本发明涉及中药技术领域，特别是涉及一种具有增加骨密度功效的组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
随着人口老龄化的到来，骨质疏松症已成为一个越来越严重的公共健康问题。目前我国60岁以上老年人口约1.73亿，老年骨质疏松患者约9000万人，并呈上升趋势。预计到本世纪50年代，我国老年人口将超过2亿，且半数以上人可能患骨质疏松。目前，相对骨质疏松治疗中主推的雌激素替代、降钙素及二磷酸盐等药物，但是近年来，但人们发现西药在治疗骨质疏松方面毒副作用大，治标不治本，且常用有依赖性和副作用。因此研究开发一种能够安全有效的治疗骨质疏松的中药，具有非常好的实用价值。
而中药保健食品更易为骨质疏松人群所接受，且具有功能显著、整体调节、副作用少等优点。
技术实现要素：
基于此，本发明公开了一种具有增加骨密度功效的组合物，该组合物具有增强骨密度的功效，可用于预防和治疗骨质疏松症。
一种具有增加骨密度功效的组合物，所述组合物的有效成分主要由以下重量份的原料制备而成：
鹿骨500-700份、黄精260-300份、杜仲叶180-240份、玉竹200-300份、山药200-240份、乌药叶100-150份、葛根60-100份、黑芝麻100-150份。
本发明人在长期的实践工作中认识到，鉴于老年人体质多虚、多瘀的特点，故在使用中医中药改善骨质疏松，特别是老年性骨质疏松辅助治疗中，应尊重中医观点，从实际出发，把握多见的因素：肾虚、脾虚、血瘀等。肾虚是骨质疏松的主要病机，脾虚是重要病机，血瘀是致病原因也是病理状态，此3个方面均相互作用，相互制约。
故在借鉴传统中药方剂的基础上，本发明人采用现代营养学、药理学的理论和方法，本发明将多种药食同源的中药材进行组合，以鹿骨、黄精、杜仲叶、玉竹、山药、乌药叶、葛根、黑芝麻为主要原料相互配合。
组方中以鹿骨益精养血、益肾壮骨之功效为君药。梅花鹿骨富含氨基酸、骨胶原、蛋白质、软骨素、多肽、酸性粘多糖和钙、磷、锌、铁、镁、钾、硒等重要成分，涵盖了人体骨髓和骨骼形成所需的几乎全部营养物质，有助于减缓骨髓老化，维持骨骼硬度和韧性，预防骨质疏松，降低骨折等风险，凝聚了中医养生治未病的智慧精髓。
黄精在《本草纲目》中描述有补诸虚，填精髓的作用，活性成分之一黄精多糖具有降低成骨细胞的凋亡，抑制破骨细胞的活性，从而促进骨质疏松性骨折的愈合；杜仲是中国名贵滋补药材，《神农本草经》谓其″主治腰膝痛，补中，益精气，坚筋骨，除阴下痒湿，小便余沥。目前已有研究，将杜仲叶提取物与钙磷骨水泥(一种医用修复材料)组成复合载体具有促进成骨细胞增殖、生长及附着的作用，有望成为新的骨替代材料。玉竹配伍山药，玉竹养阴益肾，山药补脾胃之气，且养脾胃之阴，二者合用，有温肾益气之功效。此四药共为臣药。
乌药叶甘咸而温，长于填补精髓，滋养阴血，乌药正己烷提取物及乌药烯都具治疗血瘀和保肝作用；葛根升阳解肌，平肝柔筋，最能填补阴阳而化生精血，葛根中的葛根素(又称葛根异黄酮)被证实具有类似雌性激素的作用，而且副作用相比雌激素少得多，这让人们意识到其代替雌激素治疗绝经后骨质疏松症的可能；黑芝麻富含多种微量元素能加速人体的代谢功能，加强钙质的合理吸收，预还有补肝肾、润五脏、益气力、长肌肉的作用；此三药共为佐使之药。
诸药合用有补肾壮骨、健脾益气、活血化瘀之效。
在其中一个实施例中，所述组合物的有效成分由以下重量份的原料制备而成：
鹿骨600份、黄精280份、杜仲叶200份、玉竹280份、山药240份、乌药叶130份、葛根80份、芝麻130份。
将各组分按照上述配比组合，具有最佳的增加骨密度效果。
本发明还公开了上述的具有增加骨密度功效的组合物的制备方法，包括以下步骤：
鹿骨粉的制备：取鹿骨，置于密闭的脱脂容器中，以石油醚提取，除去鹿骨中油脂，干燥后将鹿骨粉碎，即得鹿骨粉；
植物提取物的制备：取黄精、杜仲叶、玉竹、山药、乌药叶、葛根、芝麻，加水煎煮，滤过后得滤液，将滤液浓缩为浸膏液，并加入乙醇沉淀，取上清液，回收溶剂，即得植物提取物。
混合：将上述制备得到的鹿骨粉和植物提取物混合，即得。
本发明将传统中药与现代提取技术相结合，既能最大限度的保留中药有效成分，又能对中药进行精制，改变其″黑、大、粗″的表象，能够提高人们的接受度和依从性。并且上述制备方法具有工艺科学合理，质量稳定、可控、便于操作，可实现工业化连续生产，生产成本低的优点。
在其中一个实施例中，所述鹿骨粉通过以下方法制备得到：取鹿骨，剔除其上附着的非骨骼成分，粉碎得到骨粒，用水冲洗除去骨中的脂肪和血红蛋白，将清洗后的鹿骨骨粒置于密闭的脱脂容器中，控制温度在60-65℃，以石油醚逆流循环回流提取2-4hr，除去鹿骨中油脂，85-95℃干燥后将鹿骨粉碎，过80目筛，即得鹿骨粉。
在其中一个实施例中，所述植物提取物通过以下方法制备得到：取黄精、杜仲叶、玉竹、山药、乌药叶、葛根、芝麻，按照1g药材加入10-20ml水的量加水煎煮2-4hr，滤过后得滤液，将滤液浓缩为相对密度为1.10～1.25的浸膏液，并加入乙醇溶液至乙醇体积百分浓度为60％-90％，静置沉淀12-36hr，取上清液，回收溶剂，即得植物提取物。
在其中一个实施例中，所述植物提取物通过以下方法制备得到：取黄精、杜仲叶、玉竹、山药、乌药叶、葛根、芝麻，按照1g药材加入10ml水的量加水煎煮2hr，滤过，药渣再按照1g药材加入6ml水的量加水煎煮1.5hr，滤过后得滤液，合并滤液，将滤液浓缩为相对密度为1.10～1.25的浸膏液，并加入乙醇溶液至乙醇体积百分浓度为60％-90％，静置沉淀24hr，取上清液，在70℃下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.40-1.50的浓浸膏，将浓浸膏在70-75℃下干燥，碎成细粉，过80目筛，即得植物提取物。
本发明还公开了一种上述的具有增加骨密度功效的组合物在制备用于改善骨质疏松的药物或保健食品中的应用。
在其中一个实施例中，所述药物或保健食品的剂型为片剂、颗粒剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、散剂、合剂、酒剂、丸剂或滴丸。
本法明还公开了一种增加骨密度功效的制剂，包括作为活性成分的上述组合物，以及药学上可接受的辅料。
上述剂型可以采用本领域技术人员熟知的方法来进行药剂的制备。根据需要，可以加入各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。本发明的药剂在制备时，可选择的填充剂包括但不限于：淀粉、糖粉、磷酸钙、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；可选择的粘合剂包括但不限于：羧甲基纤维素钠、pvp-k30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、胶化淀粉等；可选择的崩解剂包括但不限于：干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；可选择的润滑剂包括但不限于：硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
在其中一个实施例中，所述制剂为片剂，通过以下方法制备得到：将权利要求3所述的组合物与微晶纤维素和交联羧甲基纤维素纳按照15∶6∶1的重量份混合，采用干法制粒，压制成片，包薄膜衣，制成片剂，即得。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的一种具有增加骨密度功效的组合物，以鹿骨、黄精、杜仲叶、玉竹、山药、乌药叶、葛根、黑芝麻为主要原料相互配合，以鹿骨为君药，黄精、杜仲叶、玉竹和山药共为臣药，乌药叶、葛根、黑芝麻共为佐使之药，诸药合用有补肾壮骨、健脾益气、活血化瘀之效。并通过现代医学体系，以大鼠为实验动物，随机分为假手术组、模型组、组合物给药组。经动物实验的体内micro-ct检测结果表明，本发明组合物能使卵巢切除后骨吸收水平降低，促进骨量的增加，有效提高骨密度，改善骨质疏松症状。
本发明的一种具有增加骨密度功效的组合物的制备方法，经优化后采用最佳提取条件，能最大程度保留原料药有效成分不被破坏，又可以将有效成分最大限度地提取出来。此方法可广泛应用，便于操作，适合生产企业大批量生产。
附图说明
图1为实验例中各组别大鼠骨微结构；
其中：a.假手术组(i组)，b.切除卵巢组+生理盐水组(ii组)，c.切除卵巢+组合物c组(v组)。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语″和/或″包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1
一种具有增加骨密度功效的组合物，按以下配方称取各组分：
梅花鹿骨700g、黄精260g、杜仲叶240g、玉竹200g、山药240g、乌药叶100g、葛根100g、黑芝麻100g。
制备工艺如下：
一、鹿骨粉的制备。
剔除梅花鹿骨中的残肉、皮腱、软骨以及其他非骨骼成分，骨粒粉碎，用蒸馏水冲洗除去骨中大量的脂肪和血红蛋白，将清洗后的骨装在密闭的脱脂容器中，控制温度在60～65℃，采用石油醚逆流循环的方式回流3小时，除去骨中的油脂。85～95℃干燥，将骨粉碎成细粉，过80目筛，备用。
二、植物提取物的制备。
按组方重量称取除鹿骨以外其他各药材，浸泡2h，用水煎法煎煮2次，一煎加水10倍，时间为2h，二煎加水量6倍，时间为1.5h，合并煎煮液，滤过，在65～70℃下，将滤过液浓缩为相对密度1.10～1.25的浸膏液。于浸膏液中加入乙醇，用60％～90％的乙醇溶液醇沉24h，在70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.40～1.50的浓浸膏。将浓浸膏于70～75℃干燥，碎成细粉，过80目筛，备用。
三、混合。
将上述步骤一、二得到的鹿骨细粉和植物提取物细粉混合，即得组合物a。
实施例2
一种具有增加骨密度功效的组合物，按以下配方称取各组分：
梅花鹿骨500g、黄精300g、杜仲叶180g、玉竹300g、山药200g、乌药叶150g、葛根60g、黑芝麻150g。
按照实施例1的方法制备得到组合物b。
实施例3
一种具有增加骨密度功效的组合物，按以下配方称取各组分：
梅花鹿骨600g、黄精280g、杜仲叶200g、玉竹280g、山药240g、乌药叶130g、葛根80g、黑芝麻130g。
按照实施例1的方法制备得到组合物c。
对比例1
一种组合物，与实施例3的组合物基本相同，不同之处在于其配方如下：
黄精280g、杜仲叶200g、玉竹280g、山药240g、乌药叶130g、葛根80g、黑芝麻130g。
按照实施例1的方法制备得到组合物d。
对比例2
一种组合物，与实施例3的组合物基本相同，不同之处在于其配方如下：
梅花鹿骨600g、杜仲叶200g、玉竹280g、山药240g、乌药叶130g、葛根80g、黑芝麻130g。
按照实施例1的方法制备得到组合物e。
对比例3
一种组合物，与实施例3的组合物基本相同，不同之处在于其配方如下：
梅花鹿骨600g、黄精280g、杜仲叶200g、玉竹280g、山药240g、葛根80g、黑芝麻130g。
按照实施例1的方法制备得到组合物f。
实验例
将上述实施例和对比例制备得到的组合物进行效果实验。
1实验材料和方法。
1.1实验材料。
1.1.1实验动物。
wistar大鼠，雌性，3月龄，清洁级，由吉林大学亿斯实验动物中心提供，实验动物许可证号scxk-(吉)20140003。
1.1.2实验试剂。
梅花鹿鹿骨购于吉林市龙潭山鹿业有限公司；其他中药材由吉林省维伊康生物科技有限公司提供。
1.2实验方法。
1.2.1动物分组。
卵巢切除去势大鼠模型构建方法参考《保健食品检验与评价技术规范实施手册》。大鼠经适应性饲养后分组，实验动物按体重随机分组为假手术组(i组)、切除卵巢组+生理盐水组(ii组)、切除卵巢+组合物a组(100mg/kg)(iii组)、切除卵巢+组合物b组(100mg/kg)(iv组)、切除卵巢+组合物c组(100mg/kg)(v组)、切除卵巢+组合物d组(100mg/kg)(vi组)、切除卵巢+组合物e组(100mg/kg)(vii组)、切除卵巢+组合物f组(100mg/kg)(viii组)。每组动物12只。各组动物手术后3天开始灌胃给予受试物或溶剂，无法灌胃时将受试物掺入饲料，并记录每只动物的饲料摄入量。受试物给予时间3个月。
1.2.1指标检测。
90天后大鼠股动脉放血处死，取出左侧股骨，于105℃烘箱中，烤至恒重，称量骨重。采用dpx-l双能x线骨密度仪扫描整个左股骨测定骨密度(g/cm2)，以骨的平均骨密度代表该骨骨密度。称量右侧股骨的总重量后，放入经盐酸处理干燥清洁的三角瓶中，加入硝酸和高氯酸(4∶1)的混合酸15ml消化后，用去离子水定容，用原子吸收分光光度法测定右股骨骨钙含量，每次测定用国家技术监督局批准的gbw07604扬树叶作质控物质。
microct检测：各大鼠处死后迅速取出右侧胫骨，去除附着的的软组织，然后将骨组织置于4％多聚甲醛溶液中固定。将标本放入样品杯中并固定好，在相同条件下(扫描电压：70kvp，扫描电流：200ua，层距：14.8um，平面分辨率300ms，连续扫描约808层)扫描。扫描完成后，选取胫骨膨大处及骨干区域作为感兴趣区，设定三维重建阀值后对各标本感兴趣区行三维重建，分析总体积(tv)、骨体积(bv)、骨体积/总体积(bv/tv)，骨小梁数量(tb.n)、骨小梁厚度(tb.th)、骨小梁分离度(tb.sp)、骨表面积/骨体积(bs/bv)。
实验数据采用microsoftexcel2003进行统计学处理，结果以x±s表示，并进行ttest分析，t值法比较组间差异的显著性。
2.实验结果。
2.1复方组合物对大鼠体重、骨重的影响。
结果见下表。
表1复方组合物对大鼠体重、骨重的影响(x±s)
注：*与i组(假手术)比较p＜0.05#与ii组(卵巢去势组)比较p＜0.05。
各组实验前体重差异无统计学意义(p＞0.05)，卵巢去势组与假手术组相比具有统计学差异，说明造模成功。
而组合物a-f组实验后与卵巢去势组比较体重较轻，且右股骨骨重较大，说明组合物a-f均有一定增加骨密度的功效，特别是组合物c组(v组)和卵巢去势组比较，无论是体重还是右股骨重，均有统计学差异(p＜0.05)。
2.2复方组合物对大鼠骨密度及骨钙含量的影响。
结果见下表。
表2复方组合物对大鼠骨密度及骨钙含量的影响(x±s)
注：*与a组比较p＜0.05#与b组比较p＜0.05。
卵巢去势组(ii组)与假手术组(i组)相比具有统计学差异，说明造模成功。
而组合物a-f组实验后与卵巢去势组比较，其左股骨骨密度和右股骨钙高于卵巢去势组，说明组合物a-f均有一定增加骨密度的功效，特别是组合物c组(v组)和卵巢去势组比较，无论是骨密度还是骨钙，均有统计学差异(p＜0.05)。
2.3复方组合物对骨质疏松大鼠骨微结构的影响。
结果见下表和图1。
表3复方组合物对骨质疏松大鼠骨微结构的影响(
注：*与i组比较p＜0.05#与ii组比较p＜0.05。
卵巢去势组(ii组)与假手术组(i组)相比具有统计学差异，说明造模成功。
而组合物a-f组与卵巢去势组比较，胫骨近端的tb.n、bv/tv均有一定程度的升高，且组合物c组具有统计学差异(p＜0.05)，tb.sp、bs/bv均有降低，且组合物c组具有统计学差异(p＜0.05)，而tb.th无明显变化(p＞0.05)。
由图1中可以看出，卵巢去势组(ii组)与假手术组(i组)相比，骨小梁数量减少，变细、中断、游离端增多，间隙增宽，空间结构明显破坏，而组合物c组的干预能明显改善上述骨显微结构指标，提示本发明对改善骨质疏松具有一定的疗效。
由动物实验结果可见，本发明组合物能抑制去卵巢大鼠骨吸收，改善骨微观结构，增加骨量，增加骨密度，改善原发性骨质疏松症的症状。本发明的组方系纯天然植物制剂，不含任何有毒有害添加剂，适用人群广泛，服用安全性高，无任何毒副作用，适合长期服用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。