一种p53基因、p53蛋白和基因重组药物的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种p53基因或p53基因编码的p53蛋白在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的应用。本发明还公开了一种基因重组药物在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的应用，该基因重组药物包括p53基因和可用于基因治疗的载体。本发明提供了一种已有基因p53的新用途和在此基础上得到的基因重组药物的新用途，对于同时具有癌症和血糖代谢异常性疾病的患者，具有积极的治疗意义，不仅提供了一种新的治疗途径和手段，而且不需要再使用两类药物分别进行治疗，减轻病人的痛苦。
【专利说明】—种p53基因、p53蛋白和基因重组药物的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及基因制药领域，尤其是一种P53基因、p53基因编码的P53蛋白的新应用和包含P53基因的基因重组药物的新应用。
【背景技术】
[0002]p53基因是生物体内一种抑制细胞转变癌细胞的基因。细胞中本来就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方产生病变而失去平衡，癌症就可能会发生。人类P53基因定位于17号染色体pl3，全长16-20kb，含有11个外显子，转录2.8kb的mRNA，编码蛋白质为P53，是一种核内磷酸化蛋白。p53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。过去一直把它当成一种癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突变的p53，后来证实野生型P53是一种抑癌基因。
[0003]2003年，国产的重组人p53腺病毒注射液上市，商品名"今又生"，是世界上第一个获准上市的肿瘤基因治疗药，它是由正常人p53肿瘤抑制基因和改构的5型腺病毒基因重组而成。前者是"今又生"发挥肿瘤治疗作用的主体结构，后者主要起载体作用，携带治疗基因P53进入肿瘤细胞内发挥作用。重组人p53腺病毒(rAd-p53)是一种广谱的抗肿瘤药物，目前已有多篇"今又生"治疗全身各主要系统恶性实体瘤的研究论文在国内外发表。P53已经作为治疗肿瘤的基因药物被广泛应用，充分证明了其具有良好的安全性。
[0004]血糖代谢异常性疾病是指即因血糖代谢问题引起的疾病，包括血糖代谢障碍和代谢旺盛等原因，主要包括以下这些疾病:1.糖尿病2.糖尿病酮症酸中毒3.高血糖高渗综合征4.低血糖症。
[0005]糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。糖尿病的主要危害即表现为并发症，目前，还没有根治糖尿病的药物。对于糖尿病的治疗主要表现为血糖的控制。
[0006]目如,关于ρ53基因与血糖代谢异常性疾病和癌症的关系未见研究。
【发明内容】
[0007]针对以上问题，本发明的目的之一是提供一种ρ53基因或ρ53基因编码的ρ53蛋白在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的新应用。
[0008]上述Ρ53基因或ρ53基因编码的ρ53蛋白在不能制备仅治疗血糖代谢异常性疾病的药物中应用。
[0009]优选的，上述癌症为口腔癌，例如舌癌、牙龈癌、口底癌、颊癌等。
[0010]优选的，上述血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
[0011]最优选的，上述癌症为口腔癌并且血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
[0012] 本发明的目的之二在于提供一种基因重组药物在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的应用，该基因重组药物包括Ρ53基因和可用于基因治疗的载体。[0013]优选的，上述可用于基因治疗的载体为腺病毒载体。
[0014]优选的，上述基因重组药物包含治疗有效量的重组p53腺病毒和药用赋形剂。
[0015]优选的，上述基因重组药物为重组人p53腺病毒注射液，例如“今又生”。
[0016]优选的，上述癌症为口腔癌，例如舌癌、牙龈癌、口底癌、颊癌等。
[0017]优选的，上述血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
[0018]进一步优选的，上述癌症为口腔癌并且血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
[0019]最优选的，上述基因重组药物为重组人p53腺病毒注射液，上述癌症为口腔癌并且血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
[0020]基因治疗(gene therapy)是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。
[0021]可用于基因治疗的载体是指用于基因治疗目的并将目的基因导入靶细胞并且表达的载体。
[0022]发明人经过研究发现，p53基因或p53基因编码的p53蛋白不仅可以用于抑制肿瘤，还可以同时用于抑制肿瘤和控制血糖代谢异常，特别是同时对于口腔癌和糖尿病的治疗作用显著，然而，P53基因或p53基因编码的p53蛋白对于仅控制血糖代谢异常没有明显作用。
[0023]在此基础上，包含p53基因和可用于基因治疗的载体的基因重组药物，可以用于治疗癌症和血糖代谢异常性疾病。
[0024]发明人通过动物实验证实，重组人p53腺病毒注射液(商品名“今又生”)对于同时具有口腔癌和糖尿病的大鼠，具有明显的降糖作用，然而，对于仅有糖尿病的大鼠，没有表现出明显降糖作用，对于口腔癌的大鼠，也未表现出明显的降糖作用。
[0025]发明人还对于15例同时患有糖尿病患者和口腔癌的患者进行了临床试验，同样发现重组人P53腺病毒注射液(商品名“今又生”)对于这些患者的降糖作用明显。
[0026]本发明提供了一种已有基因p53基因、p53蛋白的新用途和在此基础上得到的基因重组药物的新用途，对于同时具有癌症和血糖代谢异常性疾病的患者，具有积极的治疗意义，不仅提供了一种新的治疗途径和手段，而且不需要再使用两类药物分别进行治疗，减轻病人的痛苦。
【具体实施方式】
[0027]本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0028]本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
[0029]实施例1
[0030]1、试验材料
[0031]试验药品:购自深圳市赛百诺基因技术有限公司生产的重组人P53腺病毒注射液(今又生)，主要成分:重组腺病毒-P53基因颗粒；辅料:三羟基氨基甲烷，丙三醇，规格:I X IO12VP/支。
[0032]试验模型:
[0033]舌癌模型:用浓度为0.001 %的四硝基喹啉-1-氧化物(4NQ0)加入到SD大鼠的日常饮水中，饮水32周造舌癌模型，血糖浓度在6.0mmoI/L以下；
[0034]糖尿病模型:用链脲佐菌素(STZ)按照每公斤体重50mg腹腔多次注射SD大鼠，48h后餐后血糖≥11.lmmol/L，稳定7d后为糖尿病模型。
[0035]舌癌伴糖尿病模型:在造成舌癌基础上再造糖尿病，具体方法同以上单独舌癌模型和单独糖尿病模型。
[0036]2、试验方法
[0037]分别取舌癌伴糖尿病模型200只，随机分为4组，每组50只，分别为舌癌伴糖尿病模型的P53低剂量组、舌癌伴糖尿病模型的p53高剂量组、舌癌伴糖尿病模型的p53正常剂量组、舌癌伴糖尿病模型的空白腺病毒组。
[0038]分别取糖尿病模型150只，随机分为3组，每组50只，分别为糖尿病模型的空白腺病毒组，糖尿病模型的P53正常剂量组，糖尿病模型的胰岛素组。
[0039]分别取舌癌模型50只，为舌癌模型的p53正常剂量组。 [0040]具体的分组为:
[0041]I组、舌癌伴和糖尿病模型的p53低剂量组:采用舌癌伴和糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是瘤内注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*101(lVP/kg.bw ;腹腔注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*10lclVP/kg.bw (加入100mL0.9%生理盐水中)。
[0042]2组、舌癌伴和糖尿病模型的p53高剂量组:采用舌癌伴糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是瘤内注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*1012VP/kg.bw ;腹腔注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*1012VP/kg.bw (加入100mL0.9%生理盐水中)。
[0043]3组、舌癌伴和糖尿病模型的p53正常剂量组:采用舌癌伴糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是瘤内注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*10nVP/kg.bw ;腹腔注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*10nVP/kg.bw (加入100mL0.9%生理盐水中)。
[0044]4组、舌癌伴和糖尿病模型的空白腺病毒组:采用舌癌伴糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是瘤内注射无P53基因载体的空白单纯腺病毒2-5*10nVP/kg.bw，腹腔注射无P53基因载体的空白单纯腺病毒p53基因载体的单纯腺病毒2-5*10nVP/kg.bw。
[0045]5组、糖尿病模型的空白腺病毒组:采用糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是腹腔注射无P53基因载体的空白单纯腺病毒2-5*10nVP/kg.bw。
[0046]6组、糖尿病模型的p53正常剂量组:采用糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量是腹腔注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*10nVP/kg.bw (加入100mL0.9%生理盐水中)。
[0047]7组、糖尿病模型的胰岛素组:采用糖尿病模型的SD大鼠，每次的给药剂量腹壁皮下注射胰岛素I单位/kg.bw (市购，诺和灵R和诺和灵N，国药准字J20070044)，早晚各注射一次(根据测定血糖值调整胰岛素用量)。
[0048]8组、舌癌模型的p53正常剂量组:采用舌癌模型的SD大鼠，每次的给药剂量是瘤内注射重组人P53腺病毒注射液，剂量为2-5*10nVP/kg.bw ;腹腔注射重组人p53腺病毒注射液，剂量为2-5*10nVP/kg.bw(加入100mL0.9%生理盐水中)。
[0049]以上所有8个分组中，除第7组外，每组三天一次给药，一个月为一个疗程，每个疗程后检测一次空腹血糖，得到每个疗程后的空腹血糖值。
[0050]3、试验结果
[0051]将空腹血糖值的数据应用SPSS10.0统计软件分析，检验水准为P〈0.05时，差异有统计学意义。
[0052]动物试验数据见表1。
[0053]表1动物试验数据
[0054]
【权利要求】
1.一种p53基因或p53基因编码的p53蛋白的应用，其特征在于，所述p53基因或p53基因编码的P53蛋白在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的一种p53基因或p53基因编码的p53蛋白的应用，所述癌症为口腔癌。
3.如权利要求1或2所述的一种p53基因或p53基因编码的p53蛋白的应用，所述血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
4.一种基因重组药物的应用，其特征在于，包括p53基因和可用于基因治疗的载体，所述基因重组药物在制备治疗癌症和血糖代谢异常性疾病的药物中的应用。
5.如权利要求4所述的一种基因重组药物的应用，其特征在于，所述可用于基因治疗的载体为腺病毒载体。
6.如权利要求5所述的一种基因重组药物的应用，其特征在于，所述基因重组药物包含治疗有效量的重组P53腺病毒和药用赋形剂。
7.如权利要求6所述的一种基因重组药物的应用，其特征在于，所述基因重组药物为重组人P53腺病毒注射液。
8.如权利要求4-7中任一权利要求所述的一种基因重组药物的应用，其特征在于，所述癌症为口腔癌。
9.如权利要求4-8中任一权利要求所述的一种基因重组药物的应用，其特征在于，所述血糖代谢异常性疾病为糖尿病。
【文档编号】A61K38/17GK104001189SQ201410275539
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月19日 优先权日:2014年6月19日
【发明者】李龙江, 孙军, 高宁, 李 一, 潘剑, 张壮, 夏辉, 李春洁, 门乙, 苏凡 申请人:四川大学