一种治疗脑瘤的药物及其制备方法与流程

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种治疗脑瘤的药物及其制备方法。

背景技术：

脑胶质瘤是一种极难治愈的原发性恶性肿瘤。目前，脑胶质瘤最常用的治疗手段是手术切除治疗配合化疗，但由于胶质细胞呈现侵润性生长，与正常脑组织的界限不明显，手术切除效果不佳，达不到将胶质母细胞瘤全部切除的效果。临床观察发现90%的恶性胶质瘤在原发肿瘤边缘2cm范围内复发，远处转移少见，因此，术后化疗对于延长患者寿命尤为重要。然而，由于血脑屏障的存在，口服或静脉注射的化疗药物很难越过血脑屏障到达病灶部位，还会引起一些并发症、胃肠道反应等不良反应，因此，术后全身化疗弊大于利。

脑垂体瘤约占颅内肿瘤的15%，发病率居于颅内肿瘤（即，脑瘤）的第二位，仅次于脑胶质瘤。虽然大部分脑垂体瘤为良性肿瘤，生长缓慢，局限于蝶鞍内呈膨胀性生长。但是，也有部分垂体腺瘤生长极为迅速，且多成侵袭性生长。例如，侵袭性泌乳素瘤在脑垂体瘤患者中占了40%-50%，目前，该肿瘤主要采取的治疗方式为口服药物，患者耐受性较差。

因此，亟需开发一种治疗脑瘤的药物，以达到更好的治疗效果。。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗脑瘤的药物及其制备方法，可以有效降低化疗药物的毒副作用，且稳定性较好，具有更好的治疗效果。

为实现本发明的上述目的，本发明提供一种治疗脑瘤的药物，每5ml-20ml的药物由以下原料组成：主药8-40mg、单体90-360mg、交联剂4-16mg、表面活性剂2-8mg、引发剂4-16mg。

所述主药为卡莫司汀、替莫唑胺、溴隐亭、卡麦角林中的一种或多种混合物。

所述单体为n-异丙基丙烯酰胺（nipam）。

所述交联剂为n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺、n-n＇-双丙烯酰胱胺、乙二醇双丙烯酸酯、一缩乙二醇双丙烯酸酯、二缩乙二醇双丙烯酸酯、聚乙二醇双丙烯酸酯中的一种或多种混合物。

所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠、吐温-80、司盘-80、泊洛沙姆、卵磷脂、胆酸、胆酸钠中的一种或多种混合物。

所述引发剂为过硫酸铵、2,2＇-偶氮二（2-脒基丙烷盐酸盐）、4,4＇-偶氮二（4-氰基戊酸）中的一种或多种混合物。

所述脑瘤包括脑胶质瘤、脑垂体瘤。

所述治疗脑瘤的药物的剂型为温敏纳米凝胶。

本发明还提供一种治疗脑瘤的药物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将单体、表面活性剂和交联剂置于容器中，加入蒸馏水进行搅拌，使所述单体、所述表面活性剂和所述交联剂溶解，得混合溶液。

步骤2、通氮气30-40min至所述混合溶液的液面以下，然后加热升温至60-80℃，在60-80℃条件下持续加热15-30min后加入引发剂，在氮气保护下反应4-6h后停止加热，得到空白纳米凝胶粗品。

步骤3、将所述空白纳米凝胶粗品装入透析袋在蒸馏水中透析7天，每天换2-3次蒸馏水。

步骤4、将步骤3中透析袋内剩余液体用高速离心机离心，弃去清液，保留沉淀；采用超声波细胞粉碎机将所述沉淀重新分散在蒸馏水中，经冷冻干燥后加蒸馏水，室温下溶胀24-48h，得到空白纳米凝胶。

步骤5、将主药溶于乙醇中，得到主药的醇溶液；然后将所述主药的醇溶液逐滴滴加到所述空白纳米凝胶中，得到主药与空白纳米凝胶的混合物；将所述主药与空白纳米凝胶的混合物在恒温4℃下静置孵育载药24-48h，得到载药纳米溶胶溶液；将所述载药纳米凝胶溶液装入透析袋中，蒸馏水透析过夜。

步骤6、将步骤5中透析袋内所剩溶液离心，取上清液过滤膜得到滤液，即为治疗脑瘤的药物。

所述步骤1中的容器为三颈圆底烧瓶。

所述步骤4中高速离心机离心的条件为：在12000r•min-1条件下离心30-40min。

所述步骤4中的冷冻干燥的冻干工艺为：预冻温度为-55℃，降温速率为0.5℃/min；升华干燥阶段温度为-35℃，维持5h；解析干燥阶段温度逐渐升温至25℃，升温速率为0.5℃/min，维持5h。

所述步骤6中离心的条件为：在4000r•min-1条件下离心20min。

所述滤膜为0.8μm滤膜。

与现有技术相比本发明的有益效果。

本发明提供的治疗脑瘤的药物及其制备方法，所述治疗脑瘤的药物具有温敏纳米凝胶的给药剂型，其温敏性好、载药量高，适合脑胶质瘤、脑垂体瘤的局部化疗及切除手术后的预后治疗。此外，这种以半固体作为局部化疗的给药剂型更能适应颅内复杂生理环境，且具有良好的稳定性、抗肿瘤能力、能够起到局部化疗作用、有效降低全身副作用。

附图说明

图1为本发明实施例的治疗脑瘤的药物温敏性考察结果。

图2为本发明实施例的治疗脑瘤的药物体外释放曲线。

图3为本发明实施例的治疗脑瘤的药物抗肿瘤药效学考察结果。

图4为本发明实施例的荷瘤鼠给药后体重变化图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1。

本实施例提供一种治疗脑瘤的药物，每5ml的药物由以下原料组成：卡莫司汀8mg、n-异丙基丙烯酰胺（nipam）90mg、十二烷基磺酸钠（sds）2mg、n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺4mg、2,2＇-偶氮二（2-脒基丙烷盐酸盐）4mg。

所述脑瘤包括脑胶质瘤、脑垂体瘤。

所述治疗脑瘤的药物的剂型为纳米凝胶，优选地，所述治疗脑瘤的药物的剂型为温敏纳米凝胶。该纳米凝胶剂型同时具有水凝胶和纳米制剂两种剂型的优点。具体地，纳米凝胶含水量高，能够根据周围条件的变化而收缩或膨胀；并且，纳米凝胶粒径小，从而有较大的比表面积利于生物偶联，延长在体内的循环时间。此外，纳米凝胶的载药量较高，可以靶向与肿瘤部位，并且在肿瘤组织内有效释放治疗脑瘤的药物。

本实施例还提供一种治疗脑瘤的药物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将n-异丙基丙烯酰胺90mg、十二烷基磺酸钠2mg和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺4mg置于三颈圆底烧瓶中，加入10ml蒸馏水进行搅拌，使所述n-异丙基丙烯酰胺、十二烷基磺酸钠和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺溶解，得混合溶液。

步骤2、通氮气30min至所述混合溶液的液面以下，然后加热升温至60℃，在60℃下持续加热30min后加入2,2＇-偶氮二（2-脒基丙烷盐酸盐）4mg，在氮气保护下反应4h后停止加热，得到空白纳米凝胶粗品。

步骤3、将所述空白纳米凝胶粗品装入透析袋在200ml蒸馏水中透析7天（d），每天换3次蒸馏水,每次将200ml蒸馏水全部换成新鲜的蒸馏水。

步骤4、将步骤3中透析袋内所剩溶液（即，透析液）用高速离心机在12000r•min-1条件下离心30min，弃去清液，保留沉淀；采用超声波细胞粉碎机将所述沉淀重新分散在5ml蒸馏水中，经冷冻干燥后加5ml蒸馏水，室温下溶胀24h，得到空白纳米凝胶；所述冷冻干燥的冻干工艺为：预冻温度为-55℃，降温速率为0.5℃/min；升华干燥阶段温度为-35℃，维持5h；解析干燥阶段温度逐渐升温至25℃，升温速率为0.5℃/min，维持5h。

步骤5、将8mg卡莫司汀溶于10ml乙醇中，得到卡莫司汀醇溶液；将卡莫司汀醇溶液逐滴滴加到空白纳米凝胶中，得到卡莫司汀与空白纳米凝胶的混合物；将所述卡莫司汀与空白纳米凝胶的混合物在恒温4℃下静置孵育载药24h，得到卡莫司汀纳米凝胶溶液（即，载药纳米凝胶溶液）；将所述卡莫司汀纳米凝胶溶液装入预先洗好的透析袋中，200ml蒸馏水透析过夜。

步骤6、将步骤5中透析袋内所剩溶液在4000r•min-1条件下离心20min，取上清液过0.8μm滤膜得到滤液，即为治疗脑瘤的药物，所述药物的剂型为纳米凝胶。

在本实施例1中，为了进一步验证本发明的有益效果，提供以下试验例。

1、粒径测定。

采用马尔文粒径测定仪（malvernzetasizernanozs）进行粒径测定，将制得的治疗脑瘤的药物（即，卡莫司汀纳米凝胶）稀释100倍，在25℃条件下进行测定。

测定结果为：本实施例1制得的治疗脑瘤的药物的平均粒径为148.5nm，pdi为0.150。

2、温敏（即，温度敏感）性考察。

通过测定聚n-异丙基丙烯酰胺的低临界溶解温度（lowercriticalsolutiontemperature,lcst）来考察纳米凝胶的温敏性。温度从25℃以0.5℃/min的升温速率升至45℃，当温度低于lcst时聚n-异丙基丙烯酰胺为溶液状态，在600nm处无吸收，如果温度高于lcst制得的治疗脑瘤的药物会成凝胶态，体系浑浊度增加，所以吸光度增加。使用tu-1800型紫外可见分光光度仪检测600nm波长下的吸光度，结果请见图1。

由图1可知，制得的治疗脑瘤的药物的lcst为32℃，温度为25℃时为溶胶态，温度为37℃时为凝胶态。因此，本实施例1制得的治疗脑瘤的药物为温敏纳米凝胶。这种温敏纳米凝胶在流动的溶胶态时，可以填充无规则的病灶腔，使病灶腔无裸露全部被用于治疗脑瘤的药物所覆盖，当温敏纳米凝胶接触人体组织后，由于其温敏性，变成不流动的凝胶态，减少了向其他组织弥散的可能，从而具有更好的治疗效果。

3、贮存稳定性考察。

将本实施例1制得的治疗脑瘤的药物置于4℃下保存，分别于3天、3个月采用马尔文粒径测定仪进行粒径测定，比较粒径变化。

3天的粒径测定结果为：所述治疗脑瘤的药物平均粒径150.5nm、pdi为0.140；3个月的粒径测定结果为：所述治疗脑瘤的药物的平均粒径149.8nm、pdi为0.160。由此可见，本实施例1制得的治疗脑瘤的药物在4℃条件下有较好的稳定性。

4、体外释放。

将3ml的本实施例1制得的治疗脑瘤的药物加入10ml西林瓶中，保持液面平整，放置于37℃条件下预凝固5min，待聚合物完全胶凝，加入预热好的释放介质（ph7.4的pbs缓冲液）5ml，在37℃恒温浴摇床（sha-b，常州国华水浴恒温振荡器）中振荡，在待设时间点取样测定，由于卡莫司汀在ph7.4的pbs缓冲液不稳定极易分解，所以测定所述治疗脑瘤的药物中剩余的卡莫司汀量来绘制体外释放曲线。具体地，采用hplc法（lc-15c液相泵，紫外spd-10a检测器，日本shimadzu公司）测定卡莫司汀含量，流动相为甲醇-水（50:50，v/v），流速为1.0ml/min，检测波长为237nm，进样量为20μl。

体外释放结果请见图2。由图2可知，本实施例1制得的治疗脑瘤的药物在37℃条件下10天内累积释放量可达到80%。

5、瘤内给药后抗肿瘤药效学研究。

昆明小鼠（雄性，20±2g）腋下荷瘤（s180腹水瘤悬液），10天后给药。将小鼠分为4组：生理盐水组、空白纳米凝胶组、卡莫司汀注射液（天津金耀）组、卡莫司汀纳米凝胶组（即，本实施例1制得的治疗脑瘤的药物组）。给药后每天观察小鼠的活动情况、体重等，并使用游标卡尺测量肿块大小，计算肿瘤体积v（v=[length×(width)2]/2），其中，length为肿瘤组织的最长径，width为肿瘤组织的垂直径，并绘制肿瘤体积-时间图，于第10天处死小鼠，取出肿瘤组织、称重、照相。

抗肿瘤药效结果请见图3、图4。由图3和图4可知，卡莫司汀纳米凝胶组与其他三组相比，抗肿瘤效果明显，而且卡莫司汀注射液组体重明显低于卡莫司汀纳米凝胶组，说明本实施例1制得的治疗脑瘤的药物能够有效降低化疗药物的毒副作用。

综上所述，本实施例1制得的治疗脑瘤的药物剂型为温敏纳米凝胶，其具有良好的稳定性、抗肿瘤能力、能够起到局部化疗作用、降低全身副作用，可以用来开发为治疗脑瘤的新药。

实施例2。

本实施例提供一种治疗脑瘤的药物，每10ml的药物由以下原料组成：替莫唑胺18mg、n-异丙基丙烯酰胺180mg、吐温-804mg、n-n＇-双丙烯酰胱胺8mg、过硫酸铵8mg。

所述治疗脑瘤的药物的剂型为温敏纳米凝胶。

本实施例还提供一种治疗脑瘤的药物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将n-异丙基丙烯酰胺180mg、吐温-804mg和n-n＇-双丙烯酰胱胺8mg置于三颈圆底烧瓶中，加入20ml蒸馏水进行搅拌，使所述n-异丙基丙烯酰胺、吐温-80和n-n＇-双丙烯酰胱胺溶解，得混合溶液。

步骤2、通氮气40min至所述混合溶液的液面以下，然后加热升温至70℃，70摄氏度持续加热25min，加入过硫酸铵8mg，在氮气保护下反应5h后停止加热，得到空白纳米凝胶粗品。

步骤3、将所述空白纳米凝胶粗品放置于透析袋中在200ml蒸馏水中透析7天，每天换3次蒸馏水，每次将200ml蒸馏水全部换成新鲜的蒸馏水。

步骤4、将步骤3中透析袋内所剩溶液用高速离心机在12000r•min-1条件下离心30min，弃去清液，保留沉淀，采用超声波细胞粉碎机将所述沉淀重新分散在10ml蒸馏水中，经冷冻干燥后加10ml蒸馏水，室温下溶胀24h，得到空白纳米凝胶；所述冷冻干燥的冻干工艺为：预冻温度为-55℃，降温速率为0.5℃/min；升华干燥阶段温度为-35℃，维持5h；解析干燥阶段温度逐渐升温至25℃，升温速率为0.5℃/min，维持5h。

步骤5、将18mg替莫唑胺溶于20ml乙醇中，得到替莫唑胺醇溶液。将替莫唑胺醇溶液逐滴滴加到空白纳米凝胶中，得到替莫唑胺与空白纳米凝胶的混合物；将所述替莫唑胺与空白纳米凝胶的混合物在恒温4℃下静置孵育载药24h，得到替莫唑胺纳米凝胶溶液；将替莫唑胺纳米凝胶溶液装入预先洗好的透析袋中，200ml蒸馏水透析过夜。

步骤6、将步骤5中透析袋内所剩溶液在4000r•min-1条件下离心20min，取上清液过0.8μm滤膜得到滤液，即为治疗脑瘤的药物，所述药物的剂型为温敏纳米凝胶。

实施例3。

本实施例提供一种治疗脑瘤的药物，每15ml的药物由以下原料组成：溴隐亭40mg、n-异丙基丙烯酰胺360mg、司盘-808mg、n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺16mg、4,4＇-偶氮二（4-氰基戊酸）16mg。

所述治疗脑瘤的药物的剂型为温敏纳米凝胶。

本实施例还提供一种治疗脑瘤的药物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将n-异丙基丙烯酰胺360mg、司盘-808mg和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺16mg置于三颈圆底烧瓶中，加入30ml蒸馏水进行搅拌，使所述n-异丙基丙烯酰胺、司盘-80和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺溶解，得混合溶液。

步骤2、通氮气40min至所述混合溶液的液面以下，然后加热升温至80℃，持续加热15min，加入4,4＇-偶氮二（4-氰基戊酸）16mg，在氮气保护下反应6h后停止加热，得空白到纳米凝胶粗品。

步骤3、将所述空白纳米凝胶粗品装入透析袋在200ml蒸馏水中透析7天，每天换3次蒸馏水，每次将200ml蒸馏水全部换成新鲜的蒸馏水。

步骤4、将步骤3中透析袋内所剩溶液用高速离心机在12000r•min-1条件下离心40min，弃去清液，保留沉淀，采用超声波细胞粉碎机将沉淀重新分散在15ml蒸馏水中，经冷冻干燥后加15ml蒸馏水，室温下溶胀24h，得到空白纳米凝胶；所述冷冻干燥的冻干工艺为：预冻温度为-55℃，降温速率为0.5℃/min；升华干燥阶段温度为-35℃，维持5h；解析干燥阶段温度逐渐升温至25℃，升温速率为0.5℃/min，维持5h。

步骤5、将40mg溴隐亭溶于20ml乙醇中，得到溴隐亭醇溶；将溴隐亭醇溶液逐滴滴加到空白纳米凝胶中，得到溴隐亭与空白纳米凝胶的混合物；将所述溴隐亭与空白纳米凝胶的混合物在恒温4℃下静置孵育载药48h，得到溴隐亭纳米凝胶溶液；将所述溴隐亭纳米凝胶溶液装入预先洗好的透析袋中，200ml蒸馏水透析过夜。

步骤6、将步骤5中透析袋内所剩溶液在4000r•min-1条件下离心20min，取上清液过0.8μm滤膜得到滤液，即为治疗脑瘤的药物，所述药物的剂型为温敏纳米凝胶。

实施例4。

本实施例提供一种治疗脑瘤的药物，每15ml的药物由以下原料组成：卡麦角林30mg、n-异丙基丙烯酰胺270mg、司盘-806mg、n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺12mg、过硫酸铵12mg。

所述治疗脑瘤的药物的剂型为温敏纳米凝胶。

本实施例还提供一种治疗脑瘤的药物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将n-异丙基丙烯酰胺270mg、司盘-806mg和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺12mg置于三颈圆底烧瓶中，加入30ml蒸馏水进行搅拌，使所述n-异丙基丙烯酰胺、司盘-80和n-n＇-亚甲基双丙烯酰胺溶解，得混合溶液。

步骤2、通氮气40min至所述混合溶液的液面以下，然后加热升温至80℃，80℃持续加热15min，加入过硫酸铵12mg，在氮气保护下反应6h后停止加热，得到空白纳米凝胶粗品。

步骤3、将所述空白纳米凝胶粗品在200ml蒸馏水中透析7天，每天换3次蒸馏水，每次将200ml蒸馏水全部换成新鲜的蒸馏水。

步骤4、将步骤3中透析袋内所剩溶液用高速离心机在12000r•min-1条件下离心40min，弃去清液，保留沉淀，采用超声波细胞粉碎机将沉淀重新分散在15ml蒸馏水中，经冷冻干燥后加15ml蒸馏水，室温下溶胀24h，得到空白纳米凝胶；所述冷冻干燥的冻干工艺为：预冻温度为-55℃，降温速率为0.5℃/min；升华干燥阶段温度为-35℃，维持5h；解析干燥阶段温度逐渐升温至25℃，升温速率为0.5℃/min，维持5h。

步骤5、将30mg卡麦角林溶于20ml乙醇中，得到卡麦角林醇溶液；将卡麦角林醇溶液逐滴滴加到空白纳米凝胶中，得到卡麦角林与空白纳米凝胶的混合物；将所述卡麦角林与空白纳米凝胶的混合物在恒温4℃下静置孵育载药48h，得到卡麦角林纳米凝胶溶液；将卡麦角林纳米凝胶溶液装入预先洗好的透析袋中，200ml蒸馏水透析过夜。

步骤6、将步骤5中透析袋内所剩溶液在4000r•min-1条件下离心20min，取上清液过0.8μm滤膜得到滤液，即为治疗脑瘤的药物，所述药物的剂型为温敏纳米凝胶。

可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。