本发明涉及一种原人参二醇亚微乳制剂及其制备方法和用途，属于医药制剂领域。
背景技术：
：原人参二醇(PPD)为二醇型人参皂苷元，主要来源于人参、西洋参、三七等五加科植物。是二醇组人参皂苷的苷元，也是二醇组人参皂苷经微生物酵解后的最终产物。研究表明PPD有抑制多种肿瘤生长、抗抑郁、激活氯离子通道、抑制被激活的钠通道去极化、抑制人胚胎肾细胞HEK-293细胞生长及幽门螺杆菌生长等诸多活性。同时，PPD对认知功能损伤有保护作用。PPD为亲脂性化合物，在水中溶解性差，口服生物利用度低，半衰期短。需要对原人参二醇的制剂进行研究以提高生物利用度。毛晶晶等研究制备了PPD干混悬剂，该剂型改善了药物吸收，并且不受食物的影响，颗粒在胃肠道分布面积大，吸收快，生物利用度得到提高(参见毛晶晶，张彤，王冰等。20(S)-原人参二醇干混悬剂的处方及初步质量研究。中成药，2013,34(9)：1680-1684)。金圣煊等制备了PPD脂质体用于静脉注射，以期实现靶向递药，发挥抗肿瘤作用(参见金圣煊，雷荣剑，孙静芸。HPLC测定20(s)-原人参二醇脂质体的含量及包封率。南京中医药大学学报，2009,25(3)：197-198)。金鑫等制备了PPD的原人参脂质立方液晶纳米粒，脂质立方液晶由极性脂质在含水环境中通过吸附定量的水形成具有特殊内部结构的类凝胶相立方骨架结构，具有较强的粘附性，从而促进药物跨膜吸收。制备成立方液晶后，增加了药物在体内的滞留时间，相对口服生物利用度为原料药的1.66倍(参见金鑫，张振海，孙娥等，原人参二醇脂质立方液晶纳米粒在大鼠体内的药动学研究。中国中药杂志，2013,38(2)：263-268)。乳剂作递药载体能够增加难溶性药物的溶解度和稳定性，油相及乳化剂在体内能够降解和吸收，性质稳定，静注后不产生超人体标准渗透压。本发明经专利查询及文献检索，目前尚未发现将PPD制备成注射用乳剂，进行抗肿瘤研究的报道。技术实现要素：本发明的一个目的在于提供一种原人参二醇亚微乳制剂；本发明的第二个目的在于提供该原人参二醇亚微乳制剂的制备方法；本发明的第三个目的在于提供原人参二醇及本发明所制备的亚微乳制剂在制备具有促进造血细胞增殖、缓解骨髓抑制作用的药物中的应用。一种原人参二醇亚微乳制剂，包括原人参二醇、油、乳化剂、助乳化剂，其平均粒径为110～130nm，Zeta电位为-20～-40mV。该原人参二醇亚微乳制剂经高压、离心、稀释处理后稳定良好，于4、20、30℃稳定性试验4个月，稳定性良好。在一些实施方案中，所述原人参二醇含量为0.1-0.5％，油相含量10-30％，乳化剂和助乳化剂含量3-4％；优选的，乳化剂与助乳化剂的比例为2:1～2；进一步优选的，油相含量为10％，乳化剂与助乳化剂的比例为2:1.5。在一些实施方案中，所述油选自植物油、动物油、矿物油或合成油；所述植物油选自大豆油、玉米油、花生油、橄榄油、蓖麻油、棕榈油中的任意一种或几种；所述动物油选自鱼油或油酸；所述矿物油选自脂肪烃、蜡基烃、芳香烃或石蜡油中的任意一种或几种；所述合成油选自亚油酸、油酸乙酯、氢化蓖麻油、氢化花生油、氢化棉籽油、亚油酸乙酯、自乳化单硬脂酸酯、辛/癸酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯或甘油三乙酯中的任意一种或几种；进一步优选的，所述油为大豆油或花生油。在一些实施方案中，所述乳化剂选自豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰乙醇胺、丝氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸中的任意一种或几种；更进一步所述乳化剂为蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂。在一些实施方案中，所述助乳化剂选自泊洛沙姆(F68)或solutol。本发明还提供了所述原人参二醇亚微乳制剂的制备方法包括如下步骤：步骤1，油相的制备：向适量油中加入乳化剂和有效量PPD，分散得到油相；步骤2，水相的制备：将适量甘油、助乳化剂溶于适量水中，制成水相；步骤3，初乳化：于60～70℃条件下，将油相加入水相，制成初乳；步骤4，均质：取步骤3制备的初乳剂，均质，乳化，至乳滴平均粒径为110～130nm；步骤5，灌装，灭菌。在一些实施方案中，步骤3将油相加入水相后进行超声处理，超声时间为5-60min；步骤4均质在高压均质机中进行，均质压力为500-2000bar，循环次数为5-20次。优选的，超声时间为10-20min；步骤4均质压力为1000-2000bar，循环次数为5-15次。进一步优选的，超声时间为10min；均质压力为2000bar，高压循环次数为10次。本发明还提供原人参二醇在制备具有促进造血细胞增殖、缓解肿瘤治疗产生的骨髓抑制作用的药物中的应用。体内体外实验均证明原人参二醇注射用乳剂能明显促进骨髓细胞粒系(CFU-GM)、红系(CFU-E/BFU-E)造血祖细胞集落生成。表明原人参二醇注射用乳剂具有促进造血细胞增殖、缓解肿瘤治疗产生的骨髓抑制的作用。附图说明图1PPD亚微乳制剂外观形态图2PPD亚微乳制剂透射电镜下的形态具体实施例方式实施例1处方：实施例2实施例3处方：实施例4处方：实施例5处方：实施例6实施例1～5任一处方的制备方法：将油相(大豆油或花生油)于80℃搅拌并加入乳化剂，高速分散至成澄清溶液，然后于60℃下加入原人参二醇，高速分散均匀得到油相；另向800ml水中加入20ml甘油和助乳化剂，60℃搅拌均匀得到水相。在60℃高速搅拌下，将油相缓缓滴加到水相，继续超声搅拌10分钟，定容至1000ml。将初乳经高压均质2000bar压力循环10次，灌装，灭菌，既得。实施例1～5处方按本实施例方法制备得到的亚微乳制剂物理参数实施例7实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：超声搅拌时间为15分钟。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为115～125nm，Zeta电位为-30～-40mV。实施例8实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：超声搅拌时间为20分钟。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为115～125nm，Zeta电位为-30～-40mV。实施例9实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：高压均质压力为1000bar，高压均质循环次数为10。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为115～125nm，Zeta电位为-30～-40mV。实施例10实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：高压均质压力为700bar，高压均质循环次数为15。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为115～125nm，Zeta电位为-30～-40mV。实施例11实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：初乳化温度为70℃。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为115～125nm，Zeta电位为-30～-40mV。实施例12实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：初乳化温度为40℃。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为230～240nm。实施例13实施例1～5任一处方的制备方法，与实施例6基本相同，区别在于：初乳化温度为80℃。本实施例方法制备得到的亚微乳制剂其平均粒径为240～250nm。亚微乳制剂稳定性考察：试验用亚微乳制剂为实施例1处方按实施例6制备方法制备得到的亚微乳制剂。亚微乳的表征：性状：外观呈现均匀分散、乳白色亚微乳制剂，瓶壁可见淡蓝色荧光(见图1)。pH值：PPD亚微乳在制备成初乳时pH值8.2-8.4之间，制备完未灭菌的PPD亚微乳pH值在7.9-8.0之间，灭菌后的PPD亚微乳pH值在7.0-7.2之间。亚微乳形态观察：取亚微乳适量蒸馏水稀释至适当浓度，将微乳滴于铜网上，用2％磷钨酸负染1min，用透射电镜下观察乳滴的形态，为黑色均匀分散的球状(见图2)。稳定性：1、高压灭菌对亚微乳的影响取同一批亚微乳，分成2份，一份热压灭菌(105℃，45min；115℃，30min以及121℃，15min)，一份不经热压灭菌，观察2份亚微乳的外观，同时比较粒径、电位及药物含量的变化。结果见表1。表1高压灭菌对PPD亚微乳的影响结果表明高压灭菌后PPD亚微乳理化性质稳定。2、离心稳定性将亚微乳三批，3500rmp，离心20min，观察是否有药物晶粒析出，测定粒径、电位、药物含量。结果见表2.表2PPD亚微乳的离心稳定性结果显示PPD亚微乳的离心稳定性好。3、稀释稳定性将亚微乳三批，分别稀释10、50、100、200、500、1000、2000倍后观察是否有药物晶粒析出，测定粒径，电位。结果见表3。表3PPD亚微乳的稀释稳定性倍数粒径(nm)PDI电位(-mV)0119.7±0.90.142±0.022-35.6±1.610132.9±0.80.198±0.019-33.5±0.350120.1±1.30.145±0.021-33.4±1.0100119.7±0.90.142±0.022-35.6±1.6200120.6±1.00.143±0.009-38.8±3.9500118.5±0.70.149±0.024-37.6±0.61000120.7±0.30.154±0.009-28.1±0.82000124.4±0.20.203±0.026-23.4±3.7结果显示稀释稳定，稀释2000倍粒径变化仍小于5％。4、PPD亚微乳分别放置1、2、3、4、5个月的稳定性表4PPD亚微乳1个月放置稳定性表5PPD亚微乳2个月放置稳定性表6PPD亚微乳3个月放置稳定性表7PPD亚微乳4个月放置稳定性本发明制备的PPD亚微乳制剂分别于4、20、30℃稳定性试验4个月，稳定性良好。亚微乳制剂对化疗小鼠造血细胞的影响1、原人参二醇注射用乳剂体外加药对骨髓抑制小鼠骨髓细胞粒系(CFU-GM)、红系(CFU-E/BFU-E)造血祖细胞集落生成的影响。实验采用环磷酰胺200mg/kg，腹腔注射一次造模，造模三天后取骨髓细胞进行集落培养，同时在培养体系中加入不同浓度的药物。结果见表8。从结果可以看出原人参二醇注射用乳剂在体外能明显促进三种造血祖细胞增殖，集落产率均明显高于模型组(P<0.05或0.01)。表8原人参二醇注射用乳剂对骨髓抑制小鼠造血祖细胞集落数的影响与模型对照比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0012、原人参二醇注射用乳剂体内加药对骨髓抑制小鼠骨髓细胞粒系、红系造血祖细胞集落生成的影响。实验当天腹腔注射环磷酰胺(CP)造模，造模后给药组立即静脉注射给予原人参二醇注射用乳剂药物，正常对照组和模型组给予同体积的蒸馏水，给药体积均为0.2ml/10g，连续给药7天，分别在给药后第7d每组取3只进行造血祖细胞培养，于造模后第1，3，5，7天取血测血常规。①集落培养结果：从下表中结果可以看出不同剂量的原人参二醇注射用乳剂在小鼠体内能明显促进三种造血祖细胞增殖；表9原人参二醇注射用乳剂对小鼠三种造血祖细胞增殖的影响与模型对照比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001②血常规结果：从下表中可见，给药后第7天75和150mg/kg剂量组小鼠白细胞(WBC)升高很明显。表10血常规测定结果基础第3天第5天第7天正常对照组4.43±1.756.92±0.597.10±0.768.05±1.44模型组4.43±1.732.17±0.331.90±0.375.17±0.3775mg/kg组4.57±2.191.87±0.471.89±0.8119.24±5.16*150mg/kg组4.60±2.302.17±0.341.71±0.3721.86±2.25***与模型对照比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。当前第1页1 2 3