涉及肿瘤生长进展和转移的过程由在癌细胞中激活的信号传导途径介导。ERK途径在通过传递来自配体结合的细胞表面受体酪氨酸激酶(“RTK's”)诸如ErbB家族、PDGF、FGF和VEGF受体酪氨酸激酶的细胞外信号来调节哺乳动物细胞生长中发挥核心作用。RTK的激活诱导以Ras的激活开始的一系列磷酸化事件。Ras的激活导致Raf(一种丝氨酸-苏氨酸激酶)的募集和激活。然后活化的Raf磷酸化并激活MEK1/2，其然后磷酸化并激活ERK1/2。当激活时，ERK1/2磷酸化参与多种细胞事件(包括细胞骨架改变和转录激活)的几种下游靶标。ERK/MAPK途径是细胞增殖最重要的一种，并且据信ERK/MAPK途径在许多肿瘤中频繁激活。在ERK1/2的上游的Ras基因在几种癌症中突变，包括结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌和胰腺肿瘤。高Ras活性伴随着许多人类肿瘤中升高的ERK活性。此外，BRAF(一种Raf家族的丝氨酸-苏氨酸激酶)的突变与增加的激酶活性相关。已经在黑素瘤(60％)、甲状腺癌(大于40％)和结肠直肠癌中鉴定了BRAF中的突变。这些观察结果表明ERK1/2信号传导通路是广谱的人类肿瘤中抗癌疗法的有吸引力的途径(M.HohnoandJ.Pouyssegur,Prog.inCellCycleRes.20035:219)。ERK途径也被认为是治疗疼痛和炎症的有希望的治疗靶标(Ma,WeiyaandRemi,Quirion.“TheERK/MAPKPathway,asaTargetForTheTreatmentOfNeuropathicPain”ExpertOpin.Ther.Targets.20059(4):699-713，以及Sommer,ClaudiaandFrankBirklein“ResolvinsandInflammatoryPain”F1000MedicineReports20113:19)。因此，ERK活性(即ERK1和/或ERK2活性)的小分子抑制剂可用于治疗广谱的癌症，诸如黑素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌和卵巢癌，以及治疗疼痛和炎症，诸如关节炎、腰痛、炎性肠病和风湿病。本发明提供了用于制备(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮、药学上可接受的盐和所述盐的结晶形式的方法和中间体。本发明还提供了包含所述盐或所述盐的结晶形式的药物组合物，和使用所述盐和所述盐的结晶形式的方法。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮的合成述于WO2013/130976。技术实现要素：本发明提供了用于制备I的方法，I为可用于制备VIII的有用中间体(WO2013/130976)。化合物VIII为ERK抑制剂和用于治疗过度增殖性病症的药物。所述方法提供了得到VIII和有用中间体VI和VII的有效路线。VII与VI的烷基化得到I，其最终与1-甲基-1H-吡唑-5-胺(XIV)缩合(方案A)。方案A本发明还提供了一种不对称酶促还原，其容许立体特异性还原1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙酮以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(IV)。本发明还提供了一种制备4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)的改进方法。本发明提供了一种结晶性苯磺酸盐(VIIIb)，其具有容许容易配制和良好生物利用度的期望物理性质。在实施方案1中，本发明提供了用于制备式VIII的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使4-溴-1-氯-2-氟苯与金属化剂于非质子性有机溶剂中接触以得到有机镁化合物，其与2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺反应以得到2-氯-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酮(II)；(b)使II与甲酸钠和甲酸于水性乙醇中接触以得到1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙酮(III)(c)使III与酮还原酶接触以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(IV)；(d)使IV与氯硅烷(Ra)3SiCl和至少一种碱于非极性非质子性溶剂中接触以得到(V)，并随后添加磺酰氯RbS(O)2Cl以得到VI，其中Ra在每次出现时独立地为C1-6烷基或苯基且Rb选自C1-4烷基或苯基，其任选地取代有1至3个独立地选自C1-3烷基、卤素、硝基、氰基或C1-3烷氧基的基团；(e)使4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)与强碱于有机溶剂中接触，随后添加VI以得到XI；(f)用氧化剂处理XI以得到I；(g)在降低的温度于非质子性溶剂中用强碱处理1-甲基-1H-吡唑-5-胺并添加式I的化合物以得到IX；和(h)使IX与脱甲硅烷基化剂(de-silylatingagent)接触以得到VIII。在实施方案2中，本发明提供了实施方案1的方法，其中步骤(c)中的酮还原酶提供至少约98％的对映异构体过量。在实施方案3中，本发明提供了实施方案2的方法，其中步骤(c)中的酮还原酶为KRED-NADH-112。在实施方案4中，本发明提供了实施方案2的方法，其中步骤(c)还包括作为辅助因子的NADH或NADPH。在实施方案5中，本发明提供了实施方案4的方法，其中所述辅助因子用辅助底物或另外的酶再生，所述辅助底物选自仲醇，所述另外的酶选自醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、甲酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、亚磷酸脱氢酶或氢化酶。在实施方案6中，本发明提供了实施方案2至5中任一项的方法，其中所述酮还原酶步骤于水性介质中在有机共溶剂存在情况下在至1至50℃温度进行。在实施方案7中，本发明提供了实施方案6的方法，其中所述酮还原酶步骤产生均匀的混悬液。在实施方案8中，本发明提供了实施方案1的方法，其中所述氯硅烷为叔丁基二甲基氯硅烷，所述磺酰氯为甲烷磺酰氯，步骤(d)中的碱为DMAP和TEA且所述非极性非质子性溶剂为DCM且在步骤(e)中所述有机溶剂为二噁烷。在实施方案9中，本发明提供了实施方案1的方法，其中(Ra)3Si为叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb为甲基，且在步骤(e)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾(potassiumhexamethyldisilazane)且所述有机溶剂为二甘醇二甲醚。在实施方案10中，本发明提供了实施方案1的方法，其中在步骤(a)中所述金属化剂为i-PrMgCl和LiCl且所述溶剂为THF，在步骤(c)中所述酮还原酶为KRED-NADH-112且步骤(c)还包括辅助因子NAD和辅助因子再生剂葡萄糖脱氢酶，在步骤(d)中(Ra)3Si为叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb为甲基，所述碱为DMAP和TEA且所述非极性非质子性溶剂为DCM，且在步骤(e)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾且所述有机溶剂为二甘醇二甲醚。在实施方案11中，本发明提供了实施方案1的方法，其中在步骤(a)中所述金属化剂为i-PrMgCl和LiCl且所述溶剂为THF，在步骤(c)中所述酮还原酶为KRED-NADH-112且步骤(c)还包括辅助因子NAD和辅助因子再生剂是葡萄糖脱氢酶，在步骤(d)中(Ra)3Si为叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb为甲基，所述碱为DMAP和TEA且所述非极性非质子性溶剂为DCM，在步骤(e)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾且所述有机溶剂为二甘醇二甲醚，且在步骤(g)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾且所述非质子性溶剂为THF。在实施方案12中，本发明提供了实施方案1的方法，其中在步骤(a)中所述金属化剂为i-PrMgCl和LiCl且所述溶剂为THF，在步骤(c)中所述酮还原酶为KRED-NADH-112且步骤(c)还包括辅助因子NAD和辅助因子再生剂是葡萄糖脱氢酶，在步骤(d)(Ra)3Si为叔丁基二甲基甲硅烷基，Rb为甲基，所述碱为DMAP和TEA且所述非极性非质子性溶剂为DCM，在步骤(e)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾且所述有机溶剂为二甘醇二甲醚，在步骤(g)中所述强碱为六甲基二硅氮烷钾且所述非质子性溶剂为THF，且在步骤(h)中所述脱硅基化剂为甲醇化的HCl。在实施方案13中，本发明提供了实施方案1的方法，其中来自步骤h的化合物VIII与磺酸于有机溶剂和水中接触以得到VIIIa的盐，其中Rc为芳基磺酸在实施方案14中，本发明提供了实施方案13的方法，其中RcSO3H为苯磺酸且所述溶剂为甲基乙基酮和水以得到苯磺酸盐VIIIb。在实施方案15中，本发明提供了用于制备4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使2-氟-4-碘吡啶与金属化剂于非质子性有机溶剂中接触以得到有机镁化合物，其与4-氯-2(甲基硫基)嘧啶在钯催化剂存在情况下反应以得到4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(X)；(b)于THF中用叔丁醇钾处理X，随后用水性酸处理，以得到4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)。在实施方案16中，本发明提供了实施方案15的方法，其中所述钯催化剂为(1,3-二异丙基咪唑-2-基亚基)(3-氯吡啶基)二氯化钯(II)，所述金属化剂为i-PrMgCl和LiCl，且所述非质子性溶剂为THF。在实施方案17中，本发明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐。在实施方案18中，本发明提供了药物组合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐和药学上可接受的赋形剂。在实施方案19中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐。在实施方案20中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有包含处于以下位置的峰的X-射线粉末衍射图：6.16±0.2、7.46±0.2、16.36±0.2、25.76±0.2和25.98±0.22θ。在实施方案21中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图1所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案22中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图19所示的13CNMR图。在实施方案23中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图20所示的19FNMR图。在实施方案24中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图19所示的13CNMR图和基本上如图20所示的19FNMR图。在实施方案25中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有包含相对于CFCl3处于以下位置的峰的19FNMR图：-111.1±0.4ppm和-115.4±0.4ppm(在293K)。在实施方案26中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有包含相对于四甲基硅烷处于以下位置的峰的13CNMR图：157.7±0.2ppm、129.6±0.2ppm、125.8±0.2ppm和117.0±0.2ppm(在293K)。在实施方案27中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图2所示的DSC图。在实施方案28中，本发明提供了药物组合物，其包含实施方案19至27中任一项的结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐和药学上可接受的赋形剂。在实施方案29中，本发明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐。在实施方案30中，本发明提供了药物组合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐和药学上可接受的赋形剂。在实施方案31中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐。在实施方案32中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式A。在实施方案33中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式A，其具有包含处于以下位置的峰的X-射线粉末衍射图：5.76±0.2、13.44±0.2、15.64±0.2、19.40±0.22θ。在实施方案34中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式A，其具有基本上如图12所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案35中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式A，其具有基本上如图13所示的DSC图。在实施方案36中，本发明提供了药物组合物，其包含权利要求31至35中任一项的结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式A和药学上可接受的赋形剂。在实施方案37中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式B。在实施方案38中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式B，其具有包含处于以下位置的峰的X-射线粉末衍射图：7.02±0.2、16.30±0.2、17.30±0.2、21.86±0.22θ。在实施方案39中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式B，其具有基本上如图15所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案40中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式B，其具有基本上如图16所示的DSC图。在实施方案41中，本发明提供了药物组合物，其包含实施方案37至40中任一项的结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮对甲苯磺酸盐形式B和药学上可接受的赋形剂。在实施方案42中，本发明提供了化合物(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐。在实施方案43中，本发明提供了药物组合物，其包含(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐和药学上可接受的赋形剂。在实施方案44中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐。在实施方案45中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式I。在实施方案46中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式I，其具有包含处于以下位置的峰的X-射线粉末衍射图：12.50±0.2、13.86±0.22θ。在实施方案47中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式I，其具有基本上如图6所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案48中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式I，其具有基本上如图7所示的DSC图。在实施方案49中，本发明提供了药物组合物，其包含实施方案44至48中任一项的结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式I和药学上可接受的赋形剂。在实施方案50中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式II。在实施方案51中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式II，其具有包含处于以下位置的峰的X-射线粉末衍射图：12.80±0.2、22.42±0.2、24.92±0.22θ。在实施方案52中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式II，其具有基本上如图8所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案53中，本发明提供了结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式II，其具有基本上如图9所示的DSC图。在实施方案54中，本发明提供了药物组合物，其包含权利要求50至53中任一项的结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮萘二磺酸盐形式II和药学上可接受的赋形剂。在实施方案55中，本发明提供了无定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐。在实施方案56中，本发明提供了无定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图21所示的X-射线粉末衍射图。在实施方案57中，本发明提供了无定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐，其具有基本上如图22所示的DSC图。在实施方案58中，本发明提供了药物组合物，其包含实施方案55至57中任一项的无定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐和药学上可接受的赋形剂。附图简述图1示出VIII结晶性苯磺酸盐形式A的XRPD图。图2示出VIII结晶性苯磺酸盐形式A的DSC和TGA分析。图3示出VIII结晶性苯磺酸盐形式A的单晶结构分析。图4示出VIII游离碱的XRPD图。图5示出VIII游离碱的DSC分析。图6示出VIII萘二磺酸盐形式I的XRPD图。图7示出VIII萘二磺酸盐形式I的DSC分析。图8示出含有少量形式I的VIII萘二磺酸盐形式II的XRPD图。图9示出VIII萘二磺酸盐形式II的DSC分析。图10示出VIII萘二磺酸盐形式I的DVS图。图11示出VIII甲苯磺酸盐IPA溶剂化物的XRPD图。图12示出VIII甲苯磺酸盐形式A的XRPD图。图13示出VIII甲苯磺酸盐形式A的DSC分析。图14示出VIII甲苯磺酸盐形式A的DVS图。图15示出VIII甲苯磺酸盐无定形和形式B的混合物的XRPD图。图16示出VIII甲苯磺酸盐无定形和形式B的混合物的DSC分析。图17示出VIII甲苯磺酸盐无定形的XRPD图。图18示出VIII苯磺酸盐形式A的DVS分析。图19示出VIII结晶性苯磺酸盐形式A的13C固态NMR图。图20示出VIII结晶性苯磺酸盐形式A的19F固态NMR图。图21示出VIII苯磺酸盐无定形的XRPD图。图22示出VIII苯磺酸盐无定形的DSC分析。具体实施方式现在将详细参考本发明的某些实施方案，在所附结构和式中说明其实施例。尽管将结合所列举的实施方案来描述本发明，但是应当理解，它们并不旨在将本发明限制于那些实施方案。本发明旨在覆盖可包括在本发明的范围内的所有替换、修改和等同物。本领域技术人员将认识到与本文所述的那些相似或等同的可用于本发明的实践中的许多方法和材料。本发明决不限于所描述的方法和材料。在一个或多个所引入的文献、专利和类似材料(包括但不限于定义的术语、术语使用、所描述的技术等)与本申请不同或矛盾的情况下，以本申请为准。如本说明书中所使用，无论在过渡短语中还是在权利要求的主体中，术语“包括”和“包含”都应被解释为具有开放式含义。也就是说，术语将被解释为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的上下文中使用时，术语“包括”意指该方法至少包括所述的步骤，但可包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语“包含”意指化合物或组合物至少包含所述的特征或组分，但也可包括另外的特征或组分。此外，当在本说明书和以下权利要求书中使用时，词语“包括”、“包含”和“含有”旨在指定所述特征、整数、组分或步骤的存在，但是它们不排除存在或添加一个或多个其它特征、整数、组分、步骤或它们的组合。当与小时结合使用时，术语“约”表示±5小时。当与温度结合使用时，术语“约”表示±5摄氏度。当与百分比或其它值结合使用时，术语“约”表示±10％。术语“手性”是指具有镜像配偶体不重叠性的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像配偶体上的分子。术语“异构体”是指具有相同式，但分子中原子排列不同且性质不同的化合物。术语“立体异构体”是指具有相同化学构成但原子或基团在空间中的排列方面不同的化合物。“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子彼此不是镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如，熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可在高分辨率分析操作诸如电泳和色谱法下分离。术语“对映异构体”是指彼此不重叠的镜像的化合物的两种立体异构体。本文使用的立体化学定义和惯例通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionaryofChemicalTerms(1984)McGraw-HillBookCompany,NewYork；和Eliel,E.andWilen,S.,"StereochemistryofOrganicCompounds",JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork,1994。本文所述的化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于指定化合物的平面偏振光的旋转符号，其中(-)或1表示该化合物是左旋的。带有(+)或d的前缀的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，除了它们是彼此的镜像。特定的立体异构体也可称为对映异构体，并且这些异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，其可在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性的情况下出现。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指没有光学活性的两种对映异构体的等摩尔混合物。本文所述的本发明方法还可用于制备同位素标记的本发明化合物，其与本文所述的那些相同，但是事实上一个或多个原子被原子质量或质量数与通常在自然界中发现的原子质量或质量数不同的原子替代。所述任何特定原子或元素的所有同位素均涵盖在本发明化合物及其用途的范围内。可并入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I或125I。某些同位素标记的本发明化合物(例如，用3H和14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化(3H)和碳-14(14C)同位素因其易于制备和检测而是有用的。此外，用更重的同位素诸如氘(即2H)取代可提供由于更大的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量需求降低)而产生的某些治疗优势，因此在一些情况下可能是优选的。正电子发射同位素诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以检查底物受体占据。同位素标记的本发明化合物通常可通过以下类似于下文实施例中公开的那些方法，通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂制备。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的结构异构体，其可通过低能量势垒互相转化。例如，质子互变异构体(也称为质子移变互变异构体)包括通过质子迁移的相互转化，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过重组一些键合电子的互变。术语“非质子性(或非极性)溶剂意指这样的有机溶剂：诸如乙醚、轻石油(ligroin)、戊烷、己烷、环己烷、庚烷、氯仿、苯、甲苯、二噁烷、四氢呋喃、二氯甲烷或乙酸乙酯。术语“极性非质子性溶剂”是指这样的有机溶剂：诸如甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮或六甲基磷酰胺。术语“极性质子性溶剂”是指这样的有机溶剂：诸如低级链烷醇、甲酸或乙酸。术语“醚溶剂(etherealsolvent)”是指这样的溶剂，诸如四氢呋喃、二甲氧基乙烷、二噁烷，或二烷基醚，诸如二乙醚和甲基叔丁基醚。本文使用的术语化合物的“衍生物”意指可通过简单的化学方法从原始化合物获得的化合物。本文使用的术语“保护基团”是指这样的化学基团：(a)使反应性基团免受不期望的化学反应；和(b)可在不再需要保护反应性基团之后容易地除去。例如，苄基是伯羟基官能团的保护基团。术语“羟基保护基团”或“醇保护基团”意指保留羟基的保护基团，否则羟基将通过某些化学反应被修饰。羟基保护基团可为在所有其它反应步骤完成后可容易地除去的醚、酯或硅烷，诸如低级酰基(例如，乙酰基或丙酰基或二甲基叔丁基甲硅烷基)，或芳烷基(例如，在苯环上任选取代的苄基)。本文使用的术语“氯硅烷”是指(Ra)3SiCl，其中Ra在每次出现时独立地为C1-6烷基或苯基。本文使用的术语“脱保护试剂”是指与受保护的化学部分接触以除去保护基团的试剂。用于脱保护的试剂和方案是公知的，并且可在Greene和Wuts或Harrison和Harrison(参见下文)中找到。化学领域的技术人员将理解，有时方案必须针对特定分子进行优化，并且这种优化与本领域技术人员的能力相协调。本文使用的术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可以但不必发生，并且该描述包括事件或情况发生的情况和它不发生的情况。例如，“任选被烷基单取代或二取代的芳基”意指烷基可以但不一定存在，并且描述包括其中芳基被烷基单取代或二取代的情况，以及其中该芳基不被烷基取代的情况。当提及化学反应时，本文使用的术语“处理”、“接触”或“反应”意指在适当的条件下添加或混合两种或更多种试剂以产生所示的和/或所需的产物。应当理解，产生所示和/或所需产物的反应不一定直接源于最初添加的两种试剂的组合，即，可存在一种或多种在混合物中产生的中间体，其最终导致形成所示的和/或所需的产物。术语“离去基团”具有与在合成有机化学中其通常相关的含义，即能够被亲核试剂替代的原子或基团，包括卤素(诸如氯、溴和碘)、烷基磺酰基氧基、芳基磺酰基氧基、烷基羰基氧基(例如乙酰氧基)、芳基羰基氧基、甲磺酰基氧基、甲苯磺酰基氧基、三氟甲磺酰基氧基、芳基氧基(例如2,4-二硝基苯氧基)、甲氧基、N,O-二甲基羟基氨基等。术语“磺酰氯”是指化合物RbS(O)2Cl，其中Rb选自C1-4烷基或苯基，其任选地取代有1至3个独立地选自C1-3烷基、卤素、硝基、氰基、C1-3烷氧基的基团。Wittig试剂可用于从醛形成烯烃。Wittig试剂通常由鏻盐制备，鏻盐又通过三苯基膦与烷基卤化物的反应制备。为了形成Wittig试剂(内鎓盐)，将鏻盐悬浮于溶剂诸如乙醚或THF中并用强碱诸如苯基锂或正丁基锂处理。Sharpless二羟基化或双羟基化用于由前手性烯烃对映选择性制备1,2-二醇。该操作用锇催化剂和化学计量的氧化剂[例如K3Fe(CN)6或N-甲基吗啉氧化物(NMO)]来进行；它在缓冲溶液中进行以确保稳定的pH，因为在微碱性条件下反应进行得更快。通过添加对映异构体富集的手性配体[(DHQD)2PHAL、(DHQ)2PHAL或其衍生物]实现对映体选择性。这些试剂也可作为用于对映异构优选的稳定的预先包装的混合物(AD-mixα和AD-mixβ，AD＝不对称二羟基化)。本方法可使用KarlFischer法测定样品中痕量的水。该方法可缩写为“KF”。在制备本文所述化合物的方法中，可能有利的是将反应产物彼此分离和/或与起始物质分离。通过本领域常用的技术将每个步骤或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(以下称为分离)至所需的均匀度。通常，这样的分离包括多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱可包括任何数量的方法，包括例如：反相和正相；尺寸排除；离子交换；高、中、低压液相色谱法和装置；小规模分析；模拟移动床(SMB)和制备薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快速色谱技术。另一类分离方法包括用选择的试剂处理混合物以结合所需产物、未反应的起始物质、反应副产物等或者使得可通过其它方式分离所需产物、未反应的起始物质、反应副产物等。这些试剂包括吸附剂或吸收剂，诸如活性炭、分子筛、离子交换介质等。或者，试剂可为酸(在碱性物质的情况下)、碱(在酸性物质的情况下)、结合试剂(诸如抗体)、结合蛋白、选择性螯合剂(诸如冠醚)、液/液离子萃取试剂(LIX)等。选择适当的分离方法取决于所涉及物质的性质。例如，蒸馏和升华中的沸点和分子量、色谱中存在或不存在极性官能团、多相萃取中物质在酸性和碱性介质中的稳定性等。本领域技术人员将应用最可能实现所需分离的技术。本发明提供了用于制备(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VIII)的方法，所述化合物具有以下结构并为ERK激酶的强效抑制剂且用作治疗癌症或其它过度增殖性病症的药物。I和1-甲基-1H-吡唑-5-胺(XIV)在强碱存在情况下缩合得到IX，其通过使甲硅烷基醚与水性酸接触容易转化成VIII。可将获得的无定形游离碱转化成结晶性芳基磺酸盐。本文使用的术语“芳基磺酸”是指苯磺酸或萘单磺酸或萘二磺酸，其中芳基环任选取代有甲基或卤素。本发明还提供了如下用于制备中间体I的方法：首先用强碱处理4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)并用甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(VI)将所得化合物烷基化。酰胺的N-烷基化可在本领域技术人员公知的多种碱性条件下进行。该反应通常在-78℃至100℃的温度在非质子性溶剂诸如THF、DMF、DMSO、NMP或其混合物中进行。通常使用的碱是Grignard试剂、氢化钠、氢化钾、甲醇钠、叔丁醇钾、六甲基二硅氮烷锂、六甲基二硅氮烷钠或六甲基二硅氮烷钾。在室温(RT)在二甘醇二甲醚中用六甲基二硅氮烷钾处理VII形成VII的锂盐，之后引入甲磺酸酯VI并将反应在90℃加热4小时。硫醚氧化成亚砜或砜通常是容易的，并且能够进行该转化的许多试剂是已知的。硫氧化通常用过氧化氢、NaIO4、次氯酸叔丁酯、亚硝酸酰基酯、过硼酸钠、过硫酸氢钾或过酸诸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸的水溶液进行。通常用约1当量的氧化剂可分离出亚砜。暴露于两个或更多个当量导致氧化成砜。在环境温度下于MTBE中用MCPBA氧化XI得到I。方案B(i)i-PrMgCl，LiCl，THF；(ii)HCO2Na，HCO2H，H2O，EtOH；(iii)GDH-105，吗啉乙磺酸，MgCl2，从PEG6000，庚烷，1wt％KRED-NADH-112，NAD，葡萄糖(iv)TBSCl，DMAP，TEA，DCM，20-25℃，15h；(v)MsCl，DCM，20-25℃，3h从1-溴-4-氯-3-氟苯起始，以五个步骤制备甲磺酸酯VI，将其转化为Grignard试剂，并与2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺接触得到酮II。有机锂和有机镁化合物与N，O-二甲基羟基酰胺的缩合得到相应的酮。(S.NahmandD.M.Weinreb，S.M.TetrahedronLett.1981，22，3815)。Grignard试剂通过在LiCl存在情况下用异丙基氯化镁处理1-溴-4-氯-3-氟苯形成。认为盐的添加通过促进已知存在于Grignard试剂的经典溶液中的聚合物聚集体的分解而增加Grignard试剂的反应性。(A.KrasovskiyandP.Knochel，Angew.Chem.Int.Ed.200443：3333)。用1NHCl淬灭Grignard反应后，用水洗涤有机相并浓缩。添加甲酸钠、甲酸、乙醇和水并将混合物在80-90℃加热以得到α-羟基酮III。通常在作为辅助因子(其在原位再生)的NADH或NADPH存在情况下，酶催化的酮还原通常以高立体选择性进行。(J.C.Mooreetal.，Acc.Chem.Res，200740(12)：1412-19)。在酵母、细菌或来自哺乳动物细胞中发现的优选的微生物氧化还原酶且该氧化还原酶可以分离出的一种或多种酶或全细胞的形式应用，任选地呈通过文献中描述的许多常规方法之一的固定化形式。氧化的辅因子通常用作为辅助底物的仲醇连续再生。典型的辅助底物可选自2-丙醇、2-丁醇、戊-1，4-二醇、2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-庚醇、己-1，5-二醇、2-庚醇或2-辛醇，优选2-丙醇。优选地，辅助因子借助于共底物在也催化目标反应的相同酶下再生。在2-丙醇用作辅助底物时形成的丙酮在另一优选实施方案中从反应混合物中连续除去。辅助因子可通过掺入另外的氧化其天然底物并提供还原的辅助因子的酶来再生。例如，仲醇脱氢酶/醇、葡萄糖脱氢酶/葡萄糖、甲酸脱氢酶/甲酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶/葡萄糖-6-磷酸、亚磷酸脱氢酶/亚磷酸酯或氢化酶/分子氢等。此外，已知电化学再生方法以及包括金属催化剂和还原剂的化学辅助因子再生方法是合适的。优选的催化剂/辅助因子/共底物系统可随不同的酮而变化。酶促还原于水性介质中在有机共溶剂存在情况下进行，所述有机共溶剂可选自例如甘油、2-丙醇、乙醚、叔丁基甲基醚、二异丙基醚、二丁基醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、庚烷、己烷或环己烯或它们的混合物。有机共溶剂的存在是特别有利的，因为可形成均匀的混悬液，其允许简单分离所需的式IV的醇。酶促还原的反应温度通常保持在1℃至50℃之间，优选在20℃至40℃之间的范围内。反应浓度(即酮和相应的醇的浓度)通常保持在1％至25％，优选10％至20％。在本发明方法的一个特定实施方案中，在氧化辅助因子NAD、再循环酶GDH-105(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)和最终还原剂葡萄糖存在下，通过KRED-NADH-112(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)催化III的不对称还原，以定量化学转化得到99.5％对映体过量的(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇。最终步骤包括用叔丁基二甲基氯硅烷、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和三乙胺(TEA)于DCM中选择性保护伯醇，随后用甲磺酰氯、DMAP和TEA于DCM中形成甲磺酸酯，其可在单一反应容器中依序进行以得到甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(VI)。本领域技术人员将理解，该方法可有利地应用于其它经取代的溴苯衍生物。(i)1.0％PEPPSI(i-Pr),i-PrMgCl,LiCl,THF；步骤(ii)(a)tert-BuOK,THF(b)1NH2SO4，THF,RT通过4-氯-2-硫代甲基嘧啶(XIII)和2-氟-4-碘吡啶(XII)的钯催化偶联制备4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VII)。通过以下方式制备Grignard试剂：在LiCl存在情况下用i-PrMgCl进行金属转移(transmetallation)(Krasovskiy,同上)并在PEPPSI(i-Pr)([1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-基亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II),CASRN905459-27-0)存在情况下用XIII处理所得杂芳基Grignard。X与叔丁醇钾反应得到4-(2-(叔丁氧基)吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶，将其用H2SO4处理以去除叔丁基并得到VII。在不脱离本文所公开的发明的情况下，可修改步骤的顺序。在一个变通方案中，将2,4-二取代的嘧啶衍生物诸如2,4-二氯-嘧啶或4-氯-2-甲基硫基嘧啶与2-氟吡啶-4-基硼酸(Pd(dppf)Cl2,K3PO4,二噁烷)偶联，得到2-氯-4-(2-氟吡啶-4-基)嘧啶，其与1-甲基-1H-吡唑-5-胺(LiHMDS,THF)缩合并水解，得到4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，其可如先前所述使用两个当量的碱进行烷基化。可能出现的常用缩写包括：乙酰基(Ac)、水性/水溶液(aq.)、气氛(Atm)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或boc酐(BOC2O)、苄基(Bn)、苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸盐(BOP)、丁基(Bu)、苯甲酰基(Bz)、化学文摘登录号(CASRN)、苄基氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、二亚苄基丙酮(DBA)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)、二异丁基氢化铝(DIBAL或DIBAL-H)、二异丙基乙基胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、1,1'-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1'-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、乙基(Et)、乙醚(Et2O)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et2O)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高压液相色谱(HPLC)、异丙醇(IPA)、六甲基二硅氮烷锂(LiHMDS)、二异丙基氨基锂(LDA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO2-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、氯铬酸吡啶鎓盐(PCC)、石油醚(petether,即烃类)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅/每平方英寸(psi)、溴-三-吡咯烷子基鏻鎓六氟磷酸盐(PyBrOP)、吡啶(pyr)、室温(rt或RT)、satd.(饱和的)、叔丁基甲基醚(TBME)、叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe2Si(TBDMS或TBS)、三乙胺(TEA或Et3N)、三氟甲磺酸酯或CF3SO2-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、薄层色谱(TLC)、四氢呋喃(THF)、四甲基乙二胺(TMEDA)、三甲基甲硅烷基或Me3Si(TMS)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)、对甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C6H4SO2-或甲苯磺酸酯(Ts)、N-氨基甲酸酯-N-羧内酸酐(UNCA)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos)、细胞外信号调节激酶(ERK)、四氢呋喃(THF)、小时(h)、间氯过氧化苯甲酸(MCPBA或mCPBA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、磷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADP)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)、苯基(Ph)、甲基(Me)、乙基(Et)、叔丁基(t-Bu)、叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)、甲磺酰基(Ms)、乙酸乙酯(EtOAc)、气相色谱(GC)、甲基乙基酮(MEK)、高压液相色谱(HPLC)、X-射线衍射(XRPD)、核磁共振(NMR)、玻璃化转变温度(TG)、热重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、聚四氟乙烯(PTFE)。当与烷基部分一起使用时，常规命名法包括前缀正(n)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-或-t)和neo-具有其常规含义。(J.RigaudyandD.P.Klesney,NomenclatureinOrganicChemistry,IUPAC1979PergamonPress,Oxford.)。为了说明本发明，包括以下实施例。然而，应当理解，这些实施例不限制本发明，并且仅意在提出实施本发明的方法。本领域技术人员将认识到，本文所述的化学操作可适于适合可用的设备和环境。此外，在不偏离所公开的发明的情况下，可改变试剂诸如离去基团、活化基团、保护基团和试剂诸如强碱和钯催化剂的选择。方案1.原始合成方法原始合成方法涉及自三种市售物质的八步线性合成，即4-氯-3-氟苯甲醛1、4-氯-2-(甲基硫基)嘧啶XIII和(2-氟吡啶-4-基)硼酸6-2(方案1)。1的Wittig反应生成烯烃中间体2，产率55％。苯乙烯的不对称Sharpless二羟基化和随后用TBSCl的二醇IV的选择性单保护得到中间体V，历经两步产率55％。中间体VI之一通过仲醇的甲磺酰化获得。另一方面，吡啶酮中间体VII如下合成：XIII与6-2进行Suzuki交叉偶联，随后用HCl水溶液进行水解。需要通过Soxhlet萃取器用EtOAc历时3天纯化VII以确保6的良好纯度和后续反应的合理转化。VI和VII的Sn2取代能够自中间体V得到中间体XI，历经2步产率50％。用m-CPBA氧化得到砜中间体I，其经受用市售氨基吡唑即2-甲基吡唑-3-胺的SnAr取代，生成中间体IX，产率60％。最后，酸促进的TBS脱保护得到游离碱VIII，产率85％。该路线的化学受困于几个单独步骤中的低产率。由于相当复杂的反应曲线(reactionprofile)，需要大量繁琐的纯化诸如蒸馏、快速色谱和Soxhlet萃取。使用不够理想的溶剂和试剂诸如二氯甲烷、氢化钠和氧化锇也阻碍了化学的放大。方案2.合成I的改进方法鉴定了合成I的改进路线。获得羟基酮中间体III，历经两步产率72％。市售芳烃3-1的Grignard交换和随后的亲核加成至Weinreb酰胺生成中间体II，然后将其水解得到III。酶促不对称酮还原以高产率和高对映选择性得到相同的二醇中间体IV。将选择性TBS保护和甲磺酰化的相同方法用于生成中间体VI。改进吡啶酮VII的合成。将PEPPSI-IPr催化的Kumada偶联用于以更高产率和更佳纯度特征生成中间体X。应用两步顺序的水解以避免在原始方法期间形成腐蚀性HF。用t-BuOK/THF取代氟化物，随后在酸性条件下去除叔丁基，得到吡啶酮中间体VII，产率80％。与原始路线相比，通过使用不同的碱和溶剂改进Sn2取代。在相同条件下氧化中间体XI以得到I。实施例1甲磺酸2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯步骤1：在氮气下将4-溴-1-氯-2-氟苯(64kg)和无水甲苯(170kg)加入2000L钢反应容器。将反应器抽真空并用N2回填，历经三次，并在氮气气氛下冷却至-10至5℃。在-10至10℃向溶液中滴加i-PrMgCl.LiCl(280kg,1.3M于THF中)。将反应混合物在-10至10℃再搅拌15至30分钟，然后历经1小时温热至约20至25℃。将反应混合物再搅拌6小时以完成交换。将所得溶液冷却至-50至-40℃。将2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(44.5kg)于无水甲苯(289kg)中的溶液滴加至上述溶液中，同时维持温度为-50至-30℃。历经1小时将反应混合物温热至20至25℃，然后搅拌3小时以完成反应。通过在-5至15℃的温度添加1NHCl水溶液(808lg)淬灭反应混合物。分离水层并通过硅藻土垫过滤有机层。将有机层用10％NaCl水溶液(320kg)洗涤两次，然后浓缩至约300L，得到1-(4-氯-3-氟苯基)-2-氯乙酮(51.8kg,81.9％产率)，其为于甲苯中的产物。步骤2：将II(51.7kg)于甲苯中的溶液浓缩并交换溶剂成EtOH以得到II于EtOH(326kg)中的混悬液。在15至35℃的温度，在氮气气氛下，添加HCOONa.2H2O(54.8kg)和HCOOH(44.5kg)于水(414kg)中的溶液。将所得混合物加热至回流并搅拌4至5小时。在发生大于95％转化之后，将溶液冷却至20至30℃。在10至30℃，历经2小时，滴加水(450kg)。将所得混悬液冷却至-10和-3℃并将冷却的溶液搅拌1至2小时。将固体过滤并用水(400kg)洗涤滤饼以去除残余的HCOONa和HCOOH。将获得的1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙酮悬浮于EtOAc(41kg)和正庚烷(64kg)中，然后温热至45至50℃，搅拌2小时，然后历经2小时冷却至-2至5℃并在该温度搅拌2小时。将固体过滤并在40至50℃真空干燥12小时以得到作为白色固体的产物(40.0kg,99.3％纯度,84.5％产率)。步骤3：在氮气下，向500L反应器加入纯化水(150kg)、4-吗啉乙磺酸(0.90kg)、无水MgCl2(0.030kg)、正庚烷(37kg)、1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙酮(30kg)、D-(+)-葡萄糖一水合物(34.8kg)和PEG6000(30.0kg)。在28至32℃，用1NNaOH水溶液将溶液的pH调节至6.5至7.0。添加辅助因子循环酶、葡萄糖脱氢酶(0.300kg)(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)、辅助因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD(0.300kg)(Roche)和氧化还原酶KRED-NADH-112(0.300kg)(CodexisInc.,RedwoodCity,CA,USA)。将所得混悬液在29至31℃搅拌10至12小时，同时通过添加1NNaOH水溶液(160kg)调节pH以维持反应混合物pH6.5至7.0。通过添加49％H2SO4(20kg)调节反应混合物的pH至1至2以淬灭反应。添加EtOAc(271kg)并将混合物在20至30℃搅拌10-15分钟，然后通过硅藻土垫过滤。用EtOAc(122kg)洗涤滤饼。分离合并的有机层并用EtOAc(150kg)萃取水层。向合并的有机层添加水(237kg)。通过添加固体NaHCO3调节混合物的pH至7.0至8.0。将有机层分离，浓缩，然后用DCM稀释以得到(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(30.9kg,产率100％)，其为于DCM中的产物。步骤4：在氮气下，向1000L反应器中加入(R)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙-1,2-二醇(29.5kg)和无水DCM(390kg)。将溶液冷却至-5至0℃。按份添加叔丁基二甲基氯硅烷(25.1kg)，同时维持温度在-5至2℃。在-5至2℃向上述溶液中滴加DMAP(0.95kg)和TEA(41.0kg)于无水DCM(122kg)中的溶液。将反应溶液搅拌1小时，然后温热至20至25℃并搅拌16小时。将(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙醇的溶液再冷却至-10至-5℃。向上述溶液中滴加甲烷磺酰氯(19.55kg)于无水DCM(122kg)中的溶液，同时维持温度在-10至0℃。将反应溶液在-10至0℃搅拌20至30分钟，然后历时1小时温热至0至5℃，并搅拌。将反应溶液用水(210kg)洗涤，随后用5％柠檬酸水溶液(210kg)、2％NaHCO3水溶液(210kg)洗涤，最后用水(2x210kg)洗涤。将所得DCM溶液干燥(Na2SO4)，过滤并在低于15℃(套温度低于35℃)真空干燥以得到甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(49.5kg,83.5％产率,KarlFischer＝0.01％)，其为于DCM中的产物。实施例24-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮步骤1：向1000L反应器中加入2-氟-4-碘吡啶(82.2kg)和无水THF(205kg)。将反应器抽真空并用N2回填三次，然后冷却至-30至-20℃。向溶液中滴加i-PrMgCl.LiCl(319kg,1.3M于THF中)。将反应混合物温热至-20至-10℃并搅拌1.5小时以完成金属转移。向2000L反应器加入4-氯-2-甲基硫基嘧啶(45.6kg)、无水THF(205kg)和[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-基亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(PEPPSITM-IPr,1.850kg)。将2000L反应器抽真空并用N2回填三次，加热至55至57℃。历时0.5至1小时，向反应器中添加(2-氟吡啶-4-基)氯化镁的溶液，同时维持温度在50至62℃。将所得反应混合物在50至62℃再搅拌2小时。将反应混合物冷却至5至25℃，同时用水(273kg)淬灭反应混合物。通过添加固体柠檬酸一水合物(7.3kg)调节混合物的pH至8至9。将有机层分离，用12.5％NaCl水溶液(228kg)洗涤并在低于50℃真空浓缩以得到4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(38.3kg,61％产率)，其为于THF中的产物。步骤2：将4-(2-氟吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(38.2kg)于THF中的溶液浓缩并与THF共蒸发以去除残余的水。通过硅藻土垫过滤混悬液以去除无机盐。向所得THF溶液(510kg)中按份添加tert-BuOK(39.7kg)，同时维持温度在15至25℃。将混合物温热至20至25℃并搅拌5小时。添加NaHCO3(14.9kg)，然后添加柠檬酸(5kg)于THF(15kg)中的溶液以调节pH至8至9。添加水(230kg)。过滤混合物并用THF(100kg)洗涤滤饼。将合并的THF溶液用12.5％NaCl水溶液(320kg)洗涤并浓缩至约380L以得到4-(2-(叔丁氧基)吡啶-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶于THF中的溶液。向冷却至15至30℃的THF溶液中添加1NH2SO4水溶液(311kg)。将混合物在该温度搅拌4小时。加入MTBE(280kg)并用30％NaOH水溶液(120kg)将反应溶液的pH调节至14。分离水层并过滤有机相以去除无机盐。将获得的水层用MTBE(2x280kg)洗涤。向水溶液中添加2-MeTHF(1630kg)和i-PrOH(180kg)。然后用浓HCl(19kg)慢慢调节pH至8。分离有机层并用2-MeTHF(305kg)萃取水层。将合并的2-MeTHF萃取物用水(300kg)洗涤并浓缩至约100L。添加MTBE(230kg)并在20-30℃搅拌0.5小时。将固体过滤并于2-MeTHF(68kg)和MTBE(230kg)的混合溶液中浆化。将混悬液在35-50℃搅拌3小时，然后冷却至0至10℃并再搅拌2小时。将固体过滤并在50至62℃真空干燥20小时以得到作为棕色固体的产物4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(33.55kg,89.6％测定,79.4％产率)。实施例3(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(XI)步骤1：将THF从4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(25.5kg)的THF溶液中共蒸发以除去残余的水。添加无水双-(2-甲氧基乙基)醚(75kg)。滴加KHMDS的溶液(131kg,1M于THF中)，同时维持温度在25至40℃。将混合物加热至75至80℃并搅拌30至40分钟。在氮气气氛下将所得混合物冷却至20至30℃。历时30至60分钟添加甲磺酸(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙酯(47.6kg)于THF(50kg)中的溶液，同时维持温度在20至40℃。将反应溶液温热至80至85℃并搅拌7小时。将溶液冷却至5至15℃并添加水(155kg)。用30％柠檬酸水溶液(30kg)调节溶液的pH至7.5。添加EtOAc(460kg)并将混合物搅拌20分钟。分离有机层并用12.5％NaCl水溶液(510kg)洗涤。将合并的水层用EtOAc(115kg)萃取。将乙酸乙酯层浓缩至约360L以得到(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(44.6kg,75.7％产率)，其为于EtOAc中的产物。步骤2：向冷却至5至10℃的(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(44.6kg)于EtOAc(401kg,10体积)中的溶液中按份添加MCPBA(58kg)。在10至-20℃，将反应混合物添加至NaHCO3(48.7kg)于水(304kg)中的溶液中。滴加Na2S2O3(15kg)于水(150kg)中的溶液以消耗残余的MCBPA。分离有机层并用EtOAc(130kg)萃取水层。将合并的有机层用水(301kg)洗涤，浓缩并溶剂交换成DCM以得到(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(45.0kg,94.9％产率)，其为于DCM中的产物。将DCM溶液浓缩至约100L，通过SiO2垫(60kg)过滤并用EtOAc/DCM梯度(0、25和50％EtOAc)洗脱。将级分合并且浓缩以得到产物，将其用(丙酮:正庚烷＝1:3v/v)再浆化四次以得到终产物(31.94kg,71％产率)。实施例4(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐(VIIIb)步骤1：向洁净的100L圆柱形反应容器加入THF(13kg)，然后伴随中度搅拌依序添加(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(I,5kg)和1-甲基-1H-吡唑-5-胺(1.1kg)，随后添加THF(18kg)。将混合物冷却至-35℃并以维持内温低于-25℃的速率向所得薄浆料中慢慢添加LiHMDS的THF溶液(17.4kg,1.0M)。添加完成后，将反应混合物在-35至-25℃保持20分钟并通过HPLC监测。如果HPLC结果指示≤98.5％转化，在-35℃慢慢添加另外的LiHMDS(0.34kg,1.0M,0.05mol％)。在相同温度用H3PO4溶液(4.4kg85％H3PO4和15kg水)淬灭反应混合物并保持内温低于30℃。用EtOAc(18kg)稀释反应混合物并分离两相，将有机层用H3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)洗涤，随后用第二H3PO4洗液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)洗涤。如果1-甲基-1H-吡唑-5-剩余，则再次用H3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水层)洗涤有机层。最后，依序用水(20kg)及NaCl和NaHCO3溶液(2kgNaCl、0.35kgNaHCO3和10kg水)洗涤有机层。分离相后，通过与EtOAc共沸蒸馏取出有机溶液中残余的水至≤0.5％(通过KF)，然后在低于50℃真空浓缩溶液至20-30L。然后使用35kgMeOH将溶剂换成MeOH，然后浓缩至20至30L用于下一步骤。步骤2：在室温向(S)-1-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(4-氯-3-氟苯基)乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(IX)于MeOH中的甲醇化溶液中添加HCl(10.7kg,1.25M于MeOH中)。反应轻微放热。添加完成后，将反应混合物加热至45℃。如果反应在14至16小时后未完成，则添加另外的HCl(1kg,1.25M于MeOH中)并在45℃继续搅拌2小时。该反应装备有具有酸洗涤器(scrubber)的蒸馏装置。在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20至30L。向所得溶液中添加MeOH(35kg)并在低于50℃真空下将反应混合物再次浓缩至20至30L。然后使用40kgEtOAc将溶剂转换成EtOAc。通过顶空GC检测溶剂比率并继续进行溶剂转化直至其小于1/5。在低于50℃真空下将溶液浓缩至20至30L。将溶液冷却低于30℃后，伴随中度搅拌慢慢添加NaHCO3水溶液(1.2kgNaHCO3和20kg水)，随后添加EtOAc(40kg)。将有机层用水(2x10kg)洗涤，然后在低于50℃真空下浓缩至20-30L。然后使用35kgMEK将溶剂转换成MEK。通过顶空GC监测残余的MeOH并继续进行溶剂转换直至MeOH<0.3％。在低于50℃真空下将含有(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(VIII)的溶液浓缩至20至30L用于下一步骤。步骤3：通过1μm线路过滤器将VIII于MEK中的溶液转移至另一100L圆柱形反应溶液中。在单独的容器中制备苯磺酸溶液(1.3kg苯磺酸、1.4kg水和4.4kgMEK)。将过滤后的VIII溶液加热至75℃并向通过1μm线路过滤器所得溶液中添加0.7kg苯磺酸溶液。将作为于MEK中的浆料(0.025kgVIIIb结晶性晶种和0.4kgMEK)的VIII的结晶性苯磺酸盐(0.425kg)种晶于该澄清溶液，其产生薄浆料。然后在2小时通过1μm线路过滤器添加剩余苯磺酸溶液。添加后，将浆料在75℃再加热1小时，然后在最少3小时内冷却至18℃。将所得稠厚浆料在20℃搅拌14至16小时。使用Aurora干燥器过滤固体。通过HPLC(约3％损失)测定母液。然后用经1μm线路过滤的15.8kgMEK和水溶液(0.8kg水和15kgMEK)，随后用经1μm线路过滤的30kgMEK洗涤固体。通过HPLC(<1％损失)测定洗液。将湿滤饼在真空和氮气吹扫下在45℃套温度干燥最少12小时以得到VIII的苯磺酸盐，其标示为VIIIb。另外的实施例步骤1：首先向洁净的100L圆柱形反应容器中加入13kgTHF。伴随中度搅拌，依序加入5.0kgI和1.1kg1-甲基-1H-吡唑-5-胺，随后加入剩余的THF(18kg)。在-35℃，向所得薄浆料中慢慢添加于THF中的17.4kgLiHMDS(1.0mol/L)并保持内温低于-25℃。添加之后，将反应混合物在-35至-25℃保持20分钟。通过HPLC监测反应。如果HPLC结果指示≤98.5％转化，则在-35℃慢慢加入另外的于THF中的0.34kg(0.05mol％)LiHMDS(1.0mol/L)。否则，在相同温度用19.4kgH3PO4溶液(4.4kg85％H3PO4和15kg水)慢慢淬灭反应混合物并保持内温低于30℃。用18kgEtOAc稀释反应混合物。分离相之后，先后用13.1kgH3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)和12.6kgH3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)洗涤有机层。通过HPLC针对1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平测定有机层。如果HPLC结果指示≥20μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺，则有机层需要用12.6kgH3PO4溶液(0.55kg85％H3PO4和12kg水)另外洗涤。否则，用20kg水洗涤有机层。再次针对1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平测定有机层。如果HPLC结果指示≥2μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺，则有机层需要用20kg水另外洗涤。否则，用12.4kgNaCl和NaHCO3溶液(2kgNaCl、0.35kgNaHCO3和10kg水)洗涤有机层。分离相之后，通过与EtOAc共沸蒸馏取出有机溶液中残余的水至≤0.5％(通过KF)，然后在低于50℃真空下浓缩该溶液至20至30L。然后使用35kgMeOH将溶剂转换成MeOH，然后浓缩至20至30L用于下一步骤。步骤2：在环境温度向来自最后步骤的IX于MeOH中的溶液中加入10.7kgHCl(1.25M于MeOH中)。观察到其微微放热。添加之后，将反应混合物加热至45℃。14-16小时后，通过HPLC监测反应。如果HPLC结果指示转化≤98％，加入另外1kgHCl(1.25M于MeOH中)并将反应混合物在45℃再搅拌2小时。否则，该反应装备有具有酸洗涤器的蒸馏装置。在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20至30L。向所得溶液中加入35kgMeOH并在低于50℃真空下将反应混合物再浓缩至20至30L。然后使用40kgEtOAc将溶剂转换成EtOAc。通过顶空GC监测溶剂比率。如果MeOH/EtOAc的比率大于1/5，则溶剂转换应当继续。否则，在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20至30L。将溶液冷却低于30℃之后，伴随中度搅拌慢慢加入21.2kgNaHCO3溶液(1.2kgNaHCO3和20kg水)，随后加入40kgEtOAc。分离相之后，用2X10kg水洗涤有机层。在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20至30L。然后使用35kgMEK将溶剂转换成MEK。通过顶空GC监测残余的MeOH。如果MeOH的水平≥0.3％，则溶剂转换应当继续。否则，在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20至30L用于下一步骤。步骤3：通过3μm线路过滤器将来自最后步骤的VIII于MEK中的溶液转移至另一100L圆柱形反应容器。在单独的容器中制备7.1kg苯磺酸溶液(1.3kg苯磺酸、1.4kg水和4.4kgMEK)。将过滤后的G02584994溶液加热至75℃并通过3μm线路过滤器向所得溶液中加入0.7kg苯磺酸溶液(10％)。向澄清溶液中加入0.425kgVIIIb结晶性晶种于MEK中的浆料(0.025kgVIIIb结晶性晶种和0.4kgMEK)。由此得到薄浆料。然后通过3μm线路过滤器在2小时内加入剩余苯磺酸溶液。添加之后，将浆料在75℃再加热1小时，然后在最少3小时内冷却至20℃。将所得稠厚浆料在20℃搅拌14-16小时。使用过滤干燥器过滤固体。通过HPLC(约3％损失)测定母液。然后用经3μm线路过滤的15.8kgMEK和水溶液(0.8kg水和15kgMEK)洗涤固体，随后用经3μm线路过滤的30kgMEK洗涤。通过HPLC(<1％损失)测定洗液。将湿滤饼在真空和氮气吹扫下在45℃套温度干燥最少12小时。重结晶首先向洁净的100L圆柱形反应容器中加入16kgEtOH。伴随中度搅拌，加入3.5kgVIIIb，然后加入剩余的EtOH(8.5kg)。将稠厚的浆料加热至78℃并加入水(约1.1kg)直至获得澄清的溶液。将热溶液通过3μm线路过滤器过滤至另一洁净的100L圆柱形反应容器中。温度降至55-60℃且溶液保持澄清。向所得溶液中加入0.298kgVIIIb结晶性晶种于EtOH中的浆料(0.018kgVIIIb结晶性晶种和0.28kgEtOH)。在60℃在真空下将稠厚的浆料浓缩至20至30L，然后在3小时内冷却至20℃。将所得浆料在20℃搅拌14至16小时。使用过滤干燥器过滤固体。通过HPLC(约10％损失)测定母液。然后用经3μm线路过滤的11.1kgEtOH和水溶液(0.56kg水和11kgEtOH)洗涤固体，随后用经3μm线路过滤的21kgMEK洗涤。通过HPLC(3％损失)测定洗液。将湿滤饼在真空和氮气吹扫下在45℃套温度干燥最少12小时。另外的合成方法述于下文。步骤1：首先向洁净的100L圆柱形反应容器中加入18kgTHF。伴随中度搅拌，依序加入4.2kgI和0.9kg1-甲基-1H-吡唑-5-胺，随后加入剩余的THF(21kg)。在-40℃，向所得薄浆料中慢慢添加于THF中的14.9kgLiHMDS(1.0mol/L)并保持内温低于-30℃。添加之后，将反应混合物在-35至-40℃保持20分钟。通过HPLC监测反应。HPLC结果指示≤99.1％转化。在相同温度用16.7kgH3PO4溶液(3.7kg85％H3PO4和13kg水)慢慢淬灭反应混合物并保持内温低于30℃。用17kgEtOAc稀释反应混合物。分离相之后，先后用13.1kgH3PO4溶液(1.1kg85％H3PO4和12kg水)和10.5kgH3PO4溶液(0.46kg85％H3PO4和10kg水)洗涤有机层。通过HPLC针对1-甲基-1H-吡唑-5-胺水平测定有机层。HPLC结果指示≥2μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺。用15.8kgNaCl溶液(0.3kgNaCl和15.5kg水)洗涤有机层。再次针对G02586778水平测定有机层。HPLC结果指示≥0.5μg/mL1-甲基-1H-吡唑-5-胺。用10.3kgNaCl和NaHCO3溶液(1.7kgNaCl、0.6kgNaHCO3和8kg水)洗涤有机层。分离相之后，通过与EtOAc共沸蒸馏取出有机溶液中残余的水至≤0.5％(通过KF)，然后在低于50℃真空下浓缩该溶液至20至30L。然后使用30kgMeOH将溶剂转换成MeOH，然后浓缩至20至30L用于下一步骤。步骤2：在环境温度向来自最后步骤的IX于MeOH中的溶液中加入9.0kgHCl(1.25M于MeOH中)。观察到其微微放热。添加之后，将反应混合物加热至45℃。16小时后，通过HPLC监测反应。HPLC结果指示转化为99.4％。该反应装备有蒸馏装置。在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20L。向所得溶液中加入35kgMeOH并在低于50℃真空下将反应混合物再浓缩至20L。然后使用40kgEtOAc将溶剂转换成EtOAc。通过顶空GC监测溶剂比率。如果MeOH/EtOAc的比率大于1/5，则溶剂转换应当继续。否则，在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20L。将溶液冷却低于30℃之后，伴随中度搅拌慢慢加入18kgNaHCO3溶液(1kgNaHCO3和17kg水)，随后加入34kgEtOAc。分离相之后，用2X8kg水洗涤有机层。在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20L。然后使用35kgMEK将溶剂转换成MEK。通过顶空GC监测残余的MeOH。如果MeOH的水平≥0.3％，则溶剂转换应当继续。否则，在低于50℃真空下将反应混合物浓缩至20L用于下一步骤。步骤3：通过1μm精过滤器将来自最后步骤的VIII于MEK中的溶液转移至另一100L圆柱形反应容器。在单独的容器中制备6.0kg苯磺酸溶液(1.1kg苯磺酸、1.2kg水和3.7kgMEK)。将过滤后的溶液加热至75℃并通过1μm线路过滤器向所得溶液中加入0.6kg苯磺酸溶液(10％)。向澄清溶液中加入0.36kgVIIIb结晶性晶种于MEK中的浆料(0.021kgVIIIb结晶性晶种和0.34kgMEK)。由此得到薄浆料。然后通过1μm线路过滤器在2小时内加入剩余苯磺酸溶液。添加之后，将浆料在75℃再加热1小时，然后在最少3小时内冷却至18℃。将所得稠厚浆料在18℃搅拌14-16小时。使用Aurora干燥器过滤固体。然后用经1μm线路过滤的8.15kgMEK和水溶液(0.35kg水和7.8kgMEK)洗涤固体，随后用经1μm线路过滤的12kgMEK洗涤。重结晶首先向洁净的100L圆柱形反应容器中加入21kgEtOH。伴随中度搅拌，加入3.5kgVIIIb，然后加入剩余的EtOH(9kg)。将稠厚的浆料加热至78℃并加入水(约1.2kg)直至获得澄清的溶液。将热溶液通过1μm线路过滤器过滤至另一洁净的100L圆柱形反应容器中。温度降至69℃且溶液保持澄清。向所得溶液中加入0.37kgVIIIb结晶性晶种于EtOH中的浆料(0.018kgVIIIb结晶性晶种和0.35kgEtOH)。在60-70℃在真空下将薄浆料浓缩至20L，然后在3小时内冷却至18℃。将所得浆料在18℃搅拌14-16小时。使用过滤干燥器过滤固体。然后用经1μm线路过滤的8.6kgEtOH和水溶液(0.4kg水和8.2kgEtOH)洗涤固体。将溶液分成两等份。然后用经1μm线路过滤的6.7kgMEK洗涤。将湿滤饼在真空和氮气吹扫下在35-40℃套温度干燥最少12小时。备选的合成路线(以下步骤1至10)步骤1：操作：1.在N2下向具有桨式搅拌器的四颈套式烧瓶中加入化合物1和MeBrPPh32.向烧瓶中加入THF(5.0V.,KF<0.02％)(注意：V为溶液的体积比限定试剂的质量或L/Kg)3.在0℃搅拌混悬液4.在0℃向烧瓶中逐份添加NaH(60％混悬于矿物油中)5.在0℃搅拌30分钟6.加热至30℃并搅拌6小时7.冷却至0℃8.向烧瓶中加入PE(石油醚)(5.0V.)9.向烧瓶中添加TPPO的晶种(三苯基膦氧化物)(总体TPPO的1至约5％wt)10.在-10℃搅拌2小时11.过滤，并用PE(5.0V.)洗涤滤饼12.浓缩滤液至干13.通过减压蒸馏纯化产物得到作为无色油状物的2步骤2：操作：1.在N2下添加(DHQD)2PHAL、Na2CO3、K2Fe(CN)6、K2OsO2(OH)4至烧瓶中(Ad-mixbeta,Aldrich,St.Louis,MO)2.冷却至0℃3.添加tBuOH(5V)和H2O(5V)4.添加25.在0℃搅拌混合物6小时6.冷却至0℃7.添加Na2SO3以淬灭反应混合物8.在0℃搅拌2小时9.过滤并用EA(乙酸乙酯)洗涤滤饼10.分离有机层11.过滤并浓缩至干步骤3：操作：1.在N2下向烧瓶中添加IV(1eq.)和DCM(5V)2.冷却至0℃3.添加DMAP(0.1eq.)，然后添加TEA(1.5eq.)4.在0℃滴加TBSCl(1.05eq.)5.在0℃搅拌混合物1小时6.添加水以淬灭反应混合物7.分离两层8.经Na2SO4干燥有机层9.过滤10.浓缩滤液至干11.直接用于下一步骤步骤4：操作：1.在N2向烧瓶中添加V(1.0eq.)和DCM(5V)。2.冷却至0℃3.添加TEA(1.51eq.)4.在0℃滴加MsCl(1.05eq.)5.在室温搅拌混合物1小时6.为了更好的搅拌，添加DCM以稀释混合物7.添加水以淬灭反应混合物8.分离两层9.用NaHCO3洗涤有机层10.经Na2SO4干燥11.过滤并浓缩滤液至干12.直接用于下一步骤步骤5:操作：1.在N2下向烧瓶中添加VII(1eq.)和DGME(20V)2.冷却至0℃3.添加KHMDS(1M于THF中,1eq.)4.添加VI(1.2-1.5eq.)于DGME中的溶液5.在0℃搅拌5分钟6.加热至回流(套温120℃)并搅拌持续4小时7.冷却下来8.用水淬灭并用MTBE萃取9.用20％NaCl洗涤10.经Na2SO4干燥11.浓缩至干并直接用于下一步骤步骤6：操作：1.在N2下向烧瓶中加入XI(1eq.)、DCM(8V)2.按份添加mCPBA3.在室温搅拌2小时4.添加7％NaHCO3水溶液进行洗涤5.用Na2S2O4水溶液淬灭6.用20％NaCl水溶液洗涤7.经Na2SO4干燥8.过滤并浓缩至干9.于MTBE(3V)中浆化所得物以得到I步骤7：操作：1.在N2下向烧瓶中添加I(1eq.)、1-甲基-1H-吡唑-5-胺(4eq.)、Cs2CO3、DMF(4V)2.在室温搅拌3小时3.后处理以得到产物。步骤8：操作：1.将IX溶于MeOH中2.在环境温度加入HCl(1.25M于MeOH中)。3.添加之后，将反应混合物加热至45℃并持续16小时。4.将反应混合物冷却至室温并用NaHCO3水溶液淬灭且用EtOAc稀释5.分离相之后，用水洗涤有机层。将有机层浓缩以得到粗VIII步骤9：操作：1.在N2下向具有桨式搅拌器的四颈套式烧瓶中加入化合物6-2,XIII、Pd-催化剂和碳酸氢钠2.向烧瓶中加入水和1,4-二噁烷(5.0V.,KF<0.02％)3.在85℃搅拌混悬液16小时4.通过硅胶(2.0X)和硅藻土(0.5X)过滤5.通过真空蒸馏去除1,4-二噁烷6.在水(2.0V)和EtOAc(5.0V)之间分配7.分离有机相并浓缩8.通过从PE和EtOAc中重结晶进行纯化步骤10：操作：·向烧瓶中添加X·添加2MHCl(10-15V)·加热至100℃并搅拌3小时·冷却下来·用30％NaOH水溶液中和pH至7-8·用THF萃取·用20％NaCl水溶液洗涤·经Na2SO4干燥·过滤并浓缩至干结晶性(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐的合成将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(21.1mg,0.048mmol)溶于MEK(0.5mL)中。将苯磺酸(Fluka,98％,7.8mg,0.049mmol)溶于MEK(0.5mL)中并伴随搅拌将所得溶液滴加至游离碱溶液中。出现沉淀并随着添加更多苯磺酸沉淀物慢慢溶解。少量粘性固体残留在小瓶底部。将小瓶内容物超声处理10分钟，在此期间进一步出现沉淀。离心之后将固体分离并使用室内真空在40℃真空干燥。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐结晶形式A的合成在设置为90℃的加热块(heatingblock)中，将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，苯磺酸盐(23.1mg)溶于热异丙醇(5mL)。关闭加热块上的热源并使溶液冷却至环境温度，然后置于在约-20℃的冰箱中。收集固体，同时保持冰冷，并通过XRPD进行分析以得到(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮，苯磺酸盐形式A。适于单晶结构确定(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A单晶的合成如下文所述。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A：具有用于结构确定的合适质量的晶体通过以下方式生长于甲醇中：在约50℃搅拌，在约1天之后分离至Paratone-N油中并在环境条件下储存。结构解析：将尺寸约为0.16×0.16×0.06mm的C27H23ClFN6O5S[C21H18ClFN6O2,C6H5O3S]的无色板以随机取向安装在纤维上。在配备有共聚焦光学器件的RigakuRapidII衍射仪上用CuKα辐射进行初步检查和数据收集。使用SHELX2013进行精修[Sheldrick,G.M.ActaCryst.,2008,A64,112]。使用在3°<θ<63°的范围内的24479个反射的设置角度从最小二乘法精修获得用于数据收集的晶胞常数和取向矩阵。来自DENZO/SCALEPACK的精修镶嵌度为0.59°，表明中等的晶体质量[Otwinowski,Z.；Minor,W.MethodsEnzymol.1997,276,307]。通过程序XPREP[Bruker,XPREPinSHELXTLv.6.12.,BrukerAXSInc.,Madison,WI,USA,2002]确定空间群。没有系统消光，并且空间群被确定为P1(第1号)。在293±1K的温度，将数据收集至126.9°的最大2θ值。用HKL3000整合框架[Flack,H.D.；Bernardinelli,G.,ActaCryst.1999,A55,908]。共收集了24479个反射，其中6536个是独特的。对数据应用Lorentz和极化校正。CuKα辐射的线性吸收系数为2.450mm-1。使用SCALEPACK的经验吸收校正[Otwinowski,Z.；Minor,W.MethodsEnzymol.1997,276,307]。透射系数范围为0.564至0.863。应用二次消光校正[Glusker,JennyPickworth；Trueblood,KennethN.CrystalStructureAnalysis:APrimer,2nded.；OxfordUniversitypress:NewYork,1985；p.87]。以最小二乘法精修的最终系数为0.00170(绝对单位)。计算等效反射的强度的均值。基于强度，均值的吻合因子为9.8％。使用SHELXT通过直接方法解析结构[Burla,M.C.,Caliandro,R.,Camalli,M,.Carrozzini,B.,Cascarano,G.L.,DeCaro,L.,Giacovazzo,C.,Polidori,G.,andSpagna,R.,J.Appl.Cryst.2005,38,381]。剩余的原子位于随后的差值傅里叶合成中。独立地精修位于氮原子上的氢原子。所有其它氢原子均包括在精修中，但是限制依靠与它们所键合的原子。通过最小化函数，在全矩阵最小二乘法中精修结构：∑w(|Fo|2-|Fc|2)2权重w被定义为1/[σ2(Fo2)+(0.2000P)2+(0.0000P)]，其中P＝(Fo2+2Fc2)/3。散射因子取自“InternationalTablesforCrystallography”[InternationalTablesforCrystallography,Vol.C,KluwerAcademicPublishers:Dordrecht,TheNetherlands,1992,表4.2.6.8和6.1.1.4]。在精修中使用的6536个反射中，在计算拟合残差R中仅使用具有Fo2>2σ(Fo2)的反射。在计算中使用总共5796个反射。精修的最终周期包括771个可变参数和收敛(最大参数偏移小于其估计标准偏差的0.01倍)，具有未加权和加权吻合因子：R＝Σ|Fo-Fc|/ΣFo＝0.096单位权重的观察值的标准偏差(拟合优度)为1.385。最终差值傅立叶中的最高峰高度为这是相当高的，并且表明结构精修的质量差。最小负峰高度为将用于确定绝对结构的Flack因子[Flack,H.D.ActaCryst.1983,A39,876]精修至-0.01(4)。使用无序来精修不对称单元中的一个分子的一个羟基。这导致O22和H22原子分裂成O22A、H22A和O22B、H22B原子坐标对。由单晶分析确定的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A的单分子的代表示于图3。羟甲基中的无序(disorder)可在图3的右上方观察到。VIIIb的单晶数据和数据收集参数(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐以具有两个对称独立的阳离子阴离子对的手性三斜空间群P-1形式结晶。虽然几何参数表明所有的分子间相互作用可被视为相对强，两种阳离子都是高度无序的。发现氯氟苯基的两种构象具有约60:40的占有率。此外，羟甲基也是无序的，占有率约50:50。绝对立体化学被指定为S-构型。无定形(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐的合成在加热块中，将于叔丁醇(约20mL)中的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮苯磺酸盐(39.6mg)加热至60℃。在添加苯磺酸盐之前叔丁醇已经在约30℃融化。添加水(200μ)并加热直至得到澄清溶液。将溶液冷却并通过0.2μm过滤器过滤且置于冻干机中。使用SPScientificVirTisAdVantage2.0台式冷冻干燥机将该化合物冻干。使用70小时方案(recipe)从化合物中去除溶剂。化合物的初始冷冻在-70℃真空下在500mTorr压力下进行1.5小时。这确保在开始初级干燥之前整个溶液完全冷冻。进行初级干燥以通过升华去除大量溶剂。温度从-70℃升至-35℃，压力降至100mTorr，持续1小时。在-35℃干燥1小时后，将温度升至5℃，并在相同压力下再干燥28小时。初级干燥在最后一步在15℃结束，保持16小时。将冻干压力降低至50mTorr，并将温度升至35℃保持16小时。二次干燥继续，温度降至30℃，压力降至10mTorr，持续6小时。冻干循环的最后步骤具有降低至25℃的温度，并且将压力升高回到2500mTorr持续1小时。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,1,5-萘二磺酸盐:结晶形式I的合成：将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(21.8mg,0.0494mmol)溶于MEK(0.5mL)中。将1,5-萘二磺酸盐四水合物(25.1mg,0.0871mmol)溶于甲醇(1.0mL)中并伴随搅拌向游离碱溶液中滴加约0.36mL溶液。出现沉淀。将混悬液慢慢蒸发直至仅剩余痕量溶剂。使用室内真空将固体在40℃真空干燥。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,1,5-萘二磺酸盐:结晶形式II的合成：将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(103.3mg,0.234mmol)溶于MEK(2.5mL)中。将1,5-萘二磺酸盐四水合物(110.4mg,0.383mmol)溶于甲醇(2.0mL)中并伴随搅拌向游离碱溶液中滴加约0.77mL溶液。出现沉淀，其包含一个大的厚块(chunk)。用刮刀使厚块破裂，随后添加甲醇(0.77mL)。将混悬液搅拌3天。通过过滤分离出固体并使用室内真空在60℃干燥以得到57mg黄色固体。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸盐IPA溶剂化物和(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸盐形式A的合成使用超声处理将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(105.1mg,0.239mmol)大部分溶于异丙醇(1mL)中。将对甲苯磺酸一水合物(97.5％纯,52.9mg,0.271mmol)溶于异丙醇(1mL)中。伴随搅拌向游离碱溶液中滴加甲苯磺酸盐溶液以得到黄色固体。添加另外的异丙醇(1mL)。通过过滤分离固体并用1mL异丙醇淋洗反应器和固体。通过XRPD在对大气开放的支架(holder)中分析固体，同时仍润湿固体以得到无序的(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸盐IPA溶剂化物。对XRPD样品进行TG分析。将剩余固体在60℃真空下干燥4天以得到(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,甲苯磺酸盐结晶形式A.(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸盐，无定形形式的合成。将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮(104.3mg,0.237mmol)溶于乙醚(60mL)中。将对甲苯磺酸一水合物(52.0mg,0.273mmol)溶于乙醚(5mL)中。伴随搅拌向游离碱溶液中滴加甲苯磺酸盐溶液并将混悬液搅拌过夜。倾析醚并将固体风干以得到103mg黄色固体。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸盐，无定形形式和形式B混合物的合成将(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮甲苯磺酸盐，无定形形式(10.8mg)置于具有搅拌棒的小瓶中。添加甲基乙基酮(MEK,0.3mL)并将浆料搅拌4天。在60℃真空下蒸发溶剂以得到黄色固体。使用反射几何学的RigakuMiniFlexII粉末X射线衍射仪获得样品的粉末X射线衍射图。铜辐射源在30kV电压和15mA电流操作。将每个样品置于装有零背景石英插入物的铝样品支架的空腔中，并用载玻片压平，以呈现良好的表面纹理并插入样品支架中。所有样品在2°和40°之间的2θ角度范围内以2°/分钟的扫描速率和0.02°的步长测量。使用具有机械冷却器和标准试池(配置与样品盘相同)的TAInstruments差示扫描量热计(型号Q100或型号Q2000)来测量粉末样品的热性能。将每个样品装入具有含有0至1个针孔的非卷曲盖的封闭的铝盘中，并置于差示扫描量热计(DSC)试池中。试池具有以约50cm3/分钟流动的氮气吹扫。试池和样品在20℃平衡。然后将试池以10.00℃/分钟加热至209℃或250-350℃，同时监测空参照盘和样品盘之间的热流差。调制式DSC用于分析(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮无定形游离碱。使用具有机械冷却器和标准试池(配置与样品盘相同)的TAInstruments差示扫描量热计(型号Q2000)来测量粉末样品的热性能。将每个样品装入具有含有0至1个针孔的非卷曲盖的封闭的铝盘中，并置于差示扫描量热计(DSC)试池中。试池具有以约50cm3/分钟流动的氮气吹扫。试池和样品在25℃平衡，每60秒在±1℃调节温度，并且等温保持5分钟。开启数据存储并将样品在3℃斜升至100℃。然后将样品以3℃/分钟斜升至25℃。然后将样品以3℃/分钟加热至200℃。显示反转信号。在TAInstrumentsQ5000SA蒸气吸附分析仪上收集自动蒸气吸附数据。NaCl和PVP用作校准标准。样品在分析之前不干燥。在25℃在5至95％RH的范围内以10％RH增量在氮气吹扫下收集吸附和解吸数据。将样品在相应的RH保持1小时，然后移动到下一个RH范围。没有校正样品的初始水分含量的数据。(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮的游离碱为无定形固体(XRPD,图4)。取决于通过差示扫描量热法测量的纯度和溶剂含量，玻璃化转变温度(TG)在约74-96℃之间变化(DSC,图5)。在试图发现(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游离碱的结晶形式中进行了大约200次结晶实验没有成功。在多个实验中观察到少量晶体，但这些被鉴定为自合成序列或自原料产生的杂质，而不是(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游离碱。在使用硝基甲烷作为溶剂和庚烷作为反溶剂在蒸气扩散实验中进行的实验中注意到一个例外。分离出无定形和结晶性物质的混合物。获得的结晶性物质被确定为±1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮。进行盐筛以确定是否可发现合适的盐形式。游离碱的pKa确定为小于2，这限制了可能的盐共形成物(coformer)的范围。此外，衍生自(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮游离碱的盐pHmax小于2，并预期在水中歧化(disproportionate)。因此，不清楚可制备结晶性盐，或者任何盐在体内(水性环境)具有可接受的暴露。使用氯化氢、硫酸、甲磺酸、乙磺酸、羟乙磺酸和乙二磺酸制备结晶性盐的初始尝试未能得到任何结晶性盐。最终自1,5-萘二磺酸、对甲苯磺酸和苯磺酸获得结晶性盐。以下是显示本文所述盐的主要XRPD峰信息的表。本领域技术人员公知的是，取决于进行XRPD分析的条件，峰可向上或向下移动。通常，峰可偏移+/-0.2。在另一方面，峰可偏移+/-0.1。苯磺酸盐反射位置°2θ晶面间距(dspacing)(埃)相对面积6.1614.34299.37.4611.84019.416.365.41410025.763.45680.625.983.42390.2甲苯磺酸盐IPA溶剂化物反射位置°2θ晶面间距(埃)相对面积4.9817.72810013.286.66220.716.285.44060.419.724.49973.8甲苯磺酸盐形式A甲苯磺酸盐形式B反射位置°2θ晶面间距(埃)相对面积7.0212.58440.116.3025.43342.717.305.12257.821.864.063100萘二磺酸盐形式I反射位置°2θ晶面间距(埃)相对面积12.507.07618.313.866.38518.6萘二磺酸盐形式II反射位置°2θ晶面间距(埃)相对面积12.806.9106022.423.96276.224.923.570100药物产品是否含有特定结晶形式的物质，通常在片剂或胶囊中，可例如使用X射线衍射、拉曼光谱和/或固态NMR技术来确定。例如，(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A的固态13C和19FNMR谱分别如图19和20所示。获得NMR谱的程序如下所述。使用13C和19F固态NMR谱分析(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A。使用在500.13MHz(对于1H)、125.77MHz(对于13C)和470.55MHz(对于19F)操作的BrukerAvanceIIINMR光谱仪获得光谱。13C实验利用针对1H和13C调谐的具有4mm魔角旋转(MAS)模块的BrukerHX双共振探针。19F实验采用调谐到1H、19F和13C的也配备有4mmMAS模块的BrukerHFC三共振探针。将样品装入4mmZrO2转子中并用Kel-F驱动尖端密封。在293K收集所有数据。使用BrukerTopSpinTM3.2软件收集、处理和分析数据。用于13C采集的脉冲序列采用倾斜的交叉极化(rampedcrosspolarization)(CP)1-3，5-π总边带抑制(totalsidebandsuppression)(TOSS)4，和使用SPINAL645方案的高功率1H去耦以及90kHz场强。在8000±3Hz进行魔角旋转(MAS)。1H90°脉冲宽度为2.79μs，TOSS序列采用6.50μs的13C180°脉冲。CP接触时间为3ms，循环延迟为18s，并且计算总共3888次扫描的均值以产生光谱。化学位移通过将3-甲基戊二酸的甲基峰相对于四甲基硅烷设定为18.84ppm而进行外部参照6。用于19F采集的脉冲序列采用倾斜的CP1-3和使用SPINAL645方案的高功率1H去耦以及71kHz场强。在14000±5Hz进行魔角旋转(MAS)。1H90°脉冲宽度为3.54μs，CP接触时间为3ms，循环延迟为18s，并且计算总共16次扫描的均值以产生光谱。化学位移通过以下方式进行外部参照：将聚四氟乙烯(PTFE)的氟峰相对于CFCl3(通过将CFCl3加入PTFE样品中实验确定)设定为-122.38ppm。NMR参考文献：1.Pines,A.；Gibby,M.G.；Waugh,J.S.,Proton-enhancednuclearinductionspectroscopy.Methodforhigh-resolutionNMRofdilutespinsinsolids.J.Chem.Phys.1972,56(4),1776-7.2.Stejskal,E.O.；Schaefer,J.；Waugh,J.S.,Magic-anglespinningandpolarizationtransferinproton-enhancedNMR.J.Magn.Reson.(1969-1992)1977,28(1),105-12.3.Metz,G.；Wu,X.；Smith,S.O.,Ramped-amplitudecrosspolarizationinmagic-angle-spinningNMR.J.Magn.Reson.Ser.A1994,110(2),219-27.4.Song,Z.；Antzutkin,O.N.；Feng,X.；Levitt,M.H.,Sidebandsuppressioninmagic-angle-spinningNMRbyasequenceof5pipulses.SolidStateNucl.Magn.Reson.1993,2(3),143-6.5.Fung,B.M.；Khitrin,A.K.；Ermolaev,K.,Animprovedbroadbanddecouplingsequenceforliquidcrystalsandsolids.J.Magn.Reson.2000,142(1),97-101.6.Barich,D.H.；Gorman,E.M.；Zell,M.T.；Munson,E.J.,3-Methylglutaricacidasa13Csolid-stateNMRstandard.SolidStateNucl.Magn.Reson.2006,30(3-4),125-129.(S)-1-(1-(4-氯-3-氟苯基)-2-羟基乙基)-4-(2-((1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)吡啶-2(1H)-酮,苯磺酸盐结晶形式A的13C固态NMR谱特征在于相对于四甲基硅烷化学位移在157.7±0.2ppm、129.6±0.2ppm、125.8±0.2ppm和117.0±0.2ppm(在293K)的强峰。19F谱的特征在于相对于CFCl3化学位移在-111.1±0.4ppm和-115.4±0.4ppm(在293K)的两个各向同性峰。VIII的结晶性苯磺酸盐是一种高结晶性物质，其熔点对于药物剂型的开发是可接受的。基于其简单的固态景观(landscape)(仅鉴定一种结晶形式)，苯磺酸盐形式优于甲苯磺酸盐和1,5-萘磺酸盐形式。此外，非常可取的是苯磺酸盐与甲苯磺酸盐和1,5-萘二磺酸盐形式相比具有较低的吸湿性。VIII的游离碱具有低pKa，小于1.8，因此，由于歧化为游离碱和酸，预期鉴定的任何盐在水存在情况下不稳定。因此，苯磺酸盐的非吸湿性是出乎意料的，并且导致与甲苯磺酸盐和萘磺酸盐形式相比增强的稳定性。在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明的化合物或盐或盐的结晶形式和药学上可接受的赋形剂，诸如载体、佐剂或媒介物。在某些实施方案中，组合物被配制用于给予有此需要的患者。本文使用的术语“患者”或“个体”是指动物，诸如哺乳动物，诸如人。在一个实施方案中，患者或个体是指人。术语“药学上可接受的”意指所提及的化合物或组合物与包含制剂的其它成分(诸如赋形剂)和/或待治疗的患者(特别是人)化学和/或毒理学相容。术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”是指不破坏用其配制的化合物的药理学活性的无毒性载体、佐剂或媒介物。可用于本发明的组合物中的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。包含本发明化合物的组合物可通过口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经皮、经直肠、经鼻、经颊、舌下、经阴道、腹膜内、肺内、皮内、硬膜外或通过植入的储库给药。本文使用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。在一个实施方案中，包含本发明化合物的组合物被配制为用于口服给药的固体剂型。用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在某些实施方案中，包含式(I)的化合物或其盐的固体口服剂型进一步包含一种或多种(i)惰性的药学上可接受的赋形剂或载体，诸如柠檬酸钠或磷酸二钙；和(ii)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇或硅酸；(iii)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯胶；(iv)湿润剂，诸如甘油；(v)崩解剂诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐或碳酸钠；(vi)溶解阻滞剂诸如石蜡；(vii)吸收促进剂，诸如季铵盐；(viii)润湿剂，诸如鲸蜡醇或甘油单硬脂酸酯；(ix)吸收剂，诸如高岭土或膨润土；和(x)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇或月桂基硫酸钠。在某些实施方案中，固体口服剂型被配制为胶囊、片剂或丸剂。在某些实施方案中，固体口服剂型还包含缓冲剂。在某些实施方案中，用于固体口服剂型的这种组合物可在包含一种或多种赋形剂(诸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)、聚乙二醇等)作为填充剂的软和硬填充的明胶胶囊中配制。在某些实施方案中，包含式I的化合物或其盐的组合物的片剂、糖锭、胶囊、丸剂和颗粒剂任选地包含包衣或壳诸如肠溶衣。它们可任选地包含遮光剂，并且还可是其仅仅或优选在肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放一种或多种活性成分的组合物。包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡，其也可用作软和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，使用赋形剂诸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)以及高分子量聚乙二醇等。在另一个实施方案中，组合物包含本发明的微囊化化合物，并且任选地，还包含一种或多种赋形剂。在另一个实施方案中，组合物包含用于口服给药的包含式I的化合物或其盐的液体剂型制剂，并任选地进一步包含一种或多种药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。在某些实施方案中，液体剂型任选地进一步包含一种或多种惰性稀释剂诸如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇或脱水山梨醇的脂肪酸酯以及它们的混合物。在某些实施方案中，液体口服组合物任选地进一步包含一种或多种佐剂，诸如润湿剂、混悬剂、增甜剂、矫味剂和芳香剂。可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性混悬液可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和混悬剂配制。无菌可注射制剂还可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬液或乳液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格氏溶液、U.S.P和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或混悬介质。为此目的，可采用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸诸如油酸用于制备注射剂。可注射制剂可例如通过经由细菌截留过滤器过滤或通过掺入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。为了延长本发明化合物的效果，通常希望减慢化合物自皮下或肌内注射的吸收。这可通过使用具有差的水溶性的结晶性或无定形物质的液体混悬液来实现。然后化合物的吸收速率取决于其溶解速率，其依次取决于晶体尺寸和结晶形式。可选择地，胃肠外给药的化合物形式的延迟吸收通过将化合物溶解或混悬于油媒介物中来实现。可注射的储库形式通过在可生物降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基质来制备。根据化合物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质，可控制化合物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射制剂也通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。在某些实施方案中，将用于直肠或阴道给药的组合物配制为栓剂，其可通过将本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体(诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡，例如在环境温度为固体，但在体温为液体，因此在直肠或阴道腔中融化并释放本发明化合物的那些)混合来制备。本发明化合物的局部或经皮给药的实例剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。将本发明的化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和任选的防腐剂或缓冲剂混合。另外的制剂实例包括眼用制剂、滴耳剂、滴眼剂或透皮贴剂。经皮剂型可通过将本发明的化合物溶解或分散于介质例如乙醇或二甲基亚砜中来制备。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。采用苄醇或其它合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂，可将本发明化合物的鼻气雾剂或吸入制剂制备为盐水溶液。在某些实施方案中，药物组合物可与或不与食物一起施用。在某些实施方案中，药学上可接受的组合物不和食物一起施用。在某些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起施用。对于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合、治疗医师的判断、所治疗的具体疾病的严重程度。组合物中提供的本发明化合物的量还将取决于组合物中的具体化合物。在一个实施方案中，每剂量肠胃外给药的本发明化合物的治疗有效量将在约0.01-100mg/kg，或约0.1至20mg/kg患者体重/天的范围内，使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型，诸如片剂和胶囊剂，含有约5至约100mg的本发明化合物。实例片剂口服剂型包含约2mg、5mg、25mg、50mg、100mg、250mg或500mg的式(I)的化合物或其盐，并且还包含约5-30mg无水乳糖、约5-40mg交联羧甲基纤维素钠、约5-30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1-10mg硬脂酸镁。配制片剂的方法包括将粉末化成分一起混合并进一步与PVP的溶液混合。所得组合物可干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂形式。气溶胶制剂的实例可如下制备：将约2-500mg式I的化合物或其盐溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液，并且如果需要添加张度剂(tonicifier)，例如盐诸如氯化钠。可例如使用0.2微米过滤器过滤该溶液以去除杂质和污染物。在前述描述或所附权利要求书中公开的特征，以其具体形式或根据用于执行所公开的功能的装置，或用于实现所公开的结果的方法或过程，适当地表示，可单独地或以这些特征的任何组合用于以不同形式实现本发明。为了清楚和理解的目的，已经通过说明和实施例相当详细地描述了前述发明。对于本领域技术人员来说显而易见的是，可在所附权利要求的范围内实施改变和修改。因此，应当理解，上述描述旨在是说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应当参考上述描述来确定，而是应当参考以下所附权利要求以及这些权利要求所赋予的等同物的全部范围来确定。本文提及的专利、公开的申请和科学文献建立了本领域技术人员的知识，并且通过引用以其整体并入本文，其程度如同各自具体地和单独地指出通过引用并入。本文所引用的任何参考文献与本说明书的具体教导之间的任何冲突应以后者为准。同样地，本领域理解的词或短语的定义与本说明书中具体教导的词或短语的定义之间的任何冲突应以有利于后者的方式解决。当前第1页1 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