Kindlin‑2蛋白作为靶点在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用的制作方法

文档序号:11219628阅读:549来源:国知局
Kindlin‑2蛋白作为靶点在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用的制造方法与工艺

本发明涉及药物领域,特别是涉及一种kindlin-2蛋白作为靶点在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用。



背景技术:

骨性关节炎是一种退行性关节炎疾病,普遍发生在中老年人群中,常表现为软骨下固硬化、慢性滑膜炎、关节周围骨赘形成等症状。随着我国进入老龄化社会,骨性关节炎患病人群以惊人的速度在上升,骨性关节炎容易引起疼痛、行走障碍等,严重影响患者的生活质量。目前骨性关节炎的治疗主要包括运动、关节保健、药物疼痛缓解等方案。然而这些方案往往治标不治本,无法从根源上治疗骨性关节炎,使用的药物往往缺乏针对性和特异性,因此,非常迫切的需要研发新型的特异性的治疗骨性关节炎药物。



技术实现要素:

基于此,有必要提供一种kindlin-2蛋白作为靶点在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用。

kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用,所述药物靶向kindlin-2蛋白,所述药物能够促进kindlin-2蛋白基因转录或表达。

在一个实施方式中,所述药物靶向软骨细胞中的kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中,所述药物能够提高软骨细胞中kindlin-2蛋白的表达量的kindlin-2蛋白的表达量。

一种治疗骨性关节炎的药物,所述药物靶向kindlin-2蛋白,所述药物中包含促进kindlin-2蛋白基因转录或表达的成分。

在一个实施方式中,所述药物靶向软骨细胞中的kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中,所述药物能够提高软骨细胞中的kindlin-2蛋白的表达量。

一种治疗骨性关节炎的药物组合物,包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂,所述kindlin-2蛋白促进剂负载于所述靶向剂上,所述靶向剂靶向kindlin-2蛋白。

在一个实施方式中,所述靶向剂选自aav病毒、mirna和聚合物胶束中的至少一种。

在一个实施方式中,kindlin-2蛋白促进剂为表达kindlin-2的蛋白的基因,所述靶向剂为aav病毒,所述表达kindlin-2的蛋白的基因携带在所述aav病毒上。

kindlin-2蛋白在制备骨性关节炎的检测试剂中的应用,所述检测试剂以kindlin-2蛋白作为骨性关节炎的生物标记物。

实验结果表明,将kindlin-2基因特异性敲除后,小鼠的关节软骨及软骨下骨严重破坏,关节软骨面积显著减少,关节肿胀严重,小鼠的疼痛阈值显著下降。本研究的实验结果提示kindlin-2蛋白可以作为治疗骨性关节炎的药物的一个新靶点。

附图说明

图1为实施例1中实验组和对照组小鼠的关节软骨abg染色后的结果图;

图2为实施例1中实验组和对照组小鼠的关节软骨采用imageproplus7软件测量胫骨和股骨中关节软骨的面积的统计结果图;

图3为实施例2中实验组和对照组小鼠骨关节经微型ct扫描分析后3d重构的模型图;

图4为实施例3中实验组和对照组小鼠膝关节的外观图;

图5为实施例4中实验组和对照组小鼠的疼痛阈值统计结果。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合具体实施例及附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用,其中,该药物靶向kindlin-2蛋白,该药物能够促进kindlin-2蛋白基因转录或表达。

kindlin-2蛋白是一种粘着斑蛋白,可参与整合素的激活,有研究表明其在肌肉细胞的延长上扮演重要角色。然而关于kindlin-2蛋白作为靶点治疗的研究较少,目前尚未见其在骨性关节炎方面的研究报道。而本发明的发明人经实验研究后意外发现kindlin-2蛋白的表达与骨性关节炎存在密切的相关性。kindlin-2基因特异性敲除后,小鼠的关节软骨及软骨下骨严重破坏,关节软骨面积显著减少,关节肿胀严重,小鼠的疼痛阈值显著下降。本研究的实验结果为治疗骨性关节炎的药物提供了一个新的靶点。药物通过靶向kindlin-2蛋白,促进kindlin-2蛋白基因转录或表达,协助骨性关节炎治疗。

具体的,本文中所说的“治疗骨性关节炎的药物”可以是为治疗已经确诊为骨性关节炎的病人制备的药物,也可以是为预防骨性关节炎而制备的药物。

在一个实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用中,该药物靶向软骨细胞中的kindlin-2蛋白。软骨细胞与骨性关节炎具有密切的关联,通过药物靶向软骨细胞中的kindlin-2蛋白,能够进一步的增强药物的特异性,减少副作用。

在一个实施方式中,该药物具体为可以靶向aggrecan(聚集蛋白聚酶)呈阳性的细胞。

在一个实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用中,该药物能够提高软骨细胞中kindlin-2蛋白的表达量。研究结果表明,kindlin-2基因特异性敲除后的小鼠关节软骨面积显著减少,提示当kindlin-2蛋白分泌量降低时,关节软骨受损,进一步引起骨性关节炎等症状。因此kindlin-2蛋白可以作为治疗骨性关节炎药物的一个新的靶点,可通过药物提高kindlin-2蛋白的表达量,特异性保护关节软骨细胞,预防关节软骨受损。

更具体地,在一个实施方式的kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物中的应用中,该药物能够提高关节软骨细胞中kindlin-2蛋白的表达量。

综上,研究结果表明,kindlin-2蛋白的表达量与骨性关节炎存在密切的相关性。kindlin-2蛋白可以作为制备治疗骨性关节炎的药物的一个新靶点,在制备预防或治疗骨性关节炎的药物中具有良好的应用前景。

此外,本申请还提供一实施方式的治疗骨性关节炎的药物,其中,该药物靶向kindlin-2蛋白,该药物中包含促进kindlin-2蛋白基因转录或表达的成分。

该药物中促进kindlin-2蛋白基因转录或表达的成分能够提高kindlin-2蛋白的表达量,特异性保护关节软骨细胞,预防关节软骨受损。

在一个实施方式中,该治疗骨性关节炎的药物靶向软骨细胞中的kindlin-2蛋白。进一步的,该药物能够提高软骨细胞中的kindlin-2蛋白的表达量。

更具体地,软骨细胞可以为关节软骨细胞,该治疗骨性关节炎的药物靶向关节软骨细胞中的kindlin-2蛋白,并提高关节软骨细胞中的kindlin-2蛋白的表达量。

上述药物以kindlin-2蛋白作为治疗靶点,通过促进kindlin-2蛋白基因转录或表达从而治疗骨性关节炎。研究结果显示,当kindlin-2基因特异性敲除后,kindlin-2蛋白表达量下降,小鼠的关节软骨及软骨下骨严重破坏,关节软骨面积显著减少,关节肿胀严重,小鼠的疼痛阈值显著下降。因此可通过药物促进kindlin-2蛋白基因转录或表达,从而治疗骨性关节炎。

进一步的,本申请还提供一实施方式治疗骨性关节炎的药物组合物,该组合物包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂,kindlin-2蛋白促进剂负载于靶向剂上,靶向剂靶向kindlin-2蛋白。

其中,kindlin-2蛋白促进剂为能够提高kindlin-2蛋白表达量的药物或试剂,靶向剂为能够靶向kindlin-2蛋白。kindlin-2蛋白促进剂可以通过化学键连接或包覆等物理方式负载于靶向剂上。

在一个实施方式中,靶向剂可以选自aav病毒(adeno-associatedvirus,腺相关病毒)、mirna(microrna)和聚合物胶束中的至少一种。

具体的,aav病毒、mirna或聚合物胶束作为载体将kindlin-2蛋白促进剂携带至体内特定的部位,kindlin-2蛋白促进剂释放促进体内kindlin-2蛋白的表达,从而提高kindlin-2蛋白的表达量,修复或保护关节软骨,从而治疗或预防骨性关节炎。

在一个实施方式中,kindlin-2蛋白促进剂为表达kindlin-2的蛋白的基因,靶向剂为aav病毒,表达kindlin-2的蛋白的基因携带在aav病毒上,aav病毒进入体内并表达kindlin-2蛋白,从而提高kindlin-2蛋白的表达量。

上述治疗骨性关节炎的药物组合物,包括kindlin-2蛋白促进剂以及靶向剂,两者协同作用,提高kindlin-2蛋白的表达量,进而预防或治疗骨性关节炎。

此外,本申请还提供一实施方式的kindlin-2蛋白在制备骨性关节炎的检测试剂中的应用,其中,该检测试剂以kindlin-2蛋白作为骨性关节炎的生物标记物。

通过研究表明,kindlin-2蛋白的表达量与骨性关节炎存在密切的相关性,因此kindlin-2蛋白可作为骨性关节炎的生物标记物。具体地,检测试剂可以通过kindlin-2蛋白的表达量来判定骨性关节炎的病情。

综上,经实验研究后意外发现kindlin-2蛋白与骨性关节炎存在密切的相关性。基因特异性敲除后,kindlin-2蛋白表达量下降,导致小鼠的关节软骨及软骨下骨严重破坏,关节软骨面积显著减少,关节肿胀严重,小鼠的疼痛阈值显著下降。实验结果提示kindlin-2蛋白可以作为治疗骨性关节炎的一个新靶点。kindlin-2蛋白在制备治疗骨性关节炎的药物或者制备骨性关节炎的检测试剂中具有良好的应用前景。

以下为具体实施例。

实施例中采用药物和仪器如非特别说明,均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如文献、书本中所述的条件或者试剂盒生产厂家推荐的方法实现。

未特别说明,以下实施例中wt表示野生型对照小鼠,cko表示采用他莫昔芬诱导特异性敲除aggrecan呈阳性的软骨细胞的kindlin-2后的小鼠。实验用小鼠由美国拉什大学提供,均为雄性鼠。

实施例1

敲除kindlin-2基因对小鼠关节软骨的影响

将两个月龄的实验组小鼠(cko)进行他莫昔芬注射以诱导敲除kindlin-2,他莫昔芬的浓度为10mg/ml,给小鼠的注射剂量为0.1ml/10g体重,连续注射五针,每天一针,一个月后再补一针。实验对照组(wt)相同条件下进行玉米油注射。过两个月,处死小鼠,取出膝关节,用福尔马林固定,然后用10%的edta进行脱钙21天,用石蜡包埋,切片,进行abg染色(alcianblueandsafranin-o/fastgreenstaining,阿尔新蓝和番红/固绿染色),结果如图1所示,相比对照组,aggrecan阳性细胞中特异性敲除kindlin-2后,关节软骨及软骨下骨发生严重损坏。对图1用imageproplus7软件测量胫骨和股骨中关节软骨的面积,统计结果见图2。

以上结果显示,aggrecan阳性细胞中特异性敲除kindlin-2后导致关节软骨面积显著减少,提示kindlin-2与骨性关节炎的发展存在密切的联系。

实施例2

按实施例1的方法对实验组小鼠(cko)敲除aggrecan阳性细胞中的kindlin-2基因。实验对照组(wt)相同条件下进行玉米油注射。过两个月,处死小鼠,取骨关节,用甲醛固定,进行微型ct(μct)扫描分析,然后3d重构,结果如图3所示,图3中,(a)图表示wt型小鼠的骨关节的前视图,(b)图表示wt型小鼠的骨关节的后视图,(c)图表示cko型小鼠的骨关节的前视图,(d)图表示cko型小鼠的骨关节的后视图。

微型ct(μct)扫描显示aggrecan阳性细胞中特异性敲除kindlin-2后,骨关节的结构和形态发生严重破坏。提示可通过促进kindlin-2蛋白基因转录或表达的药物预防或治疗骨性关节炎。

实施例3

按实施例1的方法对实验组小鼠(cko)敲除aggrecan阳性细胞中的kindlin-2基因。实验对照组(wt)相同条件下进行玉米油注射。过两个月,处死小鼠,取出膝关节。如图4所示,aggrecan阳性细胞中特异性敲除kindlin-2后,小鼠膝关节肿胀严重。

实施例4

行为学实验测量疼痛指数

按照vonfrey敏感性的测定方法来测定机械力的诱发痛,在进行vonfrey测试之前,先让受试小鼠熟悉环境。在进行测定时,使用一个经过校准的vonfrey细丝从下方戳小鼠的后脚掌,然后根据迭代接近法,计算出50%的力后退阈值(forcewithdrawalthreshold)。实验组小鼠(cko)和对照组小鼠的疼痛阈值统计结果如图5所示。显示aggrecan阳性细胞中特异性敲除kindlin-2后,小鼠的疼痛阈值显著下降。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

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