本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种超临界流体技术制备恩替卡韦环糊精包合物的方法，以提高恩替卡韦的溶解度，进而提高其溶出度和生物利用度。
背景技术：
临床研究证实，恩替卡韦(entecavir，etv)是一种强效选择性鸟嘌呤核苷类似物，具有显著的抗乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus，hbv)的活性。etv较拉米夫定(lamivudine，lam)具有更加显著的病毒抑制作用，几乎没有副作用，且耐药性很低，在治疗慢性乙型肝炎药物中被认为有很好的临床应用前景。
由于恩替卡韦是难溶性药物，一般的片剂对于药物的溶出有一定的影响。利用β-环糊精(β-cyclodextrin，β-cd)和β-cd衍生物与药物包合的研究相当广泛。β-cd及其衍生物是内亲水外疏水的“锥筒”结构，能有效包合一些难溶性的药物并增加其溶解性和溶出度。β-环糊精不仅能与其空穴大小相容性的化合物形成包合物，也能通过难溶性药物上某些特定基团或侧链插入环糊精的空穴形成包合物来增加其溶解性和溶出度。β-cd对一些不溶性药物有很好的包合作用，但分子中c2和c3羟基之间形成分子内氢键而导致其自身水溶性变差，采用羟丙基-β-环糊精(hp-β-cd)和2,6-二甲基-β-环糊精(2,6-dm-β-cd)破坏了分子内氢键，大大地提高了其水溶性和亲水性。
超临界抗溶剂法(sas)是指溶剂可以与超临界流体很好的互溶，但溶质在超临界流体中的溶解度较低，当超临界流体与溶液相互接触时，流体扩散到溶液中，导致溶液迅速膨胀，溶质在溶液中的溶解度迅速下降，瞬间形成较高的过饱和度，促使溶质沉析。sas是一种环保且新颖的制备超细微粒的方法，在制药、医疗、生物工程和化工等多个行业有着广泛的使用前途。与传统的药物超微粉化技术方法相比，超临界抗溶剂法具有不易失活、绿色环保、粒度分布窄、尺寸小等优点；sas技术操作温度比较低，对药物的化学结构破坏小，特别适合于制备热敏性或者具有生物活性的药物；sas技术制备药物微粒所使用的溶剂分离简单，大大减少了有机溶剂在药物中的残留。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种超临界流体技术制备恩替卡韦环糊精包合物的方法，以提高恩替卡韦的溶解度，进而提高其溶出度和生物利用度。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种超临界流体技术制备恩替卡韦环糊精包合物的方法，所述环糊精为羟丙基-β-环糊精，所述方法包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
优选地，步骤s1所述的样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为6-10mg/ml。
优选地，步骤s2中调节结晶釜内的温度至40-50℃，压力至9-15mpa。
优选地，步骤s3维持co2的通入流速为3-5l/min。
优选地，步骤s3中样品溶液通入结晶釜的流速为0.6-1.4ml/min。
优选地，步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力20-40分钟后卸压。
优选地，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为7mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至48℃，压力至10mpa；步骤s3维持co2的通入流速为4.5l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为1.1ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力20分钟后卸压。
本发明的优点：
本发明提供的方法制备的恩替卡韦环糊精包合物可以提高恩替卡韦的溶解度，进而提高其溶出度和生物利用度。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。
实施例1：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为8mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至45℃，压力至12mpa；步骤s3维持co2的通入流速为4l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为1.0ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力30分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为39.5g/l，而恩替卡韦在水中溶解度仅为2.5g/l。
实施例2：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为6mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至40℃，压力至9mpa；步骤s3维持co2的通入流速为3l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为0.6ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力40分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为36.3g/l。
实施例3：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为10mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至50℃，压力至15mpa；步骤s3维持co2的通入流速为5l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为1.4ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力20分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为36.9g/l。
实施例4：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为7mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至42℃，压力至10mpa；步骤s3维持co2的通入流速为3.5l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为0.8ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力40分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为34.8g/l。
实施例5：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为9mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至48℃，压力至14mpa；步骤s3维持co2的通入流速为4.5l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为1.2ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力20分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为34.2g/l。
实施例6：恩替卡韦环糊精包合物的制备
包括如下操作步骤：
步骤s1，用混合有机溶剂溶解恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精制得样品溶液，所述混合有机溶剂为无水乙醇与丙酮按照体积比3:1混合而成，恩替卡韦和羟丙基-β-环糊精的质量比为1:3；
步骤s2，向结晶釜中通入co2，并调节结晶釜内的温度和压力；
步骤s3，继续以一定的流速向结晶釜中通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，同时将上述样品溶液通入结晶釜中；
步骤s4，样品溶液通入完毕后，持续通入co2，维持结晶釜内的温度和压力不变，一段时间后卸压；当结晶釜内压力降至大气压后，打开结晶釜收集恩替卡韦环糊精包合物。
其中，步骤s1所述样品溶液中恩替卡韦的质量浓度为7mg/ml；步骤s2中调节结晶釜内的温度至48℃，压力至10mpa；步骤s3维持co2的通入流速为4.5l/min，样品溶液通入结晶釜的流速为1.1ml/min；步骤s4中维持结晶釜内的温度和压力20分钟后卸压。
恩替卡韦环糊精包合物在水中溶解度为83.5g/l。该实施例制备的恩替卡韦羟丙基-β-环糊精包合物的溶解度显著高于其他实施例。而且，已知2,6-二甲基-β-环糊精对于恩替卡韦的溶解度提高效果明显优于羟丙基-β-环糊精，但是该实施例方法制备的恩替卡韦羟丙基-β-环糊精包合物的溶解度基本接近于恩替卡韦2,6-二甲基-β-环糊精包合物(用相同方法制备，所得包合物在水中溶解度为89.5g/l)。
上述实施例表明，本发明提供的方法制备的恩替卡韦环糊精包合物可以提高恩替卡韦的溶解度，进而提高其溶出度和生物利用度。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。