本发明关于一种组合物，尤指一种可用于减缓关节炎症状且由植物萃取而得的组合物；本发明亦关于一种包含前述组合物的医药品；本发明更关于一种前述医药品的制造方法；本发明更关于一种前述医药品的用途，尤指用于减缓关节炎症状的用途。
背景技术：
：：退化性关节炎最常发生在中、老年人、长期过度负重的运动员或是肥胖者，该疾病有可能发生在身体的任何关节，其中又以膝关节、髋关节为最常发生的区域。此外退化性关节炎的致病原因目前尚未完全厘清，而年龄与肥胖是该疾病最主要的危险因子，现代人因寿命的延长，因此随着年龄增长几乎都会受到某种程度上退化性关节炎的困扰，长久下来受到这种疾病的患者将遭受肿胀疼痛甚至劳动能力丧失的威胁。退化性关节炎是最常见的关节疾病，由多重因子影响滑膜关节以及细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)，造成软骨纤维化且失去弹性，覆盖在关节最外层骨质上的软骨因磨损而变薄、进而碎裂，甚至完全消失，关节间隙变狭窄，使软骨下方的骨头受力增加，进而造成骨骼硬化、坏死，变成囊状空洞，最终引发疼痛与严重影响行动能力。退化性关节炎可分为原发性关节炎以及次发性关节炎；原发性关节炎主要与老化有关；次发性关节炎与机械性压迫(肥胖)、受伤、代谢性疾病或先天性异常等有关。退化性关节炎主要的症状是疼痛、僵硬、肿大和变形，在活动关节时，常可听到不正常的磨擦声响。患者通常是关节出现疼痛，甚至影响日常生活起居而寻求就医。经由临床病史的询问与理学检查来进行诊断，亦可搭配影像医学(X光检查、超声波)诊断软组织、关节与骨骼的变化，以便进行确诊与治疗。退化性关节炎可依照患者X光上的表现进行关节退化分级，共可分为0-4级(Kellgren-LawrenceGradingScale)。目前治疗退化性关节炎首要为减轻关节的疼痛与僵硬，再者为减缓疾病恶化的速度。轻度患者只需改变生活习惯以及搭配物理治疗等方式即可获得改善，必要时或中度患者则须搭配药物或玻尿酸注射剂治疗，重度患者则需进行外科手术。因此，如何有效改善退化性关节炎的发生率，并提供有效的治疗 方法，是十分重要的课题。当退化性关节炎发生时，滑膜腔的发炎会伴随着软骨的流失；较严重的关节炎，四肢甚至会有肿胀与变形现象，可明显观察到软骨与滑膜组织有大量巨噬细胞浸润，不断促进发炎反应，因此能够在病灶处检测到多种细胞因子(Cytokine)像是TNF-α、NF-κB的增加,以及COX-2酶的大量表达。COX-2是一种在组织发炎时才会被诱导产生的酶(inducibleenzyme)，正常生理状况下的大多数组织并不会过量表达COX-2；然而，当细胞受到IL-1、TNF-α、NF-κB等发炎因子刺激时，COX-2的生成量会大幅上升，并代谢出大量参与发炎反应的前列腺素，导致关节组织产生剧烈疼痛反应。此外，关节炎会伴随着滑膜细胞不正常增生并大量产生RANKL(receptorforactivationofnuclearfactorkappaBligand)，当RANKL和发炎处的巨噬细胞表面RANK受体结合后，便会刺激巨噬细胞分化为蚀骨细胞，将骨钙中的矿物质释放出来，最终造成硬骨的流失。退化性关节炎目前尚无完全治愈的方式，多以保养与药物来效控制病况、缓解疼痛。根据疾病的严重程度给予不同的治疗方式，包含各类型的消炎止痛药、玻尿酸关节注射剂；如果病人的关节疼痛已无法通过上述药物或治疗改善，则必需进行手术置换人工关节等来改善症状；此外通过生活习惯、饮食的改变以及保持运动、控制体重也是有效减少退化性关节炎危险因子好方法。现阶段常用于改善关节炎的止痛药物包含三大类，乙酰胺酚(acetaminophen)、非甾体类止痛药(nonsteroidalanti-inflammatorydrugs,NSAIDs)、COX-2抑制剂(inhibitors)等。乙酰胺酚是减缓疼痛的第一线用药，能抑制前列腺素的分泌，然而前列腺素也与血压调节、凝血、胃酸分泌及肾功能调节等有关，因此干扰前列腺素同时也影响体内正常的功能；另一方面当乙酰胺酚使用剂量过大时会增加肠胃道出血的风险，且容易产生肝脏毒性。NSAIDs用以抑制环氧合酶COX-1以及COX-2，具有抗发炎与镇痛的效果；当COX-2被抑制会导致前列腺素I2(prostacyclinI2,PGI2)减少而产生消炎止痛的作用，但亦会促使血小板的凝集，而COX-1被抑制则会破坏肠胃道黏膜的完整性及影响肾血流，进而产生胃溃疡或肾功能衰败等副作用。而第三大类药物COX-2抑制剂(inhibitor)则通过抑制COX-2来抑制前列腺素，达到减少发炎及疼痛的效果，能减少将近50％的病患产生胃穿孔、流血、溃疡的问题；但近期研究发现COX-2抑制剂(inhibitor)会造成心血管毒性与风险，因此该药物建议使用在有高肠胃道风险且低心血管风险的病患。综上所述，目前退化性关节炎常用的药物仅抑制疼痛，并无改善关节致病原因或减少疼痛来源的治疗；不仅会造成肝毒性，肠胃出血、溃疡、肾衰竭等副作用，对于退化性关节炎的主要人群老年人而言更是一大负担。具专一性的止痛药COX-2抑制剂(inhibitors)，虽然能减少COX-2达到较佳的止痛效果，但会造成心血管毒性，且对于关节磨损严重或老化的病人改善并不明显，其心血管毒性对中老年人更是一大风险。而葡萄糖胺止痛及抗发炎效果不佳，特别是对于年龄较高的患者。至于玻尿酸关节注射剂，患者需要平均每周注射一次，连续注射5周以上，大幅增加病人不适及感染风险。玻尿酸关节注射剂主要是增加关节润滑以舒缓疼痛，但无法直接减少关节发炎因子。目前退化性关节炎药物或治疗方式皆仅能治标而无法治本，有鉴于此，目前市场上仍缺乏一种同时能抗发炎、减少疼痛、同时副作用低且更加安全的关节炎治疗方式或药物。技术实现要素：鉴于现有技术上仍缺乏一种能抗发炎、减少疼痛、副作用低且更加安全的关节炎治疗方式或药物，故本发明的目的在于提供一种包含姜黄萃取物(curcumin)、白藜芦醇(resveratrol)及/或槲皮素(quercetin)的组合物，藉以达成减缓关节发炎的目的。为达上述目的，本发明提供一种用于减缓关节发炎的组合物，该组合物包含姜黄萃取物(curcumin)以及至少一种选自于由白藜芦醇(resveratrol)及槲皮素(quercetin)或其组合所组成的群组。依据本发明，“姜黄萃取物”于此处是指包含姜黄素的萃取物，其中姜黄素占姜黄萃取物的浓度为85％至100％。依据本发明，“关节”于此处是指两块或两块以上的骨之间能活动的连接处；较佳的，所述的关节包括但不限于膝关节及髋关节。依据本发明，“关节发炎”于此处是指软骨退化或结缔组织发炎，导致关节疼痛的病征，其包括但不限于退化性关节炎、类风湿性关节炎、外伤性关节炎及化脓性关节炎。较佳的，所述的组合物中，姜黄萃取物与白藜芦醇的重量比为1：4至49：1。较佳的，所述的组合物中，姜黄萃取物与槲皮素的重量比为2：3至48：1。较佳的，所述的组合物中，姜黄萃取物、白藜芦醇与槲皮素的重量比为18：1： 1至5：1：4。本发明更提供一种包含所述组成物的医药品，其中医药品包含有效剂量的减缓关节发炎的所述组合物以及其医药学上可接受的载体。依据本发明，“有效剂量的减缓关节发炎”于此处是指有效抑制或舒缓关节发炎。“有效剂量”是指在剂量上及对于所需要的时间段而言对达成所要抑制或舒缓关节发炎有效的量；其如本发明的示例，有效抑制或舒缓关节发炎的剂量可通过施予特定范围量的所述组合物，并于特定时间范围内测量COX-2及NF-κB基因或蛋白质表达变化而得。较佳的，其中有效剂量是指每天施予每公斤受体0.1mg/kg/day至67mg/kg/day的医药品。依据本发明，“医药学上可接受的载体”包括生理上兼容人体的任意所有溶剂、分散介质、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延缓剂及其类似物。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲生理食盐水、右旋糖、甘油、乙醇及其类似物的一种或多种及其组合。在许多情况中，较佳的组合物包括等渗剂，例如糖、诸如甘露醇、山梨糖醇的多元醇或氯化钠。药学上可接受的载体可进一步包含微量辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、助悬剂、防腐剂或缓冲剂。本发明所述的医药品可以多种形式存在。这些形式包括但不限于液体、半固体及固体药剂形式，诸如液体溶液(例如可注射及可输注溶液)、分散液或悬浮液、锭剂、丸剂、粉剂、脂质体及栓剂。较佳的形式取决于预期的给药模式及治疗应用；较佳的，本发明的医药品呈可口服或可输注溶液形式，给药模式可为经肠模式，诸如口服。较佳的，所述的包含有效减缓关节发炎剂量的组合物的医药品系通过口服施予，且根据本发明组合物适用及受偏好的口服剂型有药片、颗粒、包衣锭、胶囊、锭剂及其他固体口服剂型亦涵盖于本发明范围中。更佳的，所述的包含有效减缓关节发炎剂量的组合物的医药品是通过关节腔注射施予，且注射液的种类包含但不限于溶液或悬浮液。本发明更提供一种以所述医药品用于减缓关节发炎的用途，其通过施予受体有效剂量的包含姜黄萃取物以及至少一种选自于由白藜芦醇及槲皮素或其组合的医药品，以达到减缓关节发炎的效果。例如，施予受体有效剂量之包含白藜芦醇、姜黄萃取物与槲黄素之组合物之医药品，以达到减缓关节发炎之效果。从而，本发明还提供了所述组合物在制备用于减缓关节发炎的医药品中的用途。较佳的，有效剂量是指每天施予每公斤受体0.1毫克(mg/kg/day)至67mg/kg/day的医药品。本发明更提供一种制造包含姜黄萃取物以及至少一种选自于由白藜芦醇及槲皮素或其组合的医药品的方法，其包括将包含姜黄萃取物以及至少一种选自于由白藜芦醇及槲皮素的组合物与医药上可接受的盐类组合物、医药上可接受的安定剂或医药上可接受的赋形剂相混合成溶液、胶囊、锭剂或制成包衣锭。例如一种制造包含白藜芦醇、姜黄萃取物与槲黄素的组合物的医药品的方法，其包括将包含有白藜芦醇、姜黄萃取物与槲皮素的组合物与医药上可接受的盐类组成物、医药上可接受的安定剂或医药上可接受的赋形剂相混合成胶囊、锭剂或制成包衣锭。依据本发明，“医药上可接受的盐类组合物”于此处是指与受体生理上兼容的所有溶剂。依据本发明，“医药上可接受的安定剂”于此处是指可稳定医药品的物品，其包括但不限于无机碱(inorganicalkaline)、碱土金属的盐(alkalineearthmetalsalt)、氧化物(oxide)及/或氢氧化物(hydroxide)。依据本发明，“医药上可接受的赋形剂”于此处包括但不限于崩解剂(disintegrant)、黏合剂(binder)、填充剂(filler)、润滑剂(lubricant)、助悬剂(suspendingagent)、助溶剂(solubilizer)及助流剂(glidant)。赋形剂的使用量取决于使用多少活性成分，且一种赋形剂可以执行一种以上的功能。较佳的，所述的崩解剂包括但不限于琼脂(agar)、海藻酸(alginicacid)、碳酸钙(calciumcarbonate)、羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose)、纤维素(cellulose)、黏土(clays)、胶体二氧化硅(colloidalsilica)、交联羧甲基钠(croscarmellosesodium)、交联聚维酮(cross-linkedpovidone)、胶(gum)、硅酸镁铝(magnesiumaluminumsilicate)、甲基纤维素(methylcellulose)、波拉克林钾(polacrilinpotassium)、藻酸钠(sodiumalginate)，低取代的羟丙基纤维素(lowsubstitutedhydroxypropylcellulose)、交联聚乙烯吡咯烷酮羟丙基纤维素(crosslinkedpolyvinylpyrrolidonehydroxypropylcellulose)、丙基纤维素(sodiumstarchglycolate)及淀粉(starch)。较佳的，所述的黏合剂包括但不限于微晶纤维素(microcrystallinecellulose)、羟甲基纤维素(hydroxymethylcellulose)、羟丙基纤维素(hydroxypropylcellulose)及聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)。较佳的，所述的填充剂包括但不限于碳酸钙(calciumcarbonate)、磷酸钙(calciumphosphate)、磷酸氢钙(dibasiccalciumphosphate)、磷酸三硫酸钙(tribasiccalciumsulfate)、羧甲基纤维素钙(calciumcarboxymethylcellulose)、纤维素(cellulose)、糊精(dextrin)、盐(salt)、右旋糖(dextrose)、果糖(fructose)、乳糖醇(lactitol)、乳糖(lactose)、碳酸盐(carbonate)、氧化镁(magnesiumoxide)、麦芽糖醇(maltitol)、麦芽糊精(maltodextrin)、麦芽糖(maltose)、山梨糖醇(sorbitol)、淀粉、蔗糖(sucrose)、糖(sugar)及木糖醇(xylitol)。较佳的，所述的润滑剂包括但不限于琼脂、硬脂酸钙(calciumstearate)、油酸乙酯(ethyloleate)、月桂酸乙酯(ethyllaurate)、甘油(glycerin)、硬脂酸棕榈酸甘油酯(glycerylpalmitostearate)、氢化植物油(hydrogenatedvegetableoil)、氧化镁(magnesiumoxide)、硬脂酸镁(magnesiumstearate)、甘露醇(mannitol)、泊洛沙姆(poloxamer)、乙二醇(ethyleneglycol)、苯甲酸钠(sodiumbenzoate)、月桂基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)、硬脂酸钠(sodiumstearoylacid)、山梨糖醇、硬脂酸(stearicacid)、滑石(talc)和硬脂酸锌(zincstearate)。较佳的，所述的助悬剂包括但不限于甘露醇、羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose，CMC)及羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。较佳的，所述的助溶剂包括但不限于羟丙基β环糊精(hydroxypropyl-beta-cyclodextrin)、吐温80(tween80)、蓖麻油(castoroil)。较佳的，所述的助流剂包括但不限于硬脂酸镁(magnesiumstearate)、二氧化硅(silicondioxide)、三硅酸镁(magnesiumtrisilicate)、粉状纤维素(powderedcellulose)、淀粉、滑石、磷酸三钙(tribasiccalciumphosphate)、硅酸钙(calciumsilicate)、硅酸镁(magnesiumsilicate)、胶体二氧化硅及硅凝胶(siliconhydrogel)等材料。本发明所述的组合物以及包含其组合物的医药品通过抑制NF-κB与COX-2发炎因子的表达，以减少关节发炎肿胀，同时亦能减少退化性关节炎病人蚀骨细胞的生成，以减缓骨侵蚀与骨质疏松的问题；因此，本案有别现有技术中所使用的各项止痛、抗发炎药物或玻尿酸注射剂。本发明所述的组合物以及包含其组合物的医药品不仅能明显抑制骨关节处的发炎反应，避免现有药物所造成的明显副作用，更能通过抑制骨关节处的巨噬细胞分化成蚀骨细胞，来减缓骨头遭受侵蚀与骨质疏松的风险，且本发明所述的组合物并无明显的副作用，对于退化性关节炎的主要人群中老年人的额外负担 及健康风险非常小。附图说明图1为本发明的各组别抑制COX-2mRNA表达的柱状图。图2为本发明的各组别抑制NF-κBmRNA表达的柱状图。图3为本发明的各组别抑制COX-2蛋白表达的电泳结果及柱状图；其中α-微管蛋白(α-tubulin)是作为内部控制组(内部对照组，internalcontrol)(购自于millipore公司，型号为MLP05-829)。图4为本发明的各组别抑制巨噬细胞分化形成蚀骨细胞柱状图。图5为本发明先诱导发炎反应再给予不同浓度各组别，以观察抑制各组别对于发炎反应的电泳结果及柱状图；其中β-肌动蛋白(β-actin)作为内部控制组。图6为本发明先诱导发炎反应后，再给予的组合物OT-001-C1以及不同浓度的单一植物萃取物(分别为白藜芦醇及姜黄萃取物(curcumin))，以观察抑制各组别对于发炎反应的电泳结果及柱状图。具体实施方式本发明将由下列的实施例作进一步说明，这些实施例并不限制本发明前面所揭示的内容。本领域技术人员，可以做些许改良与修饰，但不脱离本发明的范畴。实施例1.发炎因子COX-2及NF-κB基因表达试验本实施例将巨噬细胞株RAW264.7(购自台湾食品工业研究所)以3×105cells/well培养于6公分培养皿(6cmdish)以及培养条件为37℃、5％CO2的环境中；细胞培养24小时后将细胞培养液抽掉并以磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)冲洗，再于不同孔洞(well)中分别加入浓度为10ppm二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)控制组、浓度为10ppm脂多醣(lipopolysaccharides,LPS)作为负控制组、浓度为10ppm槲皮素、浓度为10ppm白藜芦醇、浓度为10ppm姜黄萃取物(curcumin)以及浓度皆为30ppm的本发明的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-Q、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4及OT-001-C5，且每组实验3重复；本发明的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-Q、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4及OT-001-C5所包含的白藜芦醇、姜黄萃取物(curcumin)与槲皮素的重量 比如表1所示。表1本发明的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-Q、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4及OT-001-C5所包含的白藜芦醇、姜黄萃取物(curcumin)与槲皮素的重量比重量比白藜芦醇姜黄萃取物槲皮素OT-001-R1410OT-001-R2311OT-001-Q302OT-001-C1140OT-001-C2023OT-001-C3032OT-001-C4041OT-001-C52303小时后，除DMSO控制组以外，其他各组再添加每毫升100纳克(ng/ml)的LPS诱导发炎反应；再培养3小时后将含有LPS的培养液抽干并以PBS冲洗。加入1毫升(ml)的TRIzol进行RNA萃取，再分析COX-2及NF-κB基因表达量。结果如图1所示，本发明所述的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4或OT-001-C5相较于控制组以及单一植物萃取物组别能有效抑制COX-2的表达并有明显的差异，其中又以组合物OT-001-C1与OT-001-C4效果最佳。结果如图2所示，本发明所述的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C4或OT-001-C5能显著抑制NF-κB的表达，其中又以组合物OT-001-C1具有较佳抑制效果。所有数据均以Mean±SD表示，英文字母a、b、c、d表示统计的结果，标示不同字母表示组间具有统计上差异(p<0.05)。实施例2.发炎因子COX-2蛋白质表达试验本实施例将巨噬细胞株RAW264.7以3×105cells/well培养于6公分培养皿以及培养条件为37℃、5％CO2的环境中；培养24小时后将细胞培养液抽掉并以PBS缓冲液冲洗，再于不同孔洞(well)中分别加入浓度为10ppmDMSO控制组(control)、浓度为10ppmLPS控制组、浓度为10ppm槲皮素、浓度为10ppm白藜芦醇、浓度为10ppm姜黄萃取物(curcumin)以及浓度皆为30ppm的本发明的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-Q、OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4、OT-001-C5及OT-001-C6，且每组实验3重复；本发明的组合物OT-001-R1、OT-001-R2、OT-001-Q、 OT-001-C1、OT-001-C2、OT-001-C3、OT-001-C4、OT-001-C5所包含的白藜芦醇、姜黄萃取物(curcumin)与槲皮素的重量比如表1所示；其中组合物OT-001-C6包含的白藜芦醇、姜黄萃取物(curcumin)与槲皮素的重量比为1：48：0。3小时后，除DMSO控制组以外，其他各组再添加100ng/ml的LPS诱导发炎反应；再培养3小时后将含有LPS的培养液抽干并以PBS冲洗。加入1ml的TRIzol进行蛋白质萃取，再分析COX-2蛋白质表达量，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis)分别分离等量蛋白(25微克(μg))，并将蛋白质转移至PVDF膜；其中用于西方墨点法的COX-2抗体(C-20)购自于SantaCruz，且型号为sc-1745。结果如图3所示，姜黄萃取物(curcumin)能够抑制COX-2蛋白质表达；本发明所述的组合物OT-001-C1、OT-001-C3、OT-001-C4、OT-001-C5及OT-001-C6能够明显抑制COX-2蛋白质表达。实施例3.抑制蚀骨细胞生成本实施例的目的在于评估本发明组合物与单一植物萃取物对于抑制巨噬细胞分化为蚀骨细胞的效果，本实施例中使用NF-κB受体活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactorkappa-Bligand,RANKL)做为促使蚀骨细胞(osteoclast)生成的主要物质。本实施例组别包含DMSO控制组、RANKL对照组、单一植物萃取物组(例如槲皮素、白藜芦醇、姜黄萃取物(curcumin))以及试验组(即本发明组合物OT-001-C1、OT-001-C3与OT-001-C4)。将巨噬细胞株RAW264.7以1.25×104cells/well培养于24孔盘(well)中，培养12小时后以PBS清洗一次，除了DMSO控制组外，其余各组分别更换为含有50ng/mlRANKL(购买自R&Dsystems公司，型号为RecombinantMouseTRANCE/RANKL#462-TEC-010)的细胞培养液，并同时分别添加浓度为2ppm的槲皮素、浓度为2ppm的白藜芦醇、浓度为2ppm的姜黄萃取物(curcumin)及浓度为4ppm的OT-001-C1、浓度为4ppm的OT-001-C3以及浓度为3ppm的OT-001-C4，并每3天更换一次上述条件的培养液，共培养5天，再使用AcidPhosphatase,Leukocyte(TRAP)Kit(购自SigmaAldrich公司，型号为#387A-1KT)进行蚀骨细胞的染色，并在显微镜底下以100倍镜头计数视野中大于三个细胞核的细胞，即视为一颗成熟的蚀骨细胞。如图4所示，相较于RANKL对照组，使用单一植物萃取物或组合物OT-001-C1、 OT-001-C3、OT-001-C4可抑制巨噬细胞分化成为蚀骨细胞，比较单一植物萃取物与组合物OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4则可观察到组合物OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4对于抑制巨噬细胞分化形成蚀骨细胞的效果明显更优于单一植物萃取物。结果显示本发明组合物可有效减少蚀骨细胞的生成，达到抑制骨侵蚀与骨质疏松的效果。所有数据均以Mean±SD表示，英文字母a、b、c、d、e表示统计的结果，标示不同字母表示组间具有统计上差异(p<0.05)。实施例4.抑制发炎反应本实施例的目的为：在先诱导发炎反应再给药的情况下观察本发明组合物对于抑制发炎反应的效果；本实施例的组别包含DMSO控制组、LPS对照组、浓度为20ppm试验组(即本发明组合物OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4)以及浓度为30ppm试验组(即本发明组合物OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4)。将巨噬细胞株RAW264.7以3×105cells/well培养于6公分培养皿中，培养24小时后将细胞培养液抽掉并以PBS清洗。除DMSO控制组外，其余各组皆先以100ng/ml的LPS诱导发炎反应30分钟，接着再于各试验组中分别加入浓度为20ppm的OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4或浓度为30ppm的OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4，且每组实验至少3重复。培养6小时后，将各组的细胞培养液抽干并以PBS洗清干净后加入1mLTRIzol进行RNA萃取，并量测COX-2的基因表达量。如图5所示，本发明的组合物皆可明显减少COX-2的基因表达，在浓度为20ppm的OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4分别可抑制81.5％、29.5％、74.2％的COX-2基因表达量；而在浓度为30ppm的OT-001-C1、OT-001-C3及OT-001-C4则分别可抑制80.2％、56.3％、71.1％的COX-2基因表达量。本发明所述的三种组合物在浓度为20ppm或30ppm的试验中均可观察到一致的抑制发炎效果，且其中以组成物OT-001-C1抑制COX-2的效果最佳。所有数据均以Mean±SD表示，英文字母a、b、c、d、e表示统计的结果，标示不同字母表示组间具有统计上差异(p<0.05)。实施例5.组合物OT-001-C1抑制发炎反应的效果本实施例的目的为在先诱导发炎反应的情况下比较本发明的组合物OT-001-C1与单一植物萃取物对抑制发炎反应的效果，本实施例的组别包含DMSO控制组、LPS对照组、浓度为4.8ppm白藜芦醇、浓度为19ppm姜黄萃取物(curcumin)、浓度为24ppm姜黄萃取物(curcumin)及浓度为24ppm组合物OT-001-C1。将巨噬细胞株RAW264.7以3×105cells/well培养于6公分培养皿中，培养24小时后将细胞培养液抽掉并以PBS清洗。除DMSO控制组外，其余各组皆先以100ng/ml的LPS诱导发炎反应30分钟，接着再于各试验组中分别加入浓度为4.8ppm白藜芦醇、浓度为19ppm姜黄萃取物(curcumin)、浓度为24ppm姜黄萃取物(curcumin)及浓度为24ppmOT-001-C1，且每组实验至少3重复。培养6小时后，将各组的细胞培养液抽干并以PBS洗清干净后加入1mLTRIzol进行RNA萃取，并量测COX-2的基因表达量。如图6所示，单独使用白藜芦醇几乎无法抑制因LPS诱导所产生的发炎反应，其COX-2的表达量与LPS对照组并无差异，在单独使用姜黄萃取物(curcumin)的情况下可抑制COX-2的表达量。与LPS对照组相比，组合物OT-001-C1不仅可以显著抑制COX-2的表达量(p<0.05)，且不论与浓度为19ppm及浓度为24ppm的姜黄萃取物(curcumin)相比，组合物OT-001-C1抑制COX-2的效果更显著优于单独使用姜黄萃取物(curcumin)(p<0.05)。所有数据均以Mean±SD表示，英文字母a、b、c、d表示统计的结果，标示不同字母表示组间具有统计上差异(p<0.05)。当前第1页1 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