一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法
【专利摘要】一种应用于医药【技术领域】中的防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法，它的产品配方是，大黄，桂枝，丹参，川芎，地龙，金银花；其制备方法是，将大黄、大黄、桂枝、丹参、川芎、地龙、金银花用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后100℃水浴浓缩至150mL，4℃冰箱保存。该发明药物组成简单，配伍关系明确，药味少，价格低廉，疗效确切显著，通过动物实验证明具有抑制抑制血小板聚集，抑制PDGF-B表达的作用，有显著的防治动脉内膜损伤后内膜增生的作用，防止PCI术后再狭窄事件发生，易于被患者接受。
【专利说明】一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】中的一种中草药，尤其是涉及一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法。
【背景技术】
[0002]PTCA机械性扩张血管，拓开管壁，是外源性创伤，伤及络脉，造成血行不畅，导致瘀血形成，属“血瘀证”范畴。《圣济总录.伤折总论》谓:“论曰:脉者，血之府，血行脉中……，若因伤折，内动经络，血行之道，不得宣统，瘀积不散，则为肿为痛。“《温热经纬.方论》亦云:“络伤则血不能循行……其伤处即瘀阻，阻久而蓄积，无阳气以化之，乃为死血矣”陈无择《三因方》所述“金刃所伤”。我国第一代的著名中西医结合心血管病专家廖家祯教授认为PTCA术后RS从其病理过程与创伤修复相似，辨治当类同于中医修复创伤的治法。其发病理论涉及瘀，痰，虚等多个方面，病机为脏气亏虚为本，痰瘀阻滞为标。因PTCA系为外源性创伤,导致血脉受损,瘀血内停,毒邪壅于局部,与外伤的创伤过程类似,并根据病变局部的感染因素和炎症反应，PTCA术后RS的中医发病机制不单纯是痰瘀和虚，局部特点应为瘀毒互结，兼以正气亏虚。中药治疗理论则主要是活血化瘀，豁痰去浊，兼以扶正等方面，同时针对病变局部瘀毒互结的病机特点治以通下瘀毒，故治疗以“活血化瘀，通下瘀毒兼扶正气”达到防止PCI术后RS的目的。本中药复方是由大黄、桂枝、丹参、川芎、地龙、金银花组成。大黄破瘀泻热，为君药，丹参、川芎为活血祛瘀之药，与大黄配伍，瘀热并治，地龙为破血逐瘀之药，金银花芳香疏散，清热解毒共为臣药，桂枝辛散温通，通行气血经脉为佐药。该方具有活血化瘀，通下瘀毒兼扶正气之功效，使蓄血去，瘀毒清，诸证平。 [0003]现代药理研究证明:大黄配伍促进了大黄酸的吸收利用，家兔灌服汤后，达峰浓度较灌服单味大黄显著提高，达峰时间也有所提前，有利于迅速产生抗血栓的作用，灌胃给药后可抑制动物血栓形成和血小板聚集。丹参的提取物在抗血栓作用方面表现较显著。地龙含有蚓激酶物质，能够阻止体外血栓形成，抑制PTCA术后VSMC增生，减轻内膜增生，降低再狭窄率的作用。金银花有抑菌，抗炎抗病毒的作用，能显著降低多种模型小鼠血清胆固醇(Tc)及动脉粥样硬化指数，提高高密度脂蛋白、胆固醇(HDL-c)含量，保护胰腺B细胞及弱降糖作用。
[0004]中药复方的作用机制探讨:经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronaryintervention, PCI)治疗冠状动脉狭窄，最佳的心肌再灌注对接受PTCA的AMI对病人的生存是重要的，术后再狭窄发生率高达10 %~20 %。Danenberg证实在新生内膜内，巨噬细胞显著增多并且表达多种生长因子，细胞因子和酶参与新生膜的形成。当球囊损伤血管壁的早期，由于内皮细胞受损，基底膜暴露，胶原纤维粘连等和促凝血物质释放入血液，同时多种细胞因子生长因子和趋化因子分泌增加，从而促进了炎细胞侵入和有害物质的透入，诱发局部病毒感染，进而启动和引起一系列血管损伤和修复反应，引起大量的血小板聚集、黏附、释放。其中大量的TOGF-B促使单核巨噬细胞、平滑肌细胞向内膜下迁移、增生，同时产生多种细胞因子和生长因子，再通过自分泌和旁分泌的作用，形成复杂的作用网络，导致局部细胞脂质代谢异常，泡沫细胞形成和细胞基质过量产生，形成动脉粥样硬化特征性斑块，导致再狭窄的发生。TOGF-B或其受体的特异性阻滞剂能够抑制内膜的增生。任宏生等实验研究表明西药氯吡格雷可以减轻兔髂腹动脉球囊损伤后血管内膜增生，抑制TOGF-B表达。本实验表明，模型组球囊损伤内膜后，损伤动脉可见有明显的新生内膜形成，中药组内膜厚度与面积、内膜/中膜厚度比、内膜/中膜面积比较模型组显著减少，中药复方的通下瘀毒，扶助正气之功效使炎细胞和有害物质不易透入，抑制血小板聚集，黏附及血管平滑肌细胞增殖，使I3DGF-B的分泌减少，内膜增生减低，明显抑制管腔狭窄，为中医药防治PCI术后的再狭窄提供了有利有理的实验依据。
[0005]目前，对于防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物，在西药方面应用他汀类药物和抗血小板药物，毒副作用很大，容易肝损伤和出血等，中药未见防治主动脉内膜损伤后内膜增生的药物。因此，研制开发一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法一直是亟待解决的新课题。
【发明内容】
[0006]本发明目的在于针对上述问题，提供一种疗效确切、实际针对性强、毒副作用小、质量稳定可靠、成本低、方便服用的一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法。
[0007]本发明的目的是这样实现的:一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物，它的产品配方的重量比是，大黄10-20g，桂枝10-15g，丹参15-20g，川芎10-15g，地龙10-15g，金银花10-15g ;—种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物的制备方法，其制备方法是，将大黄、桂枝、丹参、川芎、地龙、金银花用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用 文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后10(TC水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存，即得成品。
[0008]本发明的要点在于它的产品配方及制备方法。冠心病是危害人类生命的最主要疾病之一。目前心血管领域积极开展了介入治疗，以经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneoustransluminal coronary angioplasty, PTCA)为基础的PCI迅速发展，成为冠心病血管重建治疗的较成熟的手段，成功抢救许多患者生命。介入治疗后RS率已经从PTCA时代的20 % -30 %降至目前药物支架时代的5 % -8 %，但是RS仍是影响介入治疗中、远期疗效的重要因素。目前常规西药防治过程中出现对肝功、肾功损害及大出血等的严重问题仍未能解决，因此PCI术后RS的中医药防治的研究成了人们关注的新热点。本文旨在研究中药复方对血管内皮损伤后I3DGF-B的影响来预防PCI术后RS。
[0009]再狭窄是经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneous Transluminal CoronaryAngioplasty, PTCA)后最常见的并发症,术中对血管内膜、甚至对中膜造成一定损伤,本研究旨在通过动物实验探讨中药复方的作用机制，为中药防治PTCA术后再狭窄提供可靠的理论依据。
[0010]大黄:性味及归经:苦，寒。脾、胃、大肠、肝、心包经。功效:攻积滞；清湿热；湾火；凉血；祛瘀；解毒。主治:实热便秘；热结胸痞；湿热泻痢；黄疸；淋病；水肿腹满；小便不利；目赤；咽喉肿痛；口舌生疮；胃热呕吐；吐血；咯血；衄血；便血；尿血；蓄血；经闭；产后瘀滞腹痛；症瘕积聚；跌打损伤；热毒痈疡；丹毒；烫伤。现代药理研究表明，大黄对消化系统的影响:(1)泻下作用，(2)利胆、保肝，(3)促进胰液分泌、抑制胰酶活性，(4)抗胃及十二指肠溃疡；对血液系统的影响:⑴止血作用，⑵降血脂；抗感染作用:(I)抗病原微生物作用:抗炎、解热作用，⑵免疫调节:蒽醌衍生物可抑制非特异性免疫功能，⑶抗衰老抗氧化作用，国内外越来越多学者证明，大黄所含鞣质有很好的抗氧化作用。
[0011]桂枝:最早记载于《名医别录》。性味归经:辛、甘，温。归心、肺、膀胱经。功效:发汗解肌，温经通脉，助阳化气，散寒止痛。现代药理作用:扩张血管、促进发汗，(I)扩张血管，调节血液循环，使血液流向体表；(2)抑制IgE所致肥大细胞颗粒反应，降低补体活性，抗过敏作用，抗菌、抗病毒。
[0012]丹参:又名赤参，紫丹参，红根等。性味归经:苦微寒，归心、心包、肝经。功效:活血祛瘀，凉血消痈，养血安神。现代药理作用:(1)强心:加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量；(2)对血管作用:扩张冠脉，增加心肌血流量，扩张外周血管，血流增加，脑血流量下降；(3)抗血栓形成:提高纤溶酶活性，延长出、凝血时间，抑制血小板聚集(提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成)，改善血液流变学特性(血粘度降低、红细胞电泳时间缩短)；(4)改善微循环，促进组织的修复与再生作用，保肝:改善肝微循环；抗菌:丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用；降血脂作用:丹参能使主动脉粥样斑块形成面积明显减少，血清总胆固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低，丹 参可抑制高脂膳食家兔的血脂上升，通过研究发现丹参素还能抑制细胞内源性胆固醇的合成。
[0013]川芎:性味与归经，辛，温。归肝、胆、心包经。功能与主治:活血行气，祛风止痛。用于月经不调，经闭痛经，癥瘕腹痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，头痛，风湿痹痛。现代药理作用:
(I)对中枢神经系统的作用:川芎有明显的镇静作用；(2)对心血管系统的作用:对心脏的作用，川芎煎剂对离体蟾蜍和蛙心脏，在浓度在10-5-10-4时使收缩振幅增大、心率稍慢；
(3)对平滑肌的作用；(4)抗菌作用；(5)抗放射作用；(6)其它作用:川芎嗪能增加麻醉兔的肾血流量，并能利尿。
[0014]地龙:又名蚯蚓，最早记载大约是《诗经》。《神农本草经》将其列为下品药。药性:咸、寒，归肝、脾、膀胱经；具有清热息风，平喘，通络，利尿之功效；“主伤寒疟疾，大热狂烦，及大人小儿小便不通，急慢惊风，历节风痛。”现代药理研究表明，地龙具有(I)降血脂；(2)抗菌；(3)抗氧化；(4)降压和抗心律失常；(5)抗凝血溶血栓的双重作用；(6)解热、抗炎、镇痛；(7)免疫调节。
[0015]金银花:性能，甘、寒。归肺、心、胃经。功效，清热解毒，疏散风热。应用，(I)痈肿疔疮，(2)外感风热，温病初起，(3)热毒血痢。药理作用:本品具有广谱抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等致病菌有较强的抑制作用，对钩端螺旋体、流感病毒及致病霉菌等多种病原微生物亦有抑制作用；金银花煎剂能促进白细胞的吞噬作用；有明显的抗炎及解热作用。本品有一定降低胆固醇作用。
[0016]一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物及制备方法与现有技术相比，具有药物组成简单，配伍关系明确，药味少，价格低廉，疗效确切显著，通过动物实验证明具有抑制抑制血小板聚集，抑制TOGF-B表达的作用，有显著的防治动脉内膜损伤后内膜增生的作用，防止PCI术后再狭窄事件发生，易于被患者接受等优点，将广泛的应用于医药【技术领域】中。
【专利附图】
【附图说明】[0017]下面结合附图及实施例对本发明进行详细说明。
[0018]图1是TOGF-B免疫组化染色图象分析结果图。
【具体实施方式】
[0019]实施例一
[0020]将大黄10g，桂枝15g，丹参20g，川芎14g，地龙10g，金银花15g用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后10(TC水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存；舒降之40mg/片，批号:国药准字J20060032，由杭州默沙东制药有限公司提供；阿司匹林IOOmg/片，批号:BTA6015，由拜尔药业集团有限公司提供；研磨后，双蒸水溶解，13.5ml相当含舒降之1.5mg、阿司匹林3.7mg，4度冰箱保存，即得成品。
[0021]实施例二[0022]将大黄20g，桂枝10g，丹参18g，川芎10g，地龙15g，金银花IOg用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后10(TC水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存；舒降之40mg/片，批号:国药准字J20060032，由杭州默沙东制药有限公司提供；阿司匹林IOOmg/片，批号:BTA6015，由拜尔药业集团有限公司提供；研磨后，双蒸水溶解，13.5ml相当含舒降之1.5mg、阿司匹林3.7mg，4度冰箱保存，即得成品。
[0023]实施例三
[0024]大黄16g，桂枝12g，丹参16g，川芎13g，地龙llg，金银花14g用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后100°C水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存；舒降之40mg/片，批号:国药准字J20060032，由杭州默沙东制药有限公司提供；阿司匹林IOOmg/片，批号:BTA6015，由拜尔药业集团有限公司提供；研磨后，双蒸水溶解，13.5ml相当含舒降之1.5mg、阿司匹林3.7mg,4度冰箱保存，即得成品。
[0025]以上述实施例制备的防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物为例作出的实验报告。
[0026]探讨中药复方对家兔血管内皮损伤后内膜增生和血小板源生长因子B蛋白(PDGF-B-B)表达的影响。方法:将健康新西兰大耳白兔40只，随机分模型组(η = 10)、中药组(η = 10)、西药组(η = 10)、空白组(η = 10),模型组、中药组、西药组高酯饲料喂养4周后行腹主动脉内膜剥脱术造模。术后各组予正常饲料喂养，中药组予中药复方灌胃4周，西药组予舒降之、阿司匹林灌胃4周，模型组、空白组予生理盐水灌胃4周。造模术4周后处死家兔取腹主动脉观察动脉病理形态学改变，测量内膜、中膜厚度和面积，用免疫组化法观察各组对血小板源性生长因子B蛋白(TOGF-B)表达的影响。结果:与模型组比较，中药组内膜/中膜厚度比、内膜/中膜面积比显著减少(Ρ〈0.05);中药组使血管壁TOGF-B表达下降。结论:核承气桃改良方使兔腹主动脉内膜损伤后内膜增生减低，对血管内膜增殖早期血小板源生长因子B蛋白(TOGF-B)有拮抗作用。提示其对血管内皮损伤有一定的保护作用，为抗PTCA术后再狭窄提供较充足的实验依据。
[0027]再狭窄是经皮腔内冠状动脉成形术(Percutaneous Transluminal CoronaryAngioplasty,PTCA)后最常见的并发症,术中对血管内膜、甚至对中膜造成一定损伤，本研究旨在通过动物实验探讨中药复方的作用机制，为中药防治PTCA术后再狭窄提供可靠的理论依据。
[0028]1材料与方法
[0029]1.1实验材料
[0030]动物及饲料:由辽宁中医药大学实验动物中心引进的封闭群健康新西兰大耳白兔，微生物控制级别为β级，体重为2-2.5kg，数量40只，雌雄不限，在普通环境中饲养。其中10只为正常对照组，喂普通饲料，不施行手术；30只喂特制的模型饲料，并施行手术。模型饲料(基础饲料79 %、15 %蛋黄粉、猪油5 %、胆固醇I % )均由辽宁中医药大学动物实验中心加工。
[0031]主要试剂:roGF_B抗体，SA1020免疫组化染色试剂盒，均由武汉博士德生物公司提供。
[0032]主要仪器:SN — 695型智能放免r测量仪，上海原子核研究所日环仪器一厂生产。SANY0MDF — 382E超低温冰箱，日本三洋公司生产。恒温水浴箱、S m a r t V i e w 2001生物电泳图像分析软件等。
[0033]中药和西药:大黄10_20g，桂枝10_15g，丹参15_20g，川芎10_15g，地龙10_15g，金银花10-15g ;其制备方法是，将大黄、大黄、桂枝、丹参、川芎、地龙、金银花用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后100°C水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存；舒降之40mg/片，批号:国药准字J20060032，由杭州默沙东制药有限公司提供；阿司匹林IOOmg/片，批号:BTA6015，由拜尔药业集团有限公司提供；研磨后，双蒸水溶解，13.5ml相当含舒降之1.5mg、阿司匹林3.7mg, 4度冰箱保存，即得成品。
[0034]1.2实验方法
[0035]实验分组:健康新西兰大耳白兔40只将动物分模型组(η = 10)、中药组(η = 10)、西药组(η = 10)、空白组(η = 10)。
[0036]动物造模:30只兔高酯饲料喂养4周造成动脉粥样硬化模型[1]，然后用25%乌拉坦每0.4ml/100g腹腔注射麻醉，于右侧腹股沟区备皮、消毒、铺巾，利多卡因少量局麻，切皮拨肉分离股动脉，两动脉夹分别夹住股动脉近心远心两端暴露2厘米左右，剪开动脉周长三分之一口，用6F穿刺针刺破动脉壁，经导丝导入直径1.5—2.0mm球囊导管(依血管直径大小而定)，至肾动脉下方，盐水充盈球囊(压力为4一6Kpa)，缓慢回拉导管至切口处抽空球囊内液体降至零，重复上述过程三次，间隔5min重复一次，达到剥落腹主动脉内皮的目的。撤出导管，结扎股动脉，缝合皮肤，术后3天连续肌注青霉素80万u/只/天，预防感染。
[0037]术后喂饲:从内膜剥脱术后第2天开始每日每只兔喂普通饲料50g，中药组予中药复方13.5ml/kg灌胃4周，西药组予舒降之、阿司匹林混合液13.5ml/kg灌胃4周，模型组、空白组予生理盐水13.5ml/kg灌胃4周(给药量按人和动物间体表面积折算的等效剂量比率表计算)。
[0038]1.3病理标本采集与观察:腹主动脉内膜剥脱术后4周处死家兔，切开腹壁暴露腹腔，将肠管翻至一侧，见到腹主动脉与下腔静脉并行于脊柱旁，分离腹主动脉，截取2cm长腹主动脉用生理盐水冲洗后放于10%的中性甲醛溶液中-20°C。[0039]2术后指标测定
[0040]2.1中药对动脉壁I3DGF-B含量影响:取腹主总动脉，制成石蜡切片，3% H202灭活内源性酶lOmin，加复合酶消化液置8min，滴加正常山羊血清封闭液置20min，加TOGF-B链单克隆抗体，4°C过夜，次日加生物素化山羊抗鼠/兔IgG，37 V反应40min，滴加试剂SABC，37V反应30min，显色，脱水，中性树胶封固。新生内膜部位棕黄色颗粒为I3DGF-B染色阳性信号。
[0041]2.2药物对血管内膜增生的影响:标本脱水、石蜡包埋，切片5μπιΗΕ染色，在SEM2IPS图像分析系统(日本SONY公司)，测量动脉内膜厚度、中膜厚度(μπι)，计算内膜/中膜厚度比，测定管腔面积、内弹力板围绕面积和外弹力板围绕面积，以内弹力板围绕面积减管腔面积得到新生内膜面积，外弹力板围绕面积减内弹力板围绕面积得到中膜面积(mm2)，计算内膜/中膜面积比。每只动物随机选取3张切面分析，取平均值。
[0042]2.3数据处理(统计学方法):采用SPSS10.0软件统计学处理，数据以平均值土标准差(又土S)表示〃计量资料组AN0VA，两组间比较用q检验，计数资料率用x2检验，P〈0.05为差异有显著性意义。图像分析和统计学处理图像经S m a r t V i e w 2001生物电泳图像分析软件(上海复日科技有限公司)进行处理、分析。
[0043]3 结果
[0044]3.1各组血管内膜和中膜厚度及面积比的比较
[0045]表一:各组血管内膜和中膜厚度及面积比的比较(X土s)
[0046]
【权利要求】
1.一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物，其特征在于:它的产品配方的重量比是，大黄 10-20g，桂枝 10-15g，丹参 15-20g，川芎 10_15g，地龙 10_15g，金银花 10_15g。
2.根据权利要求1所述的一种防治动脉内膜损伤后内膜增生的药物的制备方法，其特征在于:其制备方法是，将大黄、桂枝、丹参、川芎、地龙、金银花用15倍的水量浸泡40分钟后，第一次用武火煎煮70分钟，第二次加10倍量得水用文火煎煮50分钟，第三次加6倍量得水用文火煎煮30分钟，将3次所煎药液合并，纱布过滤后100°C水浴浓缩至150mL，4°C冰箱保存，即得成品。
【文档编号】A61P9/00GK103948687SQ201410209917
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月19日 优先权日:2014年5月19日
【发明者】宫丽鸿 申请人:辽宁中医药大学附属医院