一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物的制作方法

本发明涉及中药材深加工
技术领域：
，具体涉及一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物。
背景技术：
：铁皮石斛，又名万丈须，石斛载于《神农本草经》，并被列为上品。为多年生草本植物，石斛生长在热带、亚热带原始森林及相类似的温暖湿润的环境，多附生于大的树干或岩石上。有抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板凝聚、降低血糖和治疗白内障等方面均有良好疗效。铁皮石斛花为铁皮石斛所结的花，5～7月最茂盛，非常美丽。铁皮石斛的花呈淡黄色，共六瓣，最显著的功效就是解郁——其气清香，味轻清，善疏达，“轻扬宜畅，善走上焦”，温和养胃，能解郁。从现代观点来看，铁皮石斛花中含有多种挥发油，具有挥发性，可以清新解郁，有助于舒缓精神紧张，保持头脑清醒，解除精神抑郁，安定烦躁情绪，因此尤其适合有精神性失眠、暑热不适、躁动不安、工作压力大等症状者，或作为养颜清心之用。铁皮石斛花有非常高的药用价值，能很好地滋阴润肺、养胃生津、明目清热，有增强免疫力、抗衰老功效，对呼吸道疾病、糖尿病、慢性肝炎、慢性胃炎等有好处。铁皮石斛花素是铁皮石斛花含有的花色素，包括水溶性和脂溶性两大类成分，是铁皮石斛花具有抗氧化、抗衰老，美白等功效的基础。“美白肌肤”是广大爱美女性永恒的话题与追求。美白产品的研发、安全性和功效性评价自然成为研究者、生产经营者和消费者关注的焦点。皮肤的颜色主要由皮肤色素含量及分布决定，黑色素是最主要的决定因素。皮肤中的黑色素细胞产生黑色素，黑色素颗粒通过黑色素细胞枝状突起向角质细胞转移，转移至角质细胞的黑色素颗粒随表皮细胞上行至角质层，从而影响皮肤的颜色或形成色斑，最终随角质层脱落而排泄。目前市场上的美白产品分为物理美白和生物化学美白2种。物理美白通常用钛白粉和氧化锌等粉体遮盖，以达到美白效果；生物化学美白机理概括来说，就是通过抑制黑色素的生成，阻断黑色素的运输，加快表皮细胞代谢速度，阻断黑色素生成过程中的信号通路等途径，达到美白肌肤的效果。闪式提取技术是一种用于中草药提取的高新技术，该技术以组织破碎原理为基础，按照提取的目的和工艺特点，技术要求等，充分吸收国外最新技术，科学设计，精心制作，不但达到了快速，高效，充分，完全的提取要求，而且不需加热，节省能源，有效保护了提取物质中的热敏性成分，原来需要数小时的提取工作利用该仪器仅需几分钟即可完成，工作效率提高了几十倍，并且操作简便，与传统提取方法相比具有非常显著的优势。亚临界流体萃取技术是以亚临界状态的流体或亚临界流体的混合溶液为溶媒，与溶质在系统内相继经过浸提、蒸发脱溶、压缩、冷凝回收等过程，从天然产物中提取目标组分的一种新技术。当lpg、丙烷、丁烷、r600a、dme、r134a和六氟化硫等以亚临界流体状态存在时，分子的扩散性能增强，传质速度加快，对天然产物中弱极性以及非极性物质的渗透性和溶解能力显著提高。亚临界环境下提取，不破坏热敏性成分、目的物完全，被视为绿色环保、前景广阔的一项变革性技术。为了解决目前脂溶性铁皮石斛花素生产成本高、效率低、产品不稳定的问题，本发明把闪式提取和亚临界萃取技术结合，极大地节约成本，提高生产效率，解决了生产过程中易发生褐变的问题。本发明提供的脂溶性铁皮石斛花提取物改善皮肤微循环、抑制酪氨酸酶活性以及抗氧化作用协同改善皮肤肤色，达到多层次美白的功效。技术实现要素：本发明的目的是为了克服现有技术中的不足，提供一种一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，解决了现有产品中生产成本高、效率低、产品不稳定等问题。为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素80-90%、米糠油10-20%。铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入10-40倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间3-5分钟，提取温度20-30℃；（3）将步骤（2）中混合物高速离心或者板框过滤得到乙醇提取液；（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏；（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的萃取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；优选地，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，包括丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷、乙醇中的一种或几种的混合。优选地，步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:2～1:20，萃取压力为0.1mpa～0.9mpa，萃取时间30min～40min，萃取温度25℃～40℃，萃取次数2～4次。优选地，步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。本发明的有益效果为：（1）本发明制备工艺成本低，生产效率高，解决了生产过程中；（2）本发明通过闪式提取和亚临界萃取技术相结合解决了生产过程易发生褐变的问题；（3）本发明提供的脂溶性铁皮石斛花提取物通过改善皮肤微循环、抑制黑色素生成以及抗氧化作用协同改善皮肤肤色，达到多层次美白的功效。附图说明附图1为本发明实施例1中铁皮石斛花油和金钗石斛花油混合后的气相色谱仪-质谱（gc-ms）检测图谱；附图2为本发明实施例二天然防脱育发油的动物实验效果对比图。具体实施方式为使对本发明的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解与认识，用以较佳的实施例及附图配合详细的说明，说明如下：实施例1：一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素80%、米糠油20%。所述铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入10倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间3分钟，提取温度20℃。（3）将步骤（2）中混合物高速离心得到乙醇提取液。（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏。（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的提取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；其中，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，为丙烷和丁烷任意比例的混合；步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:2，萃取压力为0.1mpa，萃取时间30min，萃取温度25℃，萃取次数2次；步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。实施例2一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素90%、米糠油10%。所述铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入40倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间5分钟，提取温度30℃。（3）将步骤（2）中混合物板框过滤得到乙醇提取液。（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏。（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的提取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；其中，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，为丁烷；步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:20，萃取压力为0.9mpa，萃取时间40min，萃取温度40℃，萃取次数4次；步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。实施例3一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素85%、米糠油15%。所述铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入20倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间4分钟，提取温度25℃。（3）将步骤（2）中混合物高速离心得到乙醇提取液。（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏。（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的提取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；其中，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，为丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷任意比例的混合；步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:10，萃取压力为0.5mpa，萃取时间35min，萃取温度30℃，萃取次数3次；步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。实施例4一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素90%、米糠油10%。所述铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入30倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间3分钟，提取温度25℃。（3）将步骤（2）中混合物板框过滤得到乙醇提取液。（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏。（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的提取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；其中，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，为二甲醚、四氟乙烷和乙醇任意比例的混合；步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:15，萃取压力为0.7mpa，萃取时间30min，萃取温度40℃，萃取次数4次；步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。实施例5一种具有美白功效的铁皮石斛花提取物，其特征在于：包括如下质量份的原料为铁皮石斛花素88%、米糠油12%。所述铁皮石斛花素由闪式提取技术结合亚临界萃取方法制得，步骤如下：（1）闪式提取：将切碎的新鲜铁皮石斛花的花瓣加入闪式提取器中，加入35倍质量重的95%（体积比）乙醇；（2）将步骤（1）中混合物6000转每分钟，提取时间3分钟，提取温度30℃。（3）将步骤（2）中混合物高速离心得到乙醇提取液。（4）将步骤（3）中乙醇提取液真空加热浓缩至无乙醇的浸膏。（5）亚临界萃取：将步骤（4）中的浸膏装入密闭提取罐,抽真空,注入适量萃取溶剂至将样品完全浸没,在一定压力及萃取条件下进行多次萃取；（6）脱溶：萃取结束后,将含有铁皮石斛花素的提取溶剂放入蒸发罐,恒温减压蒸发,获得铁皮石斛花素,气化后的萃取溶剂经压缩、过滤、冷凝液化后,回收到溶剂储存罐；其中，步骤（5）中萃取溶剂为亚临界提取有机溶剂，为丙烷、丁烷、二甲醚、四氟乙烷、乙醇任意比例的混合；步骤（5）中样品与萃取溶剂质量之比为1:10，萃取压力为0.4mpa，萃取时间36min，萃取温度30℃，萃取次数4次；步骤（6）中回收的萃取溶剂可以循环使用。实施例5所得产品的抗氧化活性测试：（1）对dpph自由基的清除作用配制不同浓度（25μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，300μg/ml，400μg/ml）的铁皮石斛花提取物的油溶液，分别取2ml与2mldpph的甲醇溶液（0.13mmol/l）混和。将反应混合物用快速混匀器混合均匀并在室温25oc下孵育30min，静置，在517nm处用紫外可见光分光光度计测定吸光值；每组实验设置三个平行，取吸光值的平均值。以ve作阳性对照代替铁皮石斛花提取物按上述步骤操作；dpph自由基的清除能力按照以下公式计算：其中，a0为2mldpph溶液加入2ml甲醇中的吸光度值；a1是2ml甲醇加2ml不同浓度的样品的混合物的吸光度值；a2为2mldpph的甲醇溶液加2ml不同浓度的样品的吸光度值。测试结果如图1所示，从图中可以看出，在测试浓度范围内，所有样品对dpph清除能力呈明显的浓度依赖性。铁皮石斛花提取物和ve的ic50值分别是11.2μg/ml和22.8μg/ml，说明铁皮石斛花提取物对dpph自由基的清除能力优于ve（2）对羟基自由基（•oh）的清除作用分别精确配制不同浓度（10μg/ml，25μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，400μg/ml，500μg/ml）的铁皮石斛花提取物和ve样品的油溶液，6mm的feso4溶液，2.4mm的h2o2溶液，6mm的乙醇-水杨酸溶液。各取1mlfeso4溶液、1ml乙醇-水杨酸溶液，加入1ml样品溶液，将反应混合物在试管中震荡混匀，静置10min。再加入1mlh2o2溶液反应30min。以ve作为阳性对照，用锡箔纸分别包裹阳性对照和铁皮石斛花提取物在37oc条件下恒温水浴30min。反应产生的2,3-二羟基苯甲酸在510nm处有吸光值。以双蒸水代替铁皮石斛花提取物溶液作为空白组，以双蒸水代替水杨酸作为对照组，每组实验设三组平行。•oh的清除能力按照如下公式计算：其中，a0为空白组的吸光值，a2为不同浓度铁皮石斛花提取物样品的吸光值，a1为对照组的吸光值。测试结果如图2所示，从图中可以看出，所有样品对•oh的清除活性具有明显浓度依赖性。铁皮石斛花提取物和ve的ic50值分别为70.2μg/ml和61.3μg/ml。很显然，铁皮石斛花提取物与ve具有几乎同样的清除•oh能力。实施例5所得产品的人体改善皮肤微循环、抑制黑色素生成活性测试：基于光谱吸收的原理（rgb），通过测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素和血红素的含量。色素检测仪的测试探头由光源发射器和接收器组成，另有弹簧以保持检测时对皮肤的压力恒定。探头的发射器发出波长分别为568nm、660nm、和880nm3种波长的光，照射在皮肤表面，接受器测得皮肤反射的光。由于发射光的量是一定的，因此就可以测出被皮肤吸收的光的量，测出皮肤黑色素和血红素的含量测试步骤与要求志愿者要求、测试环境条件、测试前准备及测试志愿者要求：无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏性疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近1个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；未参加其他临床试验者；按规定使用受试物；测试前所有志愿者应填写知情同意书。测试环境条件：保持温度18℃，湿度45%±1%。测试前准备：受试部位前2天～3天不能使用任何产品（化妆品或外用药品）。试验前，受试者需要清洁双手前臂内侧，用干的面巾纸擦拭干净。清洁后，在受试者双手前臂内侧做好测量区域标记。正式测试前，应该在符合标准的房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持轻松。测试步骤：实验中，受试产品涂抹量一般为2mg/cm2，涂布在2cm2的区域，区域之间间隔至少2cm，选择一区域作为空白对照。选择不同时间，分别测定各测试点的变化值，每点一般测定3次，取平均值。10名受试者分别涂抹添加5%铁皮石斛花提取物的乳液，分别测定受试者使用前和连续使用3天、7天、14天和28天后面颊中的黑色素和血红素含量，计算平均值见表1。从表1中可以看出，受试者试用第3天黑色素和血红素的含量并没有明显减少，第7天黑色素和血红素含量开始有一定的减少，第14天时，黑色素和血红素的含量减少最明显，第28天以后，黑色素和血红素的含量逐渐趋于平稳状态。说明含有铁皮石斛花提取物的乳液在使用第7天开始有一定的美白作用，第28天以后美白效果逐渐趋于平稳。表1项目使用前第3天第7天第14天第28天血红素196191186177162黑色素286280271258240本发明的有益效果为：（1）本发明制备工艺成本低，生产效率高，解决了生产过程中；（2）本发明通过闪式提取和亚临界萃取技术相结合解决了生产过程易发生褐变的问题；（3）本发明提供的脂溶性铁皮石斛花提取物通过改善皮肤微循环、抑制黑色素生成以及抗氧化作用协同改善皮肤肤色，达到多层次美白的功效。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。当前第1页12