本发明涉及一种三七黄酮的分离提取方法。
背景技术：
黄酮类化合物是自然界分布较广的一类化合物，三七全植株中，三七叶中总黄酮含量较高，含量2%左右，根茎中黄酮含量0.5%，三七茎叶中总黄酮含量高于三七根茎中总黄酮含量。三七茎叶是采挖三七后被大量抛弃的可利用资源，根据初步调查三七茎叶每年可利用资源3000t-4000t，目前仅利用了10%不到；因此三七茎叶中黄酮类物质具有开发价值。
三七黄酮具有止咳平喘祛痰、活血化瘀、保护心肌损伤、扩张血管、抗高血压，改善微循环、清除氧自由基等作用。
三七黄酮主含黄酮和黄酮甙类，主要为山奈酚、槲皮素类及其甙类。
三七黄酮提取工艺和专利报道较少，在粗提环节中大多采用水提法，水提取法能得到大量黄酮甙类化合物，水溶性较差的黄酮类化合物则难以提取完全，具有局限性。在初纯化工艺过程中通常使用ab-8、nk大孔吸附树脂等，制备所得黄酮含量较低，针对性较差，因三七皂苷和三七黄酮极性相似，洗脱条件基本一样，现有技术很难将三七黄酮和三七皂苷分离开，针对现有方法提取三七黄酮提取分离率低、纯度低等问题。
技术实现要素：
本发明提供了一种简单、分离效果好、提取率高的三七茎叶黄酮的分离提取方法，本发明方法具体内容如下：
（1）将三七或三七茎叶粉碎后置于提取罐中，加入生药质量8-10倍的体积浓度70%-80%的乙醇溶液，同时加入氨水调节混合物ph为8-10，加热回流提取2次以上，合并每次提取液浓缩到清膏加入稀盐酸调节ph值至中性，继续浓缩干燥得棕黄色粉末；
（2）将步骤（1）干燥物粉碎后，加入其质量5-7倍体积浓度70%-90%的丙酮水溶液，室温密闭搅拌提取2-4小时，过滤后，滤渣再加入2体积浓度70%-90%的丙酮水溶液提取一次，丢弃滤渣，合并2次丙酮提取液；
（3）减压回收滤液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度25-30%，过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液；
（4）将步骤（3）三七黄酮粗提液经过氢键大孔树脂进行吸附，吸附后纯净水冲洗到流出液为无色，然后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析，解析流速为1-2柱体积/h，收集流出的解析液，浓缩得浓缩液；
（5）将步骤（4）浓缩液进行聚酰胺柱层析，上样完后纯净水冲洗到洗出液为无色，然后用体积浓度35-45%的乙醇溶液解析聚酰胺柱，解析流速为0.5柱体积/h，收集解析液；最后用体积浓度70%-80%的乙醇溶液解析三七黄酮，解析流速为1-2柱体积/h；
（6）将步骤（5）体积浓度35-45%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮甙，该粉末水溶性较好，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮甙含量大于85%；将体积浓度70%-80%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得三七黄酮；该粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮含量大于92%。
所述步骤（4）中氢键大孔树脂型号为hpd417或ads-17，用量为生药质量的0.3-0.5倍，上柱流速为1.5-2柱体积/h。
所述步骤（5）中上样流速为1-2柱体积/h。
所述聚酰胺树脂用量为生药质量的0.2-0.4倍。
所述步骤（5）中使用4-5倍柱体积的体积浓度35-45%的乙醇溶液进行解析，解析大极性黄酮甙。
所述步骤（5）中使用2-3倍柱体积的体积浓度70-80%的乙醇溶液进行解析，解析小极性黄酮类物质。
本发明优点和技术效果如下：
本发明方法利用三七皂苷类化合物很难溶解于丙酮，而三七黄酮在丙酮中溶解性较好的特点，采用丙酮纯化粗提取物；在树脂纯化环节针对黄酮分子的酚羟基结构特点，选择具有较好吸附能力和吸附选择性的氢键大孔吸附树脂，能较好的吸附黄酮类化合物，通过本发明方法能获得高纯度三七总黄酮；且本发明方法操作简单，适于工业化生产和市场推广应用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1：本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下：
（1）将三七茎叶1kg粉碎至60目，将粉末置于提取罐加入生药质量8倍的体积浓度70%的乙醇溶液，同时加入氨水调节混合物ph为8，加热回流提取2次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次提取液加入稀盐酸调节ph值至中性，减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末；
（2）将步骤（1）干燥物粉碎后，加入干燥物质量5倍的体积浓度90%的丙酮水溶液，室温密闭搅拌罐中搅拌提取4小时，过滤后，滤渣再加入2体积浓度90%的丙酮水溶液提取一次，丢弃滤渣，合并2次丙酮提取液；
（3）减压回收滤液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度25%，过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液；
（4）将步骤（3）三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附，树脂用量为0.3倍生药质量，树脂型号为hpd417，上柱流速为1.5bv/h，吸附后纯净水冲洗到无色；然后用体积浓度70%的乙醇溶液解析三七黄酮，解析流速为1bv/h，收集黄色解析液，减压浓缩得混悬状浓缩液；
（5）将步骤（4）浓缩液进行聚酰胺柱层析，上样流速为1bv/h，聚酰胺粉末用量为0.2倍生药质量，上样完后纯净水冲洗到无色，然后用4倍柱体积的体积浓度35%乙醇溶液解析聚酰胺柱，解析流速为0.5柱体积/h，收集解析液，主含黄酮甙类物质；继续用2倍柱体积体积浓度70%的乙醇溶液解析三七黄酮，解析流速为1柱体积/h；
（6）将步骤（5）体积浓度35%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末12.6g，该粉末水溶性较好，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，三七黄酮甙含量为90%；将体积浓度70%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末5.4g，该粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，三七黄酮含量为97%。
实施例2:本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下：
（1）将三七茎叶1kg粉碎至60目，将粉末置于提取罐加入生药质量9倍的体积浓度80%的乙醇溶液，同时加入氨水调节混合物ph为9，加热回流提取2次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次提取液加入稀盐酸调节ph值至中性，减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末；
（2）将步骤（1）干燥物粉碎后，加入干燥物质量6倍的体积浓度80%的丙酮水溶液，室温密闭搅拌罐中搅拌提取3小时，过滤后，滤渣再加入2体积浓度80%的丙酮水溶液提取一次，丢弃滤渣，合并2次丙酮提取液；
（3）减压回收滤液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度30%，过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液；
（4）将步骤（3）三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附，树脂用量为0.4倍生药质量，树脂型号为ads-17，上柱流速为2bv/h，吸附后纯净水冲洗到无色；然后用体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮，解析流速为1.5bv/h，收集黄色解析液，减压浓缩得混悬状浓缩液；
（5）将步骤（4）浓缩液进行聚酰胺柱层析，上样流速为1bv/h，聚酰胺粉末用量为0.3倍生药质量，上样完后纯净水冲洗到无色，然后用5倍柱体积的体积浓度45%乙醇溶液解析聚酰胺柱，收集解析液，主含水溶性三七黄酮甙物质；继续用3倍柱体积体积浓度80%的乙醇溶液解析三七黄酮；
（6）将步骤（5）体积浓度45%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末14.7，该粉末水溶性较好，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮甙含量为87%；将体积浓度80%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末6.3，该粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮含量为94%。
实施例3：本三七茎叶黄酮的分离提取方法如下：
（1）将三七叶1kg粉碎至60目，将粉末置于提取罐加入生药质量10倍的体积浓度75%的乙醇溶液，同时加入氨水调节混合物ph为10，加热回流提取3次，第一次2小时，第二次1小时，第3次1h，合并3次提取液加入稀盐酸调节ph值至中性，减压真空浓缩干燥得棕黄色粉末；
（2）将步骤（1）干燥物粉碎后，加入干燥物质量7倍的体积浓度70%的丙酮水溶液，室温密闭搅拌罐中搅拌提取2小时，过滤后，滤渣再加入2体积浓度70%的丙酮水溶液提取一次，丢弃滤渣，合并2次丙酮提取液；
（3）减压回收滤液中丙酮得流浸膏，向流浸膏中加入乙醇溶液，搅拌溶解流浸膏使得溶液中乙醇量达到体积浓度27%，过滤去除不溶物得澄清三七黄酮粗提液；
（4）将步骤（3）三七黄酮粗提液经氢键大孔树脂进行吸附，树脂用量为0.5倍生药质量，树脂型号为ads-17，上柱流速为2bv/h，吸附后纯净水冲洗到无色；然后用体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮，解析流速为2bv/h，收集黄色解析液，减压浓缩得混悬状浓缩液；
（5）将步骤（4）浓缩液进行聚酰胺树脂柱层析，上样流速为2bv/h，60目聚酰胺树脂用量为0.4倍生药质量，上样完后纯净水冲洗到无色，然后用4倍柱体积的体积浓度40%乙醇溶液解析聚酰胺柱，收集解析液，主含水溶性三七叶黄酮甙物质；继续用2.5倍柱体积体积浓度75%的乙醇溶液解析三七黄酮；
（6）将步骤（5）体积浓度40%的乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七叶黄酮甙粉末17.01，该粉末水溶性较好，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮甙含量为85%；将体积浓度75%乙醇溶液解析液减压浓缩干燥得黄白色三七黄酮粉末7.29，该粉末微溶于水，溶于乙醇，以槲皮素为对照，uv法进行含量测定，黄酮含量为92%。