本发明涉及一种防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制备方法。
背景技术：
车轮虫是一种自由运动的寄生性纤毛虫类原生动物，是淡水鱼类最常见的寄生虫病，近年来呈现发病时间长、寄主范围广、耐药性强、复发率高、危害程度大等特点，由于养殖生产过程中缺乏有效防治药物，车轮虫病成为养殖过程的一大顽疾。
硫酸铜硫酸亚铁粉是目前国标渔药(2010版)仅有的用于防治车轮虫的药物，但也存在很大的弊端和安全隐患。由于使用多年，车轮虫已对硫酸铜硫酸亚铁粉产生了较强的抗药性，用药剂量逐渐加大，而药效却越来越不理想；由于硫酸铜对藻类也有杀灭作用，施用该药容易造成藻类死亡，水体缺氧，轻者出现鱼类浮头，重者会出现鱼类中毒、泛塘等情况；另外，由于铜离子和铁离子容易富集，对水产品安全和渔业生态系统构成威胁。
近些年应用较多的杀灭车轮虫药物是农业部2005年废止的代森铵。代森铵是防治蔬菜、瓜果类细菌性疾病的一种农药，其代谢产物乙撑硫脲是世界公认的致癌物，对动物和动物性食品安全构成威胁。虽然已将该药作为水产药物禁用，然而市场缺乏有效防治车轮虫的药物，导致该药禁而不止。
因此，现在急需低毒高效的防治淡水鱼类车轮虫的药物。
技术实现要素：
本发明的目的是为了填补目前生产上缺乏低毒高效防治淡水鱼类车轮虫的药物的空白，提供一种新的防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制 备方法。
本发明的发明人在研究中发现，含有二硫氰基甲烷和盐酸洗必泰作为活性成分的药物复方制剂能够高效地防治淡水鱼类车轮虫，且毒性低。
因此，为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂，所述制剂含有活性成分、分散剂、润湿剂和载体，所述活性成分含有二硫氰基甲烷和盐酸洗必泰，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为10-50重量％，盐酸洗必泰的含量为5-40重量％，，分散剂的含量为1-20重量％，润湿剂的含量为1-20重量％，余量为载体。
优选地，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为20-40重量％，盐酸洗必泰的含量为15-30重量％，分散剂的含量为5-10重量％，润湿剂的含量为5-10重量％，余量为载体。
优选地，所述药物复方制剂的粒径为200目以上，更优选为300-400目。
另一方面，本发明还提供了一种防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂的制备方法，所述方法包括：将二硫氰基甲烷、盐酸洗必泰、分散剂、润湿剂和载体混合均匀，其中，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为10-50重量％，盐酸洗必泰的含量为5-40重量％，分散剂的含量为1-20重量％，润湿剂的含量为1-20重量％，余量为载体。
优选地，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为20-40重量％，盐酸洗必泰的含量为15-30重量％，分散剂的含量为5-10重量％，润湿剂的含量为5-10重量％，余量为载体。
优选地，所述方法还包括将混合所得的混合物粉碎至200目以上，更优选粉碎至300-400目。
本发明的药物复方制剂能够低毒高效地防治淡水鱼类车轮虫。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
一方面，本发明提供了一种防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂，制剂含有活性成分、分散剂、润湿剂和载体，活性成分含有二硫氰基甲烷和盐酸洗必泰，以药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为10-50重量％，盐酸洗必泰的含量为5-40重量％，分散剂的含量为1-20重量％，润湿剂的含量为1-20重量％，余量为载体。
本发明中，优选地，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为20-40重量％，盐酸洗必泰的含量为15-30重量％，分散剂的含量为5-10重量％，润湿剂的含量为5-10重量％，余量为载体。在上述优选情况下，能够进一步提高药物复方制剂对淡水鱼类车轮虫的杀虫率。
本发明中，对于分散剂无特殊要求，可以采用本领域常用的分散剂，优选为亚甲基双萘磺酸钠(NNO)和/或木质素磺酸钠。
本发明中，对于润湿剂无特殊要求，可以采用本领域常用的润湿剂，优选为十二烷基硫酸钠和/或Morwet EFW。
本发明中，对于载体无特殊要求，可以采用本领域常用的载体，例如，可以为硅藻土、膨润土、高岭土等。
本发明的药物复方制剂的粒径优选为200目以上；更优选为300-400目。
第二方面，本发明提供了一种防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂的制备方法，该方法包括：将二硫氰基甲烷、盐酸洗必泰、分散剂、润湿剂和载体混合均匀，其中，以药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为10-50重量％，盐酸洗必泰的含量为5-40重量％，分散剂的含量为1-20重量％，润湿剂的含量为1-20重量％，余量为载体。
本发明中，优选地，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲 烷的含量为20-40重量％，盐酸洗必泰的含量为15-30重量％，分散剂的含量为5-10重量％，润湿剂的含量为5-10重量％，余量为载体。在上述优选情况下，能够进一步提高药物复方制剂对淡水鱼类车轮虫的杀虫率。
本发明方法优选还包括将混合所得的混合物粉碎至200目以上，更优选粉碎至300-400目。
对于分散剂、润湿剂和载体如前所述，在此不再赘述。
本发明的药物复方制剂在实际使用时，使用浓度可以根据鱼种不同进行适当调整，一般情况下，使用浓度为0.25-1.0mg/L。
实施例
以下的实施例将对本发明作进一步的说明，但并不因此限制本发明。
实施例1
本实施例用于说明本发明的防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制备方法。
将30重量份的二硫氰基甲烷、20重量份的盐酸洗必泰、8重量份的NNO、8重量份的十二烷基硫酸钠和34重量份的硅藻土混合均匀，并将混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到药物复方制剂A1。
实施例2
本实施例用于说明本发明的防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制备方法。
将20重量份的二硫氰基甲烷、15重量份的盐酸洗必泰、5重量份的木质素磺酸钠、5重量份的Morwet EFW和55重量份的膨润土混合均匀，并将混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到药物复方制剂A2。
实施例3
本实施例用于说明本发明的防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制备方法。
将40重量份的二硫氰基甲烷、30重量份的盐酸洗必泰、10重量份的NNO、10重量份的十二烷基硫酸钠和10重量份的高岭土混合均匀，并将混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到药物复方制剂A3。
实施例4
本实施例用于说明本发明的防治淡水鱼类车轮虫的药物复方制剂及其制备方法。
按照实施例2的方法制备药物复方制剂，不同的是，二硫氰基甲烷的用量为10重量份，盐酸洗必泰的用量为5重量份，膨润土的用量为75重量份。得到药物复方制剂A4。
试验例1
本试验例于中国水产科学研究院无公害渔药创制中心循环水系统中进行，试验鱼为草鱼(购自北京房山区吉羊村某养殖厂，规格：35g-50g。10×10倍显微镜镜检鱼鳃上的车轮虫，10-15个/视野)，试验养殖缸(100cm×60cm×50cm)。
将药物复方制剂A1-A4各自分别设置3个梯度，0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L，每个梯度设置3个平行，每个平行20尾鱼，设置1个对照组(不给药)。共计740尾，37个养殖缸。加药后循环水系统停止循环，全程充气(溶解氧含量为7.0-9.5)，水温18-22℃，分别于24h、48h、96h三个时间段取样，每组随机取5条鱼，于10×10倍显微镜下观察鱼鳃计数车轮虫，按照如下公式计算各给药组杀虫率，结果见表1。96h结束试验。
杀虫率％＝(对照组平均残留存活车轮虫数-给药组平均残留存活车轮虫数)/对照组平均残留存活车轮虫数×100％。
表1复方制剂对草鱼鳃上车轮虫的杀虫率
在试验例1中，在整个试验阶段，对照组草鱼鳃车轮虫最多，10×10倍显微镜观察，10-20个/视野。
从表1可以看出，本发明的药物复方制剂的杀虫率均在80％以上，杀虫率高。
将实施例2与实施例4进行比较可以看出，以所述药物复方制剂的总重量为基准，二硫氰基甲烷的含量为20-40重量％，盐酸洗必泰的含量为15-30重量％，分散剂的含量为5-10重量％，润湿剂的含量为5-10重量％，余量为载体，能够进一步提高杀虫率。
试验例2
试验地点：天津宝坻黄庄王姓养殖户池塘。池塘面积10亩。
试验时间：6月底-7月初。
养殖品种：鲢鳙鱼、鲤鱼、草鱼混养池塘，草鱼规格：7-18cm。
池塘水质条件：pH 8.2，氨氮1.5mg/L，亚硝酸盐0.25mg/L。
发病症状：草鱼浮头、游边，每日死亡6-7尾草鱼。捞取草鱼检查，鳃丝肿胀，粘液较多，4×10倍显微镜检查，发现鳃上寄生大量车轮虫，10×10倍下观察，10-15个/视野。鲢鳙鱼、鲤鱼鳃上未检测到车轮虫。
将药物复方制剂A1以0.35mg/L的浓度全池泼洒，第二天取草鱼鳃镜检，发现鳃上车轮虫明显减少，2-3个/视野，第三天取草鱼鳃镜检，车轮虫数更少，平均杀灭率达到96％以上。草鱼浮头、游边现象消失，无死亡。第五天取草鱼检查，鳃上未见车轮虫，鳃颜色正常，鳃丝无肿胀挂脏现象。
试验例3
试验地点：广东惠州博罗叶姓养殖户池塘。4亩水面。
试验时间：8月份。
养殖品种：鲮鱼仔，规格2-6cm。
池塘水质：pH 9.0-9.2，水质较肥，水体氨氮0.6-0.9mg/L、亚硝酸盐0.05-0.1mg/L。岸上为猪舍，猪粪直接排入池塘。
发病症状：吃料时出现炸群现象，每日死鱼几十尾。镜检发现，鳃上有大量车轮虫寄生，鳃丝有大量粘液。10×10倍下观察，30个以上/视野。
将药物复方制剂A1以0.35mg/L的浓度全池泼洒，第三天取10尾鲮鱼仔镜检，平均杀虫率达到95％以上。死亡数明显减少。第五天，检查平均杀虫率在99％以上，未出现死鱼现象。
试验例4
试验地点：广东惠州博罗王姓养殖户池塘。8亩水面。
试验时间：8月份。
养殖品种：鳜鱼，规格6-15cm。
池塘水质：水质较浑，pH 8.5-9.0，水体氨氮0.4-0.6mg/L、亚硝酸盐0.25-0.3mg/L。
发病症状：每日死鱼4-8尾。取鳃检查，鳃丝有大量粘液，颜色浅红，4×10倍镜检发现，鳃上有大量车轮虫寄生。10×10倍下观察，20个以上/ 视野。
将药物复方制剂A1以0.35mg/L的浓度全池泼洒，第三天取6尾鳜鱼镜检，只有1尾鱼鳃上有2个车轮虫，另外4尾均未发现车轮虫。第5天捞取6尾鳜鱼检查，仅有1尾鱼鳃上有1个车轮虫，杀虫率明显。无死鱼现象。
通过实验室循环水水质以及养殖池塘水质下，在0.25-0.35mg/L的浓度下，对车轮虫的杀灭率达到90％以上。证明该复方制剂对鱼类车轮虫具有显著的杀灭效果。
毒性试验：
1.1试验材料：草鱼购自房山区吉羊村某养殖厂，规格：20-35g。斑点叉尾鮰从河南某养殖场购买，规格：15-30g。
1.2试验方法：
试验前将鱼种暂养3天，试验前2天及试验期间不喂食，然后挑选体健无伤、行动敏捷、规格基本一致的个体作为试验用鱼。试验在中国水产科学研究院无公害渔药创制中心循环水系统中进行，水温19-22℃，全程充氧(7-9mg/L)，试验期间不循环。
采用静态急性毒性试验法。根据鱼病防治的药物常用剂量，选择适当浓度比例进行预试验，观察鱼苗活动及存活情况。根据预备试验的结果，在使鱼苗全部存活的最高质量浓度和全部致死最低质量浓度之间，根据等对比间距法r确定各试验组浓度(具体方法：式中r为相邻两个剂量比值；b为最高剂量；a为最低剂量；n为剂量组数)，见表2，浓度单位为mg/L。每个处理设三个平行。对照组不加药，每个试验组用鱼20尾。
试验过程中循环水系统停止循环，加药后每隔2h观察鱼的状态，记录死亡情况。96h结束试验。
1.3数据处理：
试验结果取平均值，根据死亡鱼数及死亡时间，利用半对数座标直线内插法求出各种药物作用于试验鱼24h、48h、96h的半致死浓度(LC50：median lethal concentration)值，48h安全生存的最高浓度(SC：Safe concentration)值。
半致死浓度：Log LC50＝Xm-d(Σp-0.5)；
其中，Xm为最大剂量对数；d为相邻剂量比值的对数；p为各剂量组死亡率。
安全浓度：SC＝48hLC50×0.3/(24hLC50/48hLC50)2；
表2对草鱼、斑点叉尾鮰的浓度梯度
1.4试验结果：
整个试验过程中，空白组未有死鱼，即死亡率为0。草鱼、斑点叉尾鮰在试验不同时间的死亡率、半致死浓度LC50和48h安全浓度SC见表3。
草鱼：药物复方制剂在2mg/L浓度下，96h内死亡2尾，8.0mg/L浓度下在72h内全部死亡。48h安全浓度为0.96mg/L。
斑点叉尾鮰：选择为无鳞鱼的代表种类，对药物较草鱼等有鳞鱼敏感，在1.41mg/L时就出现死亡，在48h内死亡4尾。表现症状为游泳困难，身体弯曲，浮于水面，呈半休克状态，静止片刻后再次上下挣扎游动，鱼体侧翻，慢慢死亡。4mg/L时72h内所有试验鱼死亡。48h安全浓度为0.50mg/L。
由表3可以看出，该复方制剂对草鱼、斑点叉尾鮰的48h安全浓度分别为0.96mg/L、0.50mg/L，综合有效浓度为0.25-0.35mg/L的使用量来分析，安全浓度高于草鱼和斑点叉尾鮰的有效浓度，可见，本发明的药物复方制剂 对淡水养殖鱼类较为安全。
表3草鱼、斑点叉尾鮰对药物复方制剂的半致死浓度及安全浓度
综上可见，本发明的药物复方制剂能够低毒高效地防治淡水鱼类车轮虫。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。