本发明涉及药理活性物质的体内递送技术领域，具体是一种制备用于体内递送药理活性物质的多肽纳米粒的方法。
背景技术：
水不溶性药理活性物质难以通过静脉注射给药，为了实现静脉注射给药，有效的方法之一是将药理活性物质制成纳米级的微粒。一方面，静脉注射的微粒可以缓释药理活性物质并延长药理活性物质的半衰期；另一方面，靶向材料可以将微粒化的药理活性物质靶向到病灶部位。
在现有的涉及利用多肽制备药理活性物质纳米粒制剂的方法中，美国专利US6,749,868，US5,560,933的制备方法，是以人血清白蛋白为载体的结合型紫杉醇纳米粒。这种制备方法是在有白蛋白的参与下，并在高压均质机的处理下，使白蛋白发生多肽链的展开与再折叠，将溶解有药理活性物质的微乳粒包裹在多肽链锁形成的结构中，然后经过冷冻干燥除去有机溶媒，从而获得稳定的药理活性物质纳米粒。这一技术中所使用的白蛋白通常是来自人血液提取物，资源有限且价格昂贵。因此寻找其它价格低廉、性能可靠、资源丰富的多肽材料将有助于纳米药物的广范应用。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种本利用价格低廉、资源丰富的多肽材料制备用于体内递送药理活性物质的多肽纳米粒的方法，以解决某些药理活性物质由于其水溶性低而导致无法体内递送的难题。
一种制备用于体内递送药理活性物质的多肽纳米粒的方法，包括如下步骤：
步骤(a)：将药用明胶用注射用水溶解制成明胶溶液，调节明胶溶 液的pH值为4.5～7.0，升温至70～100℃，保持温度1～3小时，停止加热，冷却至25～40℃，通过滤膜过滤除去分子量过大和过小的组分，保留重均分子量为25,000～45,000道尔顿的部分，最后向明胶溶液中加注射用水使明胶多肽的质量体积比浓度为0.5～1.0g/100ml(以含氮量计)，溶液调pH值至3.5～8.5制成明胶多肽溶液；
步骤(b)：将药理活性物质分散到有机溶剂中，加入到步骤(a)中所述的明胶多肽溶液中，混匀，转入高压均质机，在1000～2000Bar高压下乳化，形成O/W型微乳剂，高压同时使多肽分子展开，当高压解除后，展开的多肽分子发生再折叠或自组装，交互缠绕形成网状结构，把药理活性物质分散到其中形成多肽纳米粒。
进一步的，所述步骤(b)中的药理活性物质选自紫杉醇、多西紫杉醇、格列本脲、布洛芬、伊立替康、5-氟尿嘧啶、卡莫司汀、阿霉素、苯芥胆甾醇、哌泊舒凡、他莫昔芬、洛莫司汀、藤黄酸、冬凌草甲素、鬼臼毒素、阿托伐他汀、斯伐他汀、非诺贝特、硝苯地平、吲哚美辛、吡罗昔康地西泮、利哌利酮、齐拉西酮、他克莫司、雷帕霉素、茚地那韦、利托那韦和洛匹那韦中的一种或其组合。
进一步的，所述步骤(b)中的有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、DMSO、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、福尔马林、丙酮中的一种或其组合。
进一步的，所述的多肽纳米粒的平均粒径为25nm～500nm。
进一步的，所述的多肽纳米粒的平均粒径为50nm～300nm。
进一步的，所述的药理活性物质在纳米粒中所占的重量比是1％～20％。
进一步的，所述步骤(a)的明胶多肽溶液是由健康动物骨所制成的药用明胶，经预先酸碱水解，必要时也可加交联剂进行交联反应后所制成的分子量适当的明胶多肽水溶液，其中明胶多肽的重均分子量为25,000-45,000道尔顿，所述的交联剂是甲醛、乙醛、戊二醛、琥珀酸酐、或它们的组合。
进一步的，还包括步骤(c)：将步骤(b)所制备的微乳液通过0.22微米孔径的滤膜过滤。
进一步的，还包括步骤(d)：将步骤(c)所制备的微乳液经过脱水步骤制备成药物制剂，脱水方法包括减压蒸馏或喷雾干燥或冷冻干燥，所得成药物制剂的水分含量不超过5％。
本发明利用明胶多肽展开与再折叠的方法将药理活性物质微粒包入明胶多肽所构成的网格中，形成稳定的纳米粒制剂，相比现有技术使用人血液提取物提供白蛋白的方式来源更为丰富，而且格低更为廉，性能可靠。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1.明胶多肽溶液的制备
500g药用明胶用注射用水1.5L溶解，调节明胶溶液的pH值5.2，升温至100℃，保持温度2小时，停止加热，冷却至40℃，通过滤膜过滤除去分子量过大和过小的多肽组分，保留重均分子量为25,000～45,000道尔顿的部分，最后向溶液中加注射用水使明胶多肽的浓度为20％(g/100ml)，溶液pH值调至7.5。
实施例2.明胶多肽溶液的制备
500g药用明胶用注射用水1.5L溶解，调节明胶溶液的pH值为4.5，升温至120℃，保持温度1.5小时，停止加热，冷却至40℃，pH值调节至8.1，加琥珀酸酐2.0g，搅拌1.5小时，通过适当的滤膜过滤除去分子量过大和过小的多肽组分，保留重均分子量为25,000～45,000道尔顿的部分，最后向溶液中加注射用水使明胶多肽的浓度为20％(g/100ml)，溶液pH值调至7.6。
实施例3.紫杉醇-明胶多肽纳米粒的制备
取实施例1所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液(pH6.5)混合作为水相，另取240mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作为油 相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1200Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径190.6nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至35℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇8.91％(w/w)，水分含量＜4.1％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在65～152nm。
实施例4.紫杉醇-明胶多肽纳米粒的制备
取实施例2所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液(pH6.5)混合作为水相，另取130mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作为油相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1200Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径207.6nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至30℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇5.11％(w/w)，水分含量＜4.7％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在50～190nm。
实施例5.紫杉醇–明胶多肽纳米粒的制备
取实施例1所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液(pH6.5)混合作为水相，另取250mg紫杉醇溶于3.5ml氯仿作为油相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1300Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径201.3nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至30℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇9.81％(w/w)，水分含量＜4.5％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在90～197nm。
实施例6.紫杉醇-明胶多肽纳米粒的制备
取实施例2所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液 (pH6.5)混合作为水相，另取250mg紫杉醇溶于2.4ml氯仿作为油相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1300Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径167.1nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至35℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇10.01％(w/w)，水分含量＜4.0％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在50～153nm。
实施例7.多西紫杉醇-明胶多肽纳米粒的制备
取实施例2所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液(pH6.5)混合作为水相，另取250mg多西紫杉醇溶于2.4ml氯仿作为油相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1300Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径174.2nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至35℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇9.91％(w/w)，水分含量＜4.1％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在53～163nm。
实施例8.吲哚美辛-明胶多肽纳米粒的制备
取实施例2所制备的明胶多肽溶液55ml与65ml枸橼酸缓冲液(pH6.5)混合作为水相，另取200mg多西紫杉醇溶于2.4ml氯仿作为油相，油相和水相混合后转入高压均质机内(德国，APV-2000型)，在1300Bar压力下循环多次得到纳米乳剂，平均粒径181.2nm(美国布鲁克海文仪器公司，激光散射粒径检测仪检测)。无菌条件下迅速冷冻至-30℃，抽真空48小时，升温至35℃继续抽真空24小时。
所得冻干后的块状样品含紫杉醇10.03％(w/w)，水分含量＜4.7％，能够很容易的用水或生理盐水复溶为原溶液，且纳米粒粒径保持不变，主要分布在63～180nm。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并 不局限于此，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。