大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用及药物的制作方法

本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用及药物。

背景技术：

大驳骨为双子叶植物爵床科爵床属植物黑叶小驳骨(justiciaventricosawall.exsims.)的干燥全草，全年均可采收。黑叶小驳骨又名大驳骨，黑叶爵床、黑叶接骨草、大接骨、大驳骨丹、鸭仔花、逼迫树、大驳节等。其味辛；苦；性平。具有活血止痛；化瘀接骨；祛风除湿；消肿解毒。主治跌打伤肿；骨折；劳伤腰痛；风湿痹痛；胃气痛；肺痈；乳痈；无名肿毒；外伤红肿。有关大驳骨的药用记载，始见于《本草求原》，《陆川本草》等古籍亦有记载，《岭南采药录》，《南宁市药物志》，广州空军《常用中草药手册》等地方本草专著及全国性大型中药专著《中华本草》、《中药大辞典》、《中华药海》等均有收载，广西省中药材标准(1990年版)，广东省中药材标准(2011年)和中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八册，第十一册，第十九册，第二十册和国家中成药标准汇编骨伤科分册收载。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用及药物，其旨在提供一种用于制备治疗中枢神经变性疾病药剂的药物；提供一种大驳骨的新的用途。

本发明提供一种技术方案：

大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用。

进一步地，上述大驳骨的提取物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用；

大驳骨的提取物主要通过以下步骤制得：将大驳骨采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液；其中，大驳骨与溶剂的重量比为1:5～20。

进一步地，上述神经退行性疾病包括帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿病和tau蛋白病中的至少一种。

本发明还提供一种技术方案：

一种预防和/或治疗神经退行性疾病的药物，用于制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物，药物主要由包括大驳骨的原料制成。

进一步地，上述药物主要通过以下步骤制得：将大驳骨采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液；其中，大驳骨与溶剂的重量比为1:5～20。

进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。

进一步地，上述溶剂为质量分数为30-95％乙醇水溶液。

进一步地，上述将大驳骨在30-90℃下超声提取15-60min。

进一步地，上述分离得到提取液后还包括对提取液浓缩、干燥。

进一步地，上述对提取液进行蒸发浓缩、减压浓缩或者膜浓缩；对浓缩后的提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾干燥。

本发明提供的大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用及药物的有益效果是：

发明人发现大驳骨及其提取物新的用途，可以预防中枢神经元发生变性、凋亡；含有大驳骨的药物能够使ht-22神经细胞保持健康形态和增殖，保护ht-22神经细胞，抑制ht-22神经细胞的凋亡。本发明提供的药物在制备治疗、辅助治疗或预防神经退行性疾病的药物中具有较好的疗效。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1显示了mtt法检测的实施例1提供的药物对l-glutamate诱导ht-22细胞的保护作用。

图2显示了显微镜下观察的实施例1提供的药物对l-glutamate诱导ht-22细胞的保护作用。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的大驳骨在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用及药物进行具体说明。

进一步地，上述神经退行性疾病为中枢神经变性疾病。

进一步地，上述大驳骨的提取物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用；

大驳骨的提取物主要通过以下步骤制得：将大驳骨采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液；其中，大驳骨与溶剂的重量比为1:5～20。进一步地，大驳骨与溶剂的重量比为1:10-15。

上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。

进一步地，上述神经退行性疾病包括帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿病和tau蛋白病中的至少一种。具体地，tau蛋白病包括额颞痴呆、皮层基底节变性、皮克氏病、进行性核上性麻痹等。

在本发明的其他实施例中，上述神经退行性疾病也包括威尔逊氏病、朊病毒病及其他痴呆包括血管性痴呆、肌萎缩侧索硬化(als)、急性中风(脑中风引起的神经损伤)及其他外伤性损伤；脑血管意外(如，年龄相关性黄斑变性)；脑和脊髓外伤、周围神经病、视网膜病和青光眼。

中枢神经变性疾病是一组以中枢神经系统神经元逐渐发生变性、凋亡所导致的神经退行性疾病或神经病症。其病因大多不明，发病机制和病理表现复杂，临床表现各异。该组疾病多见于中老年，呈慢性或亚急性起病，进行性加重，病程较长，且多数疾病和病症之间相互重叠，如10％左右的帕金森病合并痴呆，太平洋关岛的阿尔茨海默、帕金森综合征等。由于缺乏特异的生化、影像学和病理生理学特征，往往主要依靠临床医生的经验作出诊断。除少数疾病(如帕金森病)依靠药物或手术可能暂时改善临床症状外，对大多数疾病目前尚无特效的治疗方法。例如缺血性中风的治疗策略主要包括溶栓治疗和神经保护治疗。溶栓药物阿替普酶(rt-pa)是首个也是迄今为止唯一被fda批准用于治疗中风的溶栓药物。尽管rt-pa已经被证实能有效治疗急性缺血性中风，但其治疗时间窗窄，作用机理不明确，有出血风险，因此只有少数病人能够及时接受rt-pa的有效治疗。复方左旋多巴是治疗pd的首选药物，但患者长期服用会出现开关现象、剂末恶化等严重并发症。因此开展神经保护性治疗，可能推迟发病时间或延缓病情的发展，已成为当前研究的热点。

神经保护治疗是通过阻碍缺血级联反应涉及的一种或多种机制，在初始阶段保护缺血引起的半暗带神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡。可以通过药物实现血液迅速回流入缺血组织，从而抑制缺血所引起的生化水平、代谢水平和细胞水平上的损害。脑缺血触发了复杂的病理生化级联反应，神经保护治疗的途径多样，环节不同，神经保护的前景是很可观的。

经过发明人的研究以及探讨发现，大驳骨在制备治疗、辅助治疗或预防神经退行性疾病的药物中具有较好的疗效。大驳骨对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。大驳骨有助于保护神经细胞免受细胞损伤和/或抵抗神经变性过程以及神经元功能损害的治疗剂或活性物质。

本发明还提供一种技术方案：

一种预防和/或治疗神经退行性疾病的药物，药物主要由包括大驳骨的原料制成。

进一步地，上述药物主要通过以下步骤制得：将大驳骨采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液；其中，大驳骨与溶剂的重量比为1:5～20。

进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。

进一步地，上述溶剂为质量分数为30-95％乙醇水溶液。在本实施例中，为质量分数95％的乙醇水溶液。

进一步地，上述将大驳骨在30-90℃下超声提取15-60min。

进一步地，上述分离得到提取液后还包括对提取液浓缩、干燥。

进一步地，上述对提取液进行蒸发浓缩、减压浓缩或者膜浓缩；具体地，采用减压浓缩。在本发明较佳的实施例中，采用旋转蒸发仪蒸发浓缩。

对浓缩后的提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾干燥。对浓缩后的提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾干燥。具体地，在本发明中采用减压干燥。

大驳骨对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。大驳骨的提取物或者药物具有保护神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡的效果；能推迟发病时间或延缓病情的发展。大驳骨制备的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡；该药物对于神经细胞具有显著的保护作用。

此外，在其他实施例中，该药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

例如：稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

此外，为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。如：葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

进一步地，本发明实施例的药物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。

此外，本发明实施例的药物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

承上所述，在给药过程中，可改变药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

发明人发现大驳骨及其提取物新的用途，可以预防中枢神经元发生变性、凋亡；含有大驳骨的药物能够使ht-22神经细胞保持健康形态和增殖，保护ht-22神经细胞，抑制ht-22神经细胞的凋亡。本发明提供的药物在制备治疗、辅助治疗或预防神经退行性疾病的药物中具有较好的疗效。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：

称取大驳骨30g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入300ml95％乙醇水溶液，于60℃超声提取30min，过滤，用旋转蒸发仪浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内(50℃)烘至恒重。

实施例2

本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：

称取大驳骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入50ml30％乙醇水溶液，于30℃超声提取15min，过滤，减压浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内(50℃)烘至恒重。

实施例3

本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：

称取大驳骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入200ml60％1，2-丙二醇水溶液，于90℃超声提取60min，过滤，减压浓缩成浸膏状后真空冷冻干燥至恒重。

实施例4

本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：

称取大驳骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入100ml乙酸乙酯，于60℃超声提取45min，过滤，膜浓缩后减压干燥至恒重。

实施例5

本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：

称取大驳骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入150ml水，于45℃超声提取60min，过滤，用旋转蒸发仪浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内(50℃)烘至恒重。

试验例

本试验例对实施例1得到的药物进行神经保护测试。

1.ht-22神经细胞的培养

将(三批)ht-22细胞用胰酶(0.25％，1ml)从中皿消化下来(1min内)，吹散成单细胞悬液，加入少量胎牛血清fbs(100μl)。1000rpm离心5min，去上清，将细胞沉淀分散在3ml完全培养基中，取1ml细胞悬液加入到24ml完全培养基中，来回颠倒10次混匀，取0.1ml用于计数。稀释至适当的细胞浓度(8×10⁴cell/ml)后，48孔板先加50μl培养基，使培养基彻底分布于孔板边缘。种植在48孔板中(三批细胞三块板，100μl，8×10⁴cell/ml)。边种边旋转离心管，种一半孔用力吹打细胞，使之均匀，同时让细胞悬液铺满孔板底部，全部种完后在显微镜下观察细胞分散是否均匀，十字摇匀使细胞在孔板底部分散均匀。放置24小时(细胞融合度约为30～40％)用于实验。

2.mtt法测试

将实施例1中获得药物200μg分散于2ml完全培养基中，用于3×48孔板换液，做mtt实验。取种好细胞的48孔板，分为control(对照组)，glutamate(谷氨酸)组，nac(n-acetylcysteine)(n-乙酰半胱氨酸)组，trolox(水溶性维生素e)组和样品组(实施例1提供的药物组)。每组三个复孔，培养基换液，每孔200μl，每次换液前，吹打培养基，使药物分散均匀。换液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使终浓度达到3mm(6μl)。摇匀后放置在37℃培养24h。观察细胞形态，并检测细胞存活率(mtt法)，然后用20μl的mtt(5mg/ml)避光37℃孵育2h，轻轻吸去液体，每孔加200μl的dmso，摇床5min摇匀。然后用多功能酶标仪计算490nm下各吸光值(下面图中数据均为490nm下测得，损伤组细胞存活率约为control组的20％)。取三孔od值，求平均值，减去空白dmso的od值，然后除以对照组的平均值标准化。三批细胞的mtt的od值的平均值用sigmaplot12.5软件做统计差异。

统计结果如表1所示，表1示出了control组、glutamate组、nac组，trolox组和样品组中细胞存活率。

表1各实验组细胞存活率对比(n＝3)

将表1中的实验数据绘制柱状图，结果如图1所示，具体地，图1显示了mtt法检测的大驳骨提取物对l-glutamate诱导ht-22细胞的保护作用。图中：“+”代表相应的试验组有相应的组分，“-”代表相应的试验组没有相应的组分。其中，**p<0.01，***p<0.001与谷氨酸组比较(单因素方差分析，dunnett法)。trolox(10μm)作为阳性对照使用。

由图1的结果显示，实施例1提供的药物对于ht-22神经细胞具有显著的保护作用。

3.显微镜下观察的大驳骨提取物的保护作用

实施例1提供的药物20μg分散于2ml完全培养基中，用于3×48孔板换液。取种好细胞的48孔板，分别是control组，glutamate组，glu(glutamate)+nac(n-acetylcysteine)组，glu+trolox和glu+样品组(实施例1提供的药物组)，每组三个复孔，培养基换液，每孔200μl，每次换液前，吹打培养基，使药物分散均匀。换液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使终浓度达到3mm(6μl)。摇匀后放置在37℃培养24h。最后在显微镜下观察细胞形态，并拍照，结果如图2所示。图2显示了显微镜下观察的大驳骨提取物对l-glutamate诱导ht-22细胞的保护作用。由图2可知，实施例1提供的药物可以使细胞保持健康形态和增殖，抑制了l-glutamate(l-谷氨酸)引起的细胞凋亡。

从本实验例可知，实施例1提供的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡；该药物对于ht-22神经细胞具有显著的保护作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。