一种硫磺菌提取物及用途
【专利摘要】本发明还提供了一种硫磺菌提取物，所述的提取物中含有三氢化松苓酸B的重量百分含量为1-12％。本发明还提供了该提取物及其中的化合物三氢化松苓酸B的用途。硫磺菌是常见食用真菌，安全性好，可以进行大规模发酵制备。制备得到的硫磺菌提取物质量稳定，可控性强；硫磺菌提取物以及分离得到的三氢化松苓酸B具有明显的抗炎活性，可用于治疗急慢性风湿性、类风湿性关节炎、急慢性肝炎、乳腺炎等炎性疾病，能够抑制COX2，减少PGE2等炎性介质释放，为临床提供了一种新的用药选择。
【专利说明】—种硫磺菌提取物及用途
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种硫磺菌提取物。
【背景技术】
[0002]硫磺菌(Laetiporus sulphureus (Bull.) Murri 11)又称硫色干酪菌、硫磺多孔菌，属担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，绚孔菌属。它是一种药食兼用的大型真菌。经常食用可增进身体健康，其子实体含齿孔酸(enruicoic acid)，可合成留体药物肾上腺皮质激素，是预防和治疗多种疾病的重要药物。
[0003]目前关于硫磺 菌功效的报道较少，如:申请号:99110871.X，发明名称:一种调理胃肠功能的硫磺菌制剂及其生产方法，本发明涉及一种调理胃肠功能的硫磺菌制剂及其生产方法。硫磺菌制剂包括:硫磺菌口服液、粉(散)、胶束、蜜丸剂型。本发明与一般具有相同功能的药品或保健品相比，有如下优点:迅速缓解病情，可产生即时药效应；对“气胀”病、结肠炎等疾病治愈率可达90%以上，而且不再重犯此类病状，它是直接将硫磺菌原生药粉入药。
【发明内容】
[0004]本发明的技术方案是提供了一种硫磺菌提取物。本发明的另一技术方案是提供了该提取物的用途。
[0005]本发明提供了一种硫磺菌提取物，其中，所述的提取物中含有三氢化松苓酸B的重量百分含量为1-12%。
[0006]它是硫磺菌子实体的有机溶剂提取物。
[0007]进一步优选地，所述的有机溶剂是95%乙醇。
[0008]该提取物的高效液相指纹图谱有4个特征峰，各特征峰的相对保留时间为(min):峰 I:33.11±0.I ;峰2:35.13±0.I ;峰 3:50.46±0.I ;峰4:52.21±0.I ；
[0009]色谱条件为:液相色谱柱:色谱柱:十八烷基键合硅胶为填料；(Ultimate?AQ-C18, 5um, 4.6 X 250mm, velch);流动相:10 % -100 % 的乙臆水，50min ； 100 % 乙臆 8min ；检测波长:210nm。
[0010]该提取物的指纹图谱纹图谱具有8个特征峰，各特征峰的相对保留时间为(min):峰 1:34.57+0.1 ;峰 2:36.27+0.1 ；峰 337.13+0.1 ;峰 4:39.03+0.1 ;峰 5:42.30+0.1 ；峰6:49.14+0.1 ;峰 7:50.93+0.1 ;峰 8:52.15+0.1 ；
[0011]色谱条件为:液相色谱柱:十八烷基键合硅胶为填料；流动相:10% -100%的乙腈水，50min:100% 乙腈 8min ;检测波长:254nm。
[0012]所述的指纹图谱如图2或图4所示。
[0013]本发明还提供了所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备抗炎的药物或/保健食品中的用途。
[0014]本发明还提供了所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备治疗急慢性风湿性、类风湿性关节炎或急慢性肝炎或乳腺炎的药物中的用途。
[0015]本发明还提供了所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备减少PGE2炎症介质释放的药物中的用途。
[0016]本发明还提供了所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备C0X2抑制剂的药物中的用途。
[0017]其中，所述的药物是治疗胃炎、肠炎消化系统炎症；宫颈炎、等生殖系统炎症；尿道炎、肾炎泌尿系统炎症；急慢性咽炎、肺炎呼吸系统炎症的药物。
[0018]硫磺菌是常见食用真菌，安全性好，可以进行大规模微生物发酵制备。制备得到的硫磺菌提取物质量稳定，可控性强；硫磺菌提取物以及分离得到的三氢化松苓酸B具有明显的抗炎活性，可用于治疗急慢性风湿性、类风湿性关节炎、急慢性肝炎等炎性疾病，能够抑制C0X2，减少PGE2等炎性介质释放，可减少胃酸分泌，保护胃，减轻抗炎药物对胃的不良反应，为临床提供了一种新的用药选择。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1硅胶柱洗脱物高效液相分析图
[0020]图2硫磺菌提取物波长210时局部放大高效液相分析图[0021 ]图3硫磺菌提取物波长210时高效液相分析图
[0022]图4硫磺菌提取物波长254时高效液相分析局部放大图
[0023]图5硫磺菌提取物波长254时高效液相分析图
[0024]图6对照品波长210时高效液相分析图
[0025]图7HE染色(放大200倍)
[0026]图8M染色放大200倍
[0027]图9三氢化松苓酸B与C0X2结合模型
【具体实施方式】
[0028]实施例1硫磺菌提取物及三氢化松苓酸B的制备
[0029]1、实验材料
[0030]1.1、实验用菌
[0031]硫磺菌(Laetiporus sulphureus (Fr.) Mutti 11)由三峡旅游职业技术学院王绍柏教授鉴定并提供子实体及菌株。
[0032]1.2、实验试剂
[0033]95%的医用酒精、双蒸水、色谱级乙腈、石油醚、丙酮等。
[0034]1.3、实验仪器
[0035]KQ-500DB型超声波清洗仪，艾朗旋转蒸发仪(德国)，ME215S型十万分之一电子天平(德国Sartorios公司)，紫外分光光度计(UV — 2201，日本岛津公司)，高效液相色谱仪(DIONEX Ultimate3000,美国戴安液相色谱有限公司)，核磁共振仪(UltrashiedTM400MHZPlus, bruker 布鲁克公司)，冷冻干燥机(FREEZONE PLUS6, LABC0NC0)。
[0036]2、实验方法与结果
[0037] 2.1、硫磺菌醇提物的制备[0038]将100g硫磺菌子实体用95%的乙醇回流提取三次，每次1.5h，趁热过滤并合并三次滤液，与旋转蒸发仪上减压除去乙醇，得流浸膏50g，再将提取物于50°C烘干，得25g醇提物。
[0039]2.2、三氢化松苓酸B的制备与鉴定
[0040]将上述醇提物用石油醚:丙酮=3:1作洗脱剂经硅胶柱分离，所得洗脱物占醇提取物的24%，再将洗脱物经HPLC分析其成分，条件为双蒸水(A)-乙腈(B)洗脱体系洗脱，B/A = 95%，洗脱物中主要有化合物I (见图.1)。
[0041 ] 精确称取60mg洗脱物，用B/A = 95 %作流动相，经高效液相色谱分离，得18mg化合物I。按同法制备化合物1，供实验用。
[0042]经核磁鉴定，化合物I: 13C-NMR(DMS0-d6, 500MHz): 177.1, 134.4，133.5，131.2，124.0, 76.9，50.2，49.2，47.6，46.7，43.9，38.7，36.7，35.4，32.3，30.2，28.5，28.2，27.7，26.6，26.1, 25.7，25.6，24.2，20.4，19.1, 18.0, 17.5，15.9，15.7 ； IH-NMR(DMS0-d6, 500MHz):0.68 (s, 3H)，0.69 (s, 3H)，0.81 (s, 3H)，0.90 (s, 3H)，0.90 (s, 3H)，1.52 (s, 3H)，1.62 (s, 3H)，4.25 (d, J = 3.5Hz, 1H)，5.06 (s, 1H)，11.96 (s, 1H).[0043]与文献对照，符合三氢化松苓酸B的结构。
[0044]2.3、硫磺菌醇提物的高效液相特征分析
[0045]实验仪器
[0046]高效液相色谱仪(DIONEX Ultimate3000,美国戴安液相色谱有限公司)，液相色谱柱(Ultimate? AQ-C18，5um, 4.6X 250mm, velch)
[0047]实验试剂
[0048]色谱级乙腈(TEDIA)，蒸馏水，色谱级甲醇(TEDIA)，四氢呋喃(分析纯)
[0049]实验方法
[0050]将2.1mg样品于1.2ml甲醇与四氢呋喃混合物中溶解，过滤，待用；将对照品1.6mg三氢化松茶酸B和1.1mg齿孔酸用0.6ml甲醇与四氢呋喃混合物中溶解,过滤,待用；
[0051]将高效液相色谱分析条件设为；10% -100%的乙腈水，50min ; 100%乙腈8min，共计58min,进样量为IOul。
[0052]实验结果，见图2-图6。
[0053]实施例2本发明药物片剂的制备
[0054]取硫磺菌醇提物或三氢化松苓酸B，加入淀粉和I %硬脂酸镁，压片，使每片含硫磺菌醇提物0.1-1.0g,或齿孔酸10-100mg。(所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等片剂常用的辅料中的一种或几种)。
[0055]实施例3本发明药物胶囊剂的制备
[0056]取硫磺菌醇提物或三氢化松苓酸B，加入淀粉，制粒，整粒，装胶囊，每粒胶囊中含硫磺菌醇提物0.1-0.5g，或三氢化松苓酸B10-100mg。(所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等胶囊剂常用的辅料中的一种或几种)。
[0057]实施例4本发明 药物软膏剂的制备
[0058]取硫磺菌醇提物或三氢化松苓酸B，加入羊毛脂、凡士林、单硬脂酸甘油脂等辅料制作成软膏，每100g软膏中含硫磺菌醇提物0.1-0.5g,或齿孔酸三氢化松苓酸B10-100mg。
[0059]以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
[0060]试验例I硫磺菌提取物及三氢化松苓酸B小鼠耳廓肿胀实验
[0061]1、实验材料
[0062]1.1实验动物
[0063]体重18_22g ;雄性昆明小鼠。由三峡大学动物实验中心提供(生产许可证:SCXK (鄂)2011-0012 ;使用许可证:SYXK (鄂)2011-0061)。
[0064]1.2实验试剂
[0065]二甲苯，4% CMC
[0066]1.3 仪器
[0067]ME215S型十万分之一电子天平(德国Sartorios公司)
[0068]2、实验方法与结果
[0069]2.1、实验方法
[0070]2.1.1、造模与给药方式
[0071]将实验小鼠随机分组，分别为对照组、阳性组、硫磺菌提取物高剂量组、中剂量组、低剂量组和三氢化松苓酸B低剂量组和高剂量组，每组10只。连续灌胃给药5天。
[0072]2.1.2、检测指标与检测方法
[0073](I)末次给药后Ih后，将各组小鼠右耳上、下两面分别均匀涂抹二甲苯20μ I致炎，左耳作为空白对照，20min后处死小鼠，剪下双耳，用6mm直径的打孔器冲下耳片，随即在电子天平称重并记录。用右耳重量减去左耳重量作为肿胀度，并计算肿胀率。
[0074]计算公式:
[0075]耳肿胀度=左耳片重(g)_右耳片重(g)
[0076]肿胀率=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度X 100%
[0077](2)采用SPSS11.5统计软件对数据处理。先进行数据的正态分布检验，方差齐性检验，组间比较采用方差分析。计量数据用均数土标准差(I 土S)表示，组间差异用单因素方差分析，多个样本均数间每两个均数的比较采用Q检验。P〈0.05说明有差异，P〈0.01为有显著性差异。
[0078]2.2、实验结果
[0079]硫磺菌酒精提取物对二甲苯所致小鼠急性耳肿胀的影响(见表1)
[0080]表1硫磺菌醇取物及TAB对小鼠耳廓肿胀的影响Ci ±S，N = 8)
【权利要求】
1.一种硫磺菌提取物，其特征在于:所述的提取物中含有三氢化松苓酸B的重量百分含量为1-12%。
2.根据权利要求1所述的硫磺菌提取物，其特征在于:它是硫磺菌子实体的有机溶剂提取物；优选地，所述的有机溶剂是95%乙醇。
3.根据权利要求1或2任意一项所述的硫磺菌提取物，其特征在于:该提取物的高效液相指纹图谱有4个特征峰，各特征峰的保留时间为(m1n):峰1:33.11±0.1 ;峰2:35.13±0.1 ;峰 3:50.46±0.1 ;峰4:52.21±0.1 ； 色谱条件为:液相色谱柱:十八烷基键合硅胶为填料；流动相:10% -100%的乙腈水，50m1n ；100% 乙臆 8m1n ;检测波长:210nm。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的硫磺菌提取物，其特征在于:该提取物的指纹图谱纹图谱具有8个特征峰，各特征峰的保留时间为(m1n):峰1:34.57+0.1 ;峰2:36.27+0.1 ;峰 3:37.13+0.1 ；峰 4:39.03+0.1 ；峰 5:42.30+0.1 ；峰 6:49.14+0.1 ；峰7:50.93+0.1 ;峰 8:52.15+0.1 ； 色谱条件为:液相色谱柱:十八烷基键合硅胶为填料；流动相:10% -100%的乙腈水，50m1n ；100% 乙臆 8m1n ;检测波长:254nm。
5.根据权利要求3或4所述的硫磺菌提取物，其特征在于:所述的指纹图谱如图2或图4所示。
6.权利要求1-5任意一项所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备抗炎的药物或/保健食品中的用途。
7.权利要求1-5任意一项所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备治疗急慢性风湿性、类风湿性关节炎或急慢性肝炎或乳腺炎的药物中的用途。
8.权利要求1-5任意一项所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备减少PGE2炎症介质释放的药物中的用途。
9.权利要求1-5任意一项所述的硫横菌提取物或三氢化松苓酸B在制备COX2抑制剂的药物中的用途。
10.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于:所述的药物是治疗胃炎、肠炎消化系统炎症；宫颈炎、等生殖系统炎症；尿道炎、肾炎泌尿系统炎症；急慢性咽炎、肺炎呼吸系统炎症的药物。
【文档编号】A61K36/07GK103961379SQ201410205411
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月15日 优先权日:2014年5月15日
【发明者】汪鋆植, 孙文军, 杨进, 武玲, 罗华军, 程凡, 贺海波, 李伟 申请人:神农架天润生物科技有限责任公司, 三峡大学