BMP9在制备延缓肝纤维化药物中的应用的制作方法

本发明涉及药物制备领域，尤其涉及bmp9在制备延缓肝纤维化药物中的应用。

背景技术：

肝纤维化是多种原因引起的慢性肝损害所致的病理改变，表现为肝内细胞外间质成分过度异常地沉积，并影响肝脏的功能，是慢性肝病发展到肝硬化乃至肝癌必经之阶段。肝纤维化的治疗，主要通过抑制炎症或脂质过氧化，或者抑制肝星状细胞的增生活化，以及促进胶原降解。但是现有技术中用于延缓肝纤维化的药物种类稀少，研发此类药物具有十分重要的临床指导及科学意义。

因此，在现有的基础上，研发一种新的延缓肝纤维化的药物是十分具有实用价值的。

技术实现要素：

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种bmp9在制备延缓肝纤维化药物中的应用，为制备新的延缓肝纤维化的药物开拓了新的领域。

本发明提供的bmp9在制备延缓肝纤维化药物中的应用，所述的bmp9为腺病毒shbmp9或bmp9中和抗体。

较佳地，所述的腺病毒shbmp9的序列为：cccttctttgttgtcttctccaatg。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

bmp9是由肝脏分泌的一种蛋白因子，属于tgf-β超家族，bmp9用于肝纤维化的治疗从未见报道，本发明采用bmp9制备的药物能在一定程度上延缓肝纤维化的进程，bmp9作为有效成分应用于开发治疗和防治肝纤维化的药物，十分具有实用价值，开拓了一个新的药物研发的领域。

附图说明：

图1为本发明实施例一中小鼠肝纤维化造模示意图。

图2a为本发明实施例一中肝纤造模后，小鼠肝脏massion和siriusred染色的代表性图。

图2b为本发明实施例一中massion染色的统计结果图。

图2c为本发明实施例一中siriusred染色的统计结果图。

图2d为本发明实施例一中shbmp9腺病毒注射的小鼠肝脏中bmp9的蛋白表达量图。

图3为本发明实施例二中小鼠肝纤维化造模示意图。

图4a本发明实施例二中显示出肝纤造模后进行抗体中和实验，小鼠肝脏massion和siriusred染色的代表性图。

图4b为本发明实施例二中massion染色的统计结果图。

图4c为本发明实施例二中siriusred染色的统计结果图。

图4d为本发明实施例二中bmp9中和抗体注射的小鼠肝脏中bmp9的蛋白表达量图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步地说明，以更好地理解本发明。

实施例一：

腺病毒shbmp9可应用于减弱ccl4诱导的小鼠肝纤维化的药物实验

实验材料：6-8周的c57小鼠24只，分为oli,ccl4+gfp，ccl4+shbmp9三处理组，每个处理组8只小鼠。四氯化碳(ccl4)、橄榄油、手术剪、注射器、缝线.shbmp9腺病毒、gfp腺病毒对照，shbmp9的序列为：cccttctttgttgtcttctccaatg.

oli组：给小鼠腹腔注射橄榄油50ul/次，每周3次，总共2个月.心脏采血。

ccl4+gfp组：给小鼠腹腔注射10％ccl4(橄榄油稀释)50ul/次，每周3次，连续4周，从第5周开始，同时尾静脉注射2*109pfu/次的gfp腺病毒，每周3次，连续共注射4周，第8周时处死小鼠，取血，分离小鼠肝脏。

ccl4+shbmp9组：给小鼠腹腔注射10％ccl4(橄榄油稀释)50ul/次，每周3次，连续4周，从第5周开始，同时尾静脉注射2*10pfu/次的shbmp9腺病毒，每周3次，连续共注射4周，第8周时处死小鼠，取血，分离小鼠肝脏，结果如图1所示，图1显示出小鼠肝纤造模和shbmp9腺病毒尾静脉注射的过程。

massion染色和siriusred染色显示小鼠肝脏中的胶原含量，并进行面积统计，westernblot检测a-sma和bmp9的表达，实验结果证明shbmp9能够显著减弱肝纤维化的程度。结果如图2所示，图2a显示出肝纤造模后，小鼠肝脏massion和siriusred染色的代表性图片，图2b为massion染色的统计结果，shbmp9能够显著降低小鼠肝脏中的胶原含量，图2c显示出siriusred染色的统计结果，shbmp9显著降低了肝脏中胶原沉积.图2d显示shbmp9腺病毒注射的小鼠肝脏中，bmp9的蛋白表达量显著降低，同时肌动蛋白a-sma表达下调，说明小鼠肝纤得到了缓解。

实施例二：

bmp9中和抗体能够作为有效成分应用于降低ccl4诱导的肝纤维化的药物中。

实验材料：6-8周的c57小鼠24只，分为oli,ccl4+igg，ccl4+bmp9ab处理组，每个处理组8只小鼠。

四氯化碳(ccl4)、橄榄油、手术剪、缝线.，bmp9中和抗体购自r&dsystem(catlog：mab3209-500)

实验材料：6-8周的c57小鼠24只，分为oli,ccl4+igg，ccl4+bmp9ab三处理组，每个处理组8只小鼠。四氯化碳(ccl4)、橄榄油、手术剪、注射器、缝线.

oli组：给小鼠腹腔注射橄榄油50ul/次，每周3次，总共2个月.心脏采血。

ccl4+igg组：给小鼠腹腔注射10％ccl4(橄榄油稀释)50ul/次，每周3次，连续6周，从第7周开始，同时腹腔注射50ug/次的igg，每周3次，连续共注射2周，第8周时处死小鼠，取血，分离小鼠肝脏。

ccl4+bmp9ab组：给小鼠腹腔注射10％ccl4(橄榄油稀释)50ul/次，每周3次，连续6周，从第7周开始，同时腹腔注射50ug/次的bmp9ab，每周3次，连续共注射2周，第8周时处死小鼠，取血，分离小鼠肝脏，造模图如图3所示。

massion染色和siriusred染色显示小鼠肝脏中的胶原含量，并进行面积统计，westernblot检测a-sma和bmp9的表达，实验结果证明bmp9中和抗体能够作为有效成分于显著减弱肝纤维化的程度，可应用于结果如图4所示，图4a显示出肝纤造模后进行抗体中和实验，小鼠肝脏massion和siriusred染色的代表性图片，图4b为massion染色的统计结果，bmp9中和抗体能够显著降低小鼠肝脏中的胶原含量，图4c显示出siriusred染色的统计结果，bmp9中和抗体显著降低了肝脏中胶原沉积.图4d显示bmp9中和抗体注射的小鼠肝脏中，bmp9的蛋白表达量显著降低，同时肌动蛋白a-sma表达下调，说明小鼠肝纤得到了缓解。

降低肝纤维化的药物中，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

bmp9是由肝脏分泌的一种蛋白因子，属于tgf-β超家族，bmp9用于肝纤维化的治疗从未见报道，本发明采用bmp9制备的药物能在一定程度上延缓肝纤维化的进程，bmp9作为有效成分应用于开发治疗和防治肝纤维化的药物，十分具有实用价值，开拓了一个新的药物研发的领域。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。