一种蛹虫草酵素粉及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种蛹虫草酵素粉及其制备方法。本发明公开一种制备蛹虫草酵素粉的方法，包括如下步骤：(1)将活化的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28℃振荡培养，得到蛹虫草一级种子液。本发明公开的蛹虫草酵素粉生产工艺简便，便于包装、运输、保存，服用方便，活性高，易吸收，见效快，具有抗癌、防衰、减毒、润肺补肾、降血脂、降血压、保心护肝，增强人体抵抗力和抗排异的功能。
【专利说明】 一种蛹虫草酵素粉及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种蛹虫草酵素粉及其制备方法，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]蛹虫草(学名:Cordyceps militaris)为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属。其世界性分布的天然资源数量很少。由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体。冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季，自幼虫尸体之上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得。中医认为，蛹虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。
[0003]蛹虫草的菌丝体中含有亚油酸、虫草酸、虫草素、腺苷和谷留醇等多种活性成分。实验证明，虫草的上述多种活性成分都具有明显的降血脂，降血压，预防动脉粥样硬化，保心护肝的作用。
[0004]超氧化物岐化酶(SOD)普遍存在于好氧生物体内，是生物细胞防卫系统中重要的一种抗氧化物酶，构成了细胞抗氧化损伤的第一道防线。在真核生物中主要存在3种SOD同工酶，包括细胞质Cu，Zn-SOD、线粒体Mn-SOD、细胞质Fe-SOD。许多研究报道表明，丝状真菌的Cu，Zn-SOD具有潜在的额外修饰基团和多聚体，可以为解决SOD半衰期短以及体内给药的活性问题等缺陷提供更有效的SOD药用蛋白。蛹虫草含有全部以上3种SOD同工酶，其中Cu，Zn-SOD是一种中性蛋白，占总SOD的90%以上，是蛹虫草体内主要的S0D。研究人员采用邻苯三酚自氧化体系，研究了冬虫夏草及人工虫草菌丝体对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除作用，结果表明冬虫夏草和人工虫草菌丝体对超氧阴离子自由基和羟自由基均有清除作用。另有相关研究表明，蛹虫草子实体中的SOD含量要高于冬虫夏草子实体中的SOD含量。
[0005]亚油酸是人体所必需的脂肪酸，人体每天摄取6g亚油酸，才能维持正常的生理代谢。而且亚油酸在体内的可代谢产生对人体有重要生理功能的ω-6不饱和脂肪酸，其是影响血压、血管反应性、凝血和免疫系统的脂肪激素等一系列活性化合物的前提。亚油酸还具有防癌抗癌，抗粥状动脉硬化，参与脂肪分解与新陈代谢，增强肌体免疫能力，促进骨组织的代谢等作用。现在生活节奏过快，精神压力过大，饮食和生活不规律，高血压、高血糖、高血脂、高胆固醇等疾病困扰着越来越多的群体，亚油酸作为一类功能性多不饱和脂肪酸，具有降低血清胆固醇水平作用，服用亚油酸对患高甘油三酯疾病的病人具有明显的疗效。我国药典正是采用亚油酸乙酯作为预防和治疗高血压及动脉粥样硬化症、冠心病的药物。亚油酸有助于降低血清胆固醇和抑制动脉血栓的形成，因此在预防动脉粥样硬化和心肌梗塞等心血管疾病方面有良好作用。
[0006]酵素，也就是“酶”，是一种由氨基酸组成、且具有催化细胞体内生物化学反应的蛋白质。酵素是维持细胞新陈代谢的重要物质。许多酵素对人体的健康十分有利。超氧化物歧化酶SOD是一种生物活性蛋白质，具有清除新陈代谢中产生的超氧阴离子自由基的能力，又是超氧阴离子的底物诱导酶，其功能是保护细胞免遭有氧代谢物的损伤。在维护机体活性氧代谢的平衡中起重要作用，表现出抗癌、防衰、减毒等作用。蛹虫草含有的另一有效成分SOD可抑制人体内过氧化脂质的生成和清除衰老产物(氧化自由基)，经研究证明，其功效超过了传统的具抗氧化作用的中药，具有显著的延缓衰老、抗疲劳，耐缺氧、提高人体免疫力、抗癌等功效。维持正常的SOD含量是对保持机体健康具有重要的意义。随着机体的衰老，人体内的SOD含量和活性会逐步降低，如果不及时补充则导致亚健康。因此，开发具有降脂活性并富含SOD的蛹虫草酵素就显得十分迫切。
[0007]目前，蛹虫草的生产主要是利用大米、小麦和蚕蛹等固体基质通过固体栽培的方法而实现的。这种蛹虫草固体栽培方法存在周期长(80-90天)、重金属污染严重、残留细菌或霉菌毒素、有效成分含量低(如SOD含量偏低，每克菌丝体或子实体的酶活力小于20国际单位)等缺陷。因此，人们对蛹虫草保健功效和治疗功效的渴求与蛹虫草子实体保有量和子实体中降脂活性成分与SOD含量低之间产生了明显的矛盾。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种蛹虫草酵素粉及其制备方法。
[0009]本发明提供一种制备蛹虫草酵素粉的方法，包括如下步骤:
[0010](I)将活化的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26_28°C振荡培养，得到蛹虫草一级种子液；
[0011]所述种子培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述种子培养基中的浓度为6-8g/100ml，所述酵母粉在所述种子培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述蛋白胨在所述种子培养基中的浓度为5-7g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述种子培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述种子培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为 0.1-0.2g/100ml ；
[0012](2)将蛹虫草一级种子液接入二级种子培养基，26_28°C振荡培养，得到蛹虫草二级种子液；
[0013]所述二级种子培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述二级种子培养基中的浓度为4-6g/10ml,所述酵母粉在所述二级种子培养基中的浓度为4-8g/10ml,所述蛋白胨在所述二级种子培养基中的浓度为4-8g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述二级种子培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述二级种子培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml,所述消泡剂在所述二级种子培养基中的浓度为0.1-0.2g/100ml ；
[0014](3)根据放大工艺的需要，按步骤(2)的方法由上一级种子液制备得到下一级种子液；
[0015](4)将最终得到的种子液接入发酵培养基中，26_28°C振荡培养，得到蛹虫草发酵液；
[0016]所述发酵培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述发酵培养基中的浓度为3-6g/100ml，所述酵母粉在所述发酵培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml，所述消泡剂在所述发酵培养基中的浓度为 0.1-0.2g/100ml ；
[0017](5)将蛹虫草发酵液离心收集菌体、干燥和粉碎过筛，即得蛹虫草酵素粉；
[0018]所述干燥具体为远红外干燥；
[0019]所述筛具体为120目筛。
[0020]上述方法中，所述步骤(I)中，所述活化的蛹虫草菌株是将蛹虫草菌株转接到斜面培养基上，26-28°C培养得到；
[0021]所述蛹虫草菌株购自广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GIM5.269 ；
[0022]所述斜面培养基组成如下:3g/L的鹿糖，2g/L的葡萄糖，lg/L的蛋白胨,0.5g/L的酵母膏，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，15g/L的琼脂粉，余量为水，pH为 6.5-7.0 ；
[0023]所述pH值具体采用10g/100ml的氢氧化钠水溶液进行调节；
[0024]所述培养的天数为5-7天，具体为6天；
[0025]上述任一所述的方法中，所述步骤(I)中，所述振荡培养的天数为2-3天，所述振荡培养的转速为200-250rpm ；
[0026]所述步骤(2)中，所述将蛹虫草一级种子液接入二级种子培养基时的接种量为1-2%，所述培养的天数为2-3天，通气量为1:0.4-0.8vvm，搅拌转速为400-500rpm ；
[0027]所述步骤(4)中，所述将最终得到的种子液接入发酵培养基时的接种量为3-5%，所述培养的天数为3-6天，通气量为1:0.3-0.5vvm，搅拌转速为350_450rpm。
[0028]上述任一所述的方法中，所述步骤(I)中，所述振荡培养的天数为3天，所述振荡培养的转速为250rpm ；
[0029]所述种子培养基中，所述葡萄糖在所述种子培养基中的浓度为6g/100ml，所述酵母粉在所述种子培养基中的浓度为4g/100ml，所述蛋白胨在所述种子培养基中的浓度为5g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述种子培养基中的浓度为0.2g/100ml，所述硫酸镁在所述种子培养基中的浓度为0.02g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为0.lg/100ml ；
[0030]或，
[0031]所述种子培养基中，所述葡萄糖在所述种子培养基中的浓度为8g/100ml，所述酵母粉在所述种子培养基中的浓度为6g/100ml，所述蛋白胨在所述种子培养基中的浓度为7g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述种子培养基中的浓度为0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述种子培养基中的浓度为0.04g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为0.2g/100ml ；
[0032]或，
[0033]所述种子培养基中，所述葡萄糖在所述种子培养基中的浓度为7g/100ml，所述酵母粉在所述种子培养基中的浓度为5g/100ml，所述蛋白胨在所述种子培养基中的浓度为6g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述种子培养基中的浓度为0.3g/100ml，所述硫酸镁在所述种子培养基中的浓度为0.03g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为0.15g/100ml。
[0034]上述任一所述的方法中，所述步骤⑵中，所述接种量为1%或2%;所述培养的天数为3天；所述通气量为I:0.4vvm、1:0.6vvm或1:0.8vvm ；
[0035]所述二级种子培养基中，所述葡萄糖在所述二级种子培养基中的浓度为4g/10ml,所述酵母粉在所述二级种子培养基中的浓度为4g/100ml,所述蛋白胨在所述二级种子培养基中的浓度为4g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述二级种子培养基中的浓度为0.2g/100ml，所述硫酸镁在所述二级种子培养基中的浓度为0.02g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为0.lg/100ml ；
[0036]或，
[0037]所述二级种子培养基中，所述葡萄糖在所述二级种子培养基中的浓度为6g/10ml,所述酵母粉在所述二级种子培养基中的浓度为8g/100ml,所述蛋白胨在所述二级种子培养基中的浓度为8g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述二级种子培养基中的浓度为0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述二级种子培养基中的浓度为0.04g/100ml，所述消泡剂在所述二级种子培养基中的浓度为0.2g/100ml ；
[0038]或，
[0039]所述二级种子培养基中，所述葡萄糖在所述二级种子培养基中的浓度为5g/10ml,所述酵母粉在所述二级种子培养基中的浓度为6g/100ml,所述蛋白胨在所述二级种子培养基中的浓度为6g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述二级种子培养基中的浓度为0.3g/100ml，所述硫酸镁在所述二级种子培养基中的浓度为0.03g/100ml，所述消泡剂在所述二级种子培养基中的浓度为0.15g/100ml。
[0040]上述任一所述的方法中，所述步骤(3)中，所述下一级种子液为蛹虫草三级种子液和/或四级种子液。
[0041]上述任一所述的方法中，所述步骤(4)中，所述发酵培养基的体积为75L-3850L，具体为75L、150L、750L或3850L ;所述接种量为3%、4%或5%;所述培养的天数为4天；所述通气量为I:0.3vvm、l:0.4vvm、l:0.5vvm ;所述搅拌转速为400rpm ；
[0042]所述发酵培养基的体积为75L时，发酵时所用的发酵罐的体积为100L ；
[0043]所述发酵培养基的体积为150L时，发酵时所用的发酵罐的体积为200L ；
[0044]所述发酵培养基的体积为750L时，发酵时所用的发酵罐的体积为1000L ；
[0045]所述发酵培养基的体积为3850L时，发酵时所用的发酵罐的体积为5000L ；
[0046]所述发酵培养基中，所述葡萄糖在所述发酵培养基中的浓度为3g/100ml，所述酵母粉在所述发酵培养基中的浓度为4g/100ml，所述蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为4g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为0.2g/100ml，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.02g/100ml，所述消泡剂在所述发酵培养基中的浓度为0.lg/100ml ；
[0047]或，
[0048]所述发酵培养基中，所述葡萄糖在所述发酵培养基中的浓度为6g/100ml，所述酵母粉在所述发酵培养基中的浓度为6g/100ml，所述蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为6g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.04g/100ml，所述消泡剂在所述发酵培养基中的浓度为0.2g/100ml ；
[0049]或，
[0050]所述发酵培养基中，所述葡萄糖在所述发酵培养基中的浓度为4g/100ml，所述酵母粉在所述发酵培养基中的浓度为5g/100ml，所述蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为5g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为0.3g/100ml，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.03g/100ml，所述消泡剂在所述发酵培养基中的浓度为0.15g/100ml。
[0051]上述任一所述的方法中，所述步骤(I)中，所述活化的蛹虫草菌株在将蛹虫草菌株转接到斜面培养基上之前还包括如下步骤:将所述保藏号为GIM5.269的蛹虫草菌株在26°C在斜面培养基上见光培养7天，再经15°C避光培养5天，挑选呈现金黄色的单菌落。
[0052]由上述任一所述的方法得到的蛹虫草酵素粉也属于本发明的保护范围。
[0053]上述蛹虫草酵素粉在制备具有降脂活性和/或SOD酶活力的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0054]或，
[0055]上述蛹虫草酵素粉在制备降血脂和/或抗衰老的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
[0056]本发明采用工业化液体深层发酵技术，使得蛹虫草菌种能够在液体培养基中进行大量增殖，生产出富含降脂有效成分与SOD的酵素粉，每克蛹虫草酵素粉SOD酶活3 150U酶活力。本发明提供的蛹虫草酵素粉具有抗癌、防衰、减毒、润肺补肾、降血脂、降血压、保心护肝，增强人体抵抗力和抗排异的功能，对气短、气喘、口干和精神疲乏等症状有很好的疗效或作用，适用于医药领域肿瘤及肿瘤放化疗、器官移植、肺炎、肝炎、慢性肾炎患者，特别适合于广大中老年人、生活节奏快的人群，免疫功能低下，体弱多病，肾虚，气短、气喘、口干和精神疲乏的患者，而且对人体各系统均能产生有益的作用，可适用于保健食品领域。
[0057]本发明提供的蛹虫草酵素粉生产工艺简便，便于包装、运输、保存，服用方便，活性高，易吸收，见效快。
【具体实施方式】
[0058]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0059]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0060]下述实施例中SOD酶活力的测定采用超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒A001-1 (购自南京建成生物工程研究所)进行总的SOD含量测定，具体按说明书操作并计算酶活力。
[0061]下述实施例中所用到的蛹虫草(Cordyceps militaris)购自广东省微生物菌种保藏中心，菌株名称为蛹虫草Cordyceps millitaris (L.ex Fr.) Link,保藏号为GIM5.269。将菌种GM5.269在26°C见光培养7天后，经15°C避光低温胁迫培养5天后(培养时所使用的培养基为实施例中的斜面培养基)，自然选育挑选菌落呈现金黄色的单菌落保存，供生产用。菌落金黄色越深，SOD含量就越高。
[0062]下述实施例中的亚油酸测定采用乙酰氯一甲醇甲酯化法，参考GB 5413.27—2010，婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定方法。
[0063]消泡剂购自陶氏化学(上海)有限公司，产品目录号为D0WFAX*DF103。
[0064]实施例1、10L发酵罐生产富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉
[0065]一、将蛹虫草菌株转接到斜面培养基上26_28°C常规培养6天(5_7天均可)，得活化的蛹虫草菌株；
[0066]斜面培养基组成:3g/L的鹿糖,2g/L的葡萄糖，lg/L的蛋白胨,0.5g/L的酵母膏，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，琼脂粉15g/L，余量为水，采用10g/100ml氢氧化钠的水溶液调pH为6.5-7.0。
[0067]二、将活化好的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振荡培养3天(2-3天均可)得蛹虫草一级种子液。
[0068]种子培养基的组成:6g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白胨，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，0.lg/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0069]三、将一级种子液接入二级种子培养基，26_28°C培养3天(2_3天均可)，接种量1%,通气1:0.4vvm,搅拌转速400?500rpm,得到蛹虫草二级种子液。
[0070]二级种子培养基的组成:4g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白胨，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，0.lg/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0071]四、将二级种子液接入装有75L发酵培养基的100L发酵罐中，26_28°C培养4天(3-6天均可),接种量3 %,通气1:0.3vvm,搅拌转速400rpm (350-450rpm均可),发酵结束即为蛹虫草发酵液。
[0072]发酵培养基的组成:3g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白胨，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，0.lg/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0073]五、将蛹虫草发酵液经离心收集菌体、远红外干燥和超微粉碎得到的蛹虫草菌丝粉，过120目筛，即得富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉。经测定每克蛹虫草酵素粉含有46mg亚油酸和160U的SOD酶活力。
[0074]实施例2、200L发酵罐生产富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉
[0075]—、将蛹虫草菌株转接到同实施例1相同的斜面培养基26_28°C常规培养6天(5-7天均可)，得活化的蛹虫草菌株。
[0076]二、将活化好的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振荡培养3天(2-3天均可)，得蛹虫草一级种子液。
[0077]种子培养基的组成:8g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,7g/100ml的蛋白胨，0.4g/100ml的磷酸二氢钾，0.04g/100ml的硫酸镁，0.2g/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0078]三、将一级种子液接入二级种子培养基，26_28°C培养3天(2_3天均可)，接种量2%,通气1:0.8vvm,搅拌转速400-500rpm,得蛹虫草二级种子液。
[0079]二级种子培养基的组成:6g/100ml的葡萄糖,8g/100ml的酵母粉,8g/100ml的蛋白胨，0.4g/100ml的磷酸二氢钾，0.04g/100ml的硫酸镁，0.2g/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0080]四、将二级种子液接入装有150L发酵培养基的200L发酵罐中，26_28°C培养4天(3-6天均可)，接种量5 %,通气1:0.5vvm,搅拌转速400rpm (350-450rpm均可),发酵结束即为蛹虫草发酵液。
[0081]发酵培养基的组成:6g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白胨，0.4g/100ml的磷酸二氢钾，0.04g/100ml的硫酸镁，0.2g/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0082]五、将蛹虫草发酵液经离心收集菌体、远红外干燥和超微粉碎得到的蛹虫草菌丝粉，过120目筛，即得富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉。
[0083]经测定每克蛹虫草酵素粉含有50mg亚油酸和175U的SOD酶活力。
[0084]实施例3、1000L发酵罐生产富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉
[0085]一、将蛹虫草菌株转接到同实施例1相同的斜面培养基26_28°C常规培养6天(5-7均可)，得活化的蛹虫草菌株。
[0086]二、将活化好的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振荡培养3天(2-3天均可)得蛹虫草一级种子液。
[0087]种子培养基的组成:7g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白胨，0.3g/100ml的磷酸二氢钾，(λ 03g/100ml的硫酸镁，(λ 15g/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0088]三、将一级种子液接入二级种子培养基，26_28°C培养3天(2_3天均可)，接种量2%,通气1:0.6vvm,搅拌转速400-500rpm,得到蛹虫草二级种子液。
[0089]二级种子培养基的组成:5g/100ml的葡萄糖,6g/100ml的酵母粉,6g/100ml的蛋白胨，0.3g/100ml的磷酸二氢钾，0.03g/100ml的硫酸镁，0.15g/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0090]四、按步骤三的方法，将二级种子液再接入二级种子培养基制备得到蛹虫草三级种子液。
[0091]五、将三级种子液接入装有750L发酵培养基的1000L发酵罐中，26_28°C培养4天(3-6天均可),接种量4%,通气1:0.4vvm,搅拌转速400rpm(350-450rpm均可),发酵结束即为蛹虫草发酵液。
[0092]发酵培养基的组成:4g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白胨，
0.3g/100ml的磷酸二氢钾，0.03g/100ml的硫酸镁，0.15g/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0093]六、将蛹虫草发酵液经离心收集菌体、远红外干燥和超微粉碎得到的蛹虫草菌丝粉，过120目筛，即得富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉。
[0094]经测定每克蛹虫草酵素粉含有58mg亚油酸和198U的SOD酶活力。
[0095]实施例4、5000L发酵罐生产富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉
[0096]一、将蛹虫草菌株转接到同实施例1相同的斜面培养基26_28°C常规培养6天(5-7天均可)，得活化的蛹虫草菌株。
[0097]二、将活化好的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28°C，250rpm(200-250rpm均可)振荡培养3天(2-3天均可)，得到蛹虫草一级种子液。
[0098]种子培养基的组成:6g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白胨，
0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，0.lg/100ml的消泡剂，余量为水，pH值自然。
[0099]三、将一级种子液接入二级种子培养基，26-28°C培养3天(2-3天均可)，接种量1%,通气1:0.4vvm,搅拌转速400?500rpm,得到蛹虫草二级种子液。
[0100]二级种子培养基的组成:4g/100ml的葡萄糖,4g/100ml的酵母粉,4g/100ml的蛋白胨，0.2g/100ml的磷酸二氢钾，0.02g/100ml的硫酸镁，0.lg/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0101]四、按步骤三的方法，将二级种子液再接入二级种子培养基，制备得到蛹虫草三级种子液。
[0102]五、按步骤三的方法，将三级种子液再接入二级种子培养基，制备得到蛹虫草四级种子液。
[0103]六、将四级种子液接入装有3850L发酵培养基的5000L发酵罐中，26-28 °C培养4天(3-6天均可)，接种量4%,通气1:0.4vvm,搅拌转速400rpm(350-450rpm均可)，发酵结束即为蛹虫草发酵液。
[0104]发酵培养基的组成:4g/100ml的葡萄糖,5g/100ml的酵母粉,5g/100ml的蛋白胨，0.3g/100ml的磷酸二氢钾，0.03g/100ml的硫酸镁，0.15g/100ml的消泡剂，余量为水，pH自然。
[0105]七、将蛹虫草发酵液经离心收集菌体、远红外干燥和超微粉碎得到的蛹虫草菌丝粉，过120目筛，即得富含降脂有效成分与SOD的蛹虫草酵素粉。
[0106]经测定每克蛹虫草酵素粉含有65mg亚油酸和215U的SOD酶活力。
【权利要求】
1.一种制备蛹虫草酵素粉的方法，包括如下步骤: (1)将活化的蛹虫草菌株接种于种子培养基，26-28°C振荡培养，得到蛹虫草一级种子液； 所述种子培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述种子培养基中的浓度为6-8g/100ml，所述酵母粉在所述种子培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述蛋白胨在所述种子培养基中的浓度为5-7g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述种子培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述种子培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml，所述消泡剂在所述种子培养基中的浓度为 0.1-0.2g/100ml ； (2)将蛹虫草一级种子液接入二级种子培养基，26-28°C振荡培养，得到蛹虫草二级种子液； 所述二级种子培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述二级种子培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述酵母粉在所述二级种子培养基中的浓度为4-8g/100ml，所述蛋白胨在所述二级种子培养基中的浓度为4-8g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述二级种子培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述二级种子培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml，所述消泡剂在所述二级种子培养基中的浓度为0.1-0.2g/100ml ； (3)根据放大工艺的需要，按步骤(2)的方法由上一级种子液制备得到下一级种子液； (4)将最终得到的种子液接入发酵培养基中，26-28°C振荡培养，得到蛹虫草发酵液； 所述发酵培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁和消泡剂；所述葡萄糖在所述发酵培养基中的浓度为3-6g/100ml，所述酵母粉在所述发酵培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为4-6g/100ml，所述磷酸二氢钾在所述发酵培养基中的浓度为0.2-0.4g/100ml，所述硫酸镁在所述发酵培养基中的浓度为0.02-0.04g/100ml，所述消泡剂在所述发酵培养基中的浓度为 0.1-0.2g/100ml ； (5)将蛹虫草发酵液离心收集菌体、干燥和粉碎过筛，即得蛹虫草酵素粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，所述活化的蛹虫草菌株是将蛹虫草菌株转接到斜面培养基上，26-28°C培养得到； 所述蛹虫草菌株购自广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GIM5.269。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，所述振荡培养的天数为2-3天，所述振荡培养的转速为200-250rpm ； 所述步骤(2)中，所述将蛹虫草一级种子液接入二级种子培养基时的接种量为1_2%，所述培养的天数为2-3天，通气量为1:0.4-0.8vvm，搅拌转速为400-500rpm ； 所述步骤(4)中，所述将最终得到的种子液接入发酵培养基时的接种量为3-5%，所述培养的天数为3-6天，通气量为1:0.3-0.5vvm，搅拌转速为350_450rpm。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，所述振荡培养的天数为3天，所述振荡培养的转速为250rpm。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于:所述步骤(2)中，所述接种量为I %或2% ;所述培养的天数为3天；所述通气量为1:0.4vvm、1:0.6vvm或1:0.8vvm。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，所述下一级种子液为蛹虫草三级种子液和/或四级种子液。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于:所述步骤(4)中，所述发酵培养基的体积为75L-3850L，具体为75L、150L、750L或3850L ;所述接种量为3 %、4 %或5 % ；所述培养的天数为4天；所述通气量为1:0.3vvm、l:0.4vvm、l:0.5vvm ;所述搅拌转速为400rpm。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于:所述步骤(I)中，所述活化的蛹虫草菌株在将蛹虫草菌株转接到斜面培养基上之前还包括如下步骤:将所述保藏号为GIM5.269的蛹虫草菌株在26°C在斜面培养基上见光培养7天，再经15°C避光培养5天，挑选呈现金黄色的单菌落。
9.由权利要求1-8任一所述的方法得到的蛹虫草酵素粉。
10.权利要求9所述的蛹虫草酵素粉在制备具有降脂活性和/或SOD酶活力的产品中的应用； 或， 权利要求9所述的蛹虫草酵素粉在制备降血脂和/或抗衰老的产品中的应用。
【文档编号】A61P11/00GK104173389SQ201410411396
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月20日 优先权日:2014年8月20日
【发明者】陈瑞琛, 骆梅香, 蔡玉凤, 黄钦耿, 翁雪清, 黄建忠, 施巧琴, 吴松刚 申请人:厦门元尊生物工程有限公司