绞股蓝皂苷75的抗糖尿效果的制作方法

本发明涉及含有绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的用于预防或治疗糖尿病的药物组合物，更具体地，涉及包括将含有绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的药物组合物给药于除了人体之外的个体的预防或治疗糖尿病的方法；含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的食品组合物；含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的饲料组合物。

背景技术：

危及人类健康的疾病之一的糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其是随着时间的经过而导致血管障碍和神经、肾脏及网膜等的功能异常，从而导致人类失去生命的一种疾病。糖尿病根据其发生机制分为胰岛素依赖型糖尿病(i型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(ii型糖尿病)。

已知胰岛素依赖性糖尿病是由于胰腺β细胞被选择性地损伤或破坏而在体内无法生成胰岛素，从而无法消耗血中葡萄糖而发生的疾病，出现严重的高血糖症、酮酸中毒、口干、饮水多、体重减少和疲劳感。在儿童或10几岁的青少年等对象中出现的胰岛素依赖型糖尿病，其治疗方法就是胰岛素的给药。

非胰岛素依赖型糖尿病在所有糖尿病患者中占据90％以上，主要发生在成人中。其没有明确的发病原因，但预测可能与由遗传因素和诸如非正常的饮食生活、压力、运动、肥胖、老化等环境因素导致的胰腺β细胞的胰岛素分泌降低或肝脏、肌肉、脂肪等组织中的胰岛素抵抗性的增加复合地关联而被诱发。上述非胰岛素依赖型糖尿病通常对胰岛素显示抵抗性，且由于胰岛素的功能不全而持续过血糖状态是普遍情况。慢性高血糖引发胰腺β细胞的损伤而导致细胞死亡，因此为了治疗ii型糖尿病需要对血糖进行有效控制，其中，胰岛素的正常作用尤为重要。

另外，为了了解老年人中出现的胰岛素抵抗性的原因，进行临床实验比较身体条件相似的老年人和年轻人，结果显示在老年人的肌肉中发生葡萄糖代谢的缺陷。此外根据核磁共振装置(nuclearmagneticresonance)的分析，老年人肌肉中的线粒体活性降低。该结果表示老年人肌肉细胞中线粒体功能异常可能会是非胰岛素依赖型糖尿病的原因。实际上也在非胰岛素依赖型糖尿病患者的肌肉中发现了线粒体蛋白质atp合酶(atpsynthaseβ)的表达降低(jbiolchem(生物化学杂志)，278：10436-10442(2003))。因此线粒体的激活也可以成为治疗非胰岛素依赖型糖尿病的一种方法。

现有的非胰岛素依赖型糖尿病的治疗方法有饮食疗法、运动疗法、药物疗法等。用于糖尿病治疗的药物有磺酰脲类、双胍类、α-糖苷酶抑制剂类、噻唑烷二酮类、格列奈类等多种效果优异的降血糖药在生产和市售。但这些药品不仅出现呕吐、腹痛、腹部膨胀等轻微症状(internationalhepatologycomminications(国际肝病学通讯)，5：289-296(1996))，还出现低血糖、肝功能下降(diabetescare(糖尿病护理)1995：18(6)：817-824)，严重时甚至出现死亡(internationalhepatologycomminications，5：289-296(1996))等副作用。此外，在肝脏疾病、胃肠功能紊乱、肾脏疾病、妊娠等状态的人对其的使用受限。

此外，以甲福明二甲双胍(metformin)为基础的药品在有效药物筛选过程中发现，强力激活在糖异生途径(gluconeogenesispathway)中对糖代谢起重要作用的腺苷一磷酸激活蛋白激酶(ampk，ampactivatedkinase)，从而能够主动抑制非正常的糖异生，因此目前很多制药公司在制造并销售。但是有研究结果表明甲福明二甲双胍的服用量越多且服用时间越长，维生素b12缺乏症危险随之增加，因此实际上无法被认为是安全的药品。

从而人们为了开发出一种几乎没有毒性和副作用，且药理活性优异的新的糖尿病治疗剂及功能食品，一直以来对韩医处方及民间疗法等中采用的天然物质进行广泛研究。近来也在对糖尿病预防及治疗进行不断的研究，例如，韩国专利申请第2011-0020469号中公开了一种含有人参皂苷rg2和rg3的用于预防或治疗糖尿病的组合物。

另外，人参中含有人参二醇(panaxadiol，pd)类、人参三醇(panaxatriol，pt)类、齐墩果烷(oleanane)类等多种人参皂苷(ginsenoside)和绞股蓝皂苷(gypenoside)。不同种类的免疫功能增强、中枢兴奋作用、促肾上腺皮质激素分泌促进、血小板凝集抑制等功能互不相同，因此相同类别的人参皂苷也无法预测有相同的效果。

技术实现要素：

发明目的

本发明的目的在于，提供一种含有绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的用于预防或治疗糖尿病的药物组合物。

本发明的另一目的在于，提供包括将上述药物组合物给药于除人体之外的个体的步骤的用于预防或治疗糖尿病的方法。

本发明的另一目的在于，提供含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的食品组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的饲料组合物

技术方案

本申请的发明人对糖尿病的预防或治疗方法进行不懈研究，结果发现绞股蓝皂苷75能够增进胰岛素分泌细胞的胰岛素分泌，激活胰岛素分泌细胞的线粒体功能，从而具有预防或治疗糖尿病的效果，由此完成了本发明。

发明效果

根据本发明的含有绞股蓝皂苷75的组合物促进胰岛素分泌，增强线粒体的活性，从而显示预防或治疗糖尿病的效果。

附图说明

图1是针对借助绞股蓝皂苷75的给药而分泌的胰岛素的量的elisa定量分析结果。

图2是针对借助绞股蓝皂苷75的给药而增加的细胞内atp的量的荧光素酶(luciferase)活性测定方法的分析结果。

图3是针对借助绞股蓝皂苷75的给药而增加的线粒体膜电压进行四甲基罗丹明甲酯(tmrm，tetramethylrhodaminemethylester)染色及荧光激活细胞分选术(facs，fluorescenceactivatedcellsorting)的分析结果。

具体实施方式

为了解决上述目的，根据本发明的一方面，提供一种含有绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的用于预防或治疗糖尿病的药物组合物。

根据本发明的上述绞股蓝皂苷75优选为具有下列化学式1的结构的绞股蓝皂苷75：

[化学式1]

所述绞股蓝皂苷75可以化学合成或从天然物质中分离，本发明的绞股蓝皂苷75从天然物质中分离时，只要含有绞股蓝皂苷75，其概念包括天然物的任何提取物或任何其组分(fraction)。

本发明中使用的术语“药学上可接受的盐”是指不影响所给药的绞股蓝皂苷75的生物活性和物性的剂型。所述药学上可接受的盐在没有特别说明的情况下，可以包括上述绞股蓝皂苷75的化合物中可能存在的所有酸性或碱性基团的盐。例如，所述药学上可接受的盐可以包括羟基的钠盐、钙盐及钾盐等，氨基的其他药学上可接受的盐可以举例为氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、醋酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(甲基化产物(methylate))及对甲基苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)等，可以通过本领域公知的盐制造方法制造。

本发明中使用的术语“预防”是指将本发明的上述组合物给药于个体以抑制或延缓糖尿病的所有行为。

本发明中使用的术语“治疗”是指将本发明的上述组合物给药于个体以使糖尿病症状好转或有利于其的所有行为。

本发明的所述药物组合物借助作为有效成分的上述绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的作用，其预防或治疗糖尿病的效果优异，没有毒性，因此适用于人体时也不会诱发副作用且安全。

本发明的所述药物组合物可以以单方制剂使用，也可以进一步含有本领域公知的具有糖尿病治疗效果的药物而制造为复方制剂，且可利用药剂学上可接受的载体或赋形剂而配制，从而制造为单剂量形态或包含在多剂量容器内而制造。

本发明的所述药物组合物可分别按照通常的方法剂型化为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬液、乳液、糖浆、气雾剂等口服剂型；外用剂；灭菌注射溶液等形态而使用。组合物中可含有的载体、赋形剂及稀释剂可以为乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、金合欢胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等，但不限于此。它们可以单独使用或2种以上混合使用。

本发明的药物组合物在配制时可以采用通常使用的填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂而制造。

用于口服给药的固体制剂可以包括片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂可以混合1种以上的例如淀粉、碳酸钙(calciumcarbonate)、蔗糖、乳糖或明胶等赋形剂而制造。除了单纯的赋形剂之外，还可以使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服给药的液状制剂有混悬剂、内用液剂、油剂、糖浆剂等，而这些剂型除了作为通常使用的单纯稀释剂的水、液体蜡之外，还可以含有例如湿润剂、甜味剂、芳香剂、保鲜剂等多种赋形剂。

用于非口服给药的制剂可以包括灭菌水溶液、非水溶剂、混悬剂、油剂、冷冻干燥制剂、外用剂等。所述非水溶剂、混悬剂可以使用丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物油、油酸乙酯等可注射的酯等。

本发明的所述药物组合物的药学有效给药量根据所述药物组合物的配制方法、给药方式、给药时间和/或给药途径等而不同，根据所述药物组合物的给药所要达成的反应的种类和程度；作为给药对象的个体种类、年龄、体重、一般的健康状态、疾病的症状或程度、性别、饮食、排泄；对该个体同时或非同时一同使用的其他药物组合物的成分等各种因子及药物领域中公知的类似因子而不同，本领域技术人员根据所预期的治疗可以容易的决定和处方有效的给药量。

本发明所述药物组合物可以含有药剂学上有效剂量的绞股蓝皂苷75。

本发明中用于“药剂学上有效剂量”是指具有可适用于医学治疗的合理的受益/危险比例以足以治疗疾病的量，通常可以每日以0.001至1000mg/kg，优选以0.05至200mg/kg，更优选以0.1至100mg/kg的量一次性或分几次给药。但是，根据本发明的目的，针对特定患者，优选根据所要达成的反应种类和程度；关于诸如是否根据情况而使用其他制剂等的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状态、性别、饮食；给药时间、给药途径、组合物的分泌率、治疗时间、与具体组合物同时使用或非同时使用的药物等多种因子和医药领域中公知的因子而采用不同的具体治疗有效量。

上述药物组合物中含有的提取物的含量没有特别限制，相对于药物组合物的总重量，其含量可以为0.01至100重量％；更优选为1至80重量％。

本发明的药物组合物可以作为单独治疗剂给药，也可以与其他治疗剂并用给药，本发明的药物组合物与现有的治疗剂可以同时或依序给药。另外可以是单一或多重给药。考虑上述所有因素的情况下，以在不诱发副作用的同时能够获得最大效果的最小量给药是关键，这可以由本领域技术人员容易地决定。

本发明的上述药物组合物的给药途径及给药方式分别可以为独立的，对于其方式没有特别限制，只要上述药物组合物能够到达所需的部位，任意的给药途径及给药方式均可。所述药物组合物可以通过口服或非口服方式给药，优选通过非口服方式进行给药。

作为以所述非口服方式给药的方法，可以利用例如静脉内给药、腹腔内给药、肌肉内给药、经皮给药或皮下给药等。

根据本发明另一方面，所述药物组合物还含有药学上可接受的载体。

在本发明中使用的术语“药学上可接受的载体”是指在不刺激生物体的同时不阻碍所注入的化合物的生物活性及特性的载体或稀释剂。在本发明中可使用的所述载体的种类不受特别限制，只要是在本领域通常使用的药学上可接受的载体，均可使用。所述载体的具体例有盐水、灭菌水、林格氏液、缓冲盐水、清蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇等，但不限于此。它们可以单独使用或2种以上混合使用。所述载体可以包括非天然存在的载体(non-naturallyoccuringcarrier)。

此外，根据需要可以添加使用抗氧化剂、缓冲液和/或抑菌剂等其他通常的添加剂，还可以额外添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂、润滑剂等以配制为水溶液、混悬液、乳浊液等注射用剂型、丸药、胶囊、颗粒或片剂等而使用。

根据本发明的又一方面，所述药物组合物的预防或治疗对象的糖尿病为非胰岛素依赖型糖尿病。

本发明中使用的术语“非胰岛素依赖型糖尿病”是指ii型糖尿病，是由于胰岛素虽然分泌但其量不足或人体无法有效利用分泌的胰岛素而发生的疾病。非胰岛素依赖型糖尿病占全体糖尿病的90～95％，主要在40岁以后多发，但近来发病年龄呈现年轻化趋势，在儿童中也被发现。非胰岛素依赖型糖尿病的症状为感到严重口渴、尿频、多感到疲劳、空腹感增加等。

根据本发明又一方面，提供包括将含有所述绞股蓝皂苷75或其药学上可接受的盐的用于预防或治疗糖尿病的药物组合物给药于除人体之外的个体的预防或治疗糖尿病的方法。

根据本发明的所述预防或治疗糖尿病的方法，所述药物组合物与本发明上述药物组合物相关部分的说明相同。

本发明中使用的术语“个体”指包括人、鼠、家畜等哺乳动物在内的所有动物。

根据本发明的所述预防或治疗糖尿病的方法，所述药物组合物的给药量、给药途径和给药方式与本发明所述药物组合物相关的说明相同。

根据本发明的所述糖尿病预防或治疗方法，所述药物组合物可以通过口服或非口服方式进行给药，不受特别限制。

根据本发明又一方面，提供含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的食品组合物。

本发明中所述绞股蓝皂苷75优选为具有下列化学式1结构的绞股蓝皂苷75。

[化学式1]

本发明食品组合物中含有的绞股蓝75或其食品学上可接受的盐包括含有绞股蓝皂苷75的动植物、其提取物、其组分或其加工物的形态。此外，所述组合物还可以含有食品学上可接受的食品辅助添加剂。

在本发明中使用的术语“食品辅助添加剂”是指可辅助地添加至食品中的成分，是在制造各剂型的健康功能食品时所添加的成分，本领域技术人员可以适当选择使用。食品辅助添加剂的具体例有各种营养剂、维生素、矿物(电解质)、合成调味剂及天然调味剂等调味剂、着色剂、填充剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等，但本发明的食品辅助添加剂的种类不限于上述例子。

本发明的食品组合物可以包括健康功能食品。本发明中使用的术语“健康功能食品”是指使用具有对人体有用的功能性的原料或成分，以片剂、胶囊、粉末、颗粒、液状及丸等形态制造或加工的食品。在这里“功能性”是指对人体结构和功能而言，在调节营养素或生理作用等保健用途方面具有有用的效果。本发明的健康功能食品可以通过本领域通常使用的方法制造，在制造时可以添加本领域通常添加的原料及成分而制造。此外，只要是所述健康功能食品的剂型或被认定为健康功能食品的任何剂型，均可采用，不受限制。本发明的食品用组合物可以制造为多种形态的剂型，与普通药品不同的是以食品为原料，因此具有不会发生由于长期服用药物而可能发生的副作用的优点；便携性优异，因此本发明的健康功能食品可以作为增强糖尿病预防或改善效果的辅助剂而摄取。

本发明的健康功能食品可以采用的形态不受限制，可以包括通常意义的食品，可以与功能食品等本领域已知的术语通用。此外，本发明的含有绞股蓝皂苷75的健康功能食品可以根据本领域技术人员的选择，与可在食品中含有的适当的其他辅助成分和公知添加剂混合而制造。可以添加的食品例如为肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、快餐类、饼干类、披萨、方便面、其他面类、口香糖类、包括冰淇淋类的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮剂、酒精饮料和维生素复合剂等，可以在以根据本发明的绞股蓝皂苷75为主成分制造的汁、茶、啫喱及果汁中添加而制造。

此时，所述食品组合物中含有的提取物的含量不受特别限制，相对于食品组合物总重量可以为0.01至100重量％，优选为1至80重量％。

根据本发明又一方面，提供一种含有绞股蓝皂苷75或其食品学上可接受的盐的用于预防或改善糖尿病的饲料组合物。

本发明中所述绞股蓝皂苷75优选为具有下列化学式1的结构的绞股蓝皂苷75。

[化学式1]

本发明的饲料组合物可以是牛、猪等脊椎动物；鸡、鸭等家禽类；鱼类、甲壳类等的饲料组合物，但不限于此。应当理解的是只要是能够摄取绞股蓝75的动物均可实施本发明。

本发明的饲料组合物可以与饲料组合物内的配比无关地利用。例如，即使是蛋白含量高的饲料利用本发明也没有问题。

此时，所述饲料组合物中包含的提取物的含量不受特别限制，相对于所述饲料组合物的总重量，可以含有0.01至100重量％；更优选1至80重量％。

本发明的饲料组合物包括玉米等谷物类；麦麸；谷屑类；玉米皮等糠皮类；大豆粕、紫苏饼粕等粕类；地瓜、土豆等块根类；制面包副产物、氨基酸发酵副产物等食品加工副产物类；小球藻、海带等藻类；牧草、山野草等纤维质类及其发酵物；人参粕、肌醇粕等制药副产物类；玉米油、大豆油、牛油、猪油、鱼油等油脂类；谷物类淀粉等淀粉类；鱼粉；蟹粉等蛋白质类；骨粉、鱼骨粉、贝壳粉等无机物类；矿物盐、海盐等食盐类；磷酸盐类；钙盐类等。

本发明的饲料组合物为了防止降低饲料品质，可以含有瓜尔胶、松脂、明胶、酪蛋白、海藻酸钠、酪蛋白酸钠等粘合剂；蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯等乳化剂；枸橼酸、乳酸等酸味剂；白炭墨等抗凝固剂；乙氧基喹、丁基羟基甲苯等抗氧化剂等。

本发明的饲料组合物还可以含有氨基酸剂、维生素剂、糖分解酶等酶剂、罗伊氏乳杆菌(lactobacillusreuteri)等益生菌；啤酒酵母等酵母剂等。

本发明的饲料组合物的剂型不受特别限制，通常使用的饲料组合物均可适用于本发明。例如本发明的饲料组合物可以是液状、粉末、颗粒、小粒(granule)、小球或粒状。

实施例

下面通过实施例进一步详细说明本发明的构成及效果。这些实施例仅用于例示本发明，本发明的范围不由这些实施例限定。

实施例1：绞股蓝皂苷75的胰岛素分泌增加效果

为了确认绞股蓝皂苷75的胰岛素分泌增加效果，测定了用绞股蓝皂苷75处理后分泌的胰岛素的量。

具体地，为了确认绞股蓝皂苷75引起的胰岛素分泌增加效果，将胰岛素分泌细胞ins-1细胞在细胞培养基中培养后(37℃，5％co2，rpmi(无血清细胞冻存)培养基，10％fbs(胎牛血清))，分别取10μm的绞股蓝皂苷75、人参皂苷f1、人参皂苷rg3、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3以处理细胞，处理2小时后利用elisa(酶免疫吸附)法测定分泌的胰岛素的量。

其结果如图1所示，可以确认用绞股蓝皂苷75处理时，相比对照组(dmso(二甲基亚砜))，胰岛素分泌量增加约110％。因此可以获知通过由绞股蓝皂苷75的处理所导致的胰岛素分泌量增加效果可以预防或治疗糖尿病。除此之外，可以确认人参皂苷f1、人参皂苷rg3、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3处理组显示约50％的胰岛素分泌量增加效果。

实施例2：绞股蓝皂苷75的线粒体功能激活

线粒体功能降低时，由于阻碍胰岛素信号传递而可能成为糖尿病的原因。因此为了确认绞股蓝皂苷75的线粒体功能激活效果，测定了用绞股蓝皂苷75处理后增加的atp量和线粒体膜电压。

具体地，为了确认绞股蓝皂苷75引起的线粒体功能激活效果，将胰岛素分泌细胞ins-1细胞在细胞培养基中培养后(37℃，5％co2，rpmi培养基，10％fbs)，取10μm的绞股蓝皂苷75以处理细胞，2小时后测定细胞内的atp量和线粒体膜电压。首先，为了测定细胞内atp量，将用绞股蓝皂苷75处理的ins-1细胞通过冷冻-解冻及超声波处理进行粉碎，将细胞粉碎液与荧光素酶、荧光素混合以诱导了荧光发色。荧光素酶活性及其引起的荧光发色依赖atp的量，因此利用荧光测定仪来测定荧光发色程度，由此确定atp的量。接着为了测定线粒体膜电压，将用绞股蓝皂苷75处理的ins-1细胞用tmrm染色后，利用facs仪器测定各个细胞的染色程度。线粒体膜电压越高，tmrm染色程度越高。

结果，如图2所示，可以确认用绞股蓝皂苷75处理时，相比对照组(dmso)，细胞内的atp量增加50％。此外，可以确认人参皂苷f1、人参皂苷rg3、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3处理组显示约40％左右的atp量的增加效果。此外，如图3所示，可以确认用绞股蓝皂苷75处理时，相比对照组(dmso)，线粒体膜电压增加40％。还确认人参皂苷f1、人参皂苷rg3、人参皂苷rb2、人参皂苷rb3具有约20％左右的线粒体膜电压增加效果。

上述结果表明用绞股蓝皂苷75处理细胞时，线粒体的功能被激活，从而增加atp合成和线粒体膜电压。由此可以知获知，通过由绞股蓝皂苷75的处理所引起的线粒体功能激活效果，可以预防或治疗糖尿病。