中成药颈腰康活性成分在制备治疗肾阳虚药物中的应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体涉及一种中成药颈腰康活性成分的新的药用用途。

背景技术：

中成药颈腰康主要治疗骨折瘀血肿胀疼痛，骨折恢复期，以及肾虚挟瘀所致痹痛，其组方为(以重量份数计)：制马钱子30-60份、伸筋草10-40份、香加皮10-40份、乳香(醋炒)10-40份、红花30-60份、地龙50-80份、骨碎补(沙烫)10-40份、防己10-40份、牛膝10-40份。其制备方法是：以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成常规剂型，医药市场多见胶囊剂。除上述适应症外，未见其他用途。

肾主藏精，主发育与生殖，如肾阴不足，肾精亏耗，可导致阳痿、早泄、遗精、不育症等男科疾病。男性的性激素包括睾酮(t)、垂体精子生成素(fsh)、垂体间质细胞刺激(lh)、雌二醇(ez)等，正常情况下保持动态平衡，从而保持正常的性腺功能。生殖功能有赖于下丘脑一垂体一性腺轴(hpg)功能的自然生理调节，一旦由于各种原因引起这一轴腺功能紊乱，都可引起男性不育。类固醇激素的分泌主要受下丘脑-垂体-性腺轴(hpg)的调节，下丘脑接受经中枢神经系统分析与整合后的各种信息，通过释放促性腺激素释放激素(gnrh)可促进腺垂体远侧部的促性腺激素细胞分泌卵泡刺激素(fsh)和黄体生成素(lh)。对于男性来说，fsh促进支持细胞合成雄激素结合蛋白(abp)；lh又称间质细胞刺激素(icsh)，结合于间质细胞膜受体后，通过激活腺苷酸环化酶，使camp依赖性蛋白激酶激活，导致合成磷酸化蛋白、lh诱导蛋白的形成。促进胆固醇在线粒体中脱去侧链转成孕烯酮，使滑面内质网合成雄激素(睾酮，t)能力增加，对性功能障碍的治疗达到标本兼治。

众多的壮阳中成药及方剂是通过补肝益肾和调节免疫功能等方面，而显示出其壮阳的药理学效应。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一中成药颈腰康活性成分在治疗肾阳虚药物中的应用。扩大成熟的中药的适应症，进一步发挥颈腰康药用活性成分药用作业。为治疗肾阳虚提供新的治疗药。

本发明的技术方案是：中成药颈腰康活性成分在制备治疗肾阳虚药物中的应用。

本发明的积极效果是：在传统中医理论和临床经验指导下，以现代药理学证实的颈腰康胶囊有兴奋中枢神经系统作用，具有调节下丘脑-垂体-性腺轴功能，及改善微循环，调节平滑肌，对蛋白质有同化作用及抗疲劳作用达到壮阳的功效。开创了颈腰康活性物在制备治疗肾阳虚药物中的应用。经临床应用验证，其疗效显著可靠，药性平和，未出现毒副作用，有效率达95％，治愈率65％。

附图说明

图1为空白组生精小管横切面生精上皮镜下图。

图2为模型组生精小管横切面生精上皮镜下图。

图3为颈腰康高剂量组生精小管横切面生精上皮镜下图。

图4为颈腰康高剂量组生精小管横切面生精上皮镜下图。

具体实施方式

中成药颈腰康活性成分其组方为(以重量份数计)：制马钱子30-60份、伸筋草10-40份、香加皮10-40份、乳香(醋炒)10-40份、红花30-60份、地龙50-80份、骨碎补(沙烫)10-40份、防己10-40份、牛膝10-40份。其制备方法是：以上十味，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成胶囊。

疗效实验

颈腰康活性成分对生殖系统损伤大鼠性激素水平的作用

1.动物分组及半去势模型构造

空白组：灌喂生理盐水溶液10ml·kg^-1·d^-1；模型组：摘除右侧睾丸+灌胃生理盐水10ml·kg^-1·d^-1；阳性对照组：摘除右侧睾丸+丙酸睾丸素(皮下注射2mg·kg^-1)；颈腰康胶囊组：摘除右侧睾丸+灌胃颈腰康(1080、540、270mg·kg^-1·d^-1)。除正常对照组10只外，其余各组均为12只。大鼠适应性养殖3天。除正常对照组外，将雄鼠称重,腹腔注射3％戊巴比妥钠30mg·kg^-1。麻醉后，剪去手术野周围的毛发，胶布固定四肢于泡沫板上，碘酒、酒精消毒，在阴囊部位做2cm切口，分离右侧睾丸及附睾，在附睾头尾之间结扎后摘除睾丸。青霉素冲洗腹腔后逐层缝合皮肤，术后腹腔注射青霉素2万u·kg^-1。

2.测定指标

2.1睾丸组织超氧化物歧化酶(sod)活力和丙二醛(mda)含量测定

取大鼠一侧睾丸称取lg，放在预冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸试干，放入小烧杯。用量筒取预冷的生理盐水(组织块重量的9倍)，取总量的2/3于小烧杯中，用眼科剪尽块剪碎组织块，倒入玻璃匀浆器中，再将剩余的1/3生理盐水用来冲洗残留的组织块，冰上匀浆15min后即成10％的组织匀浆。将匀浆以3500转/min低温离心10min，取上清液进行各种测定。

2.1.1睾丸组织中的蛋白含量测定

用bca法平行测定相应大鼠组织样品中蛋白质的含量。

2.1.2sod、mda活力测定

根据试剂盒说明书测定睾丸组织中sod活力及mda水平。

2.2睾丸及附睾器官脏器系数测定

取睾丸和附睾组织，分离表面脂肪，称重。脏器系数(g/100g)＝器官重/体重。

2.3睾丸组织形态观察

取睾丸组织,10％甲醛溶液固定，送病理检验。

2.4勃起实验

抗炎3天后连续灌胃14天，末次给药后2小时将bl-42oe生物机能实验系统电刺激仪放置于人鼠阴茎根部,给予局部电刺激,刺激参数：电流强度4ma，频率50hz，波宽2ms。记录勃起潜伏期(从刺激开始至阴茎勃起时间)，单位以秒计。

2.5附性腺器官脏器系数

次日(灌胃第22大)，颈椎脱臼处死大鼠，分离包皮腺、精囊腺一前列腺、提肛肌等，电子天平准确称重，脏器系数(mg/100g)＝器官重/体重。

2.6精子计数、活率

将盛有6ml生理盐水的试管置于恒温水浴箱内预热至37℃，然后将左侧附睾减碎放入试管中，摇匀，37℃保温10-15分钟，使精子充分游离。取一滴适当稀释后滴入血细胞计数板上，200倍显微镜下计数5个中方格内精子数(n)，每毫升精子数为n×5×稀释倍数×10⁴。另取一滴涂片，观察精子活率，至少观察200个精子，分别计数有活动力及无活动力的精子数。

精子活率＝活动精子数/(活动精子数+不活动精子数)x100％。

2.7性激素水平测定

半去势大鼠股动脉放血，4℃l000r/min，离心10min，分离血清，根据试剂盒说明书测定各血清样品中t、lh、fsh、e2等激素的含量。

3.数据处理

用spss100统计软件进行分析。各组睾丸细胞拖尾率、爬高动物百分率用χ²检验，其余数据以表示，显著性检验用方差分析。

4.结果

4.1颈腰康胶囊对半去势大鼠睾丸组织的抗氧化作用

结果显示：模型组与正常对照组相比，睾丸组织中sod活性下降，mda含量升高，差异有极显著性(p＜0.01)；与模型组比较，颈腰康胶囊高、中、低剂量组(1080、540、270mg·kg^-1·d^-1)差异有显著性(p<0.05，p<0.01)。颈腰康胶囊能明显提高大鼠睾丸组织中sod活性，降低mda含量，从而增强大鼠抗氧化能力。详见表4-1。

表4-1颈腰康胶囊对半去势大鼠睾丸组织中sod和mda影响(n＝10)

注：与模型组比较*p<0.05、**p<0.01。

4.2颈腰康胶囊对半去势大鼠生殖腺的影响

结果显示：与正常组比较，模型组大鼠睾丸、附肇脏器系数明显减低差异有显著性(p<0.05，p<0.01)；与模型组比较，颈腰康胶囊高、中、低剂量组均能明显提高睾丸、附睾的脏器系数差异有显著性(p<0.05)。结果详见4-2。

表4-2颈腰康胶囊对半去势大鼠生殖腺的影响(n＝10)

注：与模型组比较*p<0.05、**p<0.01。

4.3颈腰康胶囊对半去势大鼠睾丸组织形态的影响

镜下观察，空白组生精小管横切面可见精原细胞及不同发育阶段的精母细胞、精子细胞、精子，组成多种形态的生精上皮图像(见图1-1)。而模型组曲细精管变薄，各级生精细胞明显减少，精母细胞内染色质固缩，核膜不清，核内有空泡(见图1-2)，说明半去势造成了大鼠睾丸组织的损伤。各实验组对恢复睾丸损伤组织的结构有一定作用，其中以颈腰康胶囊高剂量组(1080mg·kg^-1·d^-1)镜下表现生精小管界膜完整，各级生精细胞有序排列，染色质呈细粒状，染色深，核仁明显，初级精母细胞、精子细胞数量增多；精母细胞核膜不消，染色质轻度凝聚，精子外形呈蟒蚂状，头朝向基底膜，染色深，睾丸间质细胞成群分布，数量增多，结构接近于空白组(见图1-3)；而颈腰康胶囊低剂量组(270mg·kg^-1·d^-1)曲细精管变细，各级生精细胞明显减少，有许多空泡形成(见图1-4)。

4.4颈腰康胶囊对雄性大鼠勃起潜伏期的影响

结果显示：颈腰康胶囊组、阳性对照组能明显缩短阴茎勃起潜伏期,与阴性对照组相比差异有极显著性(p<0.01)，详见表4-3。

表4-3颈腰康胶囊对半去势大鼠阴茎勃起潜伏期的影响(n＝10)

注：与模型组比较**p<0.01。

4.5颈腰康胶囊对半去势雄性大鼠生殖腺的影响

结果显示：可见大鼠包皮腺、精囊腺一前列腺、提肛肌的脏器系数，丙睾组>空白组>颈腰康胶囊组>模型组，与模型组相比，差异有显著性(p<0.05)，其中丙睾组差异有极显著性(p<0.01)，说明颈腰康胶囊能明显提高半去势大鼠附性腺器官脏器系数，促使其恢复到接近正常水平。详见表4-4。

表4-4颈腰康胶囊对半去势大鼠生殖腺的影响(n＝10)

注：与模型组比较*p<0.05、**p<0.01。

4.6颈腰康胶囊对半去势大鼠精子计数及活力的影响

结果显示：模型组精子计数及活力明显低于其余三组，差异均有显著性(p<0.01)。表明颈腰康胶囊可明显改善去势引起的精子数量下降及活力。详见表4-5。

表4-5颈腰康胶囊对半去势大鼠精子计数及活力的影响(n＝10)

注：与模型组比较**p<0.01。

4.7颈腰康胶囊对半去势大鼠血清性激素水平的影响

结果显示：阳性对照组t含量>正常对照组>颈腰康胶囊实验组>阴性对照组，与阴性对照组相比均有极显著性差异(p<0.01)；血清lh、fsh无明显变化；阴性对照组血清e2水平上升，与正常对照组、阳性对照组相比有极显著性差异(p<0.01)。阴性对照组t降低e2升高，表明t与e2是一对相互拮抗的激素；颈腰康胶囊可调节血清性激素水平的分泌，促进其含量恢复正常水平，结果见表4-6。

表4-6颈腰康胶囊对半去势大鼠性激素水平的影响

注：与阴性对照组比较^**p<0.01，与正常对照组比较^△△p<0.01。

结论：

1、颈腰康胶囊对受损伤的大鼠生殖系统具有良好的保护作用，对机体的酶促系统活力具有一定的诱导作用，可通过提高动物抗氧化酶活力的间接作用来清除过多自由基，抑制脂质过氧化及己存在的过氧化自由基对dna大分子的损伤，阻断细胞死亡，减弱生精细胞损伤、维护睾丸细胞正常的组织形态。

2、不良因素刺激、严重的躯体和心理应激均能抑制或损伤雄性动物和男性的性腺轴功能。以往的研究发现，摘除睾丸可导致血清性激素水平下降，所有的哺乳动物中，雄性动物去势后性行为将减少，而去势雄性动物在手术后补充雄激素将继续交配。同时精子发生的启动与维持，必需有fsh与t参与，其中t起关键作用。t还可以刺激雄性附性器官的发育，刺激雄性副性征的分化形成和维持正常状态与功能。本研究结果显示颈腰康胶囊可明显改善生殖损伤大鼠性功能及生殖功能，证实颈腰康胶囊对下丘脑一垂体一性腺轴产生多层次的调节作用，从而纠正了外因所导致的下丘脑一垂体一性腺轴功能紊乱，在体内产生了类似于激素样作用，维持t、fsh、lh之间的平衡。颈腰康胶囊可以增加损伤所致性腺功能低下动物的睾丸、前列腺、精囊腺、提肛肌的重量，但是并不能超过正常对照组，提示颈腰康胶囊的调节作用不会超出正常水平，其对机体产生的是一种整体的调节作用，从而维持其正常的生理功能。且各项药效学指标疗效上均优于阿司匹林对照组。

本发明所给出的一种治疗阳痿的中药组合物，做临床疗效总结如下：临床资料

诊断标准：

主证：①形体衰弱，面色萎黄，性欲淡漠，阳痿早泄；②精液量少，精子计数不足，精子活动力低、活率差，久婚无子；③腰膝酸软，失眠多梦；

次证：①小便频数，夜尿量多；②精神疲乏，肢体倦怠，气弱懒言；③烦躁易怒，睾丸坠胀不舒，死精子过多。

根据卫生部中药新药治疗男性不育的临床研究指导原则标准和卫生部中药新药治疗阳痿临床研究指导原则标准制定。

临床病例：

选符合上述诊断标准可以随访的患者108例，男性精液异常导致的男性不育症9例，阳痿早泻及性功能降低的99例。

发病年龄及时间：其中年龄20-60岁，平均年龄36岁。发病时间2个月-5年不等，平均2年。

实验室检查：

血尿常规、前列腺液常规、精液常规、性激素、阴茎多普勒血流测试、前列腺b超、睾丸附睾及精索b超检查，肝肾功能，治疗前后各查一次。

1.4、分期标准：

阴茎完全不能勃起阴茎根本无法插入阴道进行性交，手淫不能勃起，或精液检查发现无精子者，5分；

虽然阴茎能勃起但在插入阴道前早泄，或精液检查发现精液量不足1毫升，精子密度＜300万/毫升，活动率＜30％者，4分；

阴茎能勃起，但插入阴道性交2分钟内射精者，或精液检查精液量1毫升，精子密度＞300～1000万/毫升，活动率＞30～40％者，3分；

性欲减退，或精液检查精液量1～2毫升，精子密度＞1000～1500万/毫升，活动率＞40～50％者，2分；

睡眠或晨起无勃起者，或精液检查精液量2毫升，精子密度＞1500～2000万/毫升，活动率＞50～60％者，1分；

性欲、性生活均正常，精液检查精液量＞2毫升，精子密度＞2000万/毫升，活动率＞70％者，0分。

精液检查分级，根据卫生部医政司《全国临床检验操作规程》(第3版)。

(二)、治疗方法及疗效判断标准

治疗方法：

口服颈腰康胶囊，每日3次，每次4～6粒。一个月为一疗程，按临床表现对体征及症状做标准记录，并详细询问记录其不良反应。每月观察一次。

临床疗效判定标准：

痊愈：症状体征及检查均恢复正常，积分0分。

显效：症状消失，男科查体及精液检查有明显改善，治疗后比治疗前积分降低2/3以上。

有效：症状及精液检查有改善，治疗后比治疗前积分降低1/3以上，未到2/3者。

无效：治疗后症状及精液检查均无改善。

(三)、治疗结果

总疗效情况：治疗组108例，治疗最短30天，最长90天，平均51天，治愈81例，占75.00％；显效12例，11.11％；有效13例，占12.04％无效2例，占1.85％；总有效率为98.15％。