一种用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的多甲氧基黄酮、组合物及其药物制剂的制作方法

本发明属于医药领域，涉及天然产物的新用途，具体涉及一种用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的多甲氧基黄酮、组合物及其药物制剂。
背景技术：
：非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是指除酒精和其他明确的损肝因素外所导致的，以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，近年来NAFLD的发病率呈明显的上升趋势，已成为发达国家第一大慢性肝病及肝功能异常的首要病因，普通成年人NAFLD患病率为17％～33％。目前现代医学尚无治疗NAFLD的特效药物，主要以祛除病因及诱因、治疗原发基础病为主，以阻止慢性肝病的发展，防治脂肪性肝炎，终末期则以肝移植治疗，但治疗的效果不能令人满意，因此研发有效治疗NAFLD的新型药物具有重要的临床意义。多甲氧基黄酮(PolymethoxylatedFlavones，PMFs)是一类含有多个甲氧基、低极性、具有平面结构的有强烈生物活性的黄酮类成分，是在苯基色原酮结构上的3,4,5,6,7,8,2',3',4',5',6'等位置处连有4个或4个以上甲氧基，主要来源于芸香科柑橘属，存在于陈皮、青皮、橘红、佛手、枳实等药材中。3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮(HMF)就是其中一种，其分子式为C22H24O9，相对分子质量为432.43，CAS号为1178-24-1，化学结构如下：技术实现要素：本发明的目的是提供一种用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的多甲氧基黄酮、组合物及其药物制剂，所述多甲氧基黄酮为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮(HMF)。上述目的是通过如下技术方案实现的：一种用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的药物，活性成分包括多甲氧基黄酮。优选地，所述多甲氧基黄酮为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮。优选地，所述活性成分还包括鸡屎藤苷酸，为多甲氧基黄酮与鸡屎藤苷酸的组合物。一种用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的药物制剂，包括上述活性成分，还包括药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂。本发明的有益效果：给予HMF后，极大地改善了肝结构，减少了高脂饮食导致的肝脏脂肪堆积，且HMF高浓度肝脏脂滴接近正常水平，以上结果表明3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮能有效地改善肝脏脂质堆积，起到预防或治疗非酒精性脂肪肝的作用，且具有量效差异性。。附图说明图1为各组肝脏切片结果。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本发明的技术方案。实验方法：1、动物模型的建立取C57BL/6雄性小鼠60只，体重18-20g，6周龄。小鼠适应一周后随机分组为：正常饲料组(Normalchowdiet，NCD)，高脂饮食组(Highfatdiet，HFD)，洛伐他汀组(Lovastatin，LOV)，3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮低剂量组(HMF-L)和3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮高剂量组(HMF-H)，除正常饲料组外其他组均采用高脂饮食。HFD饲料配方为：1.25％胆固醇、20％猪油、5％蔗糖、0.5％胆酸、维生素调至正常水平。2、给药剂量和给药方式：HFD诱导实验中，小鼠采用灌胃的给药方式进行。造模开始给药，NCD和HFD给予同体积的0.5％CMC-Na溶液，共给药六周。LOV组给药剂量为30mg/g/d，HMF-L组给药剂量为25mg/g/d，HMF-L组给药剂量为50mg/g/d。LOV和HMF分别用0.5CMC-Na溶液配置成混悬液。3、血浆制备：实验结束前，小鼠禁食不禁水12h，眼眦静脉取血，放入含有肝素钠的离心管中，4000rpm，4℃，离心10min，上清-80℃保存。4、血液生化指标测定：血浆甘油三酯、胆固醇、血浆低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所，测定步骤按相应说明书进行。5、解剖取材：实验结束前，小鼠禁食不禁水12h，处死小鼠，迅速分离出肝脏，取出一部分固定于福尔马林中制作H&E切片。H&E染色病理分析：1)新鲜的肝脏置于福尔马林中，浸泡24h；2)石蜡包埋，切4ìm厚片子；3)二甲苯脱蜡2次，5-10min/次；4)100％乙醇、95％乙醇、80％乙醇、75％乙醇、蒸馏水分别浸洗2次，1-2min/次；5)苏木精染色5min，蒸馏水清洗残余苏木精染色液，滤纸吸干残水；6)1％盐酸乙醇分化1-3s；7)蒸馏水浸泡15min；8)伊红液染色2min；9)用95％乙醇、100％乙醇浸泡2次，1min/次，二甲苯石碳酸溶液浸泡1min、二甲苯浸泡2次，1min/次。10)中性树脂固封；11)拍照分析。实验结果：由于非酒精性脂肪肝以脂肪过度沉积为主要特征，因此我们首先考察了HMF在体内对脂代谢的调控作用，我们采用HFD饮食诱导小鼠脂代谢紊乱模型评估HMF对体内脂代谢的影响。HFD诱导6周后，模型组与正常组相比较，TG、TC、LDL-c显著增加(P＜0.001)，说明小鼠高脂血症模型造模成功，HMF具有浓度依赖性降低HFD小鼠血浆TG、TC、LDL-c的含量，显著升高血浆HDL-c的含量，与阳性药物LOV(洛伐他汀)具有相似的趋势(表1-4)。血脂的增加往往导致脂类在器官中堆积，其中脂肪和肝脏最为显著。脂肪在肝脏的沉积，进而产生损伤作用，即为“非酒精性脂肪肝”，H&E染色结果表明HFD造模后脂肪在肝脏中堆积明显，肝细胞变形明显，说明脂代谢紊乱导致了肝损伤，给予洛伐他汀或HMF均能显著逆转肝细胞脂变。为了进一步评估HMF对脂肪肝的影响，我们测定了肝功能的特征性指标ALT和AST。造模后ALT、AST显著升高，说明肝脏出现损伤，而给予HMF后，ALT、AST显著降低，HMF高浓度(50mg/kg)甚至可以使血浆中ALT和AST含量恢复正常(表5-6)。非酒精性脂肪肝是脂代谢紊乱的主要特征之一，表现为肝脏细胞内脂肪过度堆积，并影响肝功能。如图1所示，HFD造模后，HFD组显示胀大的肝细胞，不规则的肝索排列以及大量脂滴。给予HMF后，极大地改善了肝结构，减少了高脂饮食导致的肝脏脂肪堆积，且HMF高浓度肝脏脂滴接近正常水平，以上结果表明3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮能有效地改善肝脏脂质堆积，起到预防或治疗非酒精性脂肪肝的作用，且具有量效差异性。表1HMF对血浆甘油三酯(TG)的影响(n＝12)组别TG(mmol/L)P值NCD1.46±0.1844HFD2.30±0.17948.68E-7###LOV1.73±0.34509.67E-3**HMF-L1.78±0.16446.62E-4*HMF-H1.77±0.28996.13E-3*注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表2HMF对血浆总胆固醇(TC)的影响(n＝12)组别TC(mmol/L)P值NCD2.11±0.1000HFD4.80±0.27019.75E-14###LOV3.81±0.27471.33E-4***HMF-L4.37±0.23953.73E-2n.s.HMF-H3.90±0.21021.08E-4*注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，n.s.无显著性差异，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表3HMF对血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的影响(n＝12)组别LDL-c(mmol/L)P值NCD0.21±0.0168HFD0.54±0.04162.06E-11###LOV0.38±0.04221.03E-4***HMF-L0.46±0.05043.75E-2*HMF-H0.40±0.03873.12E-4***注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表4HMF对血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)的影响(n＝12)组别HDL-c(mmol/L)P值NCD1.40±0.0889HFD2.18±0.15121.10E-7###LOV2.68±0.16057.19E-4***HMF-L2.78±0.19403.80E-4***HMF-H2.86±0.15932.34E-5***注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表5HMF对谷丙转氨酶(ALT)的影响(n＝12)组别ALT(IU/L)P值NCD22.50±2.67HFD28.15±2.983.71E-3###LOV23.91±1.403.30E-2n.s.HMF-L22.31±2.027.18E-3**HMF-H18.99±1.474.85E-5***注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，n.s.无显著性差异，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。表6HMF对谷草转氨酶(AST)的影响(n＝12)组别AST(IU/L)P值NCD104.00±8.87HFD114.36±7.361.03E-2#LOV101.66±7.813.61E-2n.s.HMF-L108.45±7.913.09E-1n.s.HMF-H98.95±7.151.01E-2*注：与NCD比较，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；与HFD比较，n.s.无显著性差异，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。实验中还发现，鸡屎藤苷酸可以增强HMF的抑制非酒精性脂肪肝作用，按照上述实验方法使用HMF低剂量组中一半剂量的HMF与鸡屎藤苷酸(给药剂量为HMF给药剂量的0.1倍)组合使用就可以将小鼠血浆中TG、TC、LDL-c水平降低至NCD组的水平(为1.46±0.1312、2.11±0.1231、0.22±0.0144)，与NCD组无显著性差异(P＞0.05)，同时可以进一步升高HDL-c水平，增强HMF对肝功能的改善作用(ALT、AST水平优于HMF-H组)。但是，单独给与上述剂量的鸡屎藤苷酸时，对小鼠血浆中TG、TC、LDL-c水平无明显降低作用，与模型组无显著差异(分别为2.31±0.1416、4.81±0.2514、0.53±0.0423)(P＞0.05)，ALT、AST水平也与HFD组无显著差异(P＞0.05)。上述实施例的作用仅在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。当前第1页1 2 3