甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法与流程

本发明涉及无菌用胶原蛋白技术领域，具体涉及甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法。

背景技术：

胶原蛋白属于生物高分子。胶原蛋白种类较多，常见类型为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。其中，I型胶原蛋白因具有低免疫源性、与宿主细胞及组织之间协调作用、止血作用和生物可降解等优势，因此I型胶原蛋白作为生物医学材料在临床应用广泛，如手术缝合线、止血纤维、止血海绵、水凝胶、敷料、人工皮肤、人工血管、角膜及药物载体等。I型胶原蛋白是纤维形成胶原，是多细胞生物的细胞外的主要结构大分子，能活化上皮细胞，促进上皮细胞增生，也可促进胶原酶生成，使皮肤有张力和弹性，能淡化眼纹和消除眼袋及阴影，在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

I型胶原蛋白的结构呈三股螺旋结构，由三条α肽链组成，分子量约为300KDa。从动物肌腱中提取的I型胶原蛋白含2条α₁肽链和1条α₂肽链，在凝胶电泳图中分子量为100kDa处有两条谱带，一条谱带是由于两条α₁肽链重合所得到的，另一条谱带表示单条的α₂肽链。图谱中在分子量为200kDa处也有一条谱带，对应于胶原结构中的β链，β链是α肽链的二聚体。当凝胶电泳图中不显示谱带时，表示I型胶原蛋白的三股螺旋结构受到破坏。

现有技术中，利用I型胶原蛋白制备手术缝合线、止血纤维、止血海绵、水凝胶、敷料、人工皮肤、人工血管、角膜或药物载体等时，为了达到无菌要求，一般进行辐照灭菌，然而，I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构会被破坏，进而破坏了I型胶原蛋白的功效，因此严重限制了I型胶原蛋白的广泛应用。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，以利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；

步骤三，选用包装材料将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述I型胶原蛋白来源于牛跟腱、猪跟腱或羊跟腱中的一种或任意两种以上的组合物。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述I型胶原蛋白来源于动物提取物。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述I型胶原蛋白为经过发酵或人工重组方法而获得的I型胶原蛋白。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述溶剂为水、有机酸、无机酸或缓冲对中的一种或任意两种以上的组合物；

所述有机酸为乙酸、甲酸、苹果酸或柠檬酸；所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸；所述缓冲对为醋酸-醋酸钠缓冲对、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对或磷酸盐缓冲对。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述I型胶原蛋白与所述溶剂之间的重量比为1~10:5000。

上述技术方案中，所述步骤二中，所述甘油占所述I型胶原蛋白溶液的重量比为0.5%~40%。

上述技术方案中，所述步骤三中，所述辐照灭菌为钴60辐照灭菌或者电子束辐照灭菌。

上述技术方案中，所述步骤三中，所述包装材料为玻璃容器、塑料容器或铝塑袋。

上述技术方案中，所述步骤二中，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油的同时还加入防腐剂，所述防腐剂为山梨酸钾、山梨酸或苯甲醇，所述防腐剂占所述I型胶原蛋白溶液的重量比为0.1%~5%。

本发明与现有技术相比较，有益效果在于：

（1）本发明提供的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

（2）本发明提供的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，具有方法简单，生产成本低，并能够适用于大规模应用的特点。

附图说明

图1是I型胶原蛋白溶液经过不同方法处理后的SDS-PAGE凝胶电泳图。通过对比不经灭菌处理、用钴60灭菌处理、和用钴60灭菌同时加入甘油处理的样品谱带，观察胶原蛋白三螺旋结构是否保持完整。

具体实施方式

为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于牛跟腱；

本实施例中，溶剂为水；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为5:1000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为20%；

步骤三，选用玻璃容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行钴60辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例2。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于猪跟腱；

本实施例中，溶剂为有机酸；其中，有机酸为乙酸、甲酸、苹果酸或柠檬酸；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为1:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油和山梨酸钾，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为0.5%；山梨酸钾占I型胶原蛋白溶液的重量比为3%；

步骤三，选用塑料容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行电子束辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例3。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于羊跟腱；

本实施例中，溶剂为无机酸，其中，无机酸为盐酸、硫酸或磷酸；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为10:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油和山梨酸，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为40%；山梨酸占I型胶原蛋白溶液的重量比为0.1%；

步骤三，选用铝塑袋将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行钴60辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例4。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于牛跟腱和猪跟腱的组合物；

本实施例中，溶剂为缓冲对；其中，缓冲对为醋酸-醋酸钠缓冲对、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对或磷酸盐缓冲对；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为3:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油和苯甲醇，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为10%；苯甲醇占I型胶原蛋白溶液的重量比为5%；

步骤三，选用玻璃容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行电子束辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例5。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于牛跟腱、猪跟腱和羊跟腱中的组合物；

本实施例中，溶剂为水和有机酸的组合物；其中，有机酸为乙酸、甲酸、苹果酸或柠檬酸；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为8:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为30%；

步骤三，选用铝塑袋将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行钴60辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例6。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中，I型胶原蛋白来源于动物提取物；

本实施例中，溶剂为有机酸、无机酸和缓冲对的组合物；其中，有机酸为乙酸、甲酸、苹果酸或柠檬酸；无机酸为盐酸、硫酸或磷酸；缓冲对为醋酸-醋酸钠缓冲对、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对或磷酸盐缓冲对；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为2:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为5%；

步骤三，选用玻璃容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行钴60辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例7。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中， I型胶原蛋白为经过发酵方法而获得的I型胶原蛋白；

本实施例中，溶剂为水、有机酸、无机酸和缓冲对的组合物；其中，有机酸为乙酸、甲酸、苹果酸或柠檬酸；无机酸为盐酸、硫酸或磷酸；缓冲对为醋酸-醋酸钠缓冲对、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对或磷酸盐缓冲对；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为7:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为15%；

步骤三，选用玻璃容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行钴60辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

实施例8。

甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，它包括以下步骤：

步骤一，将I型胶原蛋白用溶剂溶解后，得到I型胶原蛋白溶液；本实施例中， I型胶原蛋白为经过人工重组方法而获得的I型胶原蛋白；

本实施例中，溶剂为缓冲对，其中，缓冲对为醋酸-醋酸钠缓冲对；

本实施例中，I型胶原蛋白与溶剂之间的重量比为6:5000；

步骤二，往步骤一制得的I型胶原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均匀，得到混合溶液；本实施例中，甘油占I型胶原蛋白溶液的重量比为25%；

步骤三，选用塑料容器将步骤二得到的混合溶液进行包装，然后进行电子束辐照灭菌，即制得无菌I型胶原蛋白溶液。

本实施例的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，由于在对I型胶原蛋白进行辐照灭菌前，加入甘油，进而使得I型胶原蛋白在辐照灭菌中，其三股螺旋结构不被破坏，进而很好地保护了I型胶原蛋白的功效，因此大大提高了I型胶原蛋白的广泛应用。利用本发明的甘油在保护I型胶原蛋白的三股螺旋结构中的应用方法，利于制备无菌I型胶原蛋白溶液。I型胶原蛋白溶液在美容与保健方面应用广泛，适用于轻中度炎症痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、痤疮愈合后早期表浅性疤痕的治疗；对治疗皮肤过敏，减轻激光、光子治疗术后疤痕的形成有辅助疗效；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。