使用包含肉苁蓉属和银杏属提取物的组合物改善受试者的记忆的方法与流程

本申请要求2014年5月8日提交的美国专利申请号61/990,200和2014年11月18日提交的美国专利申请号62/081,104的优先权以及它们的所有利益，它们的内容在此通过引用并入。

技术领域

本发明一般地涉及用于改善受试者的记忆的方法和组合物。所述方法包括给所述受试者施用所述组合物的步骤。所述组合物基本上由肉苁蓉属（Cistanche）和银杏属（Ginkgo）提取物组成。

背景技术：

短期记忆由神经元通讯的短暂模式支持，依赖于额叶和顶叶的区域。另一方面，长期记忆由广泛地遍布于脑中的神经连接中的更稳定且持久的变化维持。据信，海马是信息从短期记忆至长期记忆的巩固所必需的，尽管它自身似乎并不存储信息。

已经做出许多努力来改善短期和长期记忆。例如，已经在改善脑健康和智力性能的努力中提供了饮食添加物。这方面的一个具体例子是“含有银杏属的Memory Builder™”饮食添加物，其来自NUTRILITE®of Buena Park, California, US。该饮食添加物呈由下述活性成分组成的片剂的形式：300 mg管花肉苁蓉（Cistanche tubulosa）提取物（根）和120 mg银杏（Ginkgo biloba）提取物（叶子）。

尽管已经做出许多努力，但是仍然存在提供用于改善脑健康、记忆形成和/或记忆保留的另外方法和组合物的机会。此外，存在逆转、减慢或预防记忆丧失的机会。

发明简述

公开了一种方法和一种组合物。所述方法和组合物可用于改善受试者的记忆。所述方法包括给所述受试者施用所述组合物的步骤。所述组合物基本上由肉苁蓉属提取物和银杏属提取物组成。在第一个总实施方案中，所述提取物以>2.5:1的重量比(肉苁蓉属:银杏属；或“C:G”)存在。在第二个总实施方案中，所述提取物以<2.5:1的重量比(C:G)存在。

在本公开内容的第一个总实施方案的不同实施方案中，所述组合物包含约72-99重量%的管花肉苁蓉提取物和约1-28重量%的银杏提取物。在这些实施方案中，所述管花肉苁蓉和银杏提取物以从2.6:1至20:1的重量比(C:G)存在。在本公开内容的第二个总实施方案的不同实施方案中，所述组合物包含约50-70重量%的管花肉苁蓉提取物和约30-50重量%的银杏提取物。在这些实施方案中，所述管花肉苁蓉和银杏提取物以从1:1至2.4:1的重量比(C:G)存在。所述管花肉苁蓉提取物通常得自根材料，且所述银杏提取物通常得自叶材料。

不受任何特定理论约束或限制，认为本公开内容的方法和组合物可用于改善脑健康、记忆形成和/或记忆保留。此外，认为本公开内容的方法和组合物可用于逆转、减慢或预防记忆丧失。

附图说明

当结合附图考虑时，通过参考以下详细描述会容易地理解本公开内容的其它优点，并更好地理解它们，在附图中：

图1A描绘了急性应用实施例的条形图；

图1B描绘了其它急性应用实施例的条形图；

图1C描绘了其它急性应用实施例的条形图；

图1D描绘了其它急性应用实施例的条形图；

图2描绘了慢性应用实施例的条形图；

图3描绘了慢性应用实施例的线图；

图4描绘了慢性应用实施例的条形图；

图5A是与实施例的半自动定量有关的图像；

图5B是与实施例的突触通道对应的图像；

图6图解了评估肉苁蓉属和银杏属和有效浓度范围的混合物的急性研究的实施例；

图7A是评估肉苁蓉属和银杏属的组合效应的研究的实施例的条形图；

图7B是进一步图解评估肉苁蓉属和银杏属的组合效应的研究的实施例的线图；

图7C是进一步图解评估肉苁蓉属和银杏属的组合效应的研究的实施例的线图；

图8图解了评估管花肉苁蓉提取物对神经元网络的成熟的慢性作用的研究的实施例；

图9图解了针对免疫组织化学分析的研究的实施例；

图10图解了管花肉苁蓉指纹；

图11图解了银杏指纹；

图12图解了表型筛选过程的步骤；

图13描绘了不同的神经元/神经胶质共培养物；

图14图解了神经元网络活动的多参数表征；

图15描绘了银杏实施例的急性应用的线图；

图16描绘了管花肉苁蓉实施例的急性应用的线图；

图17描绘了银杏属和肉苁蓉属混合物和浓度矩阵；

图18A描绘了图解实施例的慢性作用的条形图；

图18B描绘了图解实施例的慢性作用的另外条形图；

图19A是热图的第一部分；

图19B是图19A的热图的第二部分；

图20A是图解实施例对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图；

图20B是图解实施例对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图；

图20C是图解实施例对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图；

图20D是图解实施例对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图；和

图21是与实施例的半自动定量有关的图像。

具体实施方式

公开了一种方法和一种组合物。所述方法和组合物可用于改善受试者的记忆。所述方法包括给所述受试者施用所述组合物的步骤。不受任何特定理论约束或限制，认为本公开内容的方法和组合物可用于改善脑健康、记忆形成和/或记忆保留。此外，认为本公开内容的方法和组合物可用于逆转、减慢或预防记忆丧失。本文描述了其它潜在非限制性益处。

所述组合物基本上由肉苁蓉属提取物和银杏属提取物组成。本文中使用的短语“基本上由……组成”通常包括为特定实施方案明确地列举的要素/组分。此外，短语“基本上由……组成”通常包括不会实质上影响该特定实施方案的基本和/或新颖特征的另外或任选要素/组分且允许其存在。在某些实施方案中，“基本上由……组成”允许≤10重量%、≤5重量%或≤1重量%的另外或任选组分的存在，基于所述组合物的总重量。在其它实施方案中，所述组合物由如本文中所述的肉苁蓉属提取物和银杏属提取物组成。前述提取物在本文中可以被称作提取物、活性物或活性成分。在不同实施方案中，所述组合物的活性物由肉苁蓉属(或“草药肉苁蓉”)和银杏属(或“银杏叶”)提取物组成。

通常实质上影响本公开内容的方法/组合物的组分包括不同于肉苁蓉属提取物和银杏属提取物的活性成分。在某些实施方案中，本公开内容的组合物不含有其它活性成分。“其它活性成分”通常是指，所述组合物不含有不同于肉苁蓉属提取物和银杏属提取物的其它类型的传统中药(“TCM”；或“中药”)。本领域会理解其它类型的TCM。其它类型的TCM的例子在国际公开号WO01/22934A2中通常描述为“生物活性物质”，其内容通过引用整体并入。

在某些实施方案中，本公开内容的组合物可以包含如下所述的无活性成分。如果利用的话，所述无活性成分不同于肉苁蓉属、银杏属和其它活性成分。

通常不会影响本公开内容的方法/组合物的组分包括无活性成分。本领域会理解无活性成分，且其不同于活性成分，诸如上述的那些。无活性成分的例子包括、但不限于：调味剂；稻子豆；玉米糖浆，诸如水解的玉米糖浆固体；纤维素，诸如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、微晶纤维素和粉末状纤维素；果糖；麦芽糊精和麦芽酚，诸如天然的麦芽酚；山梨醇；防腐剂；醇类，诸如乙醇、丙醇和苯甲醇；甘油；山梨酸钾；苯甲酸钠；粘合剂；流动剂；硬脂酸盐，诸如硬脂酸钙、硬脂酸镁和硬脂酸镁钠（sodium magnesium stearate）；磷酸二钙；三乙酸甘油酯；植物油，诸如氢化植物油；矿物油；水；有机硅，诸如有机硅油；二氧化硅；硬脂酸；蜡类，诸如巴西棕榈蜡和蜂蜡；淀粉类，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；脂肪酸酯和脂肪醇；二醇类和聚二醇类；和它们的组合。如果用于形成组合物，所述无活性成分可以以不同的量使用。此外，应当理解，本文描述的活性物的量相对于所述组合物的100重量份而归一化，以说明无活性成分(如果利用的话)的存在。本公开内容不限于特定无活性成分或其量。

所述组合物包括肉苁蓉属提取物。所述肉苁蓉属提取物得自肉苁蓉属的植物材料。肉苁蓉属是唇形目（Lamiales）列当科（Orobanchaceae）中的全寄生荒漠植物的一个全球属。该属的著名种包括迷肉苁蓉（Cistanche ambigua）、肉苁蓉（C. deserticola）、C. phelypaea、盐生肉苁蓉（C. salsa）、沙苁蓉（C. sinensis）和管花肉苁蓉（C. tubulosa）。这些物种可以在中国和巴基斯坦的干旱地以及世界上的其它地方找到。在某些实施方案中，由于缺乏而不利用肉苁蓉（C. deserticola）。

在许多实施方案中，所述肉苁蓉属提取物是来自种Cistanche tubulosa（Shrenk.）Wight（也简称为Cistanche tubulosa（管花肉苁蓉））的提取物。根据中国药典，肉苁蓉（根）也可以被称作“草药肉苁蓉”。草药肉苁蓉也可以被称作Rou Cong Rong、肉苁蓉、苁蓉、大芸、荒漠生肉苁蓉、Cong Rong、肉蓯蓉、蓯蓉或大蕓。

如本文中使用的，对“肉苁蓉属提取物”的提及通常表示含有来自肉苁蓉属（包括来自管花肉苁蓉种）的材料的提取物。任选地，可以在管花肉苁蓉以外还使用其它肉苁蓉种或用于替代管花肉苁蓉；但是，管花肉苁蓉提取物的包含通常是优选的。所述肉苁蓉属提取物可以商业上得自不同资源。另外，通过使用任何常规提取技术，包括、但不限于一种或多种在下面进一步描述的技术，可以得到合适的肉苁蓉属提取物。

肉苁蓉属植物的任何部分可以用于得到在所述组合物中使用的提取物，包括、但不限于，根、茎、根茎、叶、花、果实和/或这些部分的提取物。肉苁蓉属活性物通常存在于肉苁蓉属植物的根中，且因此，根提取(或根提取物)就本公开内容的目的而言通常是最有用的。肉苁蓉属可以以未加工形式、悬浮形式、脱水形式、浓缩形式或提取物形式使用。在具体实施方案中，所述肉苁蓉属提取物得自肉苁蓉属植物的根材料，例如得自一个或多个管花肉苁蓉植物的根材料。

肉苁蓉属根的提取物可能含有多种活性物(或植物化学物质)，诸如苯乙醇苷类（phenylethanoid glycosides）。不受任何特定理论约束或限制，认为肉苁蓉属的活性组分对神经元健康具有积极作用，特别是作为抗氧化的神经保护剂和作为内皮依赖性的松弛剂来帮助促进向脑的最佳血液流动。此外，肉苁蓉属支持神经元强度的机制被设置成通过增加神经元生长因子和抑制神经递质故障。

在不同实施方案中，所述肉苁蓉属提取物包含至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60或至少约70%的量的至少一种苯乙醇苷或其混合物。此外，所述肉苁蓉属提取物包含至少约1%、至少约2%、至少约3%、至少约4%、至少约5%、至少约6%、至少约7%、至少约8%、至少约9%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35或至少约40%的量的至少一种麦角甾苷（acteoside）、肉苁蓉苷、海胆苷或异麦角甾苷或其混合物。在所有这些实施方案中，上边界是100%。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

所述组合物还包括银杏属提取物(其也可以被称作“白果提取物”或“银杏树”提取物)。所述银杏属提取物得自银杏属的植物(或树)材料。银杏属是银杏目（Ginkgoales）银杏科（Ginkgoaceae）中的植物的一个全球属。该属的著名种包括Ginkgo(G.) aditantoides、无柄银杏（G. apodes）、银杏（G. biloba）、G. cranei、指状银杏（G. digitata）、G. dissecta、G. gardneri、G. ginkgoidea、G. huolinhensis、胡顿银杏（G. huttonii）和义马银杏（G. yimaensis）。这些种可以见于中国和世界上的其它地方。

在许多实施方案中，所述银杏属提取物是来自银杏种的提取物。根据中国药典，银杏属(叶子)也可以被称作“银杏叶”。银杏叶也被称作银杏叶、银杏属叶、白果叶、銀杏葉、白果葉或银杏叶（Folium Ginkgo）。银杏属(坚果)也可以被称作白果，尽管银杏叶通常比白果优选。

如本文中使用的，对“银杏属提取物”的提及通常表示含有来自银杏属（包括来自银杏种）的材料的提取物。任选地，可以在银杏以外还使用其它银杏属种或替代银杏；但是，银杏提取物的包含通常是优选的。银杏属提取物可以商业上得自不同资源。另外，通过使用任何常规提取技术，包括、但不限于一种或多种在下面进一步描述的技术，可以得到合适的银杏属提取物。

银杏属植物的任何部分可以用于得到在所述组合物中使用的提取物，包括、但不限于，根、茎、根茎、叶、花、果实和/或这些部分的提取物。银杏属活性物通常存在于银杏属植物的叶中，且因此，叶提取(或叶提取物)就本公开内容的目的而言通常是最有用的。银杏属可以以未加工形式、悬浮形式、脱水形式、浓缩形式或提取物形式使用。在具体实施方案中，所述银杏属提取物得自银杏属植物的叶材料，例如得自一个或多个银杏(即，Ginkgo biloba L.)植物的叶材料。

银杏属叶的提取物可以含有多种活性物(或植物化学物质)，诸如黄酮苷(例如杨梅黄酮和槲皮素)和萜类化合物(例如银杏苦内酯和白果内酯)。银杏属植物材料还可以含有萜三内酯(例如银杏苦内酯A、B、C、J和白果内酯)、黄酮醇苷、双黄酮、原花青素、烷基苯酚、简单酚酸、6-羟基犬尿喹啉酸、4-O-甲基吡多素和聚戊二烯醇。不受任何特定理论约束或限制，认为银杏属的活性组分会改善向脑的血液流动和充当抗氧化剂。另外，认为还可以改善记忆和认知速度。

在不同实施方案中，所述银杏属提取物包含至少约1%、至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约22%、至少约24%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、或至少约40%的量的至少一种类黄酮或其混合物。此外，所述银杏属提取物包含至少约0.1%、至少约0.5%、至少约1%、至少约2%、至少约3%、至少约4%、至少约5%、至少约6%、至少约7%、至少约8%、至少约9%、至少约10%、至少约15%、或至少约20%的量的至少一种萜类化合物或其混合物。在所有这些实施方案中，上边界是100%。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在本公开内容的第一个总实施方案(“第一个实施方案”)中，所述提取物以>2.5:1的重量比(肉苁蓉属:银杏属；或“C:G”)存在。换而言之，肉苁蓉属提取物的存在量超过银杏属提取物的量的2.5倍。通常，所述重量比是2.6:1至20:1、2.8:1至15:1、3:1至9:1、3:1至8:1、3:1至7:1、3:1至6:1、3:1至5:1、3:1至4:1、或3:1。可选地，所述重量比是2.6:1至20:1、2.8:1至15:1、3:1至9:1、4:1至9:1、5:1至9:1、6:1至9:1、7:1至9:1、8:1至9:1、或9:1。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在第一个实施方案的不同实施方案中，所述肉苁蓉属提取物以约72-99重量%、约73-98重量%、约74-97重量%、约75-96重量%、约75-95重量%或约75-90重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。在具体实施方案中，所述肉苁蓉属提取物以约72-99重量%、约75-98重量%、约80-97重量%、约85-96重量%、约90-95重量%、或约90重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。在其它具体实施方案中，所述肉苁蓉属提取物以约72-99重量%、约73-95重量%、约74-90重量%、约75-85重量%、约75-80重量%、或约75重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

此外，所述银杏属提取物以约1-28重量%、约2-27重量%、约3-28重量%、约4-27重量%、约5-26重量%、约6-25重量%、约7-25重量%、约8-25重量%、约9-25重量%或约10-25重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。在具体实施方案中，所述银杏属提取物以约1-28重量%、约2-25重量%、约3-20重量%、约4-15重量%、约5-10重量%、或约10重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。在其它具体实施方案中，所述银杏属提取物以约1-28重量%、约5-27重量%、约10-26重量%、约15-25重量%、约20-25重量%或约25重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在第一个实施方案的某些实施方案中，所述组合物包含约72-99重量%的管花肉苁蓉提取物和约1-28重量%的银杏提取物。所述管花肉苁蓉和银杏提取物以从2.6:1至20:1的重量比(C:G)存在。此外，所述管花肉苁蓉提取物得自根材料，且所述银杏提取物得自叶材料。在具体实施方案中，所述管花肉苁蓉提取物以约90重量%的量存在，且所述银杏提取物以约10重量%的量存在，各自基于所述组合物的100重量份。在其它具体实施方案中，所述管花肉苁蓉提取物以约75重量%的量存在，且所述银杏提取物以约25重量%的量存在，各自基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在本公开内容的第二个总实施方案(“第二个实施方案”)中，所述提取物以<2.5:1的重量比(C:G)存在。换而言之，所述肉苁蓉属提取物的存在量小于银杏属提取物的量的2.5倍。通常，所述肉苁蓉属提取物的存在量等于或大于、更通常地大于银杏属提取物的量。通常，所述重量比是1:1至2.4:1、3:2至7:3、2:1至7:3、2.1:1至7:3、2.2:1至7:3、2.3:1至7:3、或7:3。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在第二个实施方案的不同实施方案中，所述肉苁蓉属提取物以约50-70重量%、约55-70重量%、约60-70重量%、约65-70重量%、或约70重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

此外，所述银杏属提取物以约30-50重量%、约30-45重量%、约30-40重量%、约30-40重量%、约30-35重量%、或约30重量%的量存在，基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在第二个实施方案的某些实施方案中，所述组合物包含约50-70重量%的管花肉苁蓉提取物和约30-50重量%的银杏提取物。所述管花肉苁蓉和银杏提取物以从1:1至2.4:1的重量比(C:G)存在。此外，所述管花肉苁蓉提取物得自根材料，且所述银杏提取物得自叶材料。在具体实施方案中，所述管花肉苁蓉提取物以约70重量%的量存在，且所述银杏提取物以约30重量%的量存在，各自基于所述组合物的100重量份。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

在不同实施方案中，所述肉苁蓉属提取物以至少约1 mg、至少约5 mg、至少约10 mg、至少约15 mg、至少约20 mg、至少约25 mg、至少约50 mg、至少约100 mg、至少约150 mg、至少约200 mg、至少约250 mg、至少约300 mg、至少约350 mg、至少约400 mg、至少约450 mg或至少约500 mg的量存在，基于所述组合物的总重量。在这些实施方案中，上边界通常是≤5,000 mg、≤4,000 mg、≤3,000 mg、≤2,500 mg、≤2,000 mg、≤1,500 mg、≤1,000 mg、≤750 mg、或≤500 mg肉苁蓉属提取物，基于所述组合物的总重量。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

令人惊奇地发现，相对于银杏属提取物而言更大量的肉苁蓉属提取物会提供协同益处。具体地，发现本文描述的提取物组合/混合物会提供对神经元细胞信号传递的有益效果。此外，意外地发现，相对于肉苁蓉属提取物而言过量(例如50%或更大)的银杏属提取物可以实际上具有有害作用，具体地，通过充当期望的神经元细胞信号传递的抑制剂。在下面的实施例部分中描述了其它发现。

通过本领域理解的常规提取方法，诸如通过水(例如蒸汽)提取或通过溶剂(例如醇)提取，可以得到所述提取物。本公开内容的组合物不限于特定提取方法，也不限于需要的提取，因为合适的提取物(例如标准化的提取物)容易从许多商业供应商得到，诸如从中国杭州的杏辉天力(杭州)药业有限公司（Sinphar Tian-Li Pharmaceutical）和从中国北京的北京绿色金可生物技术股份有限公司（Beijing Gingko group）。示例性地，在下面描述了提取方法。

为了得到提取物，可以使用极性溶剂诸如醇(例如甲醇、乙醇、丁二醇)、醚(例如乙醚)、酮(例如丙酮)、酯(例如乙酸乙酯)、水或其混合物作为溶剂。通过用非极性溶剂从极性溶剂进一步萃取所述提取物，也可以得到某些提取物。合适的非极性溶剂包括、但不限于乙酸乙酯、己烷、二氯甲烷、氯仿或其混合物。

存在多种可以用于生产适合用于所述组合物的提取物的提取方法。这些方法包括、但不限于在美国专利号7,897,184中公开的提取方法，所述专利在此通过引用整体并入并在下面关于一些提取方法部分地再现。尽管描述的提取溶剂具体地提及乙醇，但是应当理解，可以在乙醇以外额外使用其它醇（例如，但不限于，异丙醇、乙醇和/或甲醇）或作为乙醇的替代。示例性的醇溶剂包括、但不限于：C₁-C₄醇，诸如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丁醇；氢-醇或醇和水的混合物，包括氢-乙醇；多元醇，诸如丙二醇和丁二醇；和脂肪醇。可以使用这些醇溶剂中的任一种。其它溶剂（例如，但不限于，丙酮）也可以用作提取溶剂。也可以使用任意比例的溶剂-水掺合物，例如醇-水和/或丙酮-水掺合物。

在一个实施例中，使用有机溶剂提取技术可以得到所述提取物。在另一个实施例中，溶剂连续分级分离可以用于得到所述提取物。全氢-乙醇提取技术也可以用于得到所述提取物。通常，这被称作一次性（lump-sum）提取。在所述方法中产生的提取物将含有多种存在于提取的材料中的植物化学物质，包括脂肪和水溶性的植物化学物质。在收集提取物溶液以后，蒸发溶剂，从而产生提取物。

还可以使用全乙醇提取。该技术使用乙醇作为溶剂。除了水溶性的化合物以外，该提取技术产生的提取物可能还包括脂溶性的和/或亲脂的化合物。还可以以类似的方式使用全甲醇提取并获得类似的结果。

可以用于得到所述提取物的提取技术的另一个例子是超临界二氧化碳超临界流体提取(“SFE”)。在该提取规程中，要提取的材料没有暴露于任何有机溶剂。相反，提取溶剂是处于超临界条件(例如>31.3℃且>73.8巴)的二氧化碳(CO₂)，含有或不含改性剂。本领域技术人员会明白，可以改变温度和压力条件以得到最佳的提取收率。类似于也可以使用的全己烷和乙酸乙酯提取技术，该技术会产生脂溶性的和/或亲脂的化合物的提取物。

使用本领域中理解的多种方法，可以制备组合物。例如，利用本领域中理解的多种技术，可以将所述组合物的活性物和任选的一种或多种无活性物混合或掺合并压制或复合。本公开内容的组合物不限于生产步骤的特定次序或生产方法。

通常，口服地例如经由口(或“口服”)施用(或摄入)所述组合物。更通常地，通过肠例如经由胃肠(GI)道(或“肠”)施用(或摄入)所述组合物的至少一部分。所述受试者通常是人，且可以包括不同年龄的男性和女性。本公开内容的方法/组合物不限于特定受试者。

所述组合物可以呈不同的形式。适合形式的例子包括固体、凝胶和液体。通常，所述组合物是固体。例如，所述组合物可以呈丸剂（包括片剂、胶囊剂和囊片）的形式。一般而言，这些术语中的每一个可以在本领域中可互换地使用，例如片剂替代丸剂，或反之亦然。除了肉苁蓉属和银杏属提取物(即，“活性物”或“活性成分”)以外，所述组合物可以包括无活性物(或“无活性成分”)，包括、但不限于，赋形剂，诸如稀释剂和粘合剂；造粒剂；助流剂(或流动助剂)；填充剂；润滑剂；防腐剂；稳定剂；包衣剂；崩解剂；甜味剂或矫味剂；和颜料。上面描述了无活性成分的其它例子。一般而言，赋形剂的数目和量应当保持在最小，只要适当地递送活性成分即可。这是因为，受试者/消费者倾向于偏好更小的片剂以更容易消费。

所述组合物可以呈粉末形式，或从粉末压制或紧密结合成固体剂。可以使用包衣（例如聚合物包衣）来使片剂更光滑和更易于吞咽，以控制活性物的释放速率、增加复原性(或贮存期限)和/或增强外观。所述组合物的其它合适口服形式包括糖浆剂、酏剂、混悬液和乳剂。后面描述了本公开内容的组合物的其它非限制性实施方案。

一般而言，片剂会提供固体剂型通过口服途径的递送。通常，片剂制剂的主要目的是将活性成分递送给受试者/消费者。无活性成分是通常用作用于递送活性成分的载体和制剂支持物的无活性物质。无活性成分可以为了多种原因而使用，所述原因包括处理小量(低mg和mcg剂量)的活性成分、准确定量施用、稳定化不稳定的活性成分、活性成分在胃中降解、稀释活性成分以防止潜在胃肠道损伤和/或掩蔽活性成分的令人不悦的器官感觉特性(味道和气味)。

活性成分必须变成受试者/消费者可生物利用的。为此目的，活性成分必须首先溶解并释放进身体中。关于体外溶解，美国药典(“USP”)使用以下用于确定剂型的体外溶解特性的术语：立即释放、延长释放和延迟释放。

活性成分的体内释放概况可以是常规的(未修饰的)释放、或控释/持续释放(CR/SR)、限时释放、靶向释放或延长释放。对于CR/SR，零级动力学是理想的释放概况。CR/SR概况通常可以以两种方式实现：(1)基质，其中将活性成分分散在聚合物(实施例：71G NF聚羧乙烯®聚合物，Lubrizol Advanced Material Inc.)内，或(2)蓄池，其中活性成分和无活性成分形成核心，所述核心被一层或多层膜包裹。有时，使用不同机制的组合(例如：来自SCOLR Pharma的CDT®受控递送技术，其使用基质侵蚀、凝胶厚度的变化、电解质电离和离子相互作用机制)。

还可以为了生物利用度而增强所述体内释放。几种因素可以影响活性成分的生物利用度，包括从递送系统的释放速率、活性成分在胃肠道中的降解和跨肠粘膜层的差渗透性。已经在临床试验中证实一些天然化合物会增强许多饮食成分的生物利用度，例如，来自Sabinsa的BioPerine®。

可以以不同的量施用所述组合物。在某些实施方案中，以给受试者提供至少约1 mg、至少约5 mg、至少约10 mg、至少约15 mg、至少约20 mg、至少约25 mg、至少约50 mg、至少约100 mg、至少约150 mg、至少约200 mg、至少约250 mg、至少约300 mg、至少约350 mg、至少约400 mg、至少约450 mg或至少约500 mg肉苁蓉属提取物的量施用所述组合物。在这些实施方案中，给受试者施用的上边界通常是≤5,000 mg、≤4,000 mg、≤3,000 mg、≤2,500 mg、≤2,000 mg、≤1,500 mg、≤1,000 mg、≤750 mg或≤500 mg肉苁蓉属提取物。预见到，还可以利用在上述那些之间的任意的和所有的值或值范围。

可以根据需要每天1次、每天几次或以任意合适的方案施用所述组合物，从而实现期望的结果。在本公开内容的方法中，施用(例如摄取和/或消化)的频率可以取决于几种因素，包括期望的记忆改善水平。通常，方案包括每天施用所述组合物一次或两次，包括在早晨施用和/或在晚上施用。施用的组合物的量可能取决于几种因素，包括期望的结果的水平和具体的组合物。

所述组合物可以用于改善受试者的记忆。在不同实施方案中，将所述组合物定期（可选地每天）施用给受试者，作为用于改善受试者记忆的营养补剂方案的组成部分。在这些实施方案中，例如可以每天施用所述组合物的一个或多个片剂。通常，所述组合物(例如以片剂形式)的摄取与膳食同时。不受任何特定理论约束或限制，认为银杏属(银杏)的摄取会提供对智力性能的快速支持，通常在摄取以后4-6小时，尽管肉苁蓉属(管花肉苁蓉)可以在摄取以后较长的时间段或数周的时段内改善记忆、聚焦和/或回忆。

例证本公开内容的组合物和方法的下述实施例意图例证且不是限制本发明。肉苁蓉属提取物在不同的实施例或附图中可以简称为“C”、“CHE”或“CT”。此外，银杏属提取物在不同的实施例或附图中可以简称为“G”或“GB”。

实施例

配制和分析了本公开内容的许多代表性组合物。此外，相对于前述组合物分析和对比了许多比较化合物。在附图中一般地图示了多种发现/结果和测试方法，它们在下面更详细地描述。

利用微电极阵列(MEA)神经芯片来分析不同的实施例。具体地，MEA神经芯片的应用使得能够刺激生物电并以高空间和时间分辨率记录生物电，以搜集肉苁蓉属和银杏属提取物（单独地和组合地，和与神经元生长因子一起）的神经活性。

MEA神经芯片可得自德国Rostock的NeuroProof GmbH。使用它们的诱导在MEA神经芯片上生长的神经元网络的活性变化的能力，可以评价化合物的电生理学性能。哺乳动物神经元网络的内部动力学的常规监测是可能的。在高密度MEA神经芯片上的神经元网络的生长会产生杂合测试平台，其允许连续且同时监测来自大量细胞的波峰活性数周或甚至数月。细胞外MEA-神经芯片记录的优点是来自多个体外部位的长期记录和在几百个细胞之间的信号传递的监测的可能性。因此，MEA神经芯片能够在单细胞和整个网络水平实时分析动作电位模式，同时提供用于观察网络体系结构和生长的光学通路。

来自2个主要实验区域的数据表明：1)银杏属和肉苁蓉属提取物一起在特定比例的急性应用会表现出对神经元细胞信号传递的协同效应；和2)肉苁蓉属的慢性治疗会改变神经元对神经生长因子(“NGF”)的应答（相对于单独的NGF）。

结果：急性应用

图1A描绘了急性应用实施例，具体地是来自银杏属、肉苁蓉属、及其五种混合物的等幅射分析的条形图。发现所述混合物中较高比例的银杏属会增加抑制作用的效能，这通过在混合物的较低总浓度(例如20-50µg/ml)时的效应证实。

图1B还描绘了急性应用实施例，具体地是表明混合物中较高比例的肉苁蓉属导致较高效应大小的条形图。在100µg/ml的浓度，对于含有100%、90%和75%肉苁蓉属的混合物观察到第一活性增强效应。这些效应的特征在于增加的一般活性、突发结构（burst structure ）的强化和同步性的强化。

图1C还描绘了急性应用实施例，具体地是表明所述增强作用随着上升的肉苁蓉属浓度（直到250µg/ml）而增加的条形图。

图1D还描绘了急性应用实施例，具体地是来自银杏属(“G”)、肉苁蓉属(“C”)和它们的五种混合物的等幅射分析的条形图，其表明银杏属/肉苁蓉属的25%/75%(G:C)和甚至进一步所以10%/90%(G:C)混合物在100µg/ml、150µg/ml和250µg/ml的浓度似乎具有网络模拟的增强作用。

结果：慢性应用

图2描绘了慢性应用实施例，具体地是表明在4-28天中用300 nM多奈哌齐(“DPZ”)或30µg/ml肉苁蓉属(“CHE”)对海马培养物的慢性治疗会在两个治疗组中在体外增强自发网络活性的条形图。但是，与多奈哌齐相比，肉苁蓉属会诱导更强的活性变化。

图3还描绘了慢性应用实施例，具体地是表明在4-28天中用300 nM多奈哌齐或30µg/ml肉苁蓉属对海马培养物的慢性治疗在体外补偿抑制性急性NGF应答的线图。但是，与多奈哌齐相比，肉苁蓉属会诱导NGF效应的更强急性补偿。

图4还描绘了慢性应用实施例，具体地是表明在4-28天中用300 nM多奈哌齐或30µg/ml肉苁蓉属对海马培养物的慢性治疗会在体外诱导总突触数目的增加的条形图。但是，仅肉苁蓉属相对地增加每个神经突的突触数目。

图5A是与神经元/图像、神经突/图像、突触/图像和突触/神经突比率的半自动定量有关的一个实施例图像。所述图像描绘了突触(绿色)、神经突(红色)、细胞核(蓝色)的颜色-归并，条= 50µm。

图5B是与突触通道对应的一个实施例图像：颜色反转并针对突触颗粒进行分析(自动阈值、颗粒分离和大小过滤器以后标记为红色)。

方法

通过评价草药提取物(即，银杏属和肉苁蓉属)，研究聚焦于提示记忆增强的神经元网络活动的增加。所述方法通常包括下述的四个步骤。

步骤1：评估有效浓度范围的急性研究

将来自额皮质和海马的原代混合神经元/神经胶质培养物铺板在MEA神经芯片上并培养至少4周。急性应用：除了每种单独的以外，针对含有不同百分比的肉苁蓉属(10-90%)和银杏属(余量)的混合物，分析了肉苁蓉属和银杏属之间的相互作用的效应。

图6图解了评估有效浓度范围的急性研究的实施例。执行了7个不同浓度应答系列(垂直)，都具有相同的5种浓度(水平)。

步骤2：评估银杏属和肉苁蓉属的组合效应

图7A图解了评估银杏属和肉苁蓉属的组合效应的研究的实施例，具体地是基于来自一次一种浓度的所有混合物的数据点的条形图(天然= 100%)。该图通常显示了相对于“天然”的统计数字。

图7B进一步图解了评估组合效应的研究的实施例，具体地是基于来自一种浓度的所有混合物的数据点以及银杏属和肉苁蓉属之间的假定线性趋势的线图(天然= 0%)。该图通常显示了相对于线性趋势的统计数字。

图7C进一步图解了评估组合效应的研究的实施例，具体地是指向去趋势数据的线图，从而产生相对于所述趋势的差异，并重叠所有混合物。

步骤3：评估管花肉苁蓉提取物对神经元网络的成熟的慢性作用

图8图解了评估管花肉苁蓉提取物对神经元网络的成熟的慢性作用的研究的实施例。用30µg/ml肉苁蓉属、300 nM多奈哌齐或二甲亚砜(“DMSO”)媒介物对照处理MEA神经芯片上的海马培养物。在重复剂量慢性治疗以后28天，测量自发活性，随后将活性记录至急性NGF浓度-响应曲线。

步骤4: 免疫组织化学分析

图9图解了指向免疫组织化学分析的研究的实施例。通过免疫细胞化学、荧光显微术和半自动定量图像分析进一步分析了记录的培养物。针对每个图像的以下项目，定量图像：细胞数目、神经元数目、神经突数目、突触数目、%神经元、每个神经元的神经突和每个神经元的突触。

HPLC指纹法

图10图解了管花肉苁蓉指纹。具体地，使用高效液相层析(“HPLC”)对管花肉苁蓉标准化。将提取物标准化至70%苯乙醇苷类(由至少25%海胆苷、acetoside、异麦角甾苷和verbacoside组成)。

图11图解了银杏属指纹。具体地，使用HPLC对银杏属标准化。将提取物标准化至24%黄酮苷和6%萜内酯。

使用MEA神经芯片的表型筛选

使用MEA神经芯片记录来评价CT和GB的两种培养的、标准化的提取物的不同浓度和组合引起的海马网络中的活性变化，其中有和没有NGF的急性应用。

图12图解了利用MEA神经芯片的表型筛选过程的步骤。所述步骤包括：1)神经元细胞培养；2)表型多通道记录；3)多参数数据分析；和4)模式识别。在下面详述了图12的这些步骤/方面的每一个。

1) 原代鼠细胞培养：额皮质、海马和下丘脑。

2) 网络波峰串和单个神经元动作电位。时空网络活性模式的高分辨率。

3) 200个活性参数：一般活性；突发结构；同步化/连接性；和振荡。具有化合物或疾病相关的参数选择的具体体外测定。

4) 具有超过100个基础和临床化合物的功能指纹的数据库。来自已知化合物作用的相似性和分化。组合作用。

图13描绘了在MEA神经芯片上的神经元/神经胶质共培养物。最左边的图像描绘了GABAA受体(α1，红色)、神经元(TuJ，绿色)和细胞核(蓝色)；从左边第二个图像描绘了神经元、神经元体细胞(HuCD，红色)和细胞核；从右边第二个图像描绘了少突胶质细胞(O4，红色)、神经元和细胞核；且最右边的图像描绘了星形胶质细胞(GFAP，红色)、小胶质细胞(凝集素，绿色)和细胞核。

表征：在含有血清的培养基中的神经元和神经胶质细胞的共培养物，例如在MEA神经芯片上的额皮质培养物中的细胞群体(28次分裂): 神经元(~20%)、星形胶质细胞(~70-80%)、小胶质细胞(~1-2%)、少突胶质细胞(存在，可忽略)。

图14图解了神经元网络活动的多参数表征。

读出：在单个神经元和网络活性水平的细胞外动作电位；在波峰和突发的时间尺度上的时空网络活性变化。用200个活性参数以4个类别描述波峰串：1. 一般活性，例如波峰比率、突发比率、突发时段和在突发中的波峰的百分比；2. 突发结构，例如在突发中的波峰的数目、频率和ISI、突发持续时间、振幅、面积、平台位置和平台持续时间；3. 振荡，例如随时间的变化，作为振荡强度的指示；与自相关图拟合的Gabor函数；和4. 同步性/连接性，例如在网络内的变化，作为同步化的强度、单纯同步化和在同步化的突发中的单位的百分比的指示。

银杏和管花肉苁蓉的急性应用

由A) GB和B) CT和它们各自的DMSO对照浓度在体外海马网络活性上诱导的急性浓度依赖性作用的对比。显示了从10 pg/ml至100µg/ml的9种浓度处理的4个类别(一般活性、突发结构、振荡和同步化)中的6种活性描述参数(平均值±标准误差，银杏属：n=5，肉苁蓉属：n=8，DMSO：n=5。Student氏不成对t检验：*p≤0.05；**p≤0.01；***p≤0.001)。

图15描绘了图示银杏属的急性应用会诱导突发结构中轻度浓度依赖性的活性变化的线图。图16描绘了图示管花肉苁蓉的急性应用会诱导突发结构中轻度浓度依赖性的二相性活性变化的线图。

等幅射分析

图17描绘了与一般活性(“GA”)、突发结构(“BS”)、振荡(“OS”)和同步性(“SY”)有关的银杏属和肉苁蓉属混合物以及浓度矩阵。

为了制备矩阵，将来自浓度响应曲线的数据颜色编码为相对于天然的增加或减少。接着，将来自所有混合物和所有浓度的结果组合在基质中。接着，在200中，将描述GA、BS、OS和SY的有关活性特征与参比指纹进行对比。

较高百分比的GB在总化合物的较低浓度诱导变化。递增量的GB (>50%)引起一般活性的抑制，且当GB:CT是75%/25%时，令人惊讶地，抑制效能与单独GB相比增加5倍。含有递增CT的混合物增强网络刺激，在10%/90%GB:CT和100µg/ml、150µg/ml和250µg/ml是最明显的。

慢性作用

图18A描绘了图示慢性作用的条形图。具体地，对30µg/ml管花肉苁蓉(“CT”)、以90%:10%或70%:30%的比率的两种CT和银杏(“GB”)混合物(各自在10µg/ml或30µg/ml)、或0.021%DMSO媒介物对照的天然活性的慢性作用。

图18B描绘了图示慢性作用的另外条形图。在所有条形图中，最左边的条是0.021%DMSO，从左边的第二个条是在GB10+CT90的10µg/ml，从左边的第三个条是在GB10+C90的30µg/ml，从右边的第三个条是在GB30+CT70的10µg/ml，从右边的第二个条是在GB30+CT70的30µg/ml，且最右边的条是在100%CT的30µg/ml。(平均值±标准误差，student氏t-检验：*p≤0.05；**p≤0.01；***p≤0.001)。

单独的CT通过强化的突发活性导致自发活性的增加，特别是突发惊奇的增加和在突发中分组的总波峰的百分比的增加。10µg/ml的70:30混合物(CT:GB)的慢性治疗造成网络活性变化，特别是波峰比率的增加、事件比率的下降和突发结构的松动。

热图绘制

图19A是热图的第一部分，且图19B是热图的第二部分。所述热图图解了急性小鼠神经生长因子(“mNGF”)对慢性治疗的海马培养物（含有上面关于图18描述的混合物或组分）的网络活性的浓度依赖性作用。

所述热图图解了对于每种mNGF浓度（从3 ng/ml至1µg/ml）关于60个最有代表性的参数的显著变化。根据变化百分比(100:无变化)，活性参数的颜色代码变化，黄色/红色= 增加，且绿色/蓝色= 减少。

单独的NGF诱导一般活性的抑制。单独的慢性CT补偿在NGF以后看到的抑制。在两种浓度的GB30:CT70的混合物引起来自单独CT的相反作用，因为它会增强急性mNGF效应。

慢性应用的作用

图20A是图解就细胞总数/视野而言对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图。图20B是图解就神经元百分比而言对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图。图20C是图解就神经炎密度而言对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图。图20D是图解就突触数目/视野而言对海马网络形态学的慢性应用效果的条形图。图20的混合物或组分如上面关于图18所述。

通过免疫细胞化学、荧光显微术和形态学发现的定量图像分析进一步分析了记录的培养物。半自动定量(平均值±SEM，student氏t-检验：*p≤0.05；n=3，各自具有10-20个图像)。

图21是与总细胞/视野、神经元的百分比、神经炎密度和突触数目/视野的半自动定量有关的图像。最左边的图像对应于突触(绿色)、神经炎(红色)和细胞核(蓝色)的颜色-归并。最右边的图像对应于突触通道：颜色反转并针对突触颗粒进行分析。分析以后，在CT 30µg/ml处理过的培养物中定性地观察到较高的数目或突触。

单独的CT没有增加神经元细胞数目，但是事实上增加总突触的数目以及每个神经突的突触的数目。在30µg/ml的CT70:GB30也诱导形态学效应，如增加的神经元百分比(+27%)和增加的突触数目（相对于神经炎密度增加了31%）所证实的。

非限制性的理论、实施例/分析和结论的概述

在本公开内容之前，没有清楚地阐明肉苁蓉属和银杏属提取物对神经活性的影响。如上所述，使用MEA神经芯片记录来评价CT和GB的两种培养的、标准化的提取物的不同浓度和组合引起的海马网络中的活性变化。急性应用至4周龄原代海马培养物以后，多参数分析揭示CT和GB都诱导在4个功能活性类别（GA、BS、OS和SY）内的轻度的、但是可测量的活性变化。

等幅射方案揭示，当GB/CT组合由10-25%GB (余量为CT)组成时，在特定浓度时GB和CT之间的相互作用在100µg/ml变得最明显，其中10%GB的作用是最显著的。该浓度和组合会增加进入突发中的波峰组构、诱导更强的BS和增加的突发规律性和SY。递增量的GB (>50%)引起GA的抑制。此外，当GB:CT是75/25%时，GB的效能比单独GB增加5倍。含有递增CT的混合物会增强网络刺激，在10%/90%(GB:CT)和100µg/ml、150µg/ml和250µg/ml是最明显的。

在体外4-28天对MEA神经芯片上的海马培养物的慢性CT处理(30µl/ml)通过强化的突发活性导致自发活性的增强。与应用至媒介物处理过的培养物的NGF的应答相比，急性应用至CT处理过的培养物的NGF进一步增加应答，特别是增加GA、延长突发持续时间、增加模式规律性、和改善网络内的SY。

通过免疫细胞化学、荧光显微术和形态学发现的定量图像分析来进一步分析记录的培养物。用CT慢性治疗海马网络没有增加神经元细胞数目，但是事实上增加总突触的数目以及每个神经突的突触的数目。这些发现支持以下观点：CT和GB是神经活性的并与神经系统内的内源性生长因子相互作用。此外，已经证实，使用CT的慢性重复剂量处理会诱导形态学改变和增加体外海马网络活性。

银杏属和肉苁蓉属提取物对神经元活化的协同效应

以上实施例提供了科学证据来支持银杏属和肉苁蓉属对体外神经元网络活动的协同相互作用，并科学地支持银杏属和肉苁蓉属组合在人类中的定位。此外，以上实施例例证了肉苁蓉属的记忆改善的作用机理。

一个惊人的且深远的发现是，银杏属以协同方式支持肉苁蓉属的作用，并且在体外使用肉苁蓉属的慢性治疗诱导突触的总数目和每个神经突的突触数目的增加。这允许神经元信号的空间和时间固结，其已知在长期增强(LTP)（即记忆的神经关联）中起关键作用。

发现的结果等于或优于来自阳性对照药物化合物(即，多奈哌齐；商业名称Aricept)的结果，所述阳性对照药物化合物作为乙酰胆碱酯酶(AChE或乙酰基水解酶)抑制剂被广泛销售用于增强认知。

神经元数据收集和分析

用模板匹配算法实时完成记录递送的单个神经元波峰数据的多通道以及波峰鉴别和分离，以同时允许来自256个神经元的动作电位的细胞外记录。将动作电位或“波峰”记录在波峰串中并簇集在突发中，其可以通过直接波峰串分析来定量地描述。网络活性模式的高容量分析会提供以4个类别（GA、BS、SY和OS）表征活性的多参数描述。从该分析所产生的波峰串，为这4个类别中的每一个确定共计200个描述活性的波峰串参数。

使用这些方法的优势发现- 急性应用至细胞培养物

急性应用至神经元培养物的肉苁蓉属和银杏属提取物都影响网络活性，肉苁蓉属比银杏属更甚，其中肉苁蓉属改变GA和BS，但是银杏属仅轻度地改变BS。此外，在参数转移方向上在为了认知改善而销售的药物(即，多奈哌齐)和肉苁蓉属的作用之间观察到相似性，但是该参数转移在银杏属的急性应用以后没有看到。

对于肉苁蓉属和银杏属的混合物观察到如下活性增强作用：10%和25%银杏属(余量为肉苁蓉属)使得神经元对肉苁蓉属的作用更敏感，因为在较低的总浓度诱导了GA、BS的强化和较强的SY。此外，在该稀释度(10-25%银杏属和90-75%肉苁蓉属)，以较高的效应大小增强网络刺激。

使用这些方法的优势发现- 慢性应用至细胞培养物

将体外海马细胞培养物用肉苁蓉属处理24天会增强自发的网络活性，类似于用多奈哌齐的慢性应用所看到的结果，但是肉苁蓉属作用比药物的那些作用更显著。多奈哌齐和肉苁蓉属都诱导总突触数目的增加，但是仅肉苁蓉属增加每个神经突的突触的数目。

通过使用MEA神经芯片来捕获肉苁蓉属和银杏属提取物在海马细胞培养物上的神经元活化模式，当将肉苁蓉属提取物稀释至75-90%（和25-10%的银杏属提取物）时，已经证实协同活性。还已经证实，肉苁蓉属的慢性治疗可以诱导指示改善的突触连接性的神经元形态学变化以支持长期增强和记忆。

已经鉴别出在神经元活性模式上产生协同效应的银杏属和肉苁蓉属的比率，包括使神经元对肉苁蓉属的作用更敏感；GA、BS的强化和各个神经元的点火之间的更强SY。此外，在不同的稀释度，肉苁蓉属和银杏属的组合以较高的效应大小增强网络刺激。通常，与肉苁蓉属组合的高银杏属水平(>50%)会减小所述组合的协同效应。

此外，本公开内容的实施例表明，肉苁蓉属可以靠内源性NGF的天然神经元强化作用而起作用。已知NGF会增加神经元存活和改变突触效力和神经元可塑性。保持智力活跃、实现智力满意的追求活动和在锻炼中保持活跃，是心理健康的积极行为。这些行为中的每一种也会增加NGF在脑中的内源性产生。因而，这样的行为和本公开内容的组合物的组合使得彼此的天然配对成为补充途径以强化和保护认知能力随着受试者年龄的长寿和稳健性。

术语“包含”在本文中以它们的最宽含义用于指和涵盖“包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”的概念。“例如”、“诸如”和“包括”用于列出示例性例子的应用不仅限于列出的例子。因而，“例如”或“诸如”是指“例如，但不限于”或“诸如，但不限于”，且包括其它类似的或等同的例子。本文中使用的术语“约”用于适当地包括或描述通过仪器分析测量的或作为样品处理的结果的数值的微小变化。这样的微小变化可以是所述数值的±0-10%、±0-5%或±0-2.5%的量级。此外，术语“约”当与值的范围有关时应用于两个数值。此外，术语“约”可以应用于甚至在没有明确阐述时的数值。

通常，如本文中使用的，在值的范围中的连字符“-”或破折号“—”是“至”或“直到”；“>”是“以上”或“大于”；“≥”是“至少”或“大于或等于”；“<”是“以下”或“小于”；且“≤”是“最多”或“小于或等于”。在个别基础上，专利、专利和/或专利申请公开的前述申请中的每一篇明确地通过引用整体并入本文的一个或多个非限制性实施方案中。

应当理解，所附权利要求不限于表达在详细描述中所述的特定化合物、组合物或方法，其可以在落入所附权利要求的范围内的特定实施方案之间变化。关于为了描述不同实施方案的特定特征或方面所依赖的本文任何马库什群组，应当理解，可以从各个马库什群组的每个成员得到不同的、特别的和/或意外的结果，并独立于所有其它马库什成员。可以个别地和/或联合地依赖马库什群组的每个成员，并为所附权利要求的范围内的具体实施方案提供充分支持。

还应该理解，在描述本发明的不同实施方案中所依赖的任何范围和子范围独立地和共同地落入所附权利要求的范围内，且被理解为描述和预见到所有范围，包括其中的整数值和/或分数值，即使这样的值在本文中没有明确地写出。本领域技术人员容易认识到，列举的范围和子范围足以描述和实现本发明的不同实施方案，并且这样的范围和子范围可以进一步描绘成有关的1/2、1/3、1/4、1/5，诸如此类。仅仅作为一个例子，“0.1-0.9”的范围可以进一步描绘成较小的1/3（即，0.1-0.3）、中间1/3（即，0.4-0.6）和较大的1/3（即，0.7-0.9），它们个别地和共同地落入所附权利要求的范围内，且可以个别地和/或共同地被依赖，并为所附权利要求的范围内的具体实施方案提供充分支持。另外，关于限定或修改范围的措辞，诸如“至少”、“大于”、“小于”、“不超过”等，应当理解，这样的语言包括子范围和/或上限或下限。作为另一个例子，“至少10”的范围固有地包括至少10-35的子范围、至少10-25的子范围、25-35的子范围，诸如此类，且每个子范围可以个别地和/或共同地被依赖，并为所附权利要求的范围内的具体实施方案提供充分支持。最后，在公开的范围内的单个数目可以被依赖，并为所附权利要求的范围内的具体实施方案提供充分支持。例如，“1-9”的范围包括不同的各个整数（诸如3）以及各个数目，包括小数点(或分数)，诸如4.1，其可以被依赖，并为所附权利要求的范围内的具体实施方案提供充分支持。

在本文中已经以示例性方式描述了本发明，且应当理解，已经使用的术语意图属于描述词而不是限制词的性质。考虑到以上教导，本发明的许多修改和变化是可能的。可以以在所附权利要求的范围内具体描述以外的它方式实践本发明。在本文中明确地预见到独立权利要求和从属权利要求（包括单个和多个从属权利要求）的所有组合的主题。