱综合征密切相关,是心血管疾病、高血压、肾脏疾病等独立的危险因素，联合国将其列为21世纪的20大顽症之一。随着世界范围内痛风发病率的不断升高，对高尿酸血症及痛风的发病机制和防治途径的越来越受到关注。
[0003]高尿血酸症是痛风主要的生化标志，而痛风是一组异质性疾病，它是因长期的嘌呤代谢障碍而引起的血尿酸(UA)增高而导致的组织损伤性的遗传或获得性的代谢性疾病。临床医学上一般认为当机体内服的血尿酸量高于416ttmol / L时便为高尿酸血症，痛风患者必然伴有着高尿血酸症，且据研究发现高尿血酸症与糖尿病、肥胖症、高血压病、高脂血症等疾病呈正相关。而其中大约有5%~12%的闻尿酸血症患者会最终发展成为痛风。近年来，高尿血酸症和痛风的发病率日益盛高，而且，已经成为现在的主要疾病之一，给社会带来了巨大的压力，成为现在科研研究的重要方向。
[0004]高尿酸血症按形成的原因可以分为原发性和继发性高尿酸血症两类，由此痛风被分为原发性痛风和继发性痛风，这是目前临床上广泛采用的一种简单而又实用的初步分类方法。人和猿类缺乏尿酸酶(可使尿酸分解成尿囊素)，据推测是由于在进化过程中经基因突变而造成的自然选择，失去了编码尿酸酶的功能基因，尿酸是嘌呤在机体内代谢的终产物。嘌呤合成代谢增强和/或尿酸排泄减少是痛风患者血清尿酸增高的原发机制，血液中尿酸的浓度取决于尿酸的生成和排泄之间的平衡。人体内尿酸有两个来源，体内氨基酸、磷酸核糖及其他小分子化合物合成或核酸分解代谢产生(内源性)，约占体内总尿酸的80%;从富含嘌呤或核蛋白的食物中核昔酸分解而来(外源性)，约占体内总尿酸的20%。虽然高嘌呤饮食并非痛风的原发病因， 但大量吸收嘌呤可使细胞外液尿酸水平迅速发生变化，这常常是痛风性关节炎急性发作的诱因。
[0005]尿酸的生成包括主要途径和补救途径两部分。主要途径即机体利用非嘌呤的前体物质合成尿酸的途径。具体来说，即先由5-磷酸核糖在磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRPP合成酶)的作用下生成磷酸核糖焦磷酸(PRPP)，再与谷氨酞胺结合，通过谷氨酞胺转移酶及腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)的作用生成1-氨基-5-磷酸核糖，然后陆续结合甘氨酸、天门冬氨酸等，经过至少9个步骤，生成次黄嘌呤核苷酸(MP)。MP是一种重要的嘌呤核苷酸，它可以在酶的作用下继续生成鸟嘌呤核苷酸(GMP)和腺嘌呤核苷酸(AMP)。最终均依靠黄嘌呤氧化酶(XOD)的作用生成尿酸。当机体尿酸代谢的主要途径受阻后，补救途径就发挥主要作用，即依靠次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)和腺嘌呤磷酸核糖转移酶的作用，将次黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤分别生成MP、GMP、AMP，继续维持机体正常的尿酸代谢。XOD调控尿酸生成的最终环节，因此在高尿酸血症的发病中占有重要的地位。有研究发现，无论是脂代谢的异常，还是尿酸代谢的异常都会伴有XOD的水平异常，这提示我们，由于XOD参与人体的核酸代谢，并可作用于多种底物，如嘌呤、嘧啶、蝶啶、杂环碱、醛类、脂肪酸和磷脂，因此，可以从XOD的变化入手探讨体内尿酸水平变化的原因。
[0006]目前临床上治疗痛风和高尿血酸症的西药，有通过抑制黄嘌呤氧化酶活性达到降低血尿酸的效果的别嘌呤醇等，也有促进血尿酸代谢的丙磺舒等。但是，以上药物常出现过敏反应、肝炎损害等不良反应。而痛风患者除伴有着高尿血酸症外，还伴随着关节处的炎症，红肿疼痛，也有古书言:“痛如虎啮”，“痛风痛有常处，其痛处浑身壮热或赤肿灼热”。因此痛风患者在长期服用具有降低血尿酸药物的同时也需要镇痛，但是目前有效、经济、安全的降低UA且镇痛的药物较少。我国在运用中草药医治痛风病的方面有着悠久地历史，但目前为止在临床上能有效降低血尿酸的中药制剂贫乏。所以，研究寻找新型的降血尿酸的药物，特别是降血尿酸的中草药的制剂，具有着深远的意义。目前已经发现部分中草药不仅具有良好的镇痛消炎的作用，也可以较好地降低血尿酸达到治疗的效果。
[0007]蜈蚁三七(Anemone fiaccida Fr.Schmidt),又称林荫银莲花,系属毛茛科银莲花属多年生的植物，多以根茎入药，其药理作用有抗炎镇痛、解热祛风湿等作用，其有效成分为三萜皂苷类。因此，本研究中从蜈蚣三七根茎中提取分离出总皂苷，进行药理实验，观察蜈蚣三七提取物对大鼠高尿酸血症的影响，探究其治疗意义和可能的作用机理。
【发明内容】
[0008]本发明的目的旨在提供蜈蚣三七提取物在医疗领域的新应用。
[0009]本发明的一个方面提供了蜈蚣三七提取物在制备预防或治疗预防或治疗痛风药物中的应用。
[0010]本发明的另一个方面提供了一种预防或治疗痛风的药物组合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
[0011]所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七总皂苷。
[0012]优选地，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制备，水煎法可提取足以预防或治疗痛风的成分。
[0013]优选地，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍质量的水煎煮水蜈蚣三七药材3~5次，每次I~4h ;然后过滤，浓缩滤液，放冷；加乙醇使含醇容量为40~80 %，搅匀后静置；然后过滤，回收乙醇，挥发至无醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，用水洗涤，再用50~80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，于真空下干燥，粉碎、过筛即得。
[0014]所述的预防或治疗痛风的药物组合物的剂型可为口服制剂。
[0015]本发明所述蜈蚣三七提取物对高尿酸血症大鼠具有降低血清尿酸水平作用，且不是通过抑制黄嘌呤氧化酶的表达发挥治疗效果的。此外，本发明所述蜈蚣三七提取物显著地减少高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，而对正常小鼠的血清尿酸水平无显著性影响。
【具体实施方式】
[0016]发明人意外地发现了蜈蚣三七提取物在预防或治疗痛风中的应用效果。
[0017]为了更好的理解本发明的实质，本发明通过实施例的方式说明本发明药物对痛风抑制作用的药理试验和临床试验结果。本发明的这些实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。
[0018]一、蜈蚣三七提取物对大鼠高尿酸血症的影响
[0019]痛风在近年来随着饮食水平的提高，环境质量的降低等多种原因，逐渐成为一种常见的危害人们健康的一种代谢性疾病。高尿血酸症是痛风发病的重要的生化标志，所以防治痛风必须控制高尿血酸症，在实验中建立高尿血酸动物模型是很重要的。本实验中采用大鼠来进行高尿血酸症的模型，虽然除了人类以外的哺乳动物，包括大鼠在内体内都存在着尿酸氧化酶(urateoxidase),尿酸在体内进一步分解为尿囊素,具有水溶性,不会在体内蓄积产生结晶，不会造成高尿血酸症，所以造模并不容易，可是大鼠是平时药理实验最常用的实验动物，容易获得，便于饲养，品种稳定，所以用大鼠通过生化的方法建立高尿血酸症的模型，目前在国内外依旧是相当普遍的，所以在本实验中采用大鼠进行实验研究。
[0020]I实验材料
[0021]1.1 动物
[0022]健康Wistar大鼠，雄性,体重150~180g,由山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室提供，合格证号:SCXK(鲁)2008-0002。在整个实验过程中，除实验中造模的特殊要求外，动物均处于自由饮水和饮食的状态，饲养室温22 ± I °C，饲养湿度55 ± 5°C。
[0023]1.2药品和试剂
[0024]蜈蚣三七提取物(总皂苷含量约60% ):常规水煎法制备，取蜈蚣三七药材，加2~8倍质量的水煎煮3~5次，每次I~4h，滤过，合并滤液，将滤液浓缩成60°C相对密度1.04~~1.1的液体，放冷，加乙醇使含醇容量为40~80%，搅匀，静置12h，滤过，回收乙醇，挥发至无醇味，得浸膏，加水溶解，澄清，上非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，用水洗涤，弃去,再用50~80 %乙醇洗脱， 收集洗脱液，回收乙醇，浓缩、于真空下干燥12h，粉碎、过60目筛，即得蜈蚣三七提取物。所述蜈蚣三七提取物为棕黄色粉末，用蒸馏水配成所需浓度。
[0025]羧甲基纤维素钠(CMC-Na):分析纯，由中国医药上海化学试剂站提供。
[0026]别嘌呤醇(Allopurinol):批号11M1681V,由 Sigma-AIdrich 公司提供，用 0.5%CMC-Na配成所需浓度。
[0027]氧嗪酸钾盐(Oxonicacid potassium salt,纯度 97%):批号:STBC1486V,由Sigma-Aldrich公司提供，用0.5% CMC-Na配成适当浓度。
[0028]尿酸试剂盒(尿酸酶法):购自上海复星长征医学科学有限公司。
[0029]黄嘌呤氧化酶试剂盒(xanthine oxidase, X0D):购自南京建成生物工程研究所。
[0030]考马斯亮蓝蛋白定量测试盒:购自南京建成生物工程研究所。
[0031]1.3实验仪器
[0032]CJ-2F医用净化工作台:苏州市冯氏实验动物设备有限公司；
[0033]AU400全自动生化分析仪:日本奥林巴斯公司；
[0034]DY89-1型电动匀浆机:宁波新之生物科技股份有限公司；
[0035]KDC-160HR型高速冷冻离心机:科大创新股份有限公司；
[0036]分析天平，恒温水浴锅，分光光度计。
[0037]2实验方法
[0038]2.1蜈蚣三七提取物对高尿酸血症大鼠尿酸的影响[0039]2.1.1分组与给药
[0040]雄性大鼠41只，按体重随机分组:正常组、模型组、蜈蚣三七提取物高、中、低剂量组(分别为288mg / kg、144mg / kg和72mg/kg)、阳性对照组(别嘌呤醇IOmg / kg),共6组,每组6-7只。灌胃给药,每天I次,连续14天。给药体积按20mL / kg,给药前均称量大鼠体重一次，正常组和模型组均给予等体积蒸馏水。
[0041]灌胃给药10天后，各组大鼠开始每天腹腔注射氧嗪酸钾盐200mg / kg，正常组腹腔注射等体积的0.5% CMC-Na。末次给药Ih后，除正常组外，各组大鼠腹腔注射氧嗪酸钾盐200mg / kg。注射后2h各组均摘眼球取血(取血前12h禁食不禁水)，室温下静置lh，在3000r / min离心10min，取血清置于4°C保存。取血后的大鼠脱颈椎处死，用眼科剪摘取部分心脏，称重，在冰水浴的生理盐水中漂洗除去血液，滤纸拭干，置于_20°C保存。
[0042]2.1.2测试指标
[0043]2.1.2.1血清尿酸:取血清200ul，按尿酸试剂盒说明书操作，用奥林巴斯AU400全自动生化分析仪测定血尿酸水平。
[0044]2.1.2.2肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD):取肝脏，称量，在倒置玻璃匀浆器中，加入精确体积(15倍)的冰浴生理盐水，在冰水浴中用电动匀浆机研磨匀浆，在低温高速离心机中4000r / min离心15min,再取上清液,按蛋白定量试剂盒说明书操作，分光光度计595nm
处，测量计算出肝脏蛋白浓度，计算公式:
[0045]
【权利要求】
1.蜈蚣三七提取物在制备预防或治疗痛风的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七总皂苷。
3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制备。
4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍质量的水煎煮水蜈蚣三七药材3~5次，每次I~4h ;然后过滤，浓缩滤液，放冷；加乙醇使含醇容量为40~80%，搅匀后静置；然后过滤，回收乙醇，挥发至无醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，用水洗涤，再用50~80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，于真空下干燥，粉碎、过筛即得。
5.根据权利要求1所述的应用，其中，所述蜈蚣三七提取物的剂型为口服剂型。
6.一种预防或治疗痛风的药物组合物，包含蜈蚣三七提取物或由蜈蚣三七提取物制得。
7.根据权利要求6所述的预防或治疗痛风的药物组合物，其中，所述蜈蚣三七提取物包含蜈蚣三七总皂苷。
8.根据权利要求6所述的预防或治疗痛风的药物组合物，其中，所述蜈蚣三七提取物用水煎法制备。
9.根据权利要求8所述的预防或治疗痛风的药物组合物，其中，所述蜈蚣三七提取物的提取方法包括:加2~8倍质量的水煎煮水蜈蚣三七药材3~5次，每次I~4h ;然后过滤，浓缩滤液，放冷；加乙醇使含醇容量为40~80%，搅匀后静置；然后过滤，回收乙醇，挥发至无醇味，得浸膏；加水溶解所述浸膏，澄清；上非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，用水洗涤，再用50~80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，于真空下干燥，粉碎、过筛即得。`
10.根据权利要求6~9的任一项所述的预防或治疗痛风的药物组合物，其特征在于剂型为口服制剂。
【文档编号】A61P19/06GK103877177SQ201410084518
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年3月10日 优先权日:2014年3月10日
【发明者】邴飞虹, 廖一帆, 江哲遒, 李婧 申请人:武汉道一堂中医医院有限公司