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本申请要求2015年3月12日提交的美国临时申请61/132,251和2015年12月15日提交的美国临时申请号62/267,386的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。
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背景
膀胱癌是美国第六大最常见癌症；它在男性中为第三最常见的癌症，也是女性中第十一最常见的癌症。大约75％的膀胱癌为非肌肉浸润型(babjuk等，2013)。将非肌肉浸润性膀胱癌(nmibc)分类为ta(非浸润性乳头状癌)、t1(肿瘤浸润固有层或上皮下结缔组织)和tis(原位癌)。ta肿瘤是最常见的，约占nmibc的70％，但其中只有7％被分类为高等级(sylvester等，2005)。约20％的nmibc是t1肿瘤(anastasiadis等，2012)。t1肿瘤比ta肿瘤更具侵袭性，并被认为是高风险的(babjuk等，2013；americanurologicalassociation，2014)。将局限于粘膜(非浸润性)的平坦、高等级肿瘤表征为原位癌(cis)，((babjuk等，2013))且这些占nmibc的约10％(anastasiadis等，2012)。
对于nmibc(高等级ta、t1和cis)的通常第一种治疗是膀胱肿瘤(turbt)的经尿道切除术，随后是膀胱内免疫治疗，最常见的是利用卡介苗(bacilluscalmette-guérin,bcg)(babjuk等，2013,americanurologicalassociation2014)，在患有t1肿瘤的患者中，推荐第二turbt(babjuk等，2013,americanurologicalassociation2014)。膀胱内bcg疗法常伴随局部和全身性副作用，导致约20％的患者停止治疗(sylvester等，2011)。约75％的患者经历局部副作用(包括膀胱炎、刺激性排尿症状(irritativevoidingsymptom)和血尿)，而40％的患者报告全身性副作用，包括全身不适和发热(sylvester等，2011)。膀胱内bcg失败发生在高达40％的患者中(sylvester等，2011)。由于肌肉浸润性疾病发展的高风险，对cis和高等级ta以及在膀胱内治疗后经历疾病复发的t1患者推荐膀胱切除术。对于无法或不愿承受膀胱切除术的患者，治疗选择有限。因此，在本领域需要对于膀胱癌安全并有效的治疗及安全和有效治疗的最佳给药方案。
技术实现要素：
在一个方面中，本公开提供了用于在有需要的受试者中治疗膀胱癌的方法，其中所述方法包括在第一给药期向所述受试者施用免疫偶联物，随后为第二给药期，其中所述第一给药期包括每周两次施用所述免疫偶联物，且其中所述第二给药期包括每周一次施用所述免疫偶联物。在一些实施方案中，所述第一和第二给药期是治疗的诱导期。在一些实施方案中，第一和第二给药期各自独立地选自约4、约5、约6、约7或约8周的长度。在一些实施方案中，第一给药期为至少约6个连续周的时间且第二给药期为至少约6个连续周的时间。。
在一个方面中，所述方法进一步包括在第三给药期对所述受试者施用所述免疫偶联物，其中每隔一周每周一次施用所述免疫偶联物。在一些实施方案中，第三给药期是治疗的维持期。在一些方面，在第二给药期后，在没有高等级疾病的组织学证据的受试者中开始第三给药期。在其他实施方案中，在第二给药期结束时以低等级t1疾病进入研究和不具有低等级t1疾病或任何高等级疾病证据进入研究的患者中开始第三给药期。因此，在一些实施方案中，第三给药期或维持期在未出现如本文所定义的事件的受试者中启动；和/或在治疗的诱导期之后实现如本文定义的完全响应的受试者中启动。在一些实施方案中，第三给药期在第二给药期结束之后的至少一周或至少两周开始。在一些实施方案中，第三给药期在第二给药期结束之后的不超过3周开始。在一些实施方案中，维持期持续至少约6周、至少约8周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月的时间。在其他实施方案中，维持期持续到疾病复发或疾病进展。
在一个方面中，所述方法进一步包括在施用所述免疫偶联物之前移除膀胱肿瘤。在一些实施方案中，所述膀胱肿瘤通过经尿道切除或电灼疗法来移除。
在一些实施方案中，所述免疫偶联物包含结合蛋白和毒素。在进一步的实施方案中，结合蛋白结合至人ep-cam的细胞外结构域。在一些实施方案中，免疫偶联物包含结合至ep-cam的细胞外结合结构域的结合蛋白，其中所述结合蛋白是免疫球蛋白结合蛋白或非免疫球蛋白多肽配体。
在一些实施方案中，免疫球蛋白结合蛋白是抗体或其抗原结合片段。在进一步的实施方案中，结合蛋白为单克隆抗体fab、fab'、(fab')2、单链片段(scfv)、二硫键稳定性片段(dsfv)或单结构域抗体(sdab)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段为鼠类、嵌合或人源化抗体或其抗原结合片段。在具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段是人源化的。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：与seqidno:7所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的重链cdr1区；与seqidno:8所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的重链cdr2区；和与seqidno:9所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的重链cdr3区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：与seqidno:4所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的轻链cdr1区；与seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的轻链cdr2区；和与seqidno:6所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的轻链cdr3区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含分别由seqidno:7、8和9组成的重链cdr1、cdr2和cdr3；和分别由seqidno:4、5和6组成的轻链cdr1、cdr2和cdr3。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:12所示的氨基酸序列具有至少大约80％、至少大约85％、至少大约90％、至少大约95％或至少大约99％的同源性的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:13所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的重链可变区。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:3所示的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的氨基酸序列。因此，在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段为结合至人ep-cam的scfv，其中所述scfv的氨基酸序列对应seqidno:3。在一些实施方案中，抗体或其片段包含与seqidno:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％的同源性的氨基酸序列，并包含seqidno：4、5、6和7、8和9。
在某些实施方案中，在本公开的方法中有用的免疫偶联物包含毒素。在一些实施方案中，毒素选自假单胞菌外毒素a(pseudomonasexotoxina，eta)或其变体、白树毒素(gelonin)、bouganin、皂草素(saporin)、蓖麻毒素(ricin)、蓖麻毒素a链、异株泻根毒蛋白(bryodin)、白喉毒素(diphtheriatoxin)和局限曲菌素(restrictocin)。在一些实施方案中，毒素是假单胞菌外毒素a(eta)或其变体。在进一步的实施方案中，毒素是eta(242-608)。在一些实施方案中，毒素包含与seqidno:11具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在本公开的方法中有用的免疫偶联物包含通过肽接头附接至毒素的结合蛋白。肽接头可以是可裂解接头或不可裂解接头。在一些实施方案中，接头是选自下组的可裂解接头：弗林蛋白酶敏感接头、组织蛋白酶敏感接头、金属蛋白酶接头或溶酶体水解酶敏感接头。在一些实施方案中，接头是柔性接头。在一些实施方案中，接头的长度在约5至约50个氨基酸之间。在进一步的实施方案中，接头的长度在约10至约30个氨基酸之间。在进一步的实施方案中，接头的长度为约20个氨基酸。在一些实施方案中，接头与seqidno:10具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性。
在一些实施方案中，在本文提供的方法中有用的免疫偶联物包含与seqidno:2具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫偶联物由如seqidno:2所示的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，在本文提供的方法中有用的免疫偶联物包含与seqidno:2的23-665位氨基酸具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，在本文提供的方法中有用的免疫偶联物由如seqidno:2的23-665位氨基酸所示的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，在本文提供的方法中有用的免疫偶联物包含与seqidno:2的23-669位氨基酸具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的同源性的氨基酸序列。在一些实施方案中，在本文提供的方法中有用的免疫偶联物由如seqidno:2的23-669位氨基酸所示的氨基酸序列组成。
在一些实施方案中，在第一和第二给药期，以相同的剂量水平对受试者施用免疫偶联物，使得受试者在第一给药期每周两次接受特定剂量的免疫偶联物，且在第二次给药期每周一次接受所述相同的剂量的免疫偶联物。在其它实施方案中，在第二给药期，以相对于第一给药期更高或更低的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在其它实施方案中，在第一、第二和第三给药期以相同的剂量水平对受试者施用免疫偶联物，使得受试者在第一次给药期每周两次，在第二次给药期每周一次，且在第三次给药期每隔一周一次接受所述相同剂量的免疫偶联物。在进一步的实施方案中，在第一、第二和/或第三给药期以不同剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在一些实施方案中，以约5mg至约75mg/剂量的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在进一步的实施方案中，以约10mg至约60mg/剂量的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在进一步的实施方案中，以约20mg至约40mg/剂量的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在进一步的实施方案中，以约30mg的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在一些实施方案中，在第一和第二给药期以30mg的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在进一步的实施方案中，在第一、第二和第三给药期以30mg的剂量水平对受试者施用免疫偶联物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括额外的给药期，其中进一步修改了给药水平和/或给药的频率。
在一些实施方案中，相隔至少48小时对受试者施用免疫偶联物的剂量。在一些实施方案中，在任何7天的时间内，对受试者施用不超过2份剂量的免疫偶联物。
在一些实施方案中，免疫偶联物通过滴注入膀胱施用。在进一步的实施方案中，免疫偶联物经由导管施用。在一些实施方案中，在免疫偶联物施用之前将膀胱排空。例如，在一些实施方案中，由受试者通过膀胱排尿而将膀胱排空，和/或在施用免疫偶联物前经由导管将膀胱排空。在一些实施方案中，将免疫偶联物保持在膀胱中至少约15分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约1.5小时、至少约2小时、至少约2.5小时、至少约3小时或更久。在一些实施方案中，在免疫偶联物在膀胱中的时间内，受试者被置于直立、俯卧位、仰卧位、以及左侧卧位和右侧卧位中的一个或多个。在进一步的实施方案中，在免疫偶联物在膀胱中的时间内，受试者被置于直立、俯卧位、仰卧位和左右侧卧位中的每一个。
在一个方面中，所述膀胱癌是非肌肉浸润性膀胱癌(nmibc)。在一些实施方案中，将nmibc分类为原位癌(cis)、ta或t1。在一些实施方案中，受试者具有bcg不应或bcg耐受性的膀胱癌。在一些实施方案中，受试者先前已用bcg、干扰素或其组合进行治疗。在一些实施方案中，受试者以前已经治疗了其他膀胱内疗法(intravesiculartherapy)例如丝裂霉素、吉西他滨(germcitabine)、紫杉烷、干扰素、戊柔比星或其组合。在一些实施方案中，受试者在有或没有干扰素治疗的情况下对先前的bcg没有响应。在其它实施方案中，受试者在有或没有干扰素治疗的情况下对先前的bcg进行响应，但疾病随后复发。在一些实施方案中，受试者对具有或不具有干扰素的bcg疗法没有响应后，已被丝裂霉素、吉西他滨、紫杉烷、干扰素、戊柔比星或其组合治疗。在其它实施方案中，受试者在具有或不具有干扰素的bcg疗法后复发后，已被丝裂霉素、吉西他滨、紫杉烷、干扰素、戊柔比星或其组合治疗。在一些实施方案中，受试者接受了至少6次、至少7次、至少8次或至少9次bcg的滴注。在进一步的实施方案中，所述至少6次、至少7次、至少8次、或至少9次bcg的滴注在2个bcg周期中。
在一些实施方案中，本文提供的用于治疗膀胱癌的方法进一步包括对受试者施用至少一种额外的治疗剂。在进一步的实施方案中，额外的治疗剂是化疗药物或放射治疗药物。在一些实施方案中，化疗药物包括但不限于：顺铂、卡铂、紫杉醇、紫杉萜、5-氟尿嘧啶、博莱霉素、甲氨蝶呤、异环磷酰胺、奥沙利铂、环磷酰胺(cyclophosphamide)、达卡巴嗪、替莫唑胺、吉西他滨、卡培他滨、克拉屈滨、氯法拉滨(clofarabine)、阿糖胞苷、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨、羟基脲、培美曲塞、喷司他丁、thioguanadine、柔红霉素、阿霉素、表柔比星、依达比星(去甲氧柔红霉素)、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、依托泊甙(eniposide)、秋水仙碱、长春新碱、长春碱和长春瑞滨。示例性的癌症特异性试剂和抗体包括但不限于:阿法替尼、阿地白介素、阿仑单抗、阿西替尼、贝立单抗、贝伐单抗、硼替佐米、伯舒替尼、布妥昔单抗、卡赞替尼、康纳单抗、卡非佐米、西妥昔单抗、克唑替尼、达拉非尼、达沙替尼、狄诺塞麦、埃罗替尼、依维莫司、吉非替尼、替伊莫单抗、拉铁尼伯、伊马替尼、普利姆玛(ipilimumab)、拉帕替尼、尼罗替尼、阿托珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、帕唑帕尼、帕妥珠单抗、帕纳替尼、瑞格非尼、利妥昔单抗、罗咪酯肽(romidepsin)、卢佐替尼(ruxolitinib)、sipuleucel-t、索拉非尼、西罗莫司(temsirolimus)、托珠单抗(tocilizumab)、托法替尼、托西莫单抗、曲美替尼、曲妥珠单抗、凡德他尼、威罗非尼、维莫德吉(vismodegib)、伏立诺他(vorinostat)、阿柏西普(ziv-aflibercept)及其任意组合。在一些实施方案中，在施用免疫偶联物之前、同时或之后对受试者施用额外的治疗剂。在一些实施方案中，额外的治疗剂为全身性施用。例如，在一些实施方案中，额外的治疗剂通过静脉注射施用。
所公开的包括施用免疫偶联物的治疗膀胱癌的方法涉及的讨论的特征，也适用于免疫偶联物在治疗癌症中的医学用途。
在一些实施方案中，提供用于在治疗膀胱癌中使用的免疫偶联物。在一些实施方案中，所述免疫偶联物包含结合至人ep-cam的细胞外结合结构域的结合蛋白和毒素。在一些实施方案中，所述使用包括在每周两次至少约连续六周的第一给药期施用所述免疫偶联物，随后是第二给药期，其中每周一次施用所述免疫偶联物达至少约连续六周的时间。在一些实施方案中，所述使用包括第三给药期，其中每隔一周每周一次施用所述免疫偶联物。在一些实施方案中，第三给药期长度至多为24个月或直至疾病复发或疾病进展。在一些实施方案中，对在第一给药期前已经历经尿道切除术以从其膀胱中移除nmbic肿瘤的受试者施用所述免疫偶联物。
附图说明
图1的示意流程图显示了在测试vicinium给药方案的临床方案中步骤，其包括诱导给药期和维持给药期。
具体实施方式
膀胱癌和epcam
本公开提供了用于治疗膀胱癌的方法，其包括向有需要的受试者施用包含对ep-cam特异的结合蛋白和毒素的免疫偶联物，其中以包括诱导期和任选的维持期的给药方案施用所述免疫偶联物。在一些实施方案中，膀胱癌是非肌肉浸润性膀胱癌(nmibc)。其他类型的膀胱癌包括：早期膀胱癌、非转移性膀胱癌、原发性膀胱癌、晚期膀胱癌、局部晚期膀胱癌(如不可切除的局部晚期膀胱癌)、转移性膀胱癌、缓解期膀胱癌、渐进性膀胱癌症或复发性膀胱癌。在一些实施方案中，受试者已被诊断为患有膀胱癌或处于发展为膀胱癌的风险中。在一些实施方案中，膀胱癌是难治或其他治疗选择(例如卡介苗(bcg)治疗或干扰素治疗)不耐受的nmibc。
ep-cam(上皮细胞粘附分子的简称，也称为17-1a、ksa、egp-2和ga733-2)。ep-cam是一种跨膜蛋白，其在许多实体瘤(包括膀胱、肺、乳腺、卵巢、结肠直肠的癌，以及头和颈的鳞状细胞癌)中高度表达，但在大多数正常上皮组织中弱表达。对ep-cam在癌症形成中的作用尚不清楚；然而，其表达与细胞增殖的速率相关。ep-cam特异性抗体已经被用于在患有小细胞肺癌和非小细胞肺癌的患者中成像和检测原发性肿瘤和转移瘤。在抗ep-cammab中，作为鼠单克隆抗体的panorex？(也被称为edrecolomab)已被批准在德国用于结肠癌的治疗，并在美国进行临床试验。然而，值得注意的是，
ep-cam结合蛋白
在一个方面中，本公开提供了包含结合ep-cam的结合蛋白和毒素的免疫偶联物。在一个实施方案中，结合蛋白是抗体或其片段。抗体及其片段选自：多克隆抗体、单克隆抗体、fab、fab、'(fab')2、单链片段(scfv)、二硫键稳定片段(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、双抗体和cys-双抗体(半胱氨酸修饰的双抗体)。在一些实施方案中，双抗体包括二价双特异性抗体或抗体片段。在一些实施方案中，双抗体包括由相同或不同抗体或抗体片段多肽构成的二价抗体；因此，在一些实施方案中，双抗体是同多聚体或异多聚体。抗体及其片段可以包含选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga2、igd、ige和igm的免疫球蛋白恒定区。抗体或其片段可以来自任何物种，包括小鼠、大鼠、兔、仓鼠和人。在一个实施方案中，抗体或片段是嵌合的。嵌合抗体或其片段，是结合了非人动物可变区和恒定区或恒定区的部分为人的抗体分子。
在一些实施方案中，抗体或其片段是人源化的。如本文所用，人源化抗体或人源化抗体片段是指抗体或片段包含源自非人抗体的cdr和源自人抗体的框架区。文献中已经充分阐述了来自非人物种的抗体的人源化。参见例如ep-b10239400和carter&merchant1997(curropinbiotechnol8,449-454,1997)。
任何以上描述的单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体的抗原结合片段均使用本领域已知的方法例如通过使用酶促降解或方便的限制酶制备嵌套缺失来制备。在一些实施方案中，对人源化抗体、嵌合抗体或其免疫响应性片段进行筛选，以确保抗原结合尚未被亲本单克隆抗体的人源化、嵌合或破碎所破坏。这可以通过本领域已知的多种手段中的任何一种来实现，包括例如使用噬菌体展示文库。
在一个方面中，结合蛋白是非免疫球蛋白多肽配体例如蛋白质支架(proteinscaffold)。蛋白质支架为本领域已知，且包含结合至一种或多种抗原的蛋白质或多肽。这样的分子可以被设计为结合至靶肿瘤抗原例如epcam，并且可以被改造成期望的亲和力或亲合力，或者可以被设计成耐受多种物理条件(例如极端ph范围和高温)。蛋白质支架包括例如亲本抗体、连接蛋白、抗运载蛋白(anticalin)、库尼兹(kunitz)结构域蛋白和本领域已知的其它非免疫球蛋白结合蛋白，例如公开于gebauerandkerra,curr.opin.chem.biol.13；245(2009)中的那些。
毒素
在一个方面中，本公开提供了包含结合至人ep-cam的细胞外结构域的抗体片段和毒素的免疫偶联物。在一些实施方案中，免疫毒素包含多于一种毒素。例如，在一些实施方案中，免疫偶联物包含含有多于一种毒素的双抗体。
在一些实施方案中，毒素是在靶细胞中阻断蛋白质合成的分子，这一点导致细胞死亡。因此，在一些实施方案中，毒素是细胞毒素。细胞毒素为本领域已知，并且包括例如：假单胞菌外毒素a(eta)或其变体；白树毒素、三角梅蛋白(bouganin)、皂素(saporin)、蓖麻毒素、蓖麻毒素a链、异株泻根毒蛋白、白喉毒素和局限曲菌素。
在一些实施方案中，毒素是假单胞菌外毒素a(eta)或其变体的毒性部分。毒性部分可以包含本领域已知的一种或多种假单胞菌外毒素。例如，假单胞菌外毒素的变体，以及制备和使用包含假单胞菌外毒素和变体的构建体的方法阐述于kreitman,1995,“targetingpseudomonasexotoxintohematologicmalignancies,”seminarsincancerbiology6:297-306；pastan,2003,“immunotoxinscontainingpseudomonasexotoxina:ashorthistory,”cancerimmunol.immunother.52:338-341),美国专利申请号us2003054012；美国专利号6,531,133；美国专利号6,426,075；美国专利号6,423,513；美国专利号6,074,644；美国专利号5,980,895；美国专利号5,912,322；美国专利号5,854,044；美国专利号5,821,238；美国专利号5,705,163；美国专利号5,705,156；美国专利号5,621,078；美国专利号5,602,095；美国专利号5,512,658；美国专利号5,458,878；美国专利号5,082,927；美国专利号4,933,288；美国专利号4,892,827；美国专利号4,677,070；美国专利号4,545,985；国际申请号wo98/20135,wo93/25690；wo91/18100；wo91/18099；wo91/09949；和wo88/02401；kondo等，19888,“activityofimmunotoxinsconstructedwithmodifiedpseudomonasexotoxinalackingthecellrecognitiondomain.”jbiolchem.263:9470-9475；batra等，1989,“antitumoractivityinmiceofanimmunotoxinmadewithanti-transferringreceptorandarecombinantformofpseudomonasexotoxin.”procnatl.acad.sci.usa86:8545-8549；puri等，1991,“expressionofhigh-affinityinterleukin4receptorsonmurinesarcomacellsandreceptor-mediatedcytotoxicityoftumorcellstochimericproteinbetweeninterleukin4andpseudomonasexotoxin.”cancerres51:3011-3017；siegall等，1992,“cytotoxicityofchimeric(humanmurine)monoclonalantibodybr96igg,f(ab')2,andfab'conjugatedtopseudomonasexotoxin.”bioconjug-chem3:302-307；hall等，1994,“invivoefficacyofintrathecaltransferrin-pseudomonasexotoxinaimmunotoxinagainstloxmelanoma.”neurosurgery34:649-655；kuanandpai,1995,“immunotoxinscontainingpseudomonasexotoxinthattargetleydamagehumanendothelialcellsinanantibody-specificmode:relevancetovascularleaksyndrome.”clincancerres1:1589-1594；kreitman,1995,“targetingpseudomonasexotoxintohematologicmalignancies.”semcancerbiol6:297-306；kawooyaet“theexpression,affinitypurificationandcharacterizationofrecombinantpseudomonasexotoxin40(pe40)secretedfromescherichiacoli.”jbiotechnol42:9-22；kaunandpai,1995,“immunotoxinscontainingpseudomonasexotoxinthattargetleydamagehumanendothelialcellsinanantibody-specificmode:relevancetovascularleaksyndrome.”clincancerres1:1589-1594；puri等，1996,“preclinicaldevelopmentofarecombinanttoxincontainingcircularlypermutedinterleukin4andtruncatedpseudomonasexotoxinfortherapyofmalignantastrocytoma.”cancerres56:5631-5637；pai等，1996,“treatmentofadvancedsolidtumorswithimmunotoxinlmb-1:anantibodylinkedtopseudomonasexotoxin.”naturemed.3:350-353；pai等，1998,“clinicaltrialswithpseudomonasexotoxinimmunotoxins.”currtop.microbiol.immunol.234:83-96；klimka等，1999,“ananti-cd30singlechainfvselectedbyphagedisplayandfusedtopseudomonasexotoxina(ki-4(scfv)-eta')isapotentimmunotoxinagainstahodgkin-derivedcellline.”britishjcancer80:1214-1222；rand等，2000,“intratumoraladministrationofrecombinantcircularlypermutedinterleukin-4-pseudomonasexotoxininpatientswithhigh-gradeglioma.”clincancerres6:2157-2165；leland等，2000,“humanbreastcarcinomacellsexpresstypeiiil-4receptorsandaresensitivetoantitumoractivityofchimericil-4-pseudomonasexotoxinfusionproteininvitroandinvivo.”molecularmedicinetoday6:165-178；tur等，2001,“ananti-gd2singlechainfvselectedbyphagedisplayandfusedtopseudomonasexotoxinadevelopsspecificcytotoxicactivityagainstneuroblastomaderivedcelllines.”intjmol.med8:579-584；onda等，2001,“cytotoxicityofantiosteosarcomarecombinantimmunotoxinscomposedoftp-3fvfragmentsandatruncatedpseudomonasexotoxina.”jimmunother24:144-150；18.“synergisticinteractionbetweenananti-p185her-2pseudomonasexotoxinfusionprotein[scfv(frp5)-eta]andionizingradiationforinhibitinggrowthofovariancancercellsthatoverexpressher-2.”schmidt等，2001,“synergisticinteractionbetweenananti-p185her-2pseudomonasexotoxinfusionprotein[scfv(frp5)-eta]andionizingradiationforinhibitinggrowthofovariancancercellsthatoverexpressher-2.”gynecoloncol80:145-155；pastan,2003,“immunotoxinscontainingpseudomonasexotoxina:ashorthistory.”cancerimmunolimmunother52:338-341；li等，1996,“crystalstructureofthecatalyticdomainofpseudomonasexotoxinacomplexedwithanicotinamideadeninedinucleotideanalog:implicationsfortheactivationprocessandforadpribosylation.”procnatl.acadsciusa.9:6902-6906；kreitmanandpastan,2003,“immunobiologicaltreatmentsofhairy-cellleukaemia.”bestpractresclinhaematol.16:117-33。
在一些实施方案中，毒素包含eta变体，其在单独施用时实质上不能结合至细胞。在一些实施方案中，细胞毒性部分包含eta(252-608)。eta(252-608)是缺乏细胞结合结构域的截短形式的eta，是通过单个构建体的连续翻译产生的单个多肽融合蛋白。在一些实施方案中，eta(252-608)包含根据seqidno:11的氨基酸序列。
在其它非限制性实施方案中，免疫偶联物包含与人epcam特异性结合的结合蛋白和毒素，其中所述毒素包含用来破坏dna的试剂。因此，毒素可以包括但不限于烯二炔(例如卡奇霉素(calicheamicin)和埃斯培拉霉素(esperamicin)和非烯二炔小分子试剂(例如博莱霉素(bleomycin)、甲锭丙基-edta-fe(ii))。根据本发明适用的其它毒素包括但不限于柔红霉素、多柔比星(doxorubicin)、偏端霉素a(distamycina)、顺铂(cisplatin)、丝裂霉素c(mitomycinc)、海鞘素(ecteinascidin)、多卡霉素(duocarmycin)/cc-1065、以及博莱霉素/培洛霉素(pepleomycin)。在其它非限制性实施方案中，毒素包含用来破坏微管蛋白的试剂。这样的毒素可以包括但不限于根霉素(rhizoxin)/美登素(maytansine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine)、秋水仙碱(colchicine)、阿里他汀(auristatin)、海兔毒素10mmae(dolastatin10mmae)和培洛斯德a(pelorusidea)。在其它非限制性实施方案中，本发明的免疫毒素的毒素部分可以包含烷基化试剂，包括但不限于，asaleynsc167780、azqnsc182986、bcnunsc409962、白消安(busulfan)nsc750、羧邻苯二甲酸铂(carboxyphthalatoplatinum)nsc271674、cbdcansc241240、ccnunsc79037、chipnsc256927、苯丁酸氮芥(chlorambucil)nsc3088、氯脲霉素(chlorozotocin)nsc178248、顺式铂nsc119875、克罗米松(clomesone)nsc338947、氰基吗啉代多柔比星(cyanomorpholinodoxorubicin)nsc357704、环迪松(cyclodisone)nsc348948、二脱水半乳糖醇(dianhydrogalactitol)nsc132313、氟多潘(fluorodopan)nsc73754、亥舒凡(hepsulfam)nsc329680、海蒽酮(hycanthone)nsc142982、美法仑nsc8806、甲基ccnunsc95441、丝裂霉素cnsc26980、米托唑酰胺(mitozolamide)nsc353451、氮芥nsc762、pcnunsc95466、哌嗪nsc344007、哌嗪二酮nsc135758、哌酰溴烷(pipobroman)nsc25154、泊非霉素(porfiromycin)nsc56410、螺旋乙内酰脲芥(spirohydantoinmustard)nsc172112、替罗昔隆(teroxirone)nsc296934、四铂(tetraplatin)nsc363812、噻替派nsc6396、三乙烯三聚氰胺(triethylenemelamine)nsc9706、尿嘧啶氮芥(uracilnitrogenmustard)nsc34462和yoshi-864nsc102627。在其它非限制性实施方案中，本发明的免疫毒素的毒素部分可包含抗有丝分裂剂，包括但不限于别秋水仙碱(allocolchicine)nsc406042、软海绵素b(halichondrinb)nsc609395、秋水仙碱nsc757、秋水仙碱衍生物nsc33410、海兔毒素10nsc376128(ng-阿里他汀衍生物)、美登素nsc153858、根霉素nsc332598、紫杉醇nsc125973、紫杉醇衍生物nsc608832、硫代秋水仙碱(thiocolchicine)nsc361792、三苯甲基半胱氨酸nsc83265、硫酸长春碱nsc49842和硫酸长春新碱nsc67574。
在其它非限制性实施方案中，本发明的免疫毒素的毒素部分可以包含拓扑异构酶i抑制剂，包括但不限于喜树碱nsc94600、喜树碱钠盐nsc100880、氨基喜树碱nsc603071、喜树碱nsc95382、喜树碱nsc107124、喜树碱nsc643833、喜树碱nsc629971、喜树碱nsc295500、喜树碱nsc249910、喜树碱nsc606985、喜树碱nsc374028、喜树碱nsc176323、喜树碱nsc295501、喜树碱nsc606172、喜树碱nsc606173、喜树碱nsc610458、喜树碱nsc618939、喜树碱衍生物nsc610457、喜树碱衍生物nsc610459、喜树碱衍生物nsc606499、喜树碱衍生物nsc610456、喜树碱衍生物nsc364830、喜树碱衍生物nsc606497、和吗啉多柔比星(morpholinodoxorubicin)nsc354646。
在其它非限制性实施方案中，本发明的免疫毒素的毒素部分可以包含拓扑异构酶ii抑制剂，包括但不限于：多柔比星nsc123127、氨萘非特(amonafide)nsc308847、m-amsansc249992、蒽吡唑(anthrapyrazole)衍生物nsc355644、吡唑并吖啶nsc366140、盐酸比生群(bisantrenehcl)nsc337766、柔红霉素nsc82151、脱氧多柔比星nsc267469、米托蒽醌nsc301739、美诺立尔(menogaril)nsc269148、n,n-二苄基柔红霉素nsc268242、恶烷噻唑(oxanthrazole)nsc349174、苯甲酰腙柔红霉素(rubidazone)nsc164011、vm-26nsc122819和vp-16nsc141540。
在其它非限制性实施方案中，本发明的免疫毒素的毒素部分可以包含rna或dna抗代谢物，其包括但不限于l-阿拉诺新nsc153353、5-氮杂胞苷nsc102816、5-氟尿嘧啶nsc19893、阿西维辛nsc163501、氨基喋呤衍生物nsc132483、氨基喋呤衍生物nsc184692、氨基喋呤衍生物nsc134033、抗叶酸剂nsc633713、抗叶酸剂sc623017，baker's可溶性抗叶酸剂nsc139105、二氯丙基2-羟-1,4萘醌nsc126771、布喹那(brequinar)nsc368390，呋氟尿嘧啶(ftorafur)(前药)nsc148958、5,6-二氢-5-氮杂胞苷nsc264880、甲氨蝶呤nsc740、甲氨蝶呤衍生物nsc174121、n-(膦酰基乙酰基)-l-天冬氨酸(pala)nsc224131、吡唑呋喃菌素nsc143095、三甲曲沙nsc352122、3-hpnsc95678、2‘-脱氧-5-氟尿嘧啶nsc27640、5-hpnsc107392、α-tgdrnsc71851、阿非迪霉素甘氨酸nsc303812、ara-cnsc63878、5-氮杂-2'-脱氧胞苷nsc127716、β-tgdrnsc71261、环胞苷nsc145668、胍唑nsc1895、羟基脲nsc32065、肌苷二醛nsc118994、马克霉素ii(macbecinii)nsc330500、吡唑基咪唑nsc51143、硫鸟嘌呤nsc752和巯基嘌呤nsc755。
此外，可以改变毒素以减少或抑制免疫偶联物内容之外的结合，或降低特定类型的毒性。例如，毒素可以改变以将等电点调节至约7.0从而降低肝毒性。
接头
可用于本发明的免疫偶联物可以包含接头，例如肽接头。例如，在一些实施方案中，免疫偶联物包含经由肽接头连接至毒素分子的ep-cam结合蛋白。肽接头可以是可裂解接头或不可裂解接头。可切割肽接头是本领域已知的，并且包括但不限于：弗林蛋白酶敏感接头、组织蛋白酶敏感接头、金属蛋白酶接头和溶酶体水解酶敏感性接头。在一些实施方案中，接头是柔性接头。肽接头可以是大约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个氨基酸长。
在某些实施方案中，本公开提供了用于治疗膀胱癌的方法，其包括向有需要的受试者施用免疫偶联物，所述免疫偶联物包含：特异性结合ep-cam的结合蛋白、毒素分子和将结合蛋白与毒素分子连接的肽接头。
vb4-845
在本公开的一个方面中，免疫偶联物是vicinium。vicinium含有活性药物成分vb4-845，其是在大肠杆菌(e.coli)中产生的重组融合蛋白，其表达对连接至eta(252-608)的上皮细胞粘附分子(epcam)抗原特异性的人源化单链抗体片段(scfv)。美国专利号8,545,840中公开了vb4-845，其通过引用整体并入本文。对于vb4-845的序列提供在下面的表1中。
表1.vb4-845序列
在一个方面中，vicinium的作用机理取决于vb4-845的2种成分。一旦结合至在癌细胞表面上的epcam抗原，vb4-845就通过内吞途径被内化。包含在内体室内的弗林蛋白酶切割在eta表面上的蛋白水解位点(252-608)，释放eta(252-608)。eta(252-608)通过称为白喉酰胺(diphthamide)的延伸因子-2(ef-2)的组氨酸残基的翻译后修饰的二磷酸腺苷(adp)-核糖基化，通过不可逆地阻断蛋白质合成来诱导细胞死亡(oppenheimer等,1981)。已将eta的截短型eta(252-608)改造成保留诱导细胞死亡所必需的活性结构域，但消除了细胞结构域，从而预防eta(252-608)部分在不存在一些替代载体的情况下进入细胞，例如通过抗体介导的内化。必须与epcam结合才能导致eta(252-608)介导的效果。
当全身性施用至人时，vicinium融合蛋白的eta(252-608)组分可引起免疫原性响应。一方面，以局部靶向的方式施用vicinium，以限制其全身性暴露并使药物在其靶细胞中的浓度最大化。例如，在一些实施方案中，vicinium经由膀胱滴注施用。在进一步的实施方案中，将vicinium经由导管插入(catheterization)施用入空膀胱。在一些实施方案中，通过经由滴注施用，降低了全身性暴露和中和抗体的随后产生概率。此外，在一些实施方案中，vicinium的高局部浓度最大化了获得治疗效果的可能性。
临床前研究数据已显示，vicinium对于多种epcam阳性细胞系表现为强力的活性[抑制浓度50％(ic50)＝0.001-10pm)，具有对表达epcam的肿瘤的选择性。体内药理学证明，vicinium在数种人异种移植动物模型中有效地抑制肿瘤生长。大鼠中的研究发现，vicinium的毒理学作用发生在对肿瘤细胞活性的ic50的超过1,000倍的剂量，具有至少5至100倍的安全范围。
在一个方面中，本公开提供了一种用于非肌肉浸润性膀胱癌受试者中的vicinium的改进的给药方案。给药方案包括诱导期，其包括6周的每周两次给药，随后6周的每周一次给药vicinium。在一个实施方案中，在诱导期之后是维持期。在一些实施方案中，维持期包含每隔一周一次至少1、至少2、至少3、至少6、至少8、至少10、至少12、至少18、至少24、至少36、至少48、至少60、至少72、至少84、或至少90周的vicinium给药。在一些实施方案中，维持期包含长达91周的vicinium给药。在一个方面中，本文公开的给药方案例如通过预防疾病复发提供了改进的治疗性结果。
定义
如本文所用，术语“动物”包括动物界的所有成员包括人。如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指脊索动物亚门(subphylumcordata)的任何成员，包括但不限于：人类和其他灵长类动物，包括非人灵长类动物如黑猩猩(chimpanzees)和其他猿及猴物种。术语“哺乳动物”和“动物”包括在该定义中。在具体实施方案中，本文所用的术语“受试者”是指已被诊断患有膀胱癌例如非肌肉浸润性膀胱癌的人。
如本文所用，短语“有效量”可与“治疗有效量”或“治疗有效剂量”等互换使用，并指对于治疗癌症有效的治疗剂的量。如本文所用，短语“治疗癌症”指抑制癌细胞增殖、抑制癌症扩散(转移)、抑制肿瘤生长、减少癌细胞数量或肿瘤生长、降低癌症的恶性等级(例如，分化提高)或改善的癌症相关症状。本文提供的免疫毒素的有效量可以根据诸如病情、年龄、性别、动物的体重等因素而变化。
如本文所用，术语“诱导期”是指本文提供的用免疫偶联物进行治疗的初始疗程。本文提供的免疫偶联物的诱导期包括每周两次给药方案的第一给药期，和每周一次给药方案的第二给药期。
如本文所用，术语“维持期”是指在治疗的诱导期之后的给药期。因此，如本文所述，维持期在诱导期的第二给药期之后在受试者中开始。本文提供的免疫偶联物的维持期包括每隔一周一次的给药方案。在一些实施方案中，维持期在表现为对治疗的诱导期的完全响应的受试者中开始。如本文使用的术语“完全响应”指受试者中对疗法的响应。例如，在诱导期后没有高等级疾病的组织学证据的受试者，表现为对诱导期的完全响应。在一些实施方案中，对诱导期表现为完全响应的受试者进入维持期。在诱导期后，具有组织学证实的高等级疾病的证据的受试者将不会进入维持期。患有低等级t1疾病进入研究，且没有经历t1疾病的复发或具有高等级疾病的证据的受试者进入维持期。维持治疗一直持续到疾病复发(即受试者具有组织学证实的cis或高等级乳头状ta或t1型疾病，或低级t1的复发(如果其为基线疾病))或疾病进展(组织学证实的疾病期≥t2)、膀胱切除术、从研究开始的24个月或死亡，以其中先到者计。患有疾病复发或进展的患者将从研究中撤出。除了受试者具有低等级t1疾病并低等级t1疾病复发以外，复发低等级乳头状疾病的受试者可以在肿瘤去除后继续进行维持治疗。
在一些实施方案中，膀胱癌是非肌肉浸润性膀胱癌(nmibc)，并且经受本文所提供的方法的受试者在免疫偶联物的第一次给药后表现为无事件生存。本文所用的“无事件生存”是指从本文提供的免疫偶联物的第一次给药的日期到事件的间隔。这里的“事件”定义为高等级疾病、高等级疾病肿瘤复发、肿瘤进展到肌肉浸润性膀胱癌，出于任何原因的膀胱切除术、在患有低等级t1疾病进入研究的受试者中发生低等级t1疾病或死亡。
在一些实施方案中，膀胱癌是被归类为原位癌(cis)的nmibc，且经受本文所提供的方法的受试者在施用免疫偶联物后显示为完全响应。如本文所用，“完全响应”被定义为以下之一：a)膀胱镜检查正常和尿细胞学检查非阳性或非可疑，或膀胱镜检查异常但活检阴性(或活检仅显示低等级疾病)和尿液非阳性或非可疑；b)活检阴性(或活检仅显示低等级疾病)和重复尿细胞学检查非阳性；或c)膀胱镜检查或活检仅显示可以通过膀胱肿瘤的经尿道切除术(turbt)(而不需要膀胱切除术或其他化疗)处理的低等级乳头状疾病。
如本文所用术语“无高等级疾病的证据”包括以下中至少一项：a)膀胱镜检查正常且尿细胞学检查非阳性或非可疑，或活检阴性或活检仅显示低等级乳头状疾病；b)活检阴性(或活检仅显示低等级乳头状疾病)和重复尿细胞学非阳性；或c)膀胱镜检查或活检仅显示可以通过膀胱肿瘤的经尿道切除术(turbt)(而不需要膀胱切除术)处理的低等级乳头状疾病。因此，“高等级疾病”可以通过例如显示严重程度高于低等级乳头状疾病的状况的活检来鉴定。
如本文所用，术语“疾病复发”或“肿瘤复发”是指组织学证实的cis或高等级乳头状ta或t1疾病的重回。如本文所用，“到疾病复发的时间”定义为从第一次记录无高等级疾病的证据的日期起，到组织学证实的高等级疾病的第一次复发的日期的间隔。在一些实施方案中，接受或正在接受本文提供的免疫偶联物的受试者中疾病复发的时间，相对于在接受其他可用的膀胱内治疗的受试者中将发生的疾病复发的时间延迟。
如本文所用，术语“疾病进展”是指处于t2或t2以上阶段的组织学证实的疾病。如本文所用，“到进展的时间”定义为从免疫偶联物的第一次给药的日期起，到组织学证实的≥t2期的浸润性疾病的日期的时间。在一些实施方案中，到疾病进展的时间相对于到接受其它可用的膀胱内治疗的受试者中将出现疾病进展的时间延迟。
“无进展生存”在本文中定义为从免疫偶联物的第一次给药的日期起，到(i)确定了组织学证实的≥t2期的浸润性疾病的日期，(ii)死亡日期两者中较早的时间。“总体生存”在本文中定义为从免疫偶联物的第一次给药的日期到由于任何原因而死亡的时间。
术语“vb4-845”和“vicinium”在本文中可互换使用，且指包含融合至b)的a)的免疫毒素，其中，所述a)为scfv人源化抗体4d5moc-b，所述b)为包含氨基酸252-608的截短形式的假单胞菌外毒素a。在一些实施方案中，在本文中将vicinium称为oportuzumabmonatox。
术语“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载体”在本文中可互换使用，并包括任何和所有溶剂、分散媒介、包衣、抗菌和抗真菌试剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这样的媒介和试剂用于药物活性物质的用途为本领域公知。也可以将补充的活性成分并入组合物中。本文提供的抗体及其抗原结合片段可与其它生物活性剂一起施用。参见，例如。remington:thescienceandpracticeofpharmacy,1995,gennaroed。药学上可接受的载体在一般临床使用和/或得到美国联邦或州政府的管理机构的批准，列于美国药典中，或被相关领域的技术人员普遍接受。
本文使用的“bcg疗法失败”被定义为用bcg疗法的治疗，其在用bcg疗法治疗膀胱癌的受试者中没有导致改善的结果。在一些实施方案中，bcg疗法的失败是指对两个周期(1次诱导疗程+1个至少3次给药的维持周期，或2次完整诱导疗程)中的至少9次bcg的滴注具有不充分的响应，或在至少9次bcg的滴注后已经发展为复发性疾病。在其他实施方案中，bcg疗法的失败是指对2个周期(1个至少5次给药的诱导周期+1个至少2次给药的维持周期，或2次诱导疗程)中的至少7次bcg的滴注具有不充分的响应。其疾病不再对bcg疗法响应的患有非肌肉浸润性膀胱癌的患者，可能为难治性或早期复发。在高等级疾病对bcg疗法难治的患者中，在充分的bcg疗法后仍然存在可评估的高等级疾病。在bcg疗法后其的高等级疾病早期复发的受试者中，受试者在经过充分的bcg治疗后经历了完全响应，但在最后一次给药bcg后6个月内出现高等级疾病。在患有低等级t1疾病的受试者中发生t1型疾病的复发也被考虑早期复发。
如本文所用，术语“变体”是指免疫毒素的任何药学上可接受的衍生物、类似物或片段，抗体或抗体片段，毒素(例如，假单胞菌毒素)或本文所述的癌症治疗剂。变体也涵盖：多聚体的一种或多种成分，包含单独成份的多聚体，包含多重单独成份(例如参考分子的多聚体)的多聚体、化学分解产物和生物分解产物的多聚体。特别地，在非限制性实施方案中，免疫毒素可以是凭借在参照免疫毒素的ep-cam结合部分和/或毒素部分中的改变而相对于参照免疫毒素的“变体”。例如，变体免疫毒素可以包含抗体部分和/或毒素部分的多聚体。在用于测量参照毒素的制剂的毒性的标准分析中，分子的毒素部分的变体保持至少10％，优选至少30％的毒性。
如本文所用，短语“癌症治疗剂”等是指在治疗或预防癌症中有效的化合物或治疗，包括但不限于：化学试剂、其他免疫治疗剂、癌症疫苗、抗血管生成化合物、某些细胞因子、某些激素、基因疗法、放射疗法、手术和饮食疗法。除了本文提供的免疫偶联物以外，可以在免疫偶联物施用之前、期间或之后，施用一种或多种额外的癌症治疗试剂，包括化疗药物和癌症特异性抗体。示例的治疗性药物包括但不限于；2,2,2-三氯三乙胺、3-hp、5,6-二氢-5-5-氮杂胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、5-氮杂胞苷、5-氟尿嘧啶、5-hp、5-丙帕锗、6-氮尿苷、6-重氮-5-0×0-l-正亮氨酸、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、相思豆毒蛋白、aceglarone、阿西维辛、阿克拉霉素、放线菌素、放线菌素d、阿地白介素、阿仑单抗(alemtuzumab)、别秋水仙碱(allocolchicine)、阿布他明(allutamine)、α-胎蛋白、α-tgdr、六甲密胺、氨基喜树碱、氨鲁米特、氨基喋呤衍生物、氨萘非特、安吖啶、抗叶酸剂(antifol)、阿那曲唑、环胞苷、血管生成素反义寡核苷酸、血管抑素、安曲霉素、蒽吡唑衍生物、抗凝血酶、阿非迪霉素甘氨酸酯、阿糖胞苷(ara-c)、天冬酰胺酶、auristatin、自体细胞或组织、阿瓦斯丁、阿扎胞苷、重氮丝氨酸(auristatin)、氮丙啶、阿西替尼、贝利单抗、贝伐单抗、硼替佐米、伯舒替尼、布妥昔单抗、卡赞替尼(cabozantinib)、康纳单抗、卡非佐米、西妥昔单抗、克唑替尼(crizotinib)、dabrafenib、azq、杆菌、baker的可溶性抗叶酸剂、巴马司他、bcg活疫苗、bcl-2反义寡核苷酸、bcnu、苯佐替派、倍他米松、β-tgdr、biaomycin、比卡鲁胺、比生群、博莱霉素、布喹那、布舍瑞林、白消安、放线菌素c、卡奇霉素、二甲睾酮、阿仑单抗-1、喜树碱、喜树碱钠盐、卡培他滨、carboplain、卡铂、卡波醌、羧基邻苯二甲酸铂(carboxyphthalatoplatinum)、癌胚抗原、卡莫氟、卡莫司汀、carnptothecin衍生物、卡柔比星、嗜癌菌素(carzinophilin)、cbdca、ccnu、chip、chlorabusin、苯丁酸氮芥、醋酸氯地孕酮、萘氮芥、氯代佐星、色霉素、顺铂(cisplatin)、顺氯氨铂(cisplatinum)、克拉屈滨、克罗米松、秋水仙碱、秋水仙碱衍生物、胶原蛋白14-氨基酸肽、皮质醇、可的松、氰基吗啉代多柔比星(cyanomorpholinodoxorubicin)、cyclarabine、环胞苷、环迪松、环磷酰胺(cyclophosphamide)、cyclothosphamide、阿糖胞苷、细胞松弛素b、胞嘧啶阿糖胞苷、达卡巴嗪、daclinomycin、放线菌素、达沙替尼、柔红霉素、地磷酰胺、脱氢睾酮、脱羰秋水仙碱、二甲叶酸、脱氧多柔比星、地塞米松、二脱水半乳糖醇、地吖醌、二氯丙基2-羟-1,4萘醌(dichlorallyllawsone)、白喉毒素、偏端霉素a、多西紫杉醇、海兔毒素10、去氧氟尿苷、多柔比星、屈洛昔芬、甲雄烷酮、多卡霉素/cc-1065、海鞘素、依达曲沙、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依米丁、乙嘧替氟、内皮抑素、依诺他滨、表鬼臼毒素、表柔比星、环硫雄醇、爱必妥、埃罗替尼、埃斯培拉霉素、雌莫司汀、雌激素、溴乙锭、乙环氧啶、依托泊苷、法倔唑、芬维a胺、纤连蛋白29kdan端蛋白水解片段、纤连蛋白40kdac端n端蛋白水解片段、florafbr(前药)、floxuridhe、氟尿苷，氟达拉滨、氟多潘、氟他胺、醛叶酸、福美坦、磷雌酚、福莫司汀、硝酸镓、吉非替尼、吉西他滨、赛它宾、吉妥单抗(gemtuzumab)、肾上腺糖皮质激素、戈舍瑞林、短杆菌肽d、粒细胞单核细胞集落刺激因子、胍唑nsc1895、介疫苗、软海绵素、亥舒凡、六甲蜜胺、己烷雌酚、人绒毛膜促性腺激素、海蒽酮、羟基脲、依达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、英丙舒凡、肌苷二醛、干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、白细胞介素-12、白细胞介素-15、白细胞介素-18、白细胞介素-1、白细胞介素-2、白细胞介素-2、白细胞介素-6、白细胞介素、依立替康、iubidazone、kringle5、阿拉诺新(l-alanosine)、拉帕替尼、l-天冬酰胺酶、lauprolideacetate、香菇多糖、来曲唑、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林(lupron)、左旋咪唑、利多卡因、脂质体二羟基炭疽二酮、lomusline、洛莫司汀、氯尼达明、淋巴因子、淋巴毒素、米托坦(lysodren)、麦克菌素(macbecin)、巨噬细胞炎症蛋白、m-amsa、甘露醇氮芥(mannomustine)、美登素、氮芥、盐酸氧氮芥、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、黑素细胞系蛋白、美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、美雄烷、巯嘌呤、美司钠、甲锭丙二胺-etda亚铁(methidiumpropyl-edta-fe(ii))、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤衍生物、美妥替哌、米帕、米替福新、盐皮质类固醇、光神霉素、二溴甘露醇、米托胍腙、二溴卫矛醇、mitolanc、丝裂霉素c、米托坦、米托蒽醌、米托唑酰胺、莫哌达醇、吗啉多柔比星、突变肿瘤特异性抗原、霉酚酸，n-(膦酰基乙酰基)-l-天冬氨酸(pala)、n,n-二苄基柔红霉素、神经生长因子、尼罗替尼、尼鲁米特、尼莫司汀、二胺硝吖啶、氮芥(nitrogenmustard)、诺加霉素、非自体细胞或组织、新恩比兴、橄榄霉素(olivomycins)、白介素融合毒素(ontak)、onyx-015、奥沙利铂、恶烷噻唑、紫杉醇、pcnu、培门冬酶(pegaspergase)、pelomsidea、喷司他丁、培洛霉素、培磷酰胺、蛋氨氮芥(phenamet)、胆固醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、光神霉素(picamycin)、哌嗪、哌嗪二酮、哌泊溴烷、哌泊舒凡、吡柔比星、吡曲克辛、血小板衍生生长因子、血小板因子-47.8kda蛋白水解片段、血小板因子4-13氨基酸肽、普卡霉素、鬼臼酸-2-乙基酰肼、鬼臼毒素、聚磷酸雌二醇(polyestradiolphosphate)、porfimir、甲基丝裂霉素、泼尼莫司汀、泼尼松、卡巴肼、普鲁卡因、孕激素(progestine)、催乳素16kda蛋白水解片段、普萘洛尔、假单胞菌外毒素、psk、蝶罗呤、嘌呤霉素、吡唑呋喃菌素、吡唑并吖啶、吡唑基咪唑、雷莫司汀、雷佐生、维甲酸、根霉素、根霉素美登素、蓖麻毒素a、美罗华(rituxan)、利妥昔单抗(rituximab)、riuxlmab、罗喹美克、serpin(丝氨酸蛋白酶抑制剂)、sizofican、索布佐生、索拉非尼、sparc、20-氨基酸肽、锗螺胺、螺莫司汀(spiromustine、spirohydantoinmustard)、链佐星(straplozocin)、链霉菌素、链脲霉素、舒尼替尼、他莫昔芬、紫杉醇、紫杉醇衍生物、替加氟、temozoamide、替尼泊苷、细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)、替罗昔隆、睾内酯、丁卡因、四铂(tetraplatin)、沙利度胺、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫代秋水仙碱、thioepa、巯基嘌呤、噻替派(thio-tepa)、血小板响应蛋白i19氨基酸肽、组织纤溶酶原激活剂、拓优得(tomudex)、拓扑替康、托瑞米芬、trastuzutmaban、维甲酸、三亚胺醌、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺、曲洛司坦、三甲曲沙、曲普瑞林、三苯甲基半胱氨酸(tritylcysteine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、托替坎(trontecan)、杀结核菌素(tubercidin)、肿瘤坏死因素样细胞因子、肿瘤坏死因子、乌苯美司(ubenimex)、乌拉莫司汀(uracilmustard)、尿嘧啶氮芥(uracilnitrogenmustard)、乌瑞替派、尿烷、凡德他尼(zd6474)、vegf反义寡核苷酸、长春碱、长春新碱、硫酸长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、vm-26、vp-16、yoshi-864、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、阿法替尼、狄诺塞麦、依维莫司、替伊莫单抗、拉铁尼伯、伊马替尼、普利姆玛、拉帕替尼、尼罗替尼、阿托珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、帕唑帕尼、帕妥珠单抗、帕纳替尼、瑞格非尼、罗咪酯肽、卢佐替尼、sipuleucel-t、索拉非尼、西罗莫司、托珠单抗(tocilizumab)、托法替尼、托西莫单抗、曲美替尼、曲妥珠单抗(trastuzumab)、凡德他尼、威罗非尼、维莫德吉、伏立诺他、阿柏西普(ziv-aflibercept)及其任意组合。
除非另有定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。除非另有说明，本发明的实践使用本领域熟知的常用分子生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术，例如在以下文献中的方法：molecularbiology,humanapress；molecularcloning:alaboratorymanual,secondedition(sambrook等，1989),currentprotocolsinimmunology(j.e.coliganetal.,eds.,1991)；immunobiology(c.a.janewayandp.travers,1997)；antibodies(p.finch,1997)；antibodies:apracticalapproach(d.catty.,ed.,irlpress,1988-1989)；monoclonalantibodies:apracticalapproach(p.shepherdandc.dean,eds.,oxforduniversitypress,2000)；phagedisplay:alaboratorymanual(c.barbasiiietal,coldspringharborlaboratorypress,2001)；andusingantibodies:alaboratorymanual(e.harlowandd.lane(coldspringharborlaboratorypress,1999)。本领域技术人员将认识到，可以将与本文所述的任何方法和材料类似或等同的任何方法和材料用于本发明的实践或测试中。
出于所有目的，本文引用的所有出版物通过引用以其整体并入本文。本公开中涵盖的组合物和方法将根据以下实施例进一步描述；然而，本发明的范围并不受限于此。
实施例
实施例1.利用vicinium每周两次给药然后每周一次给药的非肌肉浸润性膀胱癌治疗的临床研究。
进行研究以评估在以前用bcg治疗失败的受试者中，vicinium疗法对治疗膀胱的非肌肉浸润性cis和/或高等级乳头状疾病的功效和耐受性。
终点
在一个方面中，研究的首要终点是在vicinium疗法18个月后的无事件生存。将无事件生存定义为从免疫偶联物(vicinium)的第一次给药的日期到事件的间隔。将事件定义为：持续性高等级疾病、高等级肿瘤复发、肿瘤进展为肌肉浸润性膀胱癌、任何原因的膀胱切除术或死亡。肿瘤复发或进展通过膀胱活检进行组织学证实。
在另一方面，研究的首要终点是患有cis(有或没有切除的乳头状疾病)的患者在vicinium治疗开始后的完全响应率。完全响应定义为以下之一：a)膀胱镜检查正常且尿细胞学检查非阳性或非可疑；b)活检阴性(或活检仅显示低等级疾病)和重复尿细胞学非阳性；或c)膀胱镜检查或活检显示可以通过膀胱肿瘤的经尿道切除术(turbt)，而不需要膀胱切除术或其它化疗处理的低等级(ta)乳头状疾病。在具有完全响应的受试者中，将估计(kaplan-meier估计)响应的持续时间。在这方面，次要终点包括无事件生存。
研究的次要终点包括：i)到膀胱切除术的时间(定义为从免疫偶联物(vicinium)的第一次给药的日期到物理去除膀胱的时间)；ii)在vicinium疗法的3、6、9、12、15、18、21和24个月后，没有高等级疾病(高等级疾病通过直接检查或通过组织学确定)的证据；到疾病复发的时间；到进展的时间；无进展生存率；总体生存；以及vicinium的安全性及耐受性。
将没有高等级疾病的证据定义为以下之一：a)膀胱镜检查正常且尿细胞学检查非阳性或非可疑，或活检阴性或活检仅显示低等级乳头状疾病；b)活检阴性(或活检仅显示低等级乳头状疾病)且重复尿细胞学非阳性；c)活检阴性(或活检仅显示低等级乳头状疾病且重复尿细胞学阳性且在上尿路发现移行细胞癌(tcc)；或d)膀胱镜检查或活检仅显示可以通过膀胱肿瘤的经尿道切除术(turbt)而不需要膀胱切除术处理的低等级乳头状疾病。将到疾病复发的时间定义为从第一次记录没有高等级疾病的组织学证据的日期起，到组织学证实的高等级疾病首次复发的日期的周数。将到进展的时间定义为从免疫偶联物(vicinium)第一次给药的日期，到组织学证实的≥t2期的浸润性疾病的日期的时间。将无进展生存期定义为从免疫偶联物(vicinium)的第一次给药的日期起，到确定了组织学证实的≥t2期的浸润性疾病的日期或死亡日期的时间。将总体生存定义为从免疫偶联物(vicinium)第一次给药的日期起，到由于任何原因死亡的时间。
研究设计
研究是在患有组织学证实的非肌肉浸润性膀胱癌-原位癌(cis)、高等级ta或任何等级的t1乳头状疾病、或cis加乳头状疾病(先前利用bcg的治疗失败)的受试者中对vicinium的开放标签、非随机、多中心、多剂量研究。受试者将包括以下受试者：接受了至少2个周期内7次(1个至少5次给药的诱导疗程+1个至少2次给药的维持周期，或2次诱导疗程)bcg滴注(有或没有干扰素)，且响应失败(bcg难治性受试者)的受试者，或如上所述在至少9次的bcg疗法滴注后达到无病状态后已复发的受试者(bcg复发受试者)。
研究设计包括持续时间为12周的诱导期和维持期。治疗的总量可达到104周，包括诱导和维持期。尽管膀胱内给药在研究诊所中进行，该研究是不住院研究。vicinium将施用作为单一疗法，并将评估疗效和耐受性/安全性。
受试者将每周两次(biw)接受膀胱内vicinium滴注持续6周，然后每周一次持续6周，在诱导期中共18次。每周两次的剂量相隔至少48小时施用(在任何7天时间内不应施用超过2次)。在诱导期完成后，受试者将经历测试以确定其继续处于试验的合格性。如果不存在高等级疾病的组织学证据，受试者将进入维持期。进入研究时患有低等级t1疾病，并具有低等级t1疾病复发的受试者将不进入维持期。在维持期期间，vicinium每隔一周进行一次直至21个月。具有组织学确认的高等级疾病证据的受试者将作为治疗失败从研究中撤回。
在图1中提供了研究的示意性流程图。
在给予vicinium之前受试者将被要求清空他/她的膀胱。然后适当的研究人员将插入导管，且导管将被排空。然后将vicinium通过导管滴注入膀胱。受试者将被指示在膀胱中保持vicinium2小时。在此期间，他们也被要求避免液体摄入以降低尿流。受试者将被要求以任意顺序将其自己安置为直立(坐或站)、仰卧位、俯卧位、左侧卧位和右侧卧位，每种至少15分钟。在2小时结束时，受试者将排尿来清空膀胱，或膀胱将通过导管引流清空。
在导管插入时可以使用适当的局部麻醉剂和无菌润滑剂。另外，可以在研究者的决定下在导管插入时预防性地给予单次剂量的抗生素。
贯穿整个研究的对每个剂量的vicinium的施用步骤与上述相同。
如上文所述在第1-6周经由膀胱滴注每周两次施用vicinium。每次治疗以至少48小时相隔(且在任何7天时间内不应施用超过2次)。可以使用例如，虽然优选为星期一/星期四或星期二/星期五，也可以使用星期一/星期三或星期二/星期四的给药日程表。在给药前记录伴随药物。在给药前和临床出院前进行生命体征和ae，包括sae的收集。在第6周的最后一次给药后，在从诊所出院前将进行临床实验室评估：收集血液样品用于血液学和化学检查，收集尿样本用于尿分析。
在第7-11周期间，如上所述，经由膀胱滴注每周一次施用vicinium。在给药前记录伴随药物。在给药前和临床出院前进行生命体征和ae，包括sae的收集。
以下评估将在第12周进行。尿细胞学、伴随药物、生命体征和ae(包括sae)将在给药前收集。在第12周给药后和出院前，将进行以下临床实验室评估：生命体征、ae包括sae、体检、血液学和化学、尿分析和ecg一式三份(间隔1分钟)用于qtc分析。
在第13-16周期间将进行细胞检查和活检。活检可以是随机或直接的活检。样本将由中央病理学家收集并分级以确定受试者继续处于试验的合格性。为了进入维持期，受试者必须没有高等级疾病的组织学证据。任何具有高等级疾病的组织学证据的受试者将作为治疗失败而中断试验。
第14周是受试者可以开始维持疗法给药的最早的时间。直到所有测试步骤完成且已由中央病理学家确定没有高等级疾病的组织学证据，才能开始维持疗法。第17周是受试者可以开始维持疗法的最晚的时间。
在诱导期后没有高等级疾病的组织学证据的受试者合格进入维持期。处于维持期的受试者将每隔一周给药一次。第一个维持给药将不早于第14周(即诱导结束和维持疗法开始必须相隔至少1周)，且不迟于第17周(即诱导期完成后4周)开始。
继续维持治疗，直到疾病复发(受试者复发组织学证实的cis或高等级乳头状ta或t1病变)或疾病进展(组织学证实的疾病期≥t2)或从研究开始达24个月。具有疾病复发或进展的患者将从研究中撤出。具有低等级乳头状疾病复发的受试者将被允许在肿瘤除去后继续维持疗法。vicinium的肿瘤去除和给药必须相隔至少2周，但不超过3周的时间。
将评估无恶性疾病的膀胱镜检查证据的阳性细胞学检查(通过适当的成像技术对上尿路的完整评估；双侧输尿管细胞学检查；盲穿膀胱活检术；输尿管检查和活检)，并酌情按研究者的决定临床适当随访。受试者可按研究者的决定保留在研究中。具有第二次连续阳性细胞学检查的受试者，在第二次阳性或可疑但非诊断性细胞学检查时将被认为是发生事件，如果后续随访发现了高等级疾病的复发，但该受试者可以在确定高等级疾病之前按研究者的决定保留在研究中。
首要终点将在第17个月通过定向活检评估。通过免疫组织化学的epcam测定将在所有阳性活检上获得。此外，将在最终考察访问的2周内完成如下步骤：体检(包括身高和体重)；一次三份ecg(间隔一分钟)用于qtc分析；生命体征；伴随药物；ae包括sae；临床实验室样本收集(血液样品用于血液学和化学检查，和尿样本用于尿分析)；细胞检查；以及尿细胞学。
在诱导期期间的访问和评估的日程表提供在下面的表2中。在维持期期间的访问和评估的日程表提供在下面的表3中。术语“研究药物”是指vicinium。
表2.筛选/基线和诱导期
1.必须在研究药物施用前至少2周进行；所有乳头状疾病均必须完全切除。在具有t1疾病的受试者中，必须进行第二次turbt以符合研究入选。
2.通过方案规定的独立的中心病理评估者进行组织学证实的非肌肉浸润性尿路上皮性膀胱癌，必须在研究药物的第一给药之前记录。
3.在研究药物施用前不需要随机活检。
4.如果在给药开始前6个月内进行，则不需要。
5.单次跟踪只在筛选中进行；此后，将进行一式三份的ecg。
6.只对有生育潜力的女性(定义为符合以下准则中的至少一项：a)没有经历双边输卵管切除术、输卵管结扎术和/或子宫切除术；b)超过50岁，并在过去24个月中至少有一次月经期)。
7.评估在第1周第一次给药之前给药前(pre-dose)进行。注意：如果基线实验室评估是在研究药物的第一次给药>7天进行的，则仅需要进行第1周临床实验室评估。
8.评估在给药前并在离开诊所前进行。
9.评估在给药前进行。
10.评估在第6周(仅临床实验室(clinicallab)和第12周(临床实验室、体检和心电图)最后一次给药之后，离开诊所前进行。
11.在维持开始前仅在具有低等级乳头状疾病的受试者中进行。vicinium维持疗法的开始与肿瘤去除必须相隔至少2周，但不超过3周的时间。
12.每周两次(biw)给药，每个剂量间隔至少48小时(并且在任何7天期间不超过2个剂量)。例如，虽然优选星期一/星期四或星期二/星期五，也可以使用星期一/星期三或星期二/星期四的给药日程表。
13.在基线(第一次滴注的预剂量)和初次滴注后1小时、每周两次滴注的最后一次(预定的第12次滴注)以及每周一次滴注的最后一次(预定的第18次)获得水平。
表3.维持期
1.在完成诱导期后进行以确定对于维持期的资格。
2.在给药后尽快进行评估，但不超过2周。
3.评估在给药前并在离开诊所前进行。
4.评估在给药前进行。
5.评估在给药后1周且不超过2周进行。
6.turbt仅适用于具有低等级乳头状疾病的受试者。在诱导完成后的vicinium维持疗法的开始，或者在于维持疗法期间复发低等级乳头状疾病的受试者中重新开始vicinium维持疗法，与肿瘤去除必须相隔至少2周，但不超过3周的时间。
7.评估在研究结束的2周内进行。
vicinium和vicinium的施用
在诱导期间，受试者将每周两次(biw)持续6周和每周一次持续6周接受vicinium，如果符合条件然后进入维持期。只有在诱导期后没有高等级疾病的组织学证据的受试者才合格进入维持期。诱导期和维持期的治疗方案提供在下面的表4中。
表4.治疗方案
为了降低滴注期间的尿流并将vicinium留在膀胱中，受试者将被要求从vicinium滴注前2小时起到将药物保持在膀胱中的2小时时间段完成期间内避免饮用任何液体。在马上插入膀胱导管前，受试者将清空他们的膀胱。然后将由适当的研究人员将导管插入膀胱，且导管将被排空。在导管插入时可以使用适当的局部麻醉剂和无菌润滑剂。另外，可以在研究者的决定下在导管插入时预防性地给予单次剂量的口服抗生素。任何药物的使用必须记录在受试者病例报告表上。
在50ml盐水中的30mgvicinium将被滴注入导管。受试者将被要求将膀胱中的vicinium保持2小时，并要求在此期间避免液体摄入以降低尿流。受试者将被要求以任意顺序处于直立(坐或站)、仰卧位、俯卧位、左侧卧位和右侧卧位，每种至少15分钟。如果身体上不能，应将其记录在crf中。在2小时结束时，导管将被移除，受试者将排尿以清空膀胱。
在这项临床研究中，vicinium将作为单一疗法施用。在vicinium的初始给药开始前2周并在整个24个月的研究期间，将不允许使用抗癌疗法包括：激素疗法、放射疗法、免疫治疗、疫苗疗法、生物疗法或基于基因的疗法。另外，在vicinium开始前4周内和在整个24个月的研究期间，都不允许任何其他研究性试剂。被认为对受试者的安康必需，并且预期不会干扰vicinium的评估的任何其他的药物，可按研究者的决定给予。
在维持期期间发展低级乳头状疾病的受试者中，在除去肿瘤后而重新开始维持疗法之前，vicinium必须中断至少2周，但不超过3周。如果受试者发展了如国家癌症研究所对不良事件的常见术语标准(nationalcancerinstitutecommonterminologycriteriaforadverseevents)(nci-ctcae)4.03版中定义的任何局部3级不良事件，则vicinium施用可延迟达2周。对任何全身性3级ae，vicinium施用也可以按研究者的决定延迟达2周。如果在这2周内症状改善至1级或更少，则可恢复给药。如果2周后症状没有改善，则不应恢复治疗。然而，如果ae被研究者评估为与vicinium无关，并且预期继续的治疗将导致受试者的临床益处，则可基于具体情况与医疗监护员(medicalmonitor)会诊确定重新开始治疗。
viciniumtm(oportuzumabmonatox)是一种用于膀胱内施用的透明无色的溶液。其以玻璃小瓶中的冷冻产品形式提供，然后在施用之前在室温下解冻来制备。浑浊、颜色改变和/或存在颗粒物质可能表明产品已经变质。在50ml盐水中的vicinium30mg将进行膀胱内施用。
对于每个剂量，将1小瓶以5mg/ml的浓度含有7mlvicinium的vicinium从冰箱中取出，并允许其在直立位置在室温(20-25，℃允许变动至15-30)℃解冻1小时±15分钟。如果观察到较大颗粒或溶液在外观上浑浊，则允许小瓶静置最长额外的30分钟时间，或者直到观察到澄清溶液为止，以两者中先到者为准。如果在30分钟后仍然观察到颗粒，则将从冰箱取得一小瓶新的vicinium。在解冻过程中，小瓶将不会倒置或被晃动或以其侧面放置。小瓶不应暴露于直接的光源或热源。
研究群体
为了符合参与资格，受试者必须在筛选/基线访问时满足以下所有的纳入准则：
1.组织学证实的高等级非肌肉浸润性膀胱癌-cis、ta或t1乳头状疾病或两者。该诊断由方案规定的独立中心病理评估者，在受试者入选试验和开始研究治疗之前证实。
2.记录了受到对于cis或高等级ta或膀胱的任何t1级膀胱的bcg疗法(含或不含干扰素)并失败(即非不耐受)，或bcg难治性或bcg耐受疾病。男性或非怀孕、非哺乳期女性，在同意日年龄为18岁或以上。
3.有生育潜力的女性和所有具有育龄伴侣的男性，只有在24个月的研究期间同意使用适当的避孕技术或禁欲才合格。有生育潜力的女性被定义为满足以下标准中的至少一个：a)没有经历双侧卵巢输卵管切除术、输卵管结扎和/或子宫切除术；b)大于50岁，并且在过去24个月内至少有一次月经期。
4.在vicinium施用前8周内，绘图肿瘤位置并定量膀胱的感染面积的膀胱活检。
5.预计至少4年的寿命。
6.根据以下标准定义的充分的器官功能：
a.血清天冬氨酸氨基转移酶(ast)和丙氨酸氨基转移酶(alt)≤3.0×正常上限(uln)；
b.总血清胆红素≤1.5×uln(ctcae级别≤1)；
c.血清肌酐≤2.0×uln；具有血清肌酐>1×uln的受试者也必须具有肌酐清除率≥50ml/min；
d.血红蛋白≥8.0g/dl；接受治疗性红细胞生成素制剂(即促红细胞生成素α，darbepoetinα)的受试者合格入选；
e.绝对中性粒细胞计数≥1500×109/l；
f.血小板≥75,000×109/l。
7.能够了解和签署独立伦理委员会或机构审查委员会批准的知情同意书，表明受试者(或法律上可接受的代表)已经在入选前被告知试验的所有相关方面，并愿意和能够遵守定期访问、治疗计划、实验室检查和其他研究步骤。
如果受试者适用以下准则中的一项或多项，则将对于参与资格不合格。
8.受试者怀孕或正在哺乳。
9.通过活检或上尿路放射学成像(例如静脉肾盂造影、计算机断层扫描、尿路或逆行性肾盂造影)的尿道或上尿路移行细胞癌(tcc)的证据，或在过去2年内通过盆腔成像的高阶段疾病的证据。
10.具有肾积水的受试者，除了那些已经长期存在肾积水(即早于cis、ta或t1的诊断超过2年)并在筛查中的诊断评估显示没有肿瘤的证据的受试者以外。
11.在初始给药vicinium之前的4周内，在2周内的任何膀胱内或其他化学疗法治疗，或任何研究性试剂。
12.现有重度尿路感染或复发性严重细菌性膀胱炎史。
13.以研究者的意见，倾向于使受试者从膀胱内疗法的施用和/或一般的麻醉发展并发症的泌尿生殖系统、肾脏、肝胆、胃肠、神经系统或造血系统的活跃的、不受控制的损伤。
14.在研究的24个月期间内需要伴随的癌症治疗的其他原发性恶性肿瘤(鳞状或基底细胞皮肤癌除外)史。
15.在筛选ecg时，男性的qtc间隔>450毫秒或女性的qtc间隔>470毫秒。如果所述发现是由于可纠正的原因(例如低钾血症、低镁血症)，则可以进行校正的重复ecg来确定受试者的合格性。
16.由于存在严重共患病(例如不受控制的心脏或呼吸系统疾病)，研究者的意见认为不能耐受膀胱内施用或膀胱内手术操作(膀胱镜检查、活检)的受试者。
功效的评估
应进行标准膀胱镜检查。对于用于进入研究的资格的诊断样本经历了荧光指导活检的任何受试者，必须在整个研究中继续使用这种膀胱镜检查模式。在每个膀胱镜检查评估期间，必须进行膀胱绘图，包括每个肿瘤位置的记录和定量膀胱受感染的总体面积。膀胱镜检查将在诱导期结束进行，且在维持期期间每3个月进行。细胞检查应在上述每个时间点的最后一次给药后至少1周完成，但不得超过2周。在vicinium的最后一次给药后的2周内的最终访问时，也进行膀胱镜检查。
诱导期细胞学样品将在vicinium的初始(第一次)给药和第12周的给药前的第1周收集。细胞学样品也在维持期期间(刚好在该月的第一次给药之前)每3个月收集，以及在最后访问(在vicinium的最后一次给药后2周内)收集。
所有受试者在诱导期完成后、在维持期期间的第18个月和最后访问时都需要定向活检。不需要随机的活检，但可以在无明显解剖学异常的可疑或阳性细胞学检查中获得。在每个时间点的最后一次给药后(但不超过2周)尽快获得活检并分级。在所有其他时间点的活检，仅在膀胱镜检查期间出现明显或可疑的病变时，或在阴性膀胱镜检查时观察到阳性或可疑细胞学检查时才能获得。
应从所有可疑为疾病的区域，包括任何明显持续性疾病的区域和/或任何炎症区域取得定向活检。在每个活检时间点，每个受试者应获得最少2个活检。
安全/耐受性的评估
不良事件(ae)被定义为在施用药物产品的受试者中的任何不良医学发生，并且不一定必须与该治疗有因果关系。因此，ae可以是与药物产品的使用暂时相关的任何不利的和非预期的迹象(可以包括异常的实验室发现)、症状或疾病，无论是否与药物产品相关。在研究或其他医疗条件下受试者的疾病的任何恶化也将被视为ae，除非其在对于该受试者的疾病波动的正常范围内。仅在临床显著诱导了临床体征或症状，导致了在基线时不存在的新的诊断，或在主动治疗期间恶化为3级或4级毒性或需要治疗时，实验室检查异常才构成ae。构成严重不良事件(sae)或引起vicinium停用的异常实验室值必须报告并记录为ae。所有ae应适当对待。从签署的知情同意的时间起到研究停用后30天出现的所有ae(无论是否为怀疑的因果关系)都必须记录在不良事件crf(aecrf)上，并具有以下最少信息：事件类型、持续时间(开始和结束日期)、严重程度、严重性、与vicinium的因果关系、采取的行动和结果。所有ae将使用nci-ctcae(4.03版)进行评估；在适用的情况下，将使用相同的量表对预研究状况进行分级。对于每一个集(episode)，应记录达到的最高严重程度等级。不包括在nci-ctcae中的不良事件将被记录。将由研究人员对强度(轻度、中度或重度)以及与vicinium的关系(不相关、不太相关、也许相关、可能相关或绝对相关)进行分级。
如果严重不良事件(sae)或严重的怀疑的不良响应导致以下任何结果，则将被研究者或主办者认为是严重的：
·死亡；
·危及生命的ae，被定义为由研究者或主办者认为使患者或受试者出于立即死亡的风险的ae。它不包括如果以更严重的形式发生则可能导致死亡的ae或怀疑的不良响应；
·持续或显著的失能/丧失能力，或实施正常生活功能的能力的实质性破坏；
·先天性异常/出生缺陷；
·院内住院治疗或现有住院治疗延长。以下不会被视为住院治疗：
ο由于在知情同意前存在的情况而选择性或预先规划的在院停留并且没有恶化，由于社会原因的在院停留。
ο对不符合上述sae的任何定义并且没有导致入院许可的事件，在紧诊不住院的基础上进行的治疗。为了确定sae报告的适用性，而应与医疗监护员讨论的为了观察的“23小时”住院治疗。
ο与任何病情恶化无关的，对研究的指示的日常治疗或监测。
·在基于适当的医学判断时可以将可能不会导致死亡、危及生命或需要住院治疗的重要的医疗事件视为严重，这些事件可能会危害患者或受试者，并可能需要医疗或手术介入以防止其中一种上述结果。
实验室评估将在基线和诱导期的以下时间进行：在第1周第一次给药前(如果在第1周第一次给药vicinium前7天进行基线评估)，之后在第6周的最后一次给药和第12周的最后一次给药之后。在维持期期间，实验室评估将每3个月一次进行(在最后一次给药后1周，但不超过2周进行收集)，并在最后访问时(在最后一次给药后不超过2周收集)进行。将进行以下实验室评估：
·血清化学，包括总胆红素、alt、ast、碱性磷酸酶、白蛋白、乳酸脱氢酶、bun、肌酐、葡萄糖、钠、钾、钙，磷
·血液学，包括有差异的全血细胞计数(cbc)、血红蛋白、血细胞压积和血小板
·具有红细胞(rbc)和白血球(wbc)计数的的尿分析。
所有有生育潜力的女性受试者(定义为满足以下标准中的至少一个的任何女性：a)未经历双侧卵巢输卵管切除术、输卵管结扎和/或子宫切除术；b)大于50岁，并且在过去24个月内至少有一次月经期)将接受在基线的尿妊娠测试。
还将收集血液以测定在基线和6个月的治疗期间的血浆抗vicinium。
体检必须由研究者或临床研究的有资格人员在筛选期间，和在诱导期中的初始给药vicinium之前的第1周进行。体检也将在诱导期中的最后一次给药后、在维持期期间的每6个月、和eos(或提前退出))时进行。
体重和身高，将在诱导期的初始给药vicinium之前的第1周之前、在第12个月的第一次给药之前的第12个月、和eos(或提前退出)时测量。
完整的体检将在筛选和eos时进行。所有其他测试将按研究者的决定而缩短和集中，来评估受试者的临床状态、自上次访问以来的任何变化以及任何可能的ae。
在筛选中将进行单12导联ecg来确定受试者的合格性。用于qtc分析的一式三份ecg(包括三个间隔一分钟的单独ecg)将在诱导期的最后一次给药后而从诊所出院之前进行，和eos或提前退出(在最后一次施用vicinium后2周内)时进行。ecg应在仰卧位至少10分钟的安静休息后开始。
生命体征(血压、脉搏、呼吸和体温)将在以下时间测量：筛选、每个诱导期给药访问(在给药前并在从诊所出院之前)、每个维持期给药访问(在给药前并在从诊所出院之前)和eos(或提前退出)时。每个生命体征评估将包括2次测量。在记录第一次测量之前，受试者应躺在仰卧位置5分钟。在记录第二次测量之前，受试者应站立3分钟。
统计
对于所有假设检验的i型(α误差)将设置为0.05，且所有统计检验均为双侧。所有置信区间将是双侧95％置信区间。数据将通过报告受试者在每个类别的科目和定序测量(ordinalmeasures)中的频率和百分比，并指用于连续测量的标准偏差(sd)、中位数、最小值和最大值而汇总。
修改的意向治疗(mitt)群体：mitt群体包括接受至少一个剂量的研究药物并且具有可评估的疾病基线评估(活检、膀胱镜检查和细胞学)的任何受试者。mitt群体将是主要的功效分析群体。
安全群体：安全群体包括接受至少一个剂量的研究药物的任何受试者。
将在每次评估时分别总结具有完全响应的的具有cis(具有或不具有乳头状疾病)的患者的数量和百分比。将使用clopper-pearson方法计算完全响应率的95％(95％)置信区间。对于达到完全响应的具有cis(具有或不具有乳头状疾病)的受试者的响应的持续时间(定义为从完全响应的开始到首次记录进展或死亡的情况)，将使用kaplan-meier方法估计。任何不经历进展或死亡的患者将在最后一次非缺少性(non-missing)评估中进行审查。
将使用kaplan-meier方法估计无事件生存。不经历事件的受试者将在最后一次非缺少性评估中进行审查。在诱导期期间患有持续性疾病的受试者将被处理为在第1天发生事件。将呈现围绕18个月无事件生存率的95％(95％)置信区间。如果95％置信区间的下限不包括20％，则研究将被视为成功。将以类似的方式分析其他到事件的时间的功效终点(到膀胱切除时间、到疾病复发时间、到进展时间、无进展生存和总体生存)。
在每次评估时，将分别汇总不具有高等级疾病的证据的受试者的数量和百分比。使用clopper-pearson方法计算出围绕不具有高等级疾病率的证据的95％(95％)置信区间。
按通过最终分布确定执行研究进入的病理学子集分析。
不良事件将使用最新的可用版本的医学词典(medicaldictionary)(meddra)进行编号。nci-ctcae4.03术语通过meddraprimarysoc进行分组。将通过最大强度、治疗突发性ae、与研究药物的关系、研究药物的停用和死亡来对ae提供单独的表格和/或列表。将呈现生命体征和临床实验室测试的值的制表和列表。临床实验室测试的制表将被归类为落入高于、低于或在正常范围内。随访ecg和体检数据将以制表格式汇总。
假设无事件生存时间为非参数分布，且随访时间的长度为24个月，134个受试者的样本量将提供至少80％的能力来测试以下零假设(nullhypothesis)：在18个月的无事件生存率为20％，对比于在18个月的无事件生存率≥30％的替代假设。(swogonesamplenon-parametricsurvivalcalculatorhttps://www.swogstat.org/stat/public/one_nonparametric_survival.htm)。
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660665
<210>3
<211>254
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>ep-cam结合蛋白
<400>3
aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly
151015
aspargvalthrilethrcysargserthrlysserleuleuhisser
202530
asnglyilethrtyrleutyrtrptyrglnglnlysproglylysala
354045
prolysleuleuiletyrglnmetserasnleualaserglyvalpro
505560
serargpheserserserglyserglythraspphethrleuthrile
65707580
serserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcysalaglnasn
859095
leugluileproargthrpheglyglnglythrlysvalgluleulys
100105110
argalathrproserhisasnserhisglnvalproseralaglygly
115120125
prothralaasnserglythrserglysergluvalglnleuvalgln
130135140
serglyproglyleuvalglnproglyglyservalargilesercys
145150155160
alaalaserglytyrthrphethrasntyrglymetasntrpvallys
165170175
glnalaproglylysglyleuglutrpmetglytrpileasnthrtyr
180185190
thrglygluserthrtyralaaspserphelysglyargphethrphe
195200205
serleuaspthrseralaseralaalatyrleuglnileasnserleu
210215220
argalagluaspthralavaltyrtyrcysalaargphealailelys
225230235240
glyasptyrtrpglyglnglythrleuleuthrvalserser
245250
<210>4
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr1(l)
<400>4
argserthrlysserleuleuhisserasnglyilethrtyrleutyr
151015
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr2(l)
<400>5
glnmetserasnleualaser
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr3(l)
<400>6
alaglnasnleugluileproargthr
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr1(h)
<400>7
asntyrglymetasn
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr2(h)
<400>8
trpileasnthrtyrthrglygluserthrtyralaaspserphelys
151015
gly
<210>9
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cdr3(h)
<400>9
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15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>linker
<400>10
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151015
serserglyleu
20
<210>11
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>eta(252-608)
<400>11
gluglyglyserleualaalaleuthralahisglnalacyshisleu
151015
proleugluthrphethrarghisargglnproargglytrpglugln
202530
leugluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleu
354045
alaalaargleusertrpasnglnvalaspglnvalileargasnala
505560
leualaserproglyserglyglyaspleuglyglualaileargglu
65707580
glnprogluglnalaargleualaleuthrleualaalaalagluser
859095
gluargphevalargglnglythrglyasnaspglualaglyalaala
100105110
seralaaspvalvalserleuthrcysprovalalaalaglyglucys
115120125
alaglyproalaaspserglyaspalaleuleugluargasntyrpro
130135140
thrglyalaglupheleuglyaspglyglyaspvalserpheserthr
145150155160
argglythrglnasntrpthrvalgluargleuleuglnalahisarg
165170175
glnleuglugluargglytyrvalphevalglytyrhisglythrphe
180185190
leuglualaalaglnserilevalpheglyglyvalargalaargser
195200205
glnaspleuaspalailetrpargglyphetyrilealaglyasppro
210215220
alaleualatyrglytyralaglnaspglngluproaspalaarggly
225230235240
argileargasnglyalaleuleuargvaltyrvalproargserser
245250255
leuproglyphetyrargthrglyleuthrleualaalaprogluala
260265270
alaglygluvalgluargleuileglyhisproleuproleuargleu
275280285
aspalailethrglyprogluglugluglyglyargleugluthrile
290295300
leuglytrpproleualagluargthrvalvalileproseralaile
305310315320
prothraspproargasnvalglyglyaspleuaspproserserile
325330335
proasplysgluglnalaileseralaleuproasptyralasergln
340345350
proglylyspropro
355
<210>12
<211>113
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vb4-845轻链可变区
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aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly
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aspargvalthrilethrcysargserthrlysserleuleuhisser
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asnglyilethrtyrleutyrtrptyrglnglnlysproglylysala
354045
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505560
serargpheserserserglyserglythraspphethrleuthrile
65707580
serserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcysalaglnasn
859095
leugluileproargthrpheglyglnglythrlysvalgluleulys
100105110
arg
<210>13
<211>116
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vb4-845重链可变区
<400>13
gluvalglnleuvalglnserglyproglyleuvalglnproglygly
151015
servalargilesercysalaalaserglytyrthrphethrasntyr
202530
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354045
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505560
lysglyargphethrpheserleuaspthrseralaseralaalatyr
65707580
leuglnileasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys
859095
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100105110
thrvalserser
115
<210>14
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vb4-845轻-重链接头
<400>14
alathrproserhisasnserhisglnvalproseralaglyglypro
151015
thralaasnserglythrserglyser
2025