防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂及其制备方法。该透皮乳剂的成分为：博落回提取物、氟苯尼考、月桂氮卓酮、司盘-80、吐温-80、硬脂酸铝、羧甲基纤维素钠、维生素E、注射用大豆油和纯化水。它是将大豆油干热灭菌后，将硬脂酸铝加入其中，再加入司盘-80，经灭菌后加入维生素E，制成油相备用；将羧甲基纤维素钠加入纯化水中，溶解后加入吐温-80和月桂氮卓酮溶解后再加入博落回提取物和氟苯尼考，灭菌后降至室温作为水相备用；油相经管道进入乳化罐，加入水相，加完继续搅拌形成初乳，初乳加入胶体磨剪切乳化即得。对仔猪大肠杆菌病的临床防治效果表明，该制剂治愈率达90％以上，明显优于单用西药或中药。
【专利说明】防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于防治仔猪大肠杆菌病类药物【技术领域】，具体地说是一种防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]仔猪黄痢、白痢是由致病性大肠杆菌引起的仔猪肠道传染病。仔猪黄痢是出生后几小时到I周龄仔猪的一种急性高度致死性肠道传染病，以剧烈腹泻，排出黄色或黄白色水样粪便以及迅速脱水死亡为特征，是集约化猪场的主要肠道疾病之一。仔猪白痢是10-30日龄仔猪多发的一种急性肠道传染病，以排出灰白色粘稠稀粪为特征，普遍发生于世界各国，常引起大批仔猪发育不良或死亡，给畜牧业造成重大损失。
[0003]目前对于该病主要有菌苗的免疫，抗生素、化学药物、中药等方式进行预防和治疗。其中菌苗免疫，因肠道微生物抗原和抗原决定簇复杂，免疫机制略有差异，免疫效果不确切。随着抗菌药物在临床上的滥用，导致大肠杆菌等细菌的耐药性十分普遍，如临床上常用的庆大霉素、土霉素、氟哌酸、诺氟沙星等药物疗效降低。与其它预防、治疗方法比较，中草药具有非特异性抗菌作用.残留毒性较低，并且动物一般对它不易产生耐药性。而将中药与西药进行有效配伍，可以减缓耐药菌株的产生。 [0004]随着集约化规模养殖的发展，选择最适宜的给药途径非常关键。治疗肠道感染，将药物做成搽剂，通过透皮给药，与普通剂型(如口服片剂、注射剂等)比较有以下特点:①可避免口服给药可能发生的肝首过效应及胃肠灭活可维持恒定的最佳血药浓度，减少胃肠给药的副作用；③延长有效作用时间，减少给药次数；④通过改变给药面积调节给药剂量，减少个体间差异。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于针对目前兽医临床上抗生素的不合理使用，提供一种防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂及其制备方法，该复方制剂选择中药有效成份提取物，与西药进行科学配伍，通过联合用药以减少细菌耐药性和药物用量，其临床防治仔猪大肠杆菌病效果优于单纯用中药或西药，具有良好的市场前景。
[0006]本发明的技术方案是:一种防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂，其特征是，所述每100mL的中西药复方透皮乳剂包含以下组分:博落回提取物I~5g，氟苯尼考5~IOg,月桂氮卓酮2~5g,司盘-803~6g,吐温-802~4g,硬脂酸招(油相稳定剂) 0.5~2g,羧甲基纤维素钠(水相稳定剂)0.1~0.5g,维生素E0.1~Ig,注射用大豆油52g，纯化水加至100ml。
[0007]优选配比为:博落回提取物5g，氟苯尼考5g，月桂氮卓酮2g，司盘_804g，吐温_804g，硬脂酸铝lg，羧甲基纤维素钠0.5g，维生素E0.5g，注射用大豆油52g，纯化水加至100mLo
[0008]所述博落回提取物，由博落回经提取、纯化、浓缩、干燥制得的中药提取物，主要有效成分为血根碱(C2tlH14NO4)和白屈菜红碱(C21H18NO4), 二者总量不少于60.0% (w/w) 0
[0009]本发明的另一个目的是提供一种防治仔猪大肠杆菌病的复方透皮制剂的制备方法。具体包括以下步骤:
[0010](I)油相的制备
[0011]按上述配比称取硬脂酸铝、司盘-80、维生素E和大豆油，将大豆油150°C~160°C干热灭菌I~2小时后，降至60~70°C时，将硬脂酸铝缓慢加入大豆油中，并不断搅拌至完全溶解至透明状，再加入司盘-80混合均匀，100-120°C灭菌20-40分钟，降至65°C以下，加入维生素E，搅拌均匀，制成油相备用；
[0012](2)水相的制备[0013]按上述配比称取羧甲基纤维素钠、博落回提取物、氟苯尼考、吐温-80和月桂氮卓酮；将羧甲基纤维素钠加入纯化水中，加热使其溶解至透明状，加入吐温-80、月桂氮卓酮溶解后再加入博落回提取物、氟苯尼考，由低速(500rmp/min)至高速(1000rmp/min)混合至少10分钟，100-120°C灭菌20-40分钟，降至室温作为水相备用；
[0014](3)乳化
[0015]油相经管道进入乳化罐，缓慢加入水相,边加边搅拌,加完继续搅拌5_8min成初乳，初乳加入胶体磨剪切乳化15~30分钟，即得乳白色的透皮乳剂。取样，12000r/min离心15min,观察应不破乳。
[0016]用法与用量
[0017]治疗:涂抹皮肤给药，涂擦于患病猪背部靠近尾根处，I日龄至断奶每头I~2ml ;断奶后至20kg,每Ikg体重0.2ml, —日一次。连用3~5日。
[0018]药物的有效期:室温下密封遮光保存，有效期24个月。
[0019]各原料药来源及药理作用
[0020]博落回:S粟科植物博落回(Macleaya cordata(ffilld.)R.Br.)的果实。博落回中有效成分主要为血根碱(sanguinarine)和白屈菜红碱(chelerythrine),以果实中含量最高。博落回具有较强的杀菌、抑菌活性，体外抑菌试验和兽医临床试验表明，博落回提取物对大肠杆菌最低抑菌浓度(MIC)为7.81ug/mL，治疗仔猪黄痢和白痢的总有效率达80%，并具有用量小、成本低等优点，已载入农业部96版《兽药质量标准》中。
[0021]氟苯尼考(Florfenicol):中文名称:氟洛芬；氟苯尼考；氟甲砜霉素，化学名称:[R一(Rl.T) ]-2，2-二氯-N-.[氟甲基)-2-轻_2-[4-(甲基磺酰)苯基]乙基}乙酰胺。氟苯尼考是在八十年代后期成功研制的一种新的兽医专用氯霉素类的广谱抗菌药。氟苯尼考为氯霉素的结构同系物，能与50S亚基结合，抑制酞酰基转移酶，从而抑制酞链的延伸，干扰蛋白质合成。氟苯尼考在结构上以F原子取代了氯霉素、甲砜霉素中丙烷链3碳位置上的一 0H，阻止了细菌乙酰转移酶在此位置上的乙酰化作用，故不受该酶影响而被灭活；而乙酰转移酶又与细菌经质粒介导的对氯霉素、甲砜霉素的耐药性有关，因此氟苯尼考不会产生类似氯霉素、甲砜霉素质粒介导的耐药性，而且对许多氯霉素耐药菌株仍然敏感。氯霉素由于有严重的致再生障碍性贫血的不良反应，许多国家已禁止氯霉素在动物疾病防治上的使用，尤其是食品动物，如美国FDA。研究表明，氯霉素结构中，芳香环上对位硝基是引起再生障碍性贫血的主要基团，氟苯尼考在结构上以H3C - SO2 一取代了 O2N —，用药后不产生再生障碍性贫血的不良反应，因此在动物疾病防治上，尤其是食品动物，氟苯尼考将替代氯霉素，在兽医临床具有广阔应用前景。
[0022]皮肤的角质层是与体外环境直接接触的第一道屏障。一般认为，对于脂溶性较强的药物，皮肤的角质层的屏障作用相对较小，而分子量较大的药物，极性或水溶性较大的药物则较难通过。分子量大于600的物质已较难通过角质层。药物扩散系数与分子量的平方根成正比，分子量愈大，分子体积愈大，扩散系数则愈小。熔点愈高的药物和水溶性或亲水性药物，在角质层的渗透率较低。氟苯尼考分子量为358.2，氟苯尼考在二甲基甲酰胺中极易溶解，在水中几乎不溶，是脂溶性的药物，氟苯尼考的熔点也比较低(152-156°C )，所以氟苯尼考具备制成透皮给药制剂的基本条件。血根碱分子量为332.3，白屈菜红碱分子量为348.3( < 600)，也是脂溶性生物碱类，辅以优良的渗透促进剂月桂氮卓酮，加速氟苯尼考与小分子生物碱渗透穿过皮肤。
[0023]本发明的有益效果是:根据中兽医基础理论，结合仔猪大肠杆菌病的发病机理，针对大肠杆菌血清型复杂易产生耐药性的特点，通过体外药敏试验结合临床应用进行组方筛选，将中药提取物与氟苯尼考联合应用，体外抗菌效果显示，具有良好的协同作用。
[0024]本品的用药对象限于20kg以下的仔猪，涂抹部位选择猪体中角质层比较薄的部位:涂于猪背部靠近尾根处，这是由于仔猪的角质层的厚度比中猪或大猪薄，渗透性高于中猪，是切合实际的。临床应用证明，本品对皮肤无损害或刺激副作用，药效持久，疗效确切，血药浓度恒定，用药次数减少，对仔猪大肠杆菌病的临床防治效果表明，该制剂的有效率达100%，治愈率达90%以上，明显优于单用西药或中药。总之，本研究将中西药物联合应用，不但可以减少氟苯尼考用药量，并且可以降低细菌耐药性的产生，从而降低用药成本、减少药物残留。
【具体实施方式】
[0025]实施例1
[0026]配比:博落回提取物5g，氟苯尼考5g，月桂氮卓酮2g，司盘_804g，吐温804g，硬脂酸铝lg，羧甲基纤维素钠0.5g，维生素E0.5g，注射用大豆油52g，纯化水加至100ml。
[0027]所述博落回提取物，由湖南美可达生物资源有限公司生产，批号:2013051201，系博落回经提取、纯化、浓缩、干燥制得的中药提取物，主要有效成分为血根碱(C2tlH14NO4)和白屈菜红碱(C21H18NO4),其总量不少于60.0 % (w/w) ο
[0028]制备方法:
[0029](1)按上述配比称取硬脂酸铝、司盘-80、维生素E和大豆油，将大豆油150°C~160°C干热灭菌I~2小时后，降至60~70°C时，将硬脂酸铝缓慢加入大豆油中，并不断搅拌至完全溶解至透明状，再加入司盘-80混合均匀，115°C灭菌30分钟，降至65°C以下，加入维生素E，搅拌均匀，制成油相备用；
[0030](2)再按上述配比称取羧甲基纤维素钠、博落回提取物、氟苯尼考、吐温-80和月桂氮卓酮；将羧甲基纤维素钠加入纯化水中，加热使其溶解至透明状，加入吐温-80、月桂氮卓酮溶解后再加入博落回提取物、氟苯尼考，由低速(500rmp/min)至高速(1000rmp/min)混合至少10分钟，115°C灭菌30分钟，降至室温作为水相备用；
[0031](3)油相经管道进入乳化罐，缓慢加入水相,边加边搅拌,加完继续搅拌5_8min成初乳，初乳加入胶体磨剪切乳化15~30分钟，即得乳白色的透皮乳剂。取样，12000r/min离心15min,观察应不破乳。
[0032]所制得的透皮乳剂为乳白色的油乳状液体，平均粒径在10-60μπι之间，符合药典规定的乳剂颗粒规格。
[0033]所制得的乳剂在37°C贮存10天和以12000r/min离心15min不分层、不破乳，表明其稳定性良好，可封闭避光保存一年以上。
[0034]以下结合临床应用实验数据说明其治疗效果。
[0035]I试验材料
[0036]1.1试验药物:实施例1制备的中西药复方透皮制剂。
[0037]1.2对照药物:氟苯尼考注射液，规格:10ml:0.2g，批号:030213,山东中牧兽药有
限公司。
[0038]1.3试验猪:患黄白痢的自然发病仔猪，济南六一农场提供。
[0039]1.4菌种:猪大肠杆菌08、064、0皿株，中国兽医药品监察所。
[0040]1.5培养基:营养肉汤、麦康凯琼脂平板，按常规方法制作。
[0041]2试验方法
[0042]2.1病原鉴定:用灭菌棉拭子从患拉稀的自然发病仔猪的直腔深部采集病料，进行细菌分离、培养和鉴定，以确诊是否为仔猪黄白痢。
[0043]2.2体外抑菌试验:常规纸片法进行。
[0044]2.3抑菌结果判定标准:平均抑菌圈直径< IOmm为低敏，10_15mm为中敏，15_20mm为高敏，> 20mm为极敏,常规方法进行。
[0045]2.4临床试验及疗效观察
[0046] 2.4.1试验分组:将确诊患黄白痢的自然发病仔猪随机分成5组。1、I1、111组为试验药物高、中、低治疗组，分别按2ml/头、lml/头、0.5ml/头给药，涂擦于患病猪背部靠近尾根处，每日I次，连用3日。IV组为氟苯尼考注射液对照组，0.lml/Kg体重，肌肉注射，每日2次，连用3天。V组为安全试验组，按5ml/头猪背部涂擦给药。各试验组隔离饲养，精心照料。
[0047]2.4.2疗效观察:用药后连续观察15天，各组饲喂猪全价配合饲料(不含任何抗菌药物)，试验期间注意观察排粪次数及粪便状态。
[0048]2.4.3试验结果统计:试验结束时统计各组死亡率、有效率、治愈率，各组间进行X2检验。
[0049]2.4.4疗效判断标准:
[0050]痊愈:治疗后患猪的精神、食欲恢复正常,粪便呈条状或颗粒状,肛门干燥、收缩、无红肿，七天内无复发现象。
[0051]显效:治疗后粪便变稠，排便次数减少，肛门红肿未完全消退，精神食欲有所改善。
[0052]无效:治疗后患猪精神、粪便、食欲无明显改善，甚至死亡。
[0053]3试验结果
[0054]3.1体外抑菌试验结果
[0055]体外抑菌试验结果显示，氟苯尼考与博落回提取物对猪致病性大肠埃希菌的体外抗菌有协同作用(平均抑菌圈直径为17.3mm)，对猪大肠杆菌高敏，明显高于氟苯尼考注射液(平均抑菌圈直径为11.7mm)，结果见表1。[0056]表1体外抑菌试验结果
【权利要求】
1.一种防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂，其特征是，所述每100mL的中西药复方透皮乳剂包含以下组分:博落回提取物I~5g，氟苯尼考5~10g，月桂氮卓酮2~`5g，司盘-803~6g，吐温-802~4g ;硬脂酸铝0.5~2g，羧甲基纤维素钠0.1~0.5g，维生素E0.1~1g,注射用大豆油52g,纯化水加至100ml。
2.如权利要求1所述的防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂，其特征是，所述每100mL的中西药复方透皮乳剂包含以下组分:博落回提取物5g，氟苯尼考5g，月桂氮卓酮2g，司盘_804g，吐温-804g，硬脂酸铝lg，羧甲基纤维素钠0.5g，维生素E0.5g，注射用大豆油52g，纯化水加至100ml。
3.如权利要求1或2所述的所述防治仔猪大肠杆菌病的中西药复方透皮乳剂，其特征是，所述博落回提取物的主要有效成分为血根碱和白屈菜红碱，二者的总量不少于60.0%(w/w)。
4.一种制备权利要求1或2所述的中西药复方透皮乳剂的方法，其特征是， (1)油相的制备 按权利要求1或2所述的比例称取硬脂酸铝、司盘-80、维生素E和大豆油，将大豆油干热灭菌后，降至60~70°C时，将硬脂酸铝缓慢加入大豆油中，并不断搅拌至完全溶解至透明状，再加入司盘-80混合均匀，经灭菌后降至65°C以下，加入维生素E，搅拌均匀，制成油相备用； (2)水相的制备 按权利要求1或2所述的比例称取羧甲基纤维素钠、博落回提取物、氟苯尼考、吐温-80和月桂氮卓酮；将羧甲基纤维素钠加入纯化水中，加热使其溶解至透明状，加入吐温-80和月桂氮卓酮溶解后再加入博落回提取物和氟苯尼考，搅拌混合至少10分钟，将灭菌后降至室温作为水相备用； (3)乳化 油相经管道进入乳化罐，缓慢加入水相，边加边搅拌，加完继续搅拌5-8min成初乳，初乳加入胶体磨剪切乳化15~30分钟，即得透皮乳剂。
5.如权利要求4所述的中西药复方透皮乳剂的制备方法，其特征是，所述步骤(1)大豆油干热灭菌为:150°C~160°C干热灭菌I~2小时。
6.如权利要求4所述的中西药复方透皮乳剂的制备方法，其特征是，所述步骤(1)加入司盘-80后的灭菌具体为:100-120°C灭菌20-40分钟。
7.如权利要求4所述的中西药复方透皮乳剂的制备方法，其特征是，所述步骤(2)的灭菌为:100-120°C灭菌20-40分钟。
【文档编号】A61K36/66GK103919861SQ201410180156
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月30日 优先权日:2014年4月30日
【发明者】张传津 申请人:张传津