本申请是国际申请日为2013年5月2日的发明名称为“用于治疗细菌感染的方法和组合物”的pct/us2013/039257号发明专利申请的分案申请，原申请进入中国国家阶段获得的国家申请号为201380023313.2并且其要求2012年5月2日提交的美国临时专利申请号61/641,590的优先权，该案以引用的方式整体并入本文中。
关于联邦政府资助的研究或研发的声明
本发明是根据由美国健康研究所(nationalinstitutesofhealth)授予的授权号po1hl057346在政府支持下完成。政府对本发明具有某些权利。
本发明涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。具体而言，本发明提供化合物作为抵抗细菌感染(例如，生物膜)的治疗剂。
发明背景
抗生素抗性在细菌中的流行正成为公众健康的主要威胁之一。目前的抗生素干扰病原体的重要生物过程并导致细菌死亡或生长停止。因此，抗生素疗法施加强烈的选择性压力以有利于出现具有抗生素抗性的菌株。为了回避此严重问题，需要替代性的抗微生物试剂在不对抗生素抗性产生强烈选择的情况下抑止病原体的毒性。
细菌可在嵌埋表面上产生生物膜。生物膜中的细菌与浮游生物细菌的行为不同，尤其就其对抗生素治疗的反应而言(donlan，2001.emerg.infect.dis.7：277-281)。诸如导尿管、机械心脏瓣膜、起搏器、假关节和隐形眼镜的留置医疗设备上或内部形成生物膜对于医疗护理提出了一个重要问题。革兰氏阴性(gram-negative)和革兰氏阳性(gram-positive)细菌可在留置医疗设备上形成生物膜。最常见的形成生物膜的细菌包括粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)、草绿色链球菌(streptococcusviridians)、大肠杆菌(escherichiacoli)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、奇异变形杆菌(proteusmirabilis)和绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)(donlan，2001，上文)。
在这些形成生物膜的细菌中，金黄色葡萄球菌(s.aureus)和表皮葡萄球菌(s.epidermidis)最常在心血管设备上发现(otto，2008.staphylococcalbiofilms.curr.top.microbiol.immunol.322：207-228；otto，m.2009.med.res.rev.1-22)。估计金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌导致约40-50％的心脏瓣膜假体感染和50-70％的导尿管生物膜感染)(agarwal等人，femsimmunol.med.microbiol.58：147-160)。在美国每年有250,000至500,000例原发性血流感染是由于1亿5000万移植的血管内设备。所述感染的每个阶段可使健康保健成本增加$4,000至$56,000(maki等人，2006.mayoclin.proc.81：1159-1171；uckay等人，2009.ann.med.41：109-119)。约87％的血流感染是由葡萄球菌引起的(agarwal等人，2010；上文)。总而言之，生物膜中的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对健康护理系统施加巨大的负担。
金黄色葡萄球菌是主要的人类病原体，且估计约30％的人类是无症状的鼻部载体(chambers和deleo2009.nat.rev.microbiol.7：629-641)。金黄色葡萄球菌导致皮肤、软组织、呼吸道、骨头、关节和血管内疾病。由金黄色葡萄球菌导致的致命性病例包括菌血症、心内膜炎、败血症和中毒性休克综合症(lowy1998.n.engl.j.med.339：520-532)。金黄色葡萄球菌中的抗生素抗性愈加成为一种紧急的医疗问题。金黄色葡萄球菌中的甲氧西林抗性正接近流行性水平(chambers和deleo，上文；grundmann等人，2006.lancet368：874-885)。估计美国在2005年发生了94,360例侵袭性mrsa感染，而且这些感染与18,650起病例中的死亡相关(klevens等人，2007.jama298：1763-1771)。虽然表皮葡萄球菌是正常人类上皮菌群的一部分，但在皮肤或粘膜受伤时可导致感染。在植入的留置医疗设备上形成生物膜是表皮葡萄球菌发病机理的主要表现(otto等人，2008；上文)。
生物膜相关细菌与浮游生物体相比尤其对抗生素治疗具有抗性，可能是由于阻止抗生素到达细菌的生物膜的独特结构或可能使抗生素失活的生物膜内的微环境改变(otto等人，2008；上文)。此外，抗生素主要靶向活性细胞过程，导致针对与浮游生物细菌在生理学方面不同的生物膜中的细菌的功效受限。消耗生物膜中的营养和在生物膜中积聚废物可诱使细菌进入对抗生素具有抗性的缓慢生长或饥饿状态。另外，一些细菌对在也使其对抗生素的敏感性减小的表面上生长作出反应而可采取不同的生物膜表型(otto等人，2008；上文；costerton等人，1999.science284：1318-1322；fux等人，2005.trendsmicrobiol.13：34-40；stewart等人，2001.lancet358：135-138)。
除了难以用常规的抗生素疗法来治疗生物膜以外，治疗生物膜因在葡萄球菌中的抗生素抗性增加而进一步复杂化。抗生素靶向一个小的对细菌存活而言必要的蛋白质集合，诸如细菌dna、rna、脂质和蛋白质的细胞壁形成或合成。因此，抗生素抗性菌株因选择性压力而有利(martinez和baquero，2002.clin.microbiol.rev.15：647-679)。大多数人类病原体中的抗生素抗性已成为一项严重的公众健康负担。
总体而言，这些因素表明需要超越用常规杀菌抗生素治疗的新颖治疗策略来解决因生物膜形成而导致的发病率和死亡率。
发明概要
本发明涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。特别而言，本发明提供化合物作为抵抗细菌感染(例如，生物膜)的治疗剂。
举例而言，本发明的实施方案提供一种药物组合物，其包含：具有式i、ii、iii或iv的结构的化合物
其中x是s、nh或o；r1和r2独立地是任选地经f、cn、or6、nr62、cor6、co2r6、conhr6、芳基或杂芳基取代的c1-c8烷基或烯基或环烷基，其中一个或多个烷基碳可由o置换；r3和r4独立地是h，连接在具有3至7个碳的环烷基环中，其中至少一个环ch2由o或n-g置换；g是h、c(＝o)r6、so2r6或c(＝o)or6；r5是h、c1-c6烷基、cn、or6、nr62、cor6、co2r6、conhr6、芳基、杂芳基、so2r6、nhcor6、so2nhr6或ocor6；r6是h、c1-c6烷基、c0-c3烷基-芳基或c0-c3烷基-杂芳基，全部任选地经取代；r7和r8是c1-c6烷基，或连接在具有3至7个碳的环烷基环中，其中环ch2基团中的一个可由o或n-g置换；r9是c1-c5烷基；r10是任选地经f、cn、or6、nr62、co2r6、conhr6、芳基或杂芳基取代的c2-c8烷基或烯基或环烷基，其中一个或多个烷基碳可由o置换；且r11是h或c1烷基。在一些实施方案中，化合物例如是
或
其它实施方案提供一种抑制金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的生长或生物活性(例如，毒性)的方法，其包括使金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌与本文所述的化合物接触，其中化合物抑制金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的生长或生物活性。在一些实施方案中，金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌存在于生物膜中。在一些实施方案中，化合物防止金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌形成生物膜。在一些实施方案中，此方法还包括使金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌与已知的抗生素化合物接触的步骤。
其它实施方案提供任一种前述化合物用于制备药物的用途。某些实施方案提供任一种前述化合物用于治疗细菌(例如，金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌)感染(例如，存在于生物膜中)的用途。
本发明还提供一种涂有任一种前述化合物的表面(例如，医疗设备的表面)。
本文描述其它实施方案。
附图说明
图1示出了抑制a组链球菌毒性的化学系列化合物的识别。a)对与dmso相比，用ccg-102487治疗的mgas2221中的基因表达变化的微阵列分析。b)在受gas感染(每只小鼠105-6cfu)后，ccg-2979对小鼠存活的影响。
图2示出了抑制葡萄球菌毒性的化合物。a)ccg-203592和b)ccg-205363在不同浓度下抑制金黄色葡萄球菌rn6390菌株生物膜形成；c)203592在50μm下对金黄色葡萄球菌rn6390菌株基因表达的影响。在中间对数生长期(ml)、晚期对数生长期(ll)和稳定期(s)进行实时rt-pcr。d)ccg-203592保护balb/cj小鼠抵抗鼻内金黄色葡萄球菌newman菌株感染(每只小鼠3-4×108cfu)。e)ccg-203043在微量滴定盘中抑制表皮葡萄球菌rp62a菌株生物膜形成，但不抑制细菌生长。
图3示出了抑制金黄色葡萄球菌rn6390菌株在医疗级硅胶片上形成生物膜的化合物ccg-203592。
图4示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的结构。
图5示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的结构。
图6示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的合成。
图7示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的合成。
图8示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的结构。
图9示出了本发明的实施方案的示例性生物膜抑制剂的合成。
图10示出了浸涂不锈钢(ss)晶片上的等离子涂层。
定义
为了便于理解本发明，下文定义多个术语和短语。
如本文所用，术语“脂族”表示包括(但不限于)烷基、烯基、炔基、脂环族的基团。
如本文所用，术语“烷基”指的是不饱和碳链取代基。一般而言，烷基具有通式cnh2n+1。示例性的烷基包括(但不限于)甲基(ch3)、乙基(c2h5)、丙基(c3h7)、丁基(c4h9)、戊基(c5h11)等。
如本文所用，术语“芳基”表示单芳族环，诸如苯基环，或两个或两个以上芳环(例如，双苯基、萘、蒽)，或芳环和一个或多个非芳环。芳基可任选地经低级脂族基团(例如，烷基、烯基、炔基或脂环族)取代。另外，脂族基团和芳基还可经一个或多个官能团取代，所述官能团包括(但不限于)包含n、s、o、-nh2、-nhcoch3、-oh、低级烷氧基(c1-c4)和卤基(-f、-cl、-br或-i)的化学部分。
如本文所用，术语“经取代的脂族”指的是其中至少一个脂族氢原子例如经卤素、氨基、羟基、硝基、硫基、酮、醛、酯、酰胺、低级脂族、经取代的低级脂族或环(芳基、经取代的芳基、环脂族或经取代的环脂族等)置换的烷烃、烯烃、炔烃或脂环族部分。这些的例子包括(但不限于)1-氯乙基等等。
如本文所用，术语“经取代的芳基”指的是由至少一个芳族环组成且其中环碳上的至少一个氢原子例如经卤素、氨基、羟基、硝基、硫基、酮、醛、酯、酰胺、低级脂族、经取代的低级脂族或环(芳基、经取代的芳基、环脂族或经取代的环脂族)置换的芳族环或稠合芳族环系统。这些的例子包括(但不限于)羟基苯基等等。
如本文所用，术语“环脂族”指的是含有稠合环系统的脂族结构。这些的例子包括(但不限于)十氢化萘等等。
如本文所用，术语“经取代的环脂族”指的是其中至少一个脂族氢原子经卤素、硝基、硫基、氨基、羟基、酮、醛、酯、酰胺、低级脂族、经取代的低级脂族或环(芳基、经取代的芳基、环脂族或经取代的环脂族)置换的环脂族结构。这些的例子包括(但不限于)1-氯二环癸基、双环-庚烷、辛烷和壬烷(例如，降冰片基(nonrbornyl))等等。
如本文所用，术语“杂环”表示例如含有一个或多个杂原子的芳族或非芳族环。杂原子可以彼此相同或不同。杂原子的例子包括(但不限于)氮、氧和硫。芳族和非芳族杂环在本领域中熟知。芳族杂环的一些非限制性例子包括吡啶、嘧啶、吲哚、嘌呤、喹啉和异喹啉。非芳族杂环化合物的非限制性例子包括哌啶、哌嗪、吗啉、吡咯烷和吡唑烷。含氧杂环的例子包括(但不限于)呋喃、环氧乙烷、2h-吡喃、4h-吡喃、2h-苯并吡喃和苯并呋喃。含硫杂环的例子包括(但不限于)噻吩、苯并噻吩和帕拉噻嗪。含氮环的例子包括(但不限于)吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑烷、咪唑、咪唑啉、咪唑烷、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、嘧啶、吲哚、嘌呤、苯并咪唑、喹啉、异喹啉、三唑和三嗪。含有两个不同杂原子的杂环的例子包括(但不限于)吩噻嗪、吗啉、帕拉噻嗪、噁嗪、噁唑、噻嗪和噻唑。杂环还任选地经一个或多个选自脂族、硝基、乙酰基(即，-c(＝o)-ch3)或芳基的基团取代。
如本文所用，术语“经取代的杂环”指的是其中至少一个环碳原子经氧、氮或硫置换且其中至少一个脂族氢原子经卤素、羟基、硫基、硝基、氨基、酮、醛、酯、酰胺、低级脂族、经取代的低级脂族或环(芳基、经取代的芳基、环脂族或经取代的环脂族)置换的杂环结构。这些的例子包括(但不限于)2-氯吡喃基。
如本文所用，术语“富电子杂环”意思是其中一个或多个环原子是杂原子(例如，氧、氮或硫)且杂原子具有促成6-π电子系统的不成对电子的环状化合物。示例性的富电子杂环包括(但不限于)吡咯、吲哚、呋喃、苯并呋喃、噻吩、苯并噻吩和其它类似结构。
如本文所用，术语“连接子”指的是含有至多且包括八个连接两个不同结构部分的连续原子的链，其中所述原子例如是碳、氮、氧或硫。乙二醇是一种非限制性的例子。
如本文所用，术语“经低级烷基取代的氨基”指的是其中一个脂族氢原子经氨基置换的含有至多且包括八个碳原子的任何烷基单元。这些的例子包括(但不限于)乙氨基等等。
如本文所用，术语“经低级烷基取代的卤素”指的是其中一个脂族氢原子经卤素置换的含有至多且包括八个碳原子的任何烷基链。这些的例子包括(但不限于)氯乙基等等。
如本文所用，术语“乙酰基氨基”意思是被乙酰基化的任何一级或二级氨基。这些的例子包括(但不限于)乙酰胺等等。
如本文所用，如本文所用的术语“参与氢键结合的部分”表示可接受或捐赠质子而由此来形成氢键的基团。参与氢键结合的部分的一些具体非限制性例子包括本领域中熟知的氟、含氧和含氮基团。参与氢键结合的含氧基团的一些例子包括：羟基、低级烷氧基、低级羰基、低级羧基、低级醚和酚基团。如本文所用的限定词“低级”指的是连接有各自的含氧官能团的低级脂族基团(c1-c4)。因此，例如术语“低级羰基”尤其指的是甲醛、乙醛。参与氢键形成的含氮基团的一些非限制性例子包括氨基和酰胺基。另外，含有氧和氮原子二者的基团也可以参与氢键形成。这些基团的例子包括硝基、n-羟基和亚硝基。本发明中的氢键受体也可能可以是芳族环的π电子。
如本文所用，术语化合物的“衍生物”指的是在化合物的官能团或主链发生化学改性的经过化学改性的化合物。
如本文所用，术语“受试者”指的是由本发明的方法治疗的生物体。所述生物体优选地包括(但不限于)哺乳动物(例如，鼠类、猿类、马类、牛类、猪类、犬类、猫类等等)，且最有选地包括人类。在本发明的上下文中，术语“受试者”一般指的是将接受或已接受针对具有细菌感染特征的病状的治疗(例如，施用本发明的化合物和任选地一种或多种其它药剂)的个体。
如本文所用，术语“诊断”指的是由其迹象和症状(例如，对常规疗法的抗性)或遗传分析、病理学分析、组织学分析等等来识别疾病。
如本文所用，术语“体外”指的是人造环境和在人造环境内发生的过程或反应。体外环境包括(但不限于)试管和细胞培养物。术语“体内”指的是自然环境(例如，动物或细胞)和在自然环境内发生的过程或反应。
如本文所用，术语“宿主细胞”指的是任何真核或原核细胞(例如，哺乳动物细胞、鸟类细胞、两栖动物细胞、植物细胞、鱼类细胞和昆虫细胞)，而无论位于体外或是体内。
如本文所用，术语“细胞培养物”指的是任何体外细胞培养物。此术语中包括连续细胞系(例如，具有永生化表型)、原发性细胞培养物、有限细胞系(例如，非转化细胞)和体外保持的任何其它细胞群(包括卵母细胞和胚胎)。
如本文所用，术语“有效量”指的是足以实现有利或所需结果的化合物(例如，本发明的化合物)的量。有效量可分一次或多次施用、应用或剂量来施用，而且不希望受限于特定的制剂或施药途径。
如本文所用，术语“共同施药”指的是向受试者施用至少两种药剂(例如，本发明的化合物)或疗法。在一些实施方案中，共同施用两种或两种以上药剂/疗法是同时的。在一些实施方案中，先施用第一药剂/疗法，然后施用第二药剂/疗法。本领域技术人员了解所用各种药剂/疗法的制剂和/或施药途径可变化。本领域技术人员可容易地确定共同施药的适当剂量。在一些实施方案中，当药剂/疗法共同施用时，各自的药剂/疗法是以比单独施用时适合的剂量较低的剂量来施用。因此，共同施药在共同施用药剂/疗法使已知的潜在有害(例如，毒性)药剂的必要剂量减少的实施方案中尤其有利。
如本文所用，术语“毒性”指的是与在施用毒物之前的细胞或组织相比，对相同细胞或组织的任何不利或有害作用。
如本文所用，术语“药物组合物”指的是使组合物尤其适合体内、体内或离体诊断或治疗用途的活性剂与惰性或活性载体的组合。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指的是任何标准医药载体，诸如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如，油/水或水/油乳液)和各种类型的湿润剂。组合物还可以包括稳定剂和防腐剂。关于载体、稳定剂和佐剂的例子。(例如参考martin，remington′spharmaceuticalsciences，第15版，mackpubl.co.，easton，pa[1975])。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指的是在施用于受试者时能提供本发明的化合物或其活性代谢物或残留物的本发明化合物的任何药学上可接受的盐(例如，酸或碱)。如本领域技术人员所知，本发明化合物的“盐”可来自无机或有机酸和碱。酸的例子包括(但不限于)盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、过氯酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等等。诸如草酸的其它酸尽管本身并非药学上可接受的，但也可以用来制备适合作为用于获得本发明的化合物及其药学上可接受的酸加成盐的中间体的盐。
碱的例子包括(但不限于)碱金属(例如，钠)氢氧化物、碱土金属(例如，镁)、氢氧化物、氨、和式nw4+的化合物(其中w是c1-4烷基)等等。
盐的例子包括(但不限于)：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸钠、乙磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐(flucoheptanoate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、巴莫酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等等。盐的其它例子包括与诸如na+、nh4+和nw4+(其中w是c1-4烷基)等等的合适阳离子化合的本发明化合物的阴离子。
对于治疗用途而言，预期本发明化合物的盐是药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也发现例如可用来制备或纯化药学上可接受的化合物。
如本文所用，术语“样本”以其最广泛的意义来使用。在一种意义上，它的意思是包括由任何来源获得的试样或培养物以及生物和环境样本。生物样本可以由动物(包括人类)获得，而且涵盖流体、固体、组织和气体。生物样本包括血液产物，诸如血浆、血清等等。环境样本包括环境物质，诸如表面物质、土壤、水、晶体和工业样本。然而，所述样本并非构建来限制可适用于本发明的样本类型。
如本文所用，术语“纯化的”或“纯化”指的是从样本除去不需要的组分。如本文所用，术语“基本上纯化”指的是摆脱至少60％、优选地75％且最优选地90％或更多通常与其相关的其它组分的分子。
如本文所用，术语“调节”指的是影响(例如，促进或延迟)某方面细胞功能(包括但不限于细菌生长等等)的化合物(例如，本发明的化合物)的活性。
术语“测试化合物”指的是可周来治疗或预防疾病、病痛、病症或身体机能障碍或另外改变样本的生理学或细胞状态(例如，细菌感染)的任何化学实体、药物、药品等等。测试化合物包含已知的和潜在的治疗性化合物。可以通过使用本发明的筛选方法来确定一种测试化合物是否具有治疗性。“已知的治疗性化合物”指的是已证实(例如，通过动物试验或施用于人类的先前经历)在所述治疗或预防中有效的治疗性化合物。
如本文所用，术语“生物膜”指的是细胞在表面上相互粘附的微生物聚集体(例如，细菌)。这些粘附细胞常常包埋在细胞外的聚合物质自身产生的基质中。生物膜在人类身体的各种感染中和在医疗设备上形成。例子包括(但不限于)尿路感染、导尿管感染、中耳感染、牙菌斑形成、齿龈炎、涂层的隐形眼镜、心内膜炎、囊肿性纤维化中的感染、和永久性留置设备(诸如关节假体和心脏瓣膜)的感染。各种细菌形成生物膜。例子包括(但不限于)绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、牙菌斑(例如，变形链球菌(streptococcusmutans)和血链球菌(streptococcussanguinis))、军团菌属(legionella)、和淋病奈瑟氏菌(neisseriagonorrhoeae)。
具体实施方式
本发明涉及化合物、其发现方法及其治疗和研究用途。特别而言，本发明提供化合物作为抵抗细菌感染(例如，生物膜)的治疗剂。
出现抗生素抗性是世界范围内的一项紧急的医学问题。目前的许多抗生素都是四十多年前研发的亲本化合物的衍生物，而且靶向一个小的对细菌存活而言必要的蛋白质集合，诸如细菌dna、rna、脂质和蛋白质的细胞壁形成和合成。因此，抗生素抗性菌株因选择性压力而有利(martinez等人，clin.microbiol.rev.2002；15：647-679)。多种其它因素(包括不当和过度使用抗生素)导致出现了对大多数目前可用的抗生素具有高度抗性的病原体(alanis，arch.med.res.2005；36：697-705；bax等人，int.j.antimicrob.agents2000；16：51-59；norrby等人，lancetinfect.dis.2005；5：115-119；silver，nat.rev.drugdiscov.2007；6：41-55)。目前的抗微生物研发对于改善现有抗生素的功效而言受到极大限制。
因此极为需要研发新颖的策略来对抗感染性的疾病。在不引起对抗生素抗性的选择的情况下抑制病原体毒性保留了极大的希望作为对传统抗生素策略的替代。
因此，在一些实施方案中，本发明提供对细菌感染(例如，由各种细菌引起的a群链球菌和生物膜)具有活性的组合物和方法。在研发本发明的实施方案的过程期间进行的实验中，识别能够抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在多种生物材料表面上形成生物膜而不显著抑制细菌生长的化学系列化合物。还表明这些化合物能抑制多种毒性因子(包括生物膜形成中涉及的基因)的表达。
本发明不限于一种具体机制。实际上，对机制的理解对实践本发明而言并非必要的。尽管如此，预期本文所述的抑制生物膜形成而不抑制细菌生长的组合物和方法不引发细菌对抗生素(例如，本文所述的化合物和常规的抗生素)的快速抗性。
在一些实施方案中，本发明提供一种将本文所述的化合物和涂层(例如，血浆涂层)合并成药物释放控制屏障的局部药物递送方法(mchen等人，journalofbiomaterialsscience23：483-496，2012)。在一些实施方案中，化合物与生物材料的表面共价结合(v.antoci，等人，biomaterials29：4684-4690，2008；humeebs，biomaterials25：5023-5030，2004)。
i.抑制剂
如下文更详细描述，本发明的实施方案提供特别地抑制例如生物膜(例如，生物或医疗表面上的生物膜)中的细菌毒性或生长的化合物。
在一些实施方案中，抑制剂具有式i、ii、iii或iv的结构的结构化合物
其中r1和r2独立地是任选地经f、cn、or6、nr62、cor6、co2r6、conhr6、芳基或杂芳基取代的c1-c8烷基或烯基或环烷基，其中一个或多个烷基碳可由o置换；r3和r4连接在具有3至7个碳的环烷基环中，其中至少一个环ch2由o或n-g置换；g是h、c(＝o)r6、so2r6或c(＝o)or6；r5是h、c1-c6烷基、cn、or6、nr62、cor6、co2r6、conhr6、芳基、杂芳基、so2r6、nhcor6、so2nhr6或ocor6；r6是h、c1-c6烷基、c0-c3烷基-芳基或c0-c3烷基-杂芳基，全部任选地经取代；r7和r8独立地是h、c1-c6烷基或连接在具有3至7个碳的环烷基环中，其中环ch2基团中的一个可由o或n-g置换；r9是c1-c5烷基；且r10是任选地经f、cn、or6、nr62、co2r6、conhr6、芳基或杂芳基取代的c2-c8烷基或烯基或环烷基，其中一个或多个烷基碳可由o置换。下文展示示例性化合物：
ii.药物组合物、制剂及示例性的施药途径和给药考量
下文提供涵盖的各种药剂和药物组合物的示例性实施方案。
a.制备药剂
本发明的化合物适用于制备用以治疗细菌(例如，金黄色葡萄球菌(s.arureus)或表皮葡萄球菌生物膜)感染的药剂。本领域中熟知用于制备化合物药剂的方法和技术。下文描述示例性的医药制剂和递送途径。
本领域技术人员将了解，本文所述的任一种或多种化合物(包括多个具体实施方案)是通过应用标准的医药制造程序来制备的。这些药剂可以通过使用医药技术中熟知的递送方法来递送给受试者。
b.示例性的药物组合物和制剂
在本发明的一些实施方案中，组合物是单独施用的，而在一些其它实施方案中，组合物优选地存在于包含至少一种如上文定义的活性成分/活性剂(例如，本文所述的金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌抑制剂)以及固体载体或者以及一种或多种药学上可接受的载体和任选地其它治疗剂的医药制剂中。每种载体在与制剂的其它成分相容和对受试者无害的意义上都应该是“可接受的”。
涵盖的制剂包括适合经口、直肠、经鼻、局部(包括经皮、颊部和舌下)、阴道、肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内和皮内)和肺部施用的那些制剂。在一些实施方案中，制剂便利地以单位剂型的形式存在而且通过制药技术中已知的任何方法来制备。这些方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体缔合的步骤。一般而言，通过均匀并紧密地使活性成分与液体载体或磨碎的固体载体或二者缔合(例如，混合)，然后视必要使产物成形来制备制剂。
适合经口施药的本发明的制剂可呈现为离散单位形式，诸如胶囊、扁囊剂或片剂，其中每种都优选地含有预定量的活性成分；呈现为散剂或颗粒形式；呈现为在含水或不含水液体中的溶液或悬浮液形式；或呈现为水包油液体乳液或油包水液体乳液的形式。在一些实施方案中，活性成分呈现为大药丸、药糖剂或药膏等的形式。
在一些实施方案中，片剂包含至少一种活性成分和任选地一种或多种辅助剂/载体，并通过压缩或模制各自的药剂而制得。在一些实施方案中，通过在合适的机器中压缩任选地与粘合剂(例如，聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，乙醇酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式(诸如散剂或颗粒)的活性成分来制备压缩片剂。通过在合适的机器中模制经惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物(例如，活性成分)混合物来制备模制片剂。片剂可任选地经过涂布或计分，而且可以经过配制来例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素来减缓或控制其中活性成分的释放，从而提供需要的释放轮廓。片剂可任选地具备肠溶衣，从而在肠部分而非胃中提供释放。
适合在口中局部施药的制剂包括在调味基础(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基础(诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂；和在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。
用于根据本发明局部施药的药物组合物任选地调配成油膏、乳霜、悬浮液、洗液、散剂、溶液、药膏、凝胶、喷雾、气雾剂或油的形式。在替代的实施方案中，局部制剂包含膏药或敷料，诸如浸渍有活性成分和任选地一种或多种赋形剂或稀释剂的绷带或橡皮膏。在一些实施方案中，局部制剂包括增强活性剂通过皮肤或其它受影响区域吸收或渗透的化合物。这些经皮渗透增强剂的例子包括二甲亚砜(dmso)和相关的类似物。
如果需要，乳霜基质的含水相例如包括至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或两个以上羟基的醇，诸如丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。
在一些实施方案中，本发明的油相乳液通过已知方式由已知的成分构成。此相典型地包含单独的乳化剂(乳化剂)(另外称为乳化剂(emulgent))，在一些实施方案中也希望此相另外包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油二者的混合物。
优选地一起包括亲水性乳化剂以及亲脂性乳化剂来充当稳定剂。在一些实施方案中，也优选的是包括油和脂肪二者。总而言之，具有或不具有稳定剂的乳化剂构成所谓的乳化蜡，且蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化油膏基质，它形成乳霜制剂的油性分散相。
适用于本发明的制剂中的乳化剂和乳液稳定剂包括tween60、span80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
适用于制剂的油或脂肪的选择是基于实现需要的特性(例如，美容特性)，这是因为活性化合物/活性剂在大多数可能用在医药乳液制剂中的油中的溶解度极低。因此，乳霜应优选地是不油腻、不染色且可洗的具有合适稠度以避免从管中或其它容器渗漏的产品。可以使用直链或分支链的一元烷基或二元烷基酯，诸如二异己二酸酯、异鲸蜡硬脂酸酯、椰油脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或称为crodamolcap的支链酯的掺合物，最后三项是优选的酯。视需要的特性而定，这些酯可以单独或组合使用。或者，可以使用高熔点脂质，诸如白软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油。
适合对眼睛局部施药的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是药剂的含水溶剂。
用于直肠施药的制剂可呈现为具有例如包含可可脂或水杨酸酯的合适基质的栓剂形式。
适合阴道施药的制剂可呈现为除此药剂外含有的阴道栓、乳霜、凝胶、药膏、泡沫或喷雾制剂形式，这些载体在本领域中已知是适当的。
适合经鼻施药的制剂(其中载体是固体)包括具有例如约20至约500微米范围内的粒度的粗糙粉末，它们通过采用用力吸入的方式来施用，即通过鼻腔通道从向上举起靠近鼻子的粉末容器快速吸入(例如，用力)。其它合适的制剂(其中载体是用于施药的液体)包括(但不限于)鼻用喷雾、滴剂或通过喷雾器的气溶胶，而且包括药剂的含水或油性溶液。
适合肠胃外施药的制剂包括含水和不含水的等张无菌注射溶液，它们可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，这些致使制剂与预期接受者的血液等张；以及含水和不含水的无菌悬浮液，它们可包括悬浮剂和增稠剂，以及设计成使化合物靶向血液组分或一个或多个器官的脂质体或其它微粒系统。在一些实施方案中，制剂呈现为/调配在单位剂量或多剂量的密封容器中，例如安瓶和小瓶，而且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，在即刻使用之前只需要添加无菌的液体载体(例如，注射用水)即可。可以由前文所述种类的无菌散剂、颗粒和片剂来制备临时的注射溶液和悬浮液。
优选的单位剂型制剂是含有如上文引用的每日剂量或单位、每日次剂量或其适当部分的药剂的那些单位剂型制剂。
应了解，除了上文特定提到的成分以外，本发明的制剂可包括关于所关注的制剂类型而言在本领域中常规的其它药剂，例如适合经口施药的那些药剂可包括其它药剂，诸如甜味剂、增稠剂和调味剂。还预期本发明的药剂、组合物和方法可以与其它合适的组合物和疗法合并。其它制剂又任选地包括食品添加剂(合适的甜味剂、调味剂、着色剂等)、植物营养素(例如，亚麻籽油)、矿物质(例如，ca、fe、k等)、维生素和其它可接受的组合物(例如，共轭的亚油酸)、增量剂和稳定剂等。
在一些实施方案中，本发明的实施方案的化合物被涂在医疗设备(例如包括(但不限于)起搏器、留置导尿管、植入物、关节置换体、骨修复设备等等)上。
c.示例性的施药途径和给药考量
已知各种递送系统而且可用来施用本发明的治疗剂(例如，金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌生物膜抑制剂)，例如囊封在脂质体、微粒、微胶囊、受体介导的胞吞作用中等等。递送方法包括(但不限于)动脉内、肌肉内、静脉内、鼻内和经口途径。在具体实施方案中，可能有利的是向需要治疗的区域局部施用本发明的药物组合物；这可以通过例如(且绝非限制)在手术期间局部输注、注射或通过导尿管来实现。
可以向易受金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌生物膜感染和与此相关的病况影响或存在发生此风险的受试者或个体施用本文确认对于其预期目的有效的药剂。在向如小鼠、大鼠或人类患者的受试者施用药剂时，可以将此药剂添加到药学上可接受的载体中并通过全身或局部施用给受试者。为了确定可受到有益治疗的患者，从患者去除组织样本并分析细胞对药剂的敏感性。
在一些实施方案中，在治疗过程期间连续或间断性地以单次给药来实现体内施药。本领域技术人员熟知确定最有效的施药方式和剂量的方法，而且随用于疗法的组合物、治疗目的、接受治疗的标靶细胞和接受治疗的受试者而变化。由治疗医师选择的剂量水平和模式来进行单次或多次施药。
本领域技术人员易于确定施用药剂的合适剂量制剂和方法。优选地以约0.01mg/kg至约200mg/kg、更优选地以约0.1mg/kg至约100mg/kg、甚至更优选地以约0.5mg/kg至约50mg/kg来施用化合物。当本文所述的化合物与另一药剂(例如，作为敏化剂)共同施用时，有效量可能比单独使用此药剂时少。
药物组合物可以经口、经鼻内、肠胃外或通过吸入疗法来施用，而且可采用片剂、锭剂、颗粒、胶囊、药丸、安瓶、栓剂或气溶胶形式的形式。它们也可以采用活性成分在含水或不含水的稀释剂中的悬浮液、溶液或乳液、糖浆、颗粒物或散剂的形式。除了本发明的药剂以外，药物组合物还可以含有其它药学活性化合物或多种本发明的化合物。
更具体而言，在本文中也称作活性成分的本发明的药剂可以通过任何合适的途径来施药以用于治疗，所述途径包括(但不限于)经口、直肠、经鼻、局部(包括(但不限于)经皮、气溶胶、经颊和舌下)、阴道、肠胃外(parental)(包括(但不限于)皮下、肌肉内、静脉内和皮内)和经肺。还应了解，优选的途径随接受者的病况和年龄及接受治疗的疾病而变化。
理想的是，药剂应施用到在疾病部位达到活性化合物的峰值浓度。这例如可以通过静脉内注射任选地在盐水中的药剂或例如以含有活性成分的片剂、胶囊或糖浆形式口服来实现。
可以通过连续输注来维持需要的药剂血液水平，从而在患病组织中提供治疗量的活性成分。涵盖使用有效组合来提供需要比单独使用每种个别治疗性化合物或药物时所需要的剂量较低的每种组分药剂总剂量的治疗性组合，由此减少作用。
d.示例性的共同施药途径和给药考量
本发明还包括涉及共同施用本文所述的化合物与一种或多种其它活性剂的方法。实际上，提供通过共同施用本发明的化合物来增强现有技术疗法和/或药物组合物的方法是本发明的另一方面。在共同施药的程序中，药剂可以同时或依次施用。在一个实施方案中，本文所述的化合物在另一活性剂之前施用。医药制剂和施药模式可以是上文所述的任一种。另外，两种或两种以上共同施用的化学剂、生物剂或其它治疗可各自使用不同的模式或不同的制剂来施用。
将要共同施用的药剂取决于接受治疗的病况类型。例如，当接受治疗的病况是细菌感染时，另一药剂可以是已知的抗生素。将要共同施用的其它药剂(诸如抗菌剂、免疫抑制剂、消炎药)可以是本领域中熟知的任何药剂，包括(但不限于)目前临床使用的那些药剂。
e.生物膜标靶制剂
在一些实施方案中，制剂(例如，药物组合物)经过配制来治疗细菌的生物膜。下文描述制剂的实施例。
与许多研究者或在商业产品中目前采用的常常涉及复杂程序的多步骤方法相比，低温等离子体涂层技术提供了一种简单且有成本效益的方法来控制药物释放。在一些实施方案中，通过优化相关的涂层方法参数来调节等离子体涂层，这些参数诸如沉积时间、等离子体电源、单体的质量流速和等离子体反应器内部的工作压力，从而在临床应用中针对不同的药物实现需要的药物释放速率。生物膜抑制剂与等离子体涂层合并使获得广谱抗生物膜活性的机率增加。图10图示说明药物通过不锈钢上的等离子体涂层扩散作为一种例子。药物(生物膜抑制剂)顶上的等离子体产生的涂层充当药物分子和溶剂之间的渗透屏障。在一些实施方案中，等离子体聚合物涂层经过优化来产生适当的交联结构和涂层厚度，因此允许溶剂和水分子扩散通过涂层屏障，最终以需要的释放速率溶解药物分子。
在一些实施方案中，例如利用生物膜抑制剂与生物材料表面的共价连接来抑制在可植入的心血管设备上形成生物膜。
iii.药物筛选
在本发明的一些实施方案中，针对生物活性(例如，阻断生物膜中的金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌的能力)来筛选本发明的化合物和其它潜在有用的化合物。
在一些实施方案中，涵盖基于结构的实际筛选方法来识别金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌抑制剂。举例而言，在一些实施方案中，使用分子建模来识别抑制剂。
在一些实施方案中，针对抑制金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌形成生物膜的能力在细胞培养物中或在体内(例如，非人类或人类哺乳动物)筛选化合物。在一些实施方案中，筛选检测表达或抑制下游信号传递分子的表达。
在一些实施方案中，利用下文实验部分中所述的筛选方法。举例而言，在一些实施方案中，在细菌中进行高通量筛选。在一个实施方案中，利用抗生素抗性或其它标记在大肠杆菌(e.coli)中进行高通量筛选。在其它实施方案中，利用高通量分析。针对抑制金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌生长的能力来筛选化合物。在一些实施方案中，针对杀死或抑制金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌生长或形成生物膜的能力来筛选化合物。在一些实施方案中，进行剂量反应分析。
在一些实施方案中，在动物中进一步筛选在上文的细菌筛选分析中识别的化合物。举例而言，在一些实施方案中，在筛选分析中使用表皮葡萄球菌在生物膜感染中的小鼠模型。
实施例
提供以下实施例来证实和进一步说明本发明的某些实施方案，且不应理解为限制其范畴。
实施例1
识别能够抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在不同的生物材料表面上形成生物膜的一个化学系列的小分子量化合物(表1至4)。这些化合物与现有抗生素或由其它人研发的化合物的不同之处在于它们不杀死细菌或抑制细菌生长，而是改变基因表达的模式，从而使毒性降低。
研发应用于用来制造可植入的医疗设备(尤其是人造心脏瓣膜、起搏器和导尿管)的生物材料表面以在不产生抗性的情况下预防或治疗生物膜形成的其它非杀菌的抗葡萄球菌试剂。这些化合物也可以用来治疗由金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌引起的感染，因为它们抑制多种重要的毒性因子的基因表达。
基于先前证实链激酶(sk)是a群链球菌(gas)感染的重要毒性因子的文件，使用抗毒性方法来筛选可抑制对gas具有低毒性的sk表达的小分子。评估在不阻碍细菌生长的情况下可抑制sk表达的多种小分子。此外，这些化合物可抑制广泛范围的链球菌毒性因子的基因表达(图1a)。一种化合物(ccg-2979)能够保护小鼠免受a群链球菌感染(图1b)。
然后关于葡萄球菌生物膜形成测试这些化合物。在微量滴定盘中测试对金黄色葡萄球菌newman生物膜形成的作用的68种类似物中，两者证实抑制作用一致，无显著细菌抑制生长。在金黄色葡萄球菌菌株rn6390上测试这两种化合物(ccg-203592和ccg-205363)，这种菌株据报道比newman菌株更易于形成生物膜。两种化合物都证实在微量滴定盘中强烈抑制rn6390生物膜形成(对于ccg-203592而言ic50＝2.42±0.14μm，对于ccg-205363而言ic50＝6.96±0.76μm)(图2a和b)，在20μm时不抑制细菌生长。图4中示出了这些抑制剂的结构。
通过实时rt-pcr测试一组金黄色葡萄球菌毒性因子基因对ccg-203592治疗的反应。几种毒性因子基因由ccg-203592下调(图2c)，包括对金黄色葡萄球菌生物膜形成和构建重要的基因(atl和psm)。作为一种重要毒性因子的蛋白质a(spa)也受到抑制，表明小化合物作为抗毒试剂的潜能。ccg-203592对金黄色葡萄球菌基因表达的广泛影响表明它也可以保护宿主免受金黄色葡萄球菌感染，这由其在金黄色葡萄球菌肺部感染模型中保护小鼠的体内功效而得到支持(图2d)。来自同一化学系列的一种类似物(ccg-203043)在不抑制细菌生长的情况下，展示出对表皮葡萄球菌生物膜形成的强烈抑制作用(图2e)。
ccg-203592也使在医疗设备中广泛使用的硅胶片表面上的生物膜形成减少(图3)。
来自ccg-2979系列的几种化合物可抑制金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌生物膜形成，同时也抑制a群链球菌sk基因表达。
在200至300种新的类似物上进行结构活性关系(sar)研究来识别生物膜形成的最有效抑制剂。
合成超过110种与ccg-2979相关的新的类似物。在100μm下分析所有这些的生物膜抑制作用，且仅一个小的子集在不抑制细菌生长的情况下具有抑制生物膜形成的活性：金黄色葡萄球菌(14种类似物)；表皮葡萄球菌(7种类似物)。图4中描绘最有效类似物中的三种。所有21种活性类似物可以被分成由模板a至d表示的四个群集(图5)，且这些中仅两项(a和b，在图5中加框)表示对两种菌株都具有活性的类似物。
合成这两个系列的类似物。图6中呈现a的类似物的示例性合成。在碱性条件(32)下用2-甲基苯甲腈将市售的丙烯酸酯1转化成三环氨基酯2，然后可以在各种条件(33)下用各种异硫氰酸酯进一步环化成硫脲3。
硫经各种烷基化剂烷基化，接着在酸性条件下除去n-boc基团产生中间体二级胺4。最后可以将胺在标准条件下酰化、磺酰化或还原性地烷基化。
基于模板b制备新的类似物遵循相同的通用途径，由丙烯酸二甲酯6和各种烷氧基-2-甲基苯甲腈7开始(图7)。还制备带有模板a和b的重要元素的混合类似物(例如，图7中的e)。这些化合物的合成途径与用于模板a的相同(图6)，用烷氧基-2-甲基苯甲腈7代替2-甲基苯甲腈。
将图6和7中的新类似物整合成生物材料上的多层涂层用来控制释放，从而抑制生物膜形成。替代性的递送方法是使生物膜抑制剂与生物材料表面共价键联，这预期将导致保护作用的持续时间更长。先前已证实，与钛表面共价结合的万古霉素(vancomycin)可有效杀死金黄色葡萄球菌并防止表皮葡萄球菌形成生物膜(21；34)。这可能是因为万古霉素在细胞壁表面工作而非需要渗透到细菌中。
制备已证实抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌形成生物膜的使s-甲氧基乙基移向模板上的其它点(在图8中示出)的ccg-206227的类似物。保持活性的那些类似物表明最可能通过peg连接子与生物材料共价连接，而不损失抗生物膜活性。活性类似物通过较长的peg连接物连接至生物材料。举例而言，如图9中所示实现活性类似物ccg-206227与生物材料的连接。
实施例2
生物膜抑制剂
发现表1至4中所述的化合物可用于抑制各种生物体形成生物膜。
表1示出了对表皮葡萄球菌生物膜的抑制作用。表2示出了对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用。表3示出了在100或50μm下对金黄色葡萄球菌生物膜具有＞20％的抑制作用的化合物。表4示出了在100或50μm下对表皮葡萄球菌生物膜具有＞20％的抑制作用的化合物。
表1.
表2
表3
在100或50um下＞20％抑制金黄色葡萄球菌生物膜
表4.
实施例3
此实施例描述本发明的实施方案的化合物的合成。先前已在专利us20100331351中描述了具有ccg名称102483、102485、102491、102493、102495、102620、102622、203037、203039、203041、203043和203574的化合物的合成；该专利以引用的方式整体并入本文中。具有ccg名称203592、203598、203625、203627、203629、203631、203633、203803、203804、204060、205363、205427、205434、205435、205480、206178、206352、206353、206355、206356和206358的化合物的合成由yestrepsky等人，bioorganicmedicinalchemistry2013，21，1887-1897完整描述并进行光谱表征；其以引用的方式整体并入本文中。下文描述剩余化合物的合成。
化合物的实验和光谱数据
化学。化学名称遵循cas命名法。起始物质从fisher、sigma-aldrichlancaster、fluka或tci-america购买且不进行纯化即使用。所有反应溶剂从fisher购买并原样使用。通过使用预涂硅胶60f254板的tlc监控反应。用从silicycle获得的硅胶(220至240目)进行硅胶色谱法。
仪器。在bruker300mhz、bruker400mhz，varian400mhz或varian500mhz分光计上记录nmr光谱。通过参考氘化溶剂的氢化残留物作为内标物cdcl3：δ＝7.28(1hnmr)或参考四甲基硅烷的氢化残留物δ＝0.00(1hnmr)，以δ(每百万中的份数)来报道化学位移。在利用电喷雾电离模式的micromasslct飞行时间仪器上记录质谱。在mel-temp熔点装置上测量熔点而且不进行修正。
流程a。
制备条目a1(流程a)。如yestrepsky等人，bioorgmedchem2013，21，1880-1897中所述合成5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-4(1h)-酮。1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ(ppm)9.95(s，1h，nh)，9.75(s，1h，nh)，7.57(d，1h，j＝7.7hz)，7.46(t，1h，j＝7.4hz)，7.39(t，1h，j＝7.5hz)，7.28(d，1h，j＝7.5hz)，2.78(s，2h)，1.33(s，6h)。
制备条目a2(流程a)。2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮。使化合物a1(2.7g)和koh(0.59g)在无水etoh(60ml)中的溶液回流30分钟。然后添加2-甲氧基乙基对甲苯磺酸酯(2.41g)在etoh(3ml)中的溶液。使反应回流16h，然后冷却。过滤结晶固体、用etoh(3ml)和水(75ml)洗涤、在抽吸下且然后在高真空下干燥过夜，产生白色固体状的标题化合物，2.65g(80％产率)。
流程b。
制备条目b1。如yestrepsky等人，bioorgmedchem2013，21，1880-1897中所述合成9-甲氧基-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-4(1h)-酮。分离白色粉末，650mg，经过2个步骤的产率是61％。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ(ppm)9.32(s，2h)，7.20(d，j＝8.2hz，1h)，7.00(dd，j＝8.2，2.4hz，1h)，6.97(d，j＝2.4hz，1h)，3.87(s，3h)，2.71(s，2h)，1.32(s，6h)。
制备条目b2a：9-甲氧基-5，5-二甲基-2-((2，2，2-三氟乙基)硫基)-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮。将化合物b1(50mg，0.173mmol)与1，1，1-三氟-2-碘乙烷(91mg，0.433mmol)和碳酸氢钠(22mg，0.260mmol)在dmf(1ml)中合并。将反应加盖并加热至40℃，且使其搅拌16h。此时，用etoac稀释反应并用水和盐水洗涤。使有机萃取物经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩，然后通过快速色谱(5％eh至20％eh)纯化成49mg黄色粉末，76％产率。
制备条目b2b：2-(乙硫基)-9-甲氧基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮。使用碘乙烷作为烷基化剂，以与化合物b2a类似的方式来制备标题化合物。分离181mg白色结晶物质，82％产率。
制备条目b2c：2-((9-甲氧基-5，5-二甲基-4-氧代-3，4，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-2-基)硫基)乙腈。使用α-氯乙腈作为烷基化剂，以与化合物b2a类似的方式来制备标题化合物。分离120mg黄色粉末，71％产率。
流程c。
制备条目c1：如yestrepsky等人，bioorgmedchem2013，21，1880-1897中所述合成1-氨基-3，3-二甲基-3，4-二氢萘-2-甲酸乙酯。分离860mg黄色油状物，41％产率。tlcrf＝0.30(10％etoac/hex)。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ(ppm)7.42(d，j＝8.6hz，1h)，7.36-7.29(m，2h)，7.20(d，j＝7.3hz，1h)，6.35(s，1h)，4.28(q，j＝7.1hz，2h)，2.68(s，2h)，1.37(t，j＝7.1hz，3h)，1.22(s，6h)。
制备条目c2：3-(2-甲氧基乙基)-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-4(1h)-酮。将化合物c1(100mg，0.408mmol)与2-甲氧基异硫氰酸乙酯(96mg，0.815mmol)和乙酸(49mg，0.815mmol)在无水乙醇(0.5ml)中合并，然后加温至70℃并加盖。经3小时以3等份添加另外的2-甲氧基异硫氰酸乙酯(143mg，1.223mmol)，然后使其在70℃下再搅拌16h。此时，将反应在乙酸乙酯和水之间分开。在用另外的乙酸乙酯萃取含水层之后，用水和盐水洗涤合并的有机萃取物，然后经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱进一步纯化产生标题化合物，33％产率(43mg)。
流程d。
制备条目d1：根据yestrepsky等人，bioorgmedchem2013，21，1880-1897中所述的程序合成3-烯丙基-2-(乙硫基)-8-羟基-5，5-二甲基-4a，5，6，10b-四氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮。分离310mg棕褐色固体，43％产率。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ(ppm)7.62(d，j＝8.2hz，1h)，6.85-6.79(m，2h)，5.88(ddt，j＝16.3，10.8，5.9hz，1h)，5.48-5.40(m，2h)，4.86(d，j＝5.9hz，2h)，4.22(q，j＝7.3hz，2h)，2.74(s，2h)，1.59(t，j＝7.3hz，3h)，1.31(s，6h)。
流程e。
制备条目e2：1-氨基-6-溴-3，3-二甲基-3，4-二氢萘-2-甲酸乙酯。向干燥的圆底烧瓶中添加无水二甘醇二甲醚(18ml)并冷却至-78℃。添加二异丙胺(1.45ml、10.2mmol)和正丁基锂(2.5m在己烷中，4.1ml，10.2mmol)。使反应伴随搅拌简单加温至0℃，之后再冷却至-78℃。逐滴缓慢添加4-溴-2-甲基苯甲腈(1.0g，5.1mmol)在二甘醇二甲醚(3ml)中的溶液，导致反应发展成深红色，并使其搅拌20分钟。然后逐滴添加3，3-二甲基丙烯酸乙酯(1.06ml，7.65mmol)。同时，向独立的干燥圆底烧瓶中添加二甘醇二甲醚(6ml)和锌粉(834mg，12.75mmol)。使反应冷却至-78℃，然后缓慢逐份添加碘(2.59g，10.2mmol)。从-78℃的浴中除去混合物并用热风枪柔和加温直至除去所有痕量的碘。使混合物再冷却至-78℃，且然后添加至第一反应容器中。使反应经过2小时的过程加温至室温，然后通过添加饱和nh4cl水溶液淬灭。将水溶液用乙醚萃取5次，然后将合并的有机萃取物用水洗涤5次并用盐水洗涤1次。分离有机层、经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(2％至15％etoac：hex)进一步纯化产生890mg黄色固体状的需要产物，54％产率。
制备条目e3：根据carato等人，tetrahedron2006，62，9054-9058和moriello等人，jmedchem2006，49，2320-2332的方法如下制备1-氨基-6-苯甲酰基-3，3-二甲基-3，4-二氢萘-2-甲酸乙酯：将化合物e2(890mg，2.75mmol)溶解在无水甲苯(27.5ml)中。向此溶液中添加四(三苯基膦)钯(317mg，0.275mmol)和双(三丁基锡)(2.08ml，4.12mmol)。使反应容器在氮气下加热至回流并使其搅拌16h。在减压下除去溶剂并通过快速色谱(0-5％etoac：hex)分离芳基三丁基甲锡烷基中间体，37％产率(547mg)。将此中间体溶解在无水dmf(4.3ml)中，然后添加碘苯(132μl，1.18mmol)和双(三苯基膦)二氯化钯(ii)(38mg，0.054mmol)。使一氧化碳流通过反应混合物起泡5分钟，然后对反应加紧盖子并用co气球固定。将反应加温至90℃并使其搅拌16h。此时，将反应用n2净化10分钟，然后用水稀释。将含水混合物用乙醚萃取3次，然后用水和盐水洗涤合并的有机萃取物。将有机层经mgso4干燥、过滤、在真空中浓缩。通过快速色谱(0-5％etoac：hex)分离产生187mg标题化合物，50％产率(19％经过两个步骤)。
制备条目e4：3-烯丙基-8-苯甲酰基-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-4(1h)-酮。将化合物e3(187mg，0.535mmol)溶解在无水乙醇(0.72ml)中，接着是乙酸(61μl，1.07mmol)和异硫氰酸烯丙酯(104μl，1.14mmol)。将反应加温至70℃并使其搅拌1小时。经3小时以3等份添加另外的异硫氰酸烯丙酯(156μl，1.71mmol)，然后使反应在70℃下再搅拌12小时。此时，通过添加水淬灭反应。将含水层用乙酸乙酯萃取3次，然后用水和盐水洗涤合并的有机萃取物。使有机萃取物经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱进一步纯化产生黄色油状的标题化合物(110mg，37％产率)。
流程f。
制备条目f2：以与条目e2类似的方式由3-甲基异烟腈f1来制备5-氨基-7，7-二甲基-7，8-二氢异喹啉-6-甲酸乙酯。分离500mg浅黄色固体，48％产率。
制备条目f3：3-烯丙基-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢吡啶并[3，4-h]喹唑啉-4(1h)-酮。向0℃的氢化钠60％(0.27g，7.15mmol)在无水dmf(10ml)中的悬浮液中逐滴添加3-异氰硫基丙-1-烯(0.32g，3.25mmol)和f2(0.8g，3.25mmol)在无水dmf(10ml)中的混合物。添加完成后，将混合物搅拌3小时，然后倒入冰水中。用nh4cl酸化。用et2o萃取2次并用etoac萃取1次。将有机萃取物用饱和nacl洗涤并经mgso4干燥。快速色谱提供固体状的3-烯丙基-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢吡啶并[3，4-h]喹唑啉-4(1h)-酮(0.19g，0.64mmol，19.5％产率)。nmr(400mhz，cdcl3)δ8.6(d，j＝4hz，1h)，8.5(s，1h)，7.4(d，j＝4hz，1h)，6.2-6.3(m，1h)，6.1-6.2(m，2h)，5.3-5.4(m，2h)，2.8(s，2h)，1.4(s，6h)。esi+msm/z300.0(m+h+)。
流程g。
制备条目g1：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-4-氧代-3，4，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-8-甲酸。如yestrepsky等人，bioorgmedchem2013，21，1880-1897先前报道来制备化合物g1。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ(ppm)8.18-8.19(m，1h)，8.01-8.05(m，1h)，7.95(brs，1h)，6.20-6.23(m，1h)，5.89-5.94(m，1h)，5.26-5.31(m，2h)，4.58-4.63(m，2h)，3.72-3.78(m，4h)，3.49-3.52(m，2h)，3.42(s，3h)，2.94-2.95(m，2h)，2.80(s，2h)，1.37(s，6h)。esi+msm/z＝400.49(m+h+)。
流程h。
制备条目h2：4-(2-甲氧基-2-氧代亚乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。用无水己烷(2×20ml)洗涤60％nah(3.06g)并在n2气氛下用注射器抽出澄清溶液。将经过洗涤的nah悬浮在无水dmf(100ml)中并冷却至0℃。经20分钟时间向此悬浮液缓慢添加磷酰基乙酸三甲酯(14.1ml)。向溶液中缓慢添加无水dmf(15ml)中的化合物h1(14.0g，78mmol)。温度在0℃下保持20分钟时间，然后使其搅拌同时加温至室温经历3h。此时，用et2o(250ml)稀释反应并用水(100ml)洗涤。用另外的乙醚(40ml)反萃取含水层，然后用水(4×50ml)和盐水(30ml)洗涤合并的有机萃取物。将经过分离的有机层经mgso4干燥、过滤并在减压下除去溶剂来产生结晶固体状的产物。分离16.95g(94％产率)。
制备条目h3：以与条目f2类似的方式来制备3-甲基4-氨基-1h-螺[萘-2，4′-哌啶]-1′，3-二甲酸1′-叔丁酯。在快速色谱后分离5.71g浅黄色固体，34％产率。
制备条目h4：3-烯丙基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，6-四氢-1h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯。向化合物h3(0.813g)在etoh(7ml)中的溶液中添加异硫氰酸烯丙酯(0.43ml)并将反应在85℃下加热1h。另外添加0.2ml异硫氰酸烯丙酯并将反应在85℃下再加热15h。将溶液冷却至室温并将沉淀产物过滤、用etoh洗涤并在空气下干燥，然后在烘箱中干燥经历2h。用200μl异硫氰酸烯丙酯处理滤液并在85℃下加热16h导致其它产物沉淀，将其以相同的方式收集并纯化。分离总计0.575g灰白色固体状的h4(60％产率)。
制备条目h5：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯。向化合物h4(0.25g)在dmf(2.5ml)中的溶液中添加cs2co3(371mg)。将反应混合物搅拌3分钟，然后添加2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯(0.131g)并将反应在70℃下搅拌2h。在减压下除去溶剂并用etoac(5ml)和h2o(4ml)萃取残留物。将经过分离的有机层用h2o(4×2ml)洗涤、经na2so4干燥并在减压下除去溶剂，产生280mg标题化合物(100％产率)。
流程i。
4-氨基-2′，3′，5′，6′-四氢-1h-螺[萘-2，4′-吡喃]-3-甲酸乙酯，i3
经10分钟时间在-78℃下向二异丙胺在无水二甘醇二甲醚(15ml)中的溶液中缓慢添加2.5mn-buli。将反应在此温度下搅拌40分钟以上。然后在-78℃下经15分钟缓慢添加2-甲基苯甲腈(0.69g，5.88毫摩尔)。将反应在同一温度下搅拌15分钟。然后经10分钟时间缓慢添加乙酯i2(1g，5.88毫摩尔在4ml二甘醇二甲醚中)，并将反应在-78℃下搅拌30分钟。添加zni2(1.875g)且使反应缓慢加温至室温并搅拌2h。用饱和氯化铵溶液淬灭反应。添加乙醚(50ml)并在分液漏斗中萃取。再次用乙醚(2×20ml)萃取经过分离的含水层。将合并的有机层用水(3×30ml)洗涤、干燥(mgso4)并在减压下除去溶剂。在70℃旋转蒸发仪中经历3h除去痕量溶剂。通过使用isco-teldyne快速系统的预充填biotage(80g)柱的快速色谱纯化经过分离的粗产物。用10％etoac/己烷洗提柱。在使用50％etoac/己烷作为洗提剂检查tlc后合并各部分。通过从etoac/己烷结晶进一步纯化化合物来产生4-氨基-2′，3′，5′，6′-四氢-1h-螺[萘-2，4′-吡喃]-3-甲酸乙酯i3，0.19g(11.3％)；rf＝0.51(1∶1，etoac/己烷)。
3-烯丙基-2-硫代-2，2′，3，3′，5′，6′-六氢-1h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-吡喃]-4(6h)-酮，i4：向i3(174mg，1毫摩尔)在无水etoh(7ml)中的溶液中添加异硫氰酸烯丙酯(180mg，3毫摩尔)。使反应混合物在n2气氛下回流4h。另外添加0.15g异硫氰酸烯丙酯并使反应在回流下再继续2h。在减压下通过旋转蒸发器除去溶剂，并使用12g预充填silicycle柱对残留物进行色谱分析。用25％etoac/己烷洗提柱来获得标题化合物，45mg(22％)。
流程j。
制备条目j2a：以与用来合成条目e2类似的方式来制备3-甲基4-氨基-1h-螺[萘-2，3′-吡咯烷]-1′，3-二甲酸1′-叔丁酯。分离195mg粘性黄色固体，30％产率。
制备条目j2b：以与用来合成条目e2类似的方式来制备3-甲基4-氨基-7-甲氧基-1h-螺[萘-2，3′-吡咯烷]-1′，3-二甲酸1′-叔丁酯。分离粘性黄色固体(220mg，25％产率)。
制备条目j3a：4-氧代-2-硫代-2，3，4，4a，6，10b-六氢-1h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，3′-吡咯烷]-1′-甲酸叔丁酯。将化合物j2a(190mg，0.530mmol)溶解在无水乙醇(630μl)中，向其中添加苯甲酰基异硫氰酸酯(112mg，0.689mmol)。将溶液加温至75℃并使其搅拌3小时。此时，另外添加苯甲酰基异硫氰酸酯(43mg，0.265mmol)并使溶液在75℃下搅拌过夜。在真空中浓缩反应并再溶解在乙醇和水的溶液(2：1，1.3ml)中。添加氢氧化钾(49mg，0.870mmol)，并将反应加温至75℃并使其搅拌90分钟。通过添加饱和氯化铵水溶液(5ml)使反应停止。将含水层用二氯甲烷萃取3次，然后用饱和碳酸氢铵溶液、水和盐水洗涤合并的有机萃取物。将有机萃取物经mgso4干燥、过滤并在减压下浓缩。通过快速色谱(10-30％etoac：hex)进一步纯化产生114mg白色晶体状的标题化合物(68％产率)。
制备条目j3b：以与条目j3a类似的方式由j2b来制备8-甲氧基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，4a，6，10b-六氢-1h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，3′-吡咯烷]-1′-甲酸叔丁酯。分离275mg白色晶体状的标题化合物(49％产率)。
流程k。
制备条目k1：以与用于条目e2的程序类似的方式由化合物h1和4-甲氧基苯甲腈来制备3-甲基4-氨基-7-甲氧基-1h-螺[萘-2，4′-哌啶]-1′，3-二甲酸1′-叔丁酯。在通过柱色谱纯化并用1∶1的乙醚：己烷湿磨之后，产生白色结晶固体状的标题化合物(1.95g，68％产率)。
制备条目k2：以与用于合成j3a类似的方式由k1来制备8-甲氧基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，6-四氢-1h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯。分离950mg白色固体，48％产率。
制备条目k3：4-(烯丙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯。将中间体k2(940mg，2.19mmol)溶解在二甲基甲酰胺(13ml)中，向其中添加2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯(554mg，2.407mmol)和碳酸氢钠(276mg，3.28mmol)。使反应加温至50℃并使其搅拌过夜。此时，通过添加水使反应停止，接着在乙酸乙酯中萃取3次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，然后在真空中浓缩成黄色固体。用己烷湿磨固体并通过过滤来收集，然后用15ml1∶1的己烷∶乙醚溶液洗涤。收集固体并在高真空下干燥来获得790mg(1.62mmol74％产率)s-烷基化中间体。将此固体再溶解在甲醇(9.5ml)中，向其中添加甲醇钠(175mg，3.24mmol)和烯丙基溴(294mg，2.43mmol)。将反应容器加热至50℃和使其搅拌3小时。通过添加水使反应停止，接着萃取到乙酸乙酯中。将有机层用水和盐水洗涤、然后经mgso4干燥、过滤并浓缩成由n-和o-烷基化异构体组成的无色油。通过快速色谱纯化分离白色结晶状固体的o-烯丙基异构体k3(94mg，8.2％产率，经过2个步骤)。
流程l。
流程m。
流程n。
制备条目n2：根据wymann，syncomm18(1988)1379的程序由3-氧代-3-苯基丙酸乙酯(n1)来制备2-甲基-3-氧代-3-苯基丙酸乙酯。
制备条目n3：根据us2740785中所述的程序，如下由2-甲基-3-氧代-3-苯基丙酸乙酯(n2)来制备5-甲基-6-苯基-2-硫代-2，3-二氢嘧啶-4(1h)-酮：在n2下将化合物n2(10.1g，49.0mmol)逐滴添加到钠(2.25g、98.0mmol)在乙醇(50ml)中的搅拌溶液中，然后一次性添加硫脲(5.2g，68.1mmol)。将混合物加热至回流经历7小时，然后使其冷却。通过旋转蒸发器除去大部分溶剂，并将残留物搅拌到450ml水中。添加浓hcl直到ph为3至4。约一小时之后，滤除沉淀物、用水冲洗并干燥产生白色固体状的产物(7.5g)；mp216-227℃；质谱es+m/z＝219，241(m+1，m+23)。
制备条目n4：2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5-甲基-6-苯基嘧啶-4(3h)-酮。在室温下，在n2下将三异丙胺(0.36g，2.8mmol)添加到来自实施例5-016b步骤2的5-甲基-6-苯基-2-硫代-2，3-二氢嘧啶-4(1h)-酮(0.5g，2.3mmol)在四氢呋喃(5ml)中的搅拌溶液中，并接着在5分钟后一次性添加2-溴乙基甲基醚(0.35g，2.4mmol)。短时间搅拌后，将混合物加热至回流经历18小时、冷却并通过旋转蒸发器除掉溶剂。将残留物在水中搅拌一小时，然后将固体滤除、用水冲洗并干燥。将得到的白色粉末溶解在1.5ml热的二甲基甲酰胺中、过滤、用等体积的乙醇稀释并使其冷却以产生纯产物(0.4g)。mp132-134℃。质谱es+m/z＝277，299(m+1，m+23)；es-m/z＝275(m-1)；1hnmr(500mhz，dmso)δ12.72(bs，1h)，7.67-7.56(m，2h)，7.50-7.43(m，3h)，3.58(t，2h)，3.30(m，2h)，3.25(s，3h)，1.96(s，3h)。
关于实施例化合物1至14的通用程序：向烷基化剂(0.23mmol)在dmf(1ml)中的溶液中添加k2co3(0.57毫摩尔)和化合物a2(0.19mmol)。将溶液在室温下搅拌20h。在减压下除去溶剂并用etoac(3ml)和水(1ml)萃取残留物。将分离的有机层用水(1ml)洗涤、干燥(mgso4)并在减压下除去溶剂，产生粗化合物，通常是n-和o-烷基化异构体的混合物。分离粗混合物并通过使用etoac/己烷的快速色谱纯化。
实施例化合物1：3-(2-(4-氟苯氧基)乙基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并-[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-204027)：59mg(69％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.03(d，1h，j＝7.5hz)，7.28-7.36(m，2h)，7.16(d，1h，j＝6.6hz)，6.90-6.96(m，2h)，6.82-6.89(m，2h)，4.44(t，2h，j＝6.2hz)，4.25(t，2h，j＝6.2hz)，3.75(t，2h，j＝6.2hz)，3.54(t，2h，j＝6.2hz)，3.40(s，3h)，2.8(s，2h)和1.35(s，6h)；ms(esi+)：m+h，455.2
实施例化合物2：3-((1，3-二氧戊环-2-基)甲基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-204029)。9mg(12％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.05(d，1h，j＝7.6hz)，7.25-7.35(m，2h)，7.16(m，1h)，5.41(t，1h，j＝4.9hz)，4.2(d，2h，j＝4.9hz)，4.05-4..10(m，2h)，3.85-3.95(m，2h)，3.75(t，2h，j＝6.3hz)，3.53(t，2h，j＝6.3hz)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物3：4-(2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-4-氧代-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-3(4h)-基)丁腈(ccg-204031)。21mg(29％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.03(d，1h，j＝7.6hz)，7.28-7.37(m，2h)，7.18(d，1h，j＝6.97hz)，4.16(d，2h，j＝7.42hz)，3.76(t，2h，j＝6.1hz)，3.53(t，2h，j＝6.2hz)，2.78(s，2h)，2.46(t，2h，j＝7.4hz)，2.15(qt、2h，j＝7.4hz)和1.3(s，6h)。
实施例化合物4：3-(4-甲氧基苯甲基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-204036)：14mg(34％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.04(d，1h，j＝7.6hz)，7.28-7.35(m，4h)，7.16(d，1h，j＝6.9hz)，6.83(d，2h，j＝8.7hz)，5.24(s，2h)，3.77(s，3h)，3.72(t，2h，j＝6.2hz)，3.49(t，2h，j＝6.2hz)，3.39(s，3h)，2.8(s，2h)和1.32(s，6h)；ms(esi+)：m+h，437.2。
实施例化合物5：2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-3-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯甲基)-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-205387)：48mg(44％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.08(dd，1h，j＝7.5&1.5hz)，8.03(d，2h，j＝8.5hz)，7.44(d，2h，j＝8.5hz)，7.30-7.38(m，2h)，7.19(d，1h，j＝7.1hz)，5.36(s，2h)，3.73(t，2h，j＝6.2hz)，3.50(t，2h，j＝6.2hz)，3.39(s，3h)，2.82(s，2h)，2.64(s，3h)和1.41(s，6h)；ms(esi+)：m+h，489.2。
实施例化合物6：3-(3-羟基丙基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-205390)。22mg(27％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.06(d，1h，j＝7.5hz)，7.29-7.38(m，2h)，7.19(d，1h，j＝7.2hz)，4.28(t，2h，j＝6.1hz)，3.78(t，4h，j＝6.1hz)，3.51-3.57(m，5h)，3.43(s，3h)，2.78(s，2h)，2.0(m，3h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物7：3-(环丙基甲基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-205444)，10h：39mg(48％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.07(d，1h，j＝7.1hz)，7.28-7.37(m，2h)，7.19(d，1h，j＝5.8hz)，4.00(d，2h，j＝7.1hz)，3.78(t，2h，j＝6.2hz)，3.55(t，2h，j＝6.2hz)，3.42(s，3h)，2.8(s，2h)，1.3(s，7h)和0.53(d，4h，j＝6.5hz)。
实施例化合物8：4-(2-(4-氟苯氧基)乙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉(ccg-204028)。26mg(30％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.05(d，1h，j＝7.42hz)，7.28-7.36(m，2h)，7.15(m，1h)，6.93-7.0(m，2h)，6.82-6.89(m，2h)，4.73(t，2h，j＝4.8hz)，4.27(t，2h，j＝4.8hz)，3.73(t，2h，j＝6.8hz)，3.38-3.45(m，5h)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物9：4-((1，3-二氧戊环-2-基)甲氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉(ccg-204030)。34mg(45％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.20(d，1h，j＝7.15hz)，7.26-7.37(m，2h)，7.15(m，1h)，5.29(t，1h，j＝4.03hz)，4.46(d，2h，j＝4.04hz)，3.90-4.05(m，4h)，3.72(t，2h，j＝6.8hz)，3.35-3.43(m，5h)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物10：4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉(ccg-204033)。10mg(24％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.20(d，1h，j＝7.1hz)，7.28-7.35(m，2h)，7.15(d，1h，j＝6.6hz)，4.57(t，2h，j＝4.9hz)，3.86(t，2h，j＝4.9hz)，3.72(t，2h，j＝6.9hz)，3.65-3.8(m，2h)，3.35-3.43(m，8h)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物11：4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉(ccg-204037)。12mg(29％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.20(d，1h，j＝7.0hz)，7.26-7.4(m，5h)，7.15(d，1h，j＝6.6hz)，6.9(m，2h)，5.4(s，2h)，3.81(s，3h)，3.73(t，2h，j＝6.9hz)，3.38-3.43(m，5h)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物12：1-(3，4-二氟苯基)-2-((2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉-4-基)氧基)乙酮(ccg-204040)。52mg(50％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.19(dd，1h，j＝7.5&1.3hz)，7.73-7.84(m，2h)，7.24-7.38(m，3h)，7.17(d，1h，j＝6.4hz)，5.6(s，2h)，3.61(t，2h，j＝6.8hz)，3.32(s，3h)，3.26(t，2h，j＝6.8hz)，2.8(s，2h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物13：3-((2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4-基)氧基)丙-1-醇(ccg-205384)。14mg(17％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.22(dd，1h，j＝7.2&1.7hz)，7.3-7.38(m，2h)，7.17(d，1h，j＝5.8hz)，4.59(t，2h，j＝6.2hz)，3.7-3.82(m，4h)，3.39-3.46(m，5h)，2.8(s，2h)，2.05(m，3h)和1.3(s，6h)。
实施例化合物14。4-(环丙基甲氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉(ccg-205445)：36mg(44％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.07(dd，1h，j＝7.1&1.9hz)，7.29-7.37(m，2h)，7.19(d，1h，j＝6.6hz)，4.23(d，2h，j＝7.2hz)，3.74(t，2h，j＝6.9hz)，3.42(s，3h)，3.40(t，2h，j＝6.9hz)，2.81(s，2h)，1.36(s，6h)1.30(m，1h)，0.60(m，2h)和0.35(m，2h)；ms(esi+)：m+h，371.2。
实施例化合物15：9-甲氧基-3，5，5-三甲基-2-((2，2，2-三氟乙基)硫基)-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-211790)。以与实施例1一致的方式由b2a和甲苯磺酸甲酯来合成。分离32mg(57％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ7.62(d，j＝2.6hz，1h)，7.10(d，j＝8.2hz，1h)，6.93(dd，j＝8.2，2.6hz，1h)，4.18(q，j＝9.7hz，2h)，3.85(s，3h)，3.56(s，3h)，2.73(s，2h)，1.37(s，6h)。
实施例化合物16：2-((3-(氰基甲基)-9-甲氧基-5，5-二甲基-4-氧代-3，4，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-2-基)硫基)乙腈(ccg-212012)。以与实施例1一致的方式由b2c和α-氯乙腈来合成。分离15mg(22％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.76(d，j＝2.6hz，1h)，7.12(d，j＝8.2hz，1h)，6.97(dd，j＝8.2，2.6hz，1h)，4.96(s，2h)，4.10(s，2h)，3.88(s，3h)，2.75(s，2h)，1.37(s，6h)。
实施例化合物17：2-(乙硫基)-4，9-二甲氧基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉(ccg-211793)。以与实施例1一致的方式由b2b和对甲苯磺酸甲酯来合成。分离18mg(31％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ7.81(d，j＝2.7hz，1h)，7.08(d，j＝8.2hz，1h)，6.91(dd，j＝8.2，2.7hz，1h)，4.00(s，3h)，3.87(s，3h)，3.21(q，j＝7.3hz，2h)，2.73(s，2h)，1.48(t，j＝7.3hz，3h)，1.30(s，6h)。
实施例化合物18：2-((4-(烯丙氧基)-9-甲氧基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-2-基)硫基)乙腈(ccg-212010)。以与实施例1一致的方式由b2c和烯丙基溴来合成。分离22mg(33％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.83(d，j＝2.7hz，1h)，7.08(d，j＝8.2hz，1h)，6.93(dd，j＝8.2，2.7hz，1h)，6.08(ddt，j＝16.7，10.6、5.6hz，1h)，5.41(dd，j＝16.7，1.4hz，1h)，5.29(dd，j＝10.6，1.1hz，1h)，4.96(d，j＝5.6hz，2h)，3.90-3.85(m，5h)，2.74(s，2h)，1.34(s，6h)。
实施例化合物19：2-((4-(氰基甲氧基)-9-甲氧基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-2-基)硫基)乙腈(ccg-212011)。以与实施例1一致的方式由b2c和α-氯乙腈来合成。分离26mg(39％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.84(d，j＝2.7hz，1h)，7.12(d，j＝8.3hz，1h)，6.98(dd，j＝8.3，2.7hz，1h)，5.12(s，2h)，3.92(s，2h)，3.89(s，3h)，2.78(s，2h)，1.34(s，6h)。
实施例化合物20：2-(乙硫基)-3-(2-甲氧基乙基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-203802)。以与制备h5类似的方式使用碘乙烷作为烷基化剂由c2来制备(27mg，58％产率)。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ8.11(dd，j＝7.5，1.5，1h)，7.35(td，j＝7.5，1.5，1h)，7.31(td，j＝7.5，1.5，1h)，7.18(d，j＝6.9，1h)，4.26(t，j＝6.4，2h)，3.71(t，j＝6.4，2h)，3.40(s，3h)，3.32(q，j＝7.4，2h)，2.79(s，2h)，1.48(t，j＝7.4，3h)，1.38(s，6h)。tofes+ms：345.2(m+h)，367.2(m+na)。
实施例化合物21：3-烯丙基-8-(2-(二乙氨基)乙氧基)-2-(乙硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]-喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-205396)。向3-烯丙基-2-(乙硫基)-8-羟基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(0.03g，0.09mmol)在二甲基甲酰胺中的搅拌溶液中添加碳酸铯(0.10g，0.32mmol)，并在5分钟后添加2-(二乙氨基)-乙基氯盐酸盐(0.02g，0.11mmol)。18小时后，在室温下用水稀释混合物并搅拌90分钟，然后用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取物用水洗涤，然后用饱和盐水洗涤，并经mgso4干燥。在减压下除去溶剂，留下浅黄色胶状的产物(0.03g)；质谱es+m/z＝442(m+1)；1hnmr(500mhz，dmso)δ8.00(d，1h)，6.91(dd，1h)，6.85(s，1h)，5.96-5.74(m，1h)，5.21(d，1h)，5.13(d，1h)，4.59(d，2h)，4.07(t，2h)，3.29(q，2h)，2.78(t，2h)，2.75(s，2h)2.56(q，4h)，1.39(t，3h)，1.29(s，6h)，0.98(t，6h)。
实施例化合物22：3-烯丙基-2-(乙硫基)-8-异丁氧基-5，5-二甲基-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-205426)。以与用于实施例21类似的方式来制备。产率：72％；质谱es+m/z＝399，421(m+1，m+23)。1hnmr(500mhz，dmso)δ8.05(d，1h)，6.96(d，1h)，6.90(s，1h)，5.92(m，1h)，5.27(d，1h)，5.18(d，1h)，4.64(d，2h)，3.87(d，2h)，3.34(q，2h)，2.80(s，2h)，2.09(h、1h)，1.44(t，3h)，1.34(s，6h)，1.05(d，6h)。
实施例化合物23：2-(2-((3-烯丙基-2-(乙硫基)-5，5-二甲基-4-氧代-3，4，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-8-基)氧基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(ccg-206176)。以与用于实施例21类似的方式来制备。产率28％。1hnmr(500mhz，dmso)δ7.92(d，1h)，7.87-7.79(m，4h)，6.83(d，1h)，6.76(s，1h)，5.85-5.75(m，1h)，5.17(d，1h)，5.08(d，1h)，4.52(d，2h)，4.23(t，2h)，3.95(t，2h)，3.23(q，2h)，2.65(d，2h)，1.33(t，3h)，1.21(s，6h)。
实施例化合物24：3-烯丙基-8-苯甲酰基-5，5-二甲基-2-(丙-2-炔-1-基硫基)-5，6-二氢苯并[h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-204080)。以与实施例20类似的方式使用溴丙炔作为烷基化剂来制备。分离23mg(70％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.27(d，j＝8.0hz，1h)，7.83(d，j＝7.6hz，2h)，7.73(d，j＝8.0hz，1h)，7.66(s，1h)，7.61(t，j＝7.6hz，1h)，7.51(t，j＝7.6hz，2h)，5.97-5.87(m，1h)，5.35-5.27(m，2h)，4.68(d，j＝5.5hz，2h)，4.07(d，j＝2.6hz，2h)，2.87(s，2h)，2.27(t，j＝2.6hz，1h)，1.41(s，6h)。
实施例化合物25：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-5，6-二氢吡啶并[3，4-h]喹唑啉-4(3h)-酮(ccg-204041)。向3-烯丙基-5，5-二甲基-2-硫代-2，3，5，6-四氢吡啶并[3，4-h]喹唑啉-4(1h)-酮(0.1g，0.33mmol)在dmf(10ml)中的溶液中添加碳酸铯(0.22g，0.67mmol)，接着添加2-甲氧基4-甲基苯磺酸乙酯(0.09g，0.40mmol)。将得到的混合物在40℃下搅拌3小时。冷却并浓缩。在2mhcl和etoac之间分开。分离各层并用etoac再次萃取含水相。用mgso4干燥。过滤并浓缩。通过快速色谱(etoac/己烷)纯化。浓缩提供标题化合物(0.01g，0.03mmol，8.5％产率)。nmr(400mhz，cdcl3)δ8.62(d，j＝4hz，1h)，8.51(s，1h)，7.87(d，j＝4hz，1h)，5.90-5.97(m，1h)，5.30-5.34(m，2h)，4.72(d，j＝4.5hz，2h)，3.77(t，2h)，3.57(t，2h)，3.46(s，3h)，2.82(s，2h)，1.44(s，6h)。esi+msm/z358.1(m+h+)。
实施例化合物26：3-烯丙基-n-(2-羟乙基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-4-氧代-1，2，3，4，5，6-六氢苯并[h]喹唑啉-8-甲酰胺(ccg-206239)。向3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5，5-二甲基-4-氧代-3，4，5，6-四氢苯并[h]喹唑啉-8-甲酸(0.05g，0.13mmol)、edc(0.03g，0.15mmol)、hobt(0.02g，0.15mmol)在无水thf中的溶液中添加乙醇胺(0.009g，0.15mmol)。使其在室温下搅拌过夜。通过添加水淬灭反应，然后萃取到乙酸乙酯中。用饱和碳酸钠溶液、水和盐水洗涤，然后将有机层经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(20-70％etoac：hex)纯化分离标题化合物。(36％产率)nmr(400mhz，cdcl3)δ8.18-8.19(m，1h)，8.01-8.05(m，1h)，7.95(brs，1h)，6.20-6.23(m，1h)，5.89-5.94(m，1h)，5.26-5.31(m，2h)，4.58-4.63(m，2h)，3.72-3.78(4h，m)，3.49-3.52(m2h)，3.42(s，3h)，2.94-2.95(m，2h)，2.80(s，2h)，1.37(s，6h)。esi-msm/z443.2(m+h+)。
实施例化合物27：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-205447)：向化合物(50mg)在dcm(2.5ml)中的溶液中添加tfa(0.25ml)。将反应混合物在室温下搅拌1h。tlc指示起始物质完全消失。将反应混合物用饱和nahco3(2×1ml)溶液和水(2×1ml)洗涤、经na2so4干燥、过滤并在减压下除去溶剂来产生产物。3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮，17：0.20g(91％)。1hnmr(cdcl3/tms)δ8.07(d，1h，j＝7.5hz)，7.30-7.39(m，2h)，7.23(d，1h，j＝7.1hz)，5.94(m，1h)，5.28(m，2h)，4.69(d，2h，j＝5.6hz)，3.76(t，2h，j＝6.2hz)，3.53(t，2h，j＝6.2hz)，3.4(s，3h)，3.12(s，2h)，2.96(m，4h)，2.75(m，2h)，2.17(s，1h)和1.35(d，2h，j＝13.3hz)。
关于实施例化合物28至31的通用酰化程序：向化合物17(0.09至0.126毫摩尔)在dcm0.7ml中的溶液中添加酰氯(1当量，在accl的情况下是7当量)和tea(1.2至3当量)并将反应混合物在室温下搅拌2h。tlc指示形成产物。通过添加1mldcm稀释反应。将有机层用1nhcl(1ml)洗涤，接着用h2o(2×1ml)洗涤，干燥(na2so4)、倾析并在减压下除去溶剂以产生粗化合物。通过使用etoac/己烷的快速色谱来纯化粗化合物。
实施例化合物28：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-1′-戊酰基-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-206227)：36mg(59％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.07(d，1h，j＝7.5hz)，7.32-7.39(m，2h)，7.22(d，1h，j＝7.0hz)，5.91(m，1h)，5.28(m，2h)，4.69(d，2h，j＝5.5hz)，4.38(d，1h，j＝13.2hz)，3.74-3.84(m，3h)，3.54(t，2h，j＝6.2hz)，3.33-3.44(m，4h)，3.17(d，1h，j＝17.6hz)，2.98-3.06(m，2h)，2.88-2.97(m，1h)，2.48(td，1h，j＝13.2&4.8hz)，2.33(t，2h，j＝7.1hz)，1.58-1.7(m，2h)，1.32-1.48(m，4h)和0.93(t，3h，j＝7.3hz)。
实施例化合物29：1′-乙酰基-3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-206230)：28mg(66％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.08(d，1h，j＝7.5hz)，7.33-7.41(m，2h)，7.22(d，1h，j＝7.0hz)，5.91(m，1h)，5.28(m，2h)，4.68(m，2h)，4.38(d，1h，j＝13.6hz)，3.76(m，3h)，3.54(t，2h，j＝6.2hz)，3.35-3.44(m，4h)，3.16(d，1h，j＝15.7hz)，2.98-3.06(m，2h)，2.88-2.97(m，1h)，2.48(td，1h，j＝13.2&5.0hz)，2.10(s，3h)和1.43(m，2h)。
实施例化合物30：3-烯丙基-1′-苯甲酰基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-206231)：16mg(33％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.08(d，1h，j＝7.3hz)，7.44-7.48(m，2h)，7.33-7.41(m，5h)，7.22(d，1h，j＝6.6hz)，5.93(m，1h)，5.29(m，2h)，4.70(d，2h，j＝15.5hz)，4.46-4.56(m，1h)，3.76(t，3h，6.2hz)，3.55(t，2h，j＝6.2hz)，3.42(s，3h)，3.28-3.38(m，1h)，2.96-3.25(m，4h)，2.58-2.69(m，1h)和1.32-1.56(m，2h)。
实施例化合物31：3-烯丙基-1′-(4-氯苯甲酰基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-206235)：33mg(75％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.08(dd，1h，j＝7.5&1.5hz)，7.34-7.43(m，6h)，7.23(d，1h，j＝6.9hz)，5.92(m，1h)，5.30(m，2h)，4.70(d，2h，j＝5.5hz)，4.47-4.52(m，1h)，3.77(t，3h，6.2hz)，3.70(m，1h)，3.55(t，2h，j＝6.2hz)，3.42(s，3h)，2.98-3.40(m，4h)，2.6(m，1h)和1.32-1.55(m，2h)；ms(esi+)：m+h，536.2&538.2。
实施例化合物32：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲醛(ccg-206234)：在室温下向化合物17(0.043)在甲苯(0.2ml)中的溶液中添加dbu(0.01ml)并将反应混合物在室温下搅拌2h。tlc指示产物形成以及存在起始物质。将其在室温下再搅拌15h。添加粉末状khso4(50mg)并将混合物搅拌一小时。过滤反应混合物并除去溶剂。将残留物涂在硅胶柱(4g)上并以每分钟12ml经120ml的16-90％etoac/己烷梯度洗提。分离13mg(28％产率)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.09(dd，1h，j＝7.3&1.4hz)，8.04(s，1h)，7.33-7.42(m，2h)，7.24(d，1h，j＝7.0hz)，5.91(m，1h)，5.29(m，2h)，4.68(m，2h)，4.27(dd，1h，j＝13.7&5hz)，3.76(t，2h，6.2hz)，3.54(t，3h，j＝6.2hz)，3.43(s，3h)，3.35-3.41(m，1h)，3.18(d，1h，j＝15.7hz)，3.07(d，1h，j＝15.6hz)，3.00(td，1h，j＝12.9&5.2hz)，2.92(td，1h，j＝13.4&3.3hz)，2.59(td，1h，j＝13.4&5.3hz)和1.40-1.50(m，2h)。
实施例化合物33。3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-2′，3′，5′，6′-四氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-吡喃]-4(6h)-酮，(ccg-205453)：向化合物(40mg，0.12毫摩尔)在dmf(0.7ml)中的溶液中添加cs2co3(77mg，0.24毫摩尔)。将反应混合物搅拌3分钟。然后添加2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯(30mg，0.12毫摩尔)并将反应在70℃下搅拌3h。tlc指示反应完成。在减压下除去溶剂并用etoac(2ml)和h2o(2ml)萃取残留物，将分离的有机层用h2o(2×1ml)洗涤、干燥(na2so4)并在减压下除去溶剂以产生粗产物。通过使用4gsilicycle柱的快速色谱将其纯化。首先以每分钟12ml用4％etoac/dcm将柱洗提2分钟，接着用4-20％梯度的梯度经60ml洗提。在tlc后收集需要的部分，并在减压下除去溶剂以产生纯化产物。产量：39mg(83％)；rf＝0.59(1∶1，etoac/己烷)。1hnmr(cdcl3/tms)δ8.09(d，1h，j＝7.4hz)，7.3-7.4(m，2h)，7.24(d，1h，j＝7.1hz)，5.94(m，1h)，5.29(m，2h)，4.70(d，2h，j＝6.6hz)，3.7-3.88(m，6h)，3.54(t，2h，6.2hz)，3.41(s，3h)，3.18(s，2h)，3.01(td，2h，j＝13&6.3hz)和1.27(d，2h，j＝13.5hz)；ms(esi+)：m+h，399.2&m+na，421.2。
实施例化合物34：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，3′-吡咯烷]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-208860)。以与合成条目k3类似的方式使用j3a作为起始物质且使用2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯和烯丙基溴作为第一和第二烷基化剂来制备化合物。分离40mg(30％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ8.10(t，j＝7.2hz，1h)，7.41-7.30(m，2h)，7.19(d，j＝7.2hz，1h)，5.92(d，j＝5.6hz，1h)，5.30(d，j＝18.7hz，2h)，4.69(d，j＝4.9hz，2h)，3.99(dd，j＝32.9、10.8hz，1h)，3.76(t，j＝6.1hz，2h)，3.63-3.45(m，4h)，3.42(s，3h)，3.27(dd，j＝39.4、10.4hz，1h)，2.96(q，j＝15.9hz，3h)，1.70-1.62(m，1h)，1.45(d，j＝15.7hz，9h)。
实施例化合物35：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，3′-吡咯烷]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-208864)。以与合成条目k3类似的方式，使用j3b作为起始物质且使用2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯和烯丙基溴作为第一和第二烷基化剂来制备化合物。分离68mg(20％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ8.03(d，j＝8.4hz，1h)，6.85(d，j＝8.7hz，1h)，6.70(s，1h)，5.89(s，1h)，5.28(d，j＝19.5hz，2h)，4.67(d，j＝4.9hz，2h)，3.97(dd，j＝43.4，10.2hz，1h)，3.85(s，3h)，3.74(t，j＝6.1hz，2h)，3.62-3.43(m，4h)，3.41(s，3h)，3.25(dd，j＝40.4，10.6hz，1h)，3.15-2.83(m，3h)，1.70-1.59(m，1h)，1.44(d，j＝14.0hz，9h)。
实施例化合物36：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，3′-吡咯烷]-4(6h)-酮盐酸盐(ccg-208865)。将实施例35(30mg，0.058mmol)溶解在4mhcl-二噁烷中并将混合物搅拌1小时，导致白色固体沉淀。通过过滤收集固体并用冷乙醚洗涤，然后在真空下干燥。分离20mg(76％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ11.62(s，1h)，8.16(s，1h)，8.03(d，j＝8.4hz，1h)，6.90(d，j＝8.4hz，1h)，6.81(s，1h)，5.97-5.80(m，1h)，5.38-5.20(m，2h)，4.78-4.59(m，2h)，4.05-3.92(m，1h)，3.88(s，3h)，3.75(t，j＝6.0hz，3h)，3.65-3.51(m，3h)，3.42(s，3h)，3.38-3.16(m，2h)，2.87(s，1h)，2.26-1.99(m，2h)。
实施例化合物37：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-206660)。以与合成条目k3类似的方式，使用2-甲氧基对甲苯磺酸乙酯和烯丙基溴作为第一和第二烷基化剂来制备化合物。分离49mg(40％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ9.97(s，1h)，8.74(s，1h)，8.01(d，j＝8.6hz，1h)，6.87(d，j＝8.6hz，1h)，6.79(s，1h)，5.95-5.83(m，1h)，5.28-5.19(m，2h)，4.68(d，j＝4.2hz，2h)，3.87(s，3h)，3.75(t，j＝6.1hz，2h)，3.53(t，j＝6.1hz，2h)，3.50-3.43(m，2h)，3.42(s，3h)，3.36-3.21(m，2h)，3.02(s，2h)，2.99-2.84(m，2h)，1.69(d，j＝13.7hz，2h)。
实施例化合物38：3-烯丙基-2-(乙硫基)-8-甲氧基-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-206663)。以与条目k3类似的方式，使用碘乙烷、然后使用烯丙基溴作为烷基化剂来合成。分离30mg(52％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ8.05(d，j＝8.6hz，1h)，6.86(dd，j＝8.6，2.4hz，1h)，6.74(d，j＝2.4hz，1h)，5.92(ddt，j＝15.9，10.8，5.5hz，1h)，5.30-5.22(m，2h)，4.65(d，j＝5.5hz，2h)，4.07-3.89(m，2h)，3.86(s，3h)，3.30(q，j＝7.3hz，2h)，3.19-2.86(m，5h)，2.69-2.52(m，1h)，1.51-1.42(m，12h)，1.42-1.32(m，2h)。
实施例化合物39：2-((氰基甲基)硫基)-8-甲氧基-3-甲基-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-211811)。将化合物k2(500mg，1.16mmol)溶解在dmf(7ml)中，向其中添加碳酸氢钠(108mg，1.28mmol)和a-氯乙腈(78μl，1.222mmol)。使溶液在室温下搅拌3小时，此时用水(30ml)稀释反应，使黄色固体沉淀。通过真空过滤收集此固体，并用水和己烷洗涤。在高真空下干燥产生s-烷基化的中间体(490mg，90％产率)。将一部分此固体(170mg，0.36mmol)再溶解在dmf(2ml)中。向此溶液中添加碳酸铯(142mg，0.44mmol)和甲苯磺酸甲酯(74mg，0.40mmol)。使反应加温至50℃并使其搅拌过夜。通过添加水使反应停止，并用乙酸乙酯将含水的混合物萃取2次。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤、然后经mgso4干燥、过滤并浓缩成n-和o-烷基化产物的粗混合物。通过快速色谱(10-40％etoac：hex)进一步纯化产生白色固体状的n-烷基化产物(26mg，15％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.11(d，j＝8.6hz，1h)，6.89(dd，j＝8.6，2.5hz，1h)，6.74(d，j＝2.5hz，1h)，4.06(s，2h)，4.04-3.90(m，2h)，3.87(s，3h)，3.49(s，3h)，3.17-2.93(m，4h)，2.93-2.75(m，1h)，2.72-2.52(m，1h)，1.47(s，9h)，1.43-1.33(m，2h)。
实施例化合物40：2-((氰基甲基)硫基)-4，8-二甲氧基-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-211810)。通过快速色谱从粗反应混合物分离化合物以产生实施例39。分离29mg(17％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.19(d，j＝8.6hz，1h)，6.89(dd，j＝8.6，2.6hz，1h)，6.73(d，j＝2.6hz，1h)，4.10-3.85(bm，2h)，4.03(s，3h)，3.92(s，2h)，3.86(s，3h)，3.13-3.00(m，4h)，2.46(s，2h)，1.49(s，9h)，1.46(s，2h)。
实施例化合物41：4-(氰基甲氧基)-2-((氰基甲基)硫基)-8-甲氧基-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(ccg-211812)。以与实施例39类似的方式，使用a-氯乙腈作为第一和第二烷基化剂来合成。分离49mg(24％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.21(d，j＝8.6hz，1h)，6.90(dd，j＝8.6，2.5hz，1h)，6.75(d，j＝2.5hz，1h)，5.11(s，2h)，4.09-3.96(m，2h)，3.93(s，2h)，3.88(s，3h)，3.15-3.01(m，4h)，2.46-2.27(m，2h)，1.56-145(m，11h)。
实施例化合物42：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮盐酸盐(ccg-206661)。以与实施例36类似的方式，使用实施例化合物37作为起始物质来合成化合物。分离16mg(82％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ9.97(s，1h)，8.74(s，1h)，8.01(d，j＝8.6hz，1h)，6.87(d，j＝8.6hz，1h)，6.79(s，1h)，5.95-5.83(m，1h)，5.28-5.19(m，2h)，4.68(d，j＝4.2hz，2h)，3.87(s，3h)，3.75(t，j＝6.1hz，2h)，3.53(t，j＝6.1hz，2h)，3.50-3.43(m，2h)，3.42(s，3h)，3.36-3.21(m，2h)，3.02(s，2h)，2.99-2.84(m，2h)，1.69(d，j＝13.7hz，2h)。
实施例化合物43：3-烯丙基-2-(乙硫基)-8-甲氧基-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮盐酸盐(ccg-206664)。以与实施例36类似的方式，使用实施例化合物38作为起始物质来合成化合物。分离17mg(89％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ9.98(s，1h)，8.77(s，1h)，8.05(d，j＝8.6hz，1h)，6.87(dd，j＝8.6、1.9hz，1h)，6.78(s，1h)，6.01-5.79(m，1h)，5.32-5.13(m，2h)，4.66(d，j＝4.7hz，2h)，3.87(s，3h)，3.55-3.41(m，2h)，3.35-3.22(m，4h)，3.02(s，2h)，2.98-2.85(m，2h)，1.69(d，j＝14.2hz，2h)，1.47(t，j＝7.3hz，3h)。
实施例化合物44：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-1′-甲基-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-208981)。将实施例化合物42(30mg，0.065mmol)溶解在1，2-二氯乙烷(400μl)中，然后添加乙酸(5μl，0.080mmol)、多聚甲醛(10mg，0.33mmol)、和三乙酰氧基硼氢化钠(21mg，0.100mmol)。使溶液在室温下搅拌12小时，然后通过添加饱和碳酸钠水溶液淬灭。将反应用dcm萃取两次，然后将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤、经mgso4干燥、过滤并浓缩。通过快速色谱(0-20％甲醇：dcm)进一步纯化产生粘性黄色油状的标题化合物(22mg，77％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ8.01(d，j＝8.6hz，1h)，6.84(dd，j＝8.6，2.3hz，1h)，6.74(d，j＝2.3hz，1h)，5.91(ddt，j＝16.2，11.0，5.7hz，1h)，5.33-5.21(m，2h)，4.67(d，j＝5.7hz，2h)，3.86(s，3h)，3.75(t，j＝6.3hz，2h)，3.51(t，j＝6.3hz，2h)，3.42(s，3h)，3.00(s，2h)，2.98-2.89(m，2h)，2.74(d，j＝11.6hz，2h)，2.64(s，2h)，2.34(s，3h)，1.36(d，j＝13.5hz，2h)。
实施例化合物45：3-烯丙基-1′-苯甲基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-4(6h)-酮(ccg-208982)。以与化合物44类似的方式，使用苯甲醛作为偶合伙伴来合成。分离23mg(57％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ7.99(d，j＝8.8hz，1h)，7.64-7.51(m，2h)，7.44-7.29(m，3h)，6.88-6.81(m，2h)，5.98-5.85(m，1h)，5.34-5.24(m，2h)，4.71(d，j＝5.0hz，2h)，3.85(s，3h)，3.75(t，j＝6.2hz，2h)，3.53(t，j＝6.2hz，2h)，3.42(s，3h)，3.31-3.04(m，4h)，3.06-2.93(m，3h)，1.90-1.61(m，5h)。
实施例化合物46：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-n-甲基-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酰胺(ccg-211970)。将实施例化合物42(30mg，0.070mmol)溶解在dcm(350μl)中，然后添加o-琥珀酰亚胺基氨基甲酸甲酯(24mg，0.140mmol)和dipea(18μl，0.105mmol)。使溶液在室温下搅拌6小时。通过添加水使反应停止，接着萃取到dcm中。将有机萃取物用水和盐水洗涤、然后经mgso4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(20-70％etoac：hex)纯化分离需要的白色粉末状的化合物(22mg，65％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.02(d，j＝8.6hz，1h)，6.86(dd，j＝8.6，2.5hz，1h)，6.74(d，j＝2.5hz，1h)，5.91(ddt，j＝15.9，10.7，5.6hz，1h)，5.31-5.23(m，2h)，4.67(d，j＝5.6hz，2h)，4.42(d，j＝4.6hz，1h)，3.86(s，3h)，3.82-3.72(m，4h)，3.52(t，j＝6.3hz，2h)，3.42(s，3h)，3.17(td，j＝12.7，3.0hz，2h)，3.01(s，2h)，2.81(d，j＝4.6hz，3h)，2.74(td，j＝13.2，4.9hz，2h)，1.43(d，j＝13.6hz，2h)。
实施例化合物47：3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-n-苯基-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酰胺(ccg-211971)。以与实施例化合物46类似的方式，使用异氰酸苯酯作为酰化剂来合成。分离32mg(83％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.04(d，j＝8.6hz，1h)，7.37(d，j＝7.7hz，2h)，7.32-7.25(m，2h)，7.02(t，j＝7.3hz，1h)，6.88(dd，j＝8.6，2.5hz，1h)，6.76(d，j＝2.5hz，1h)，6.39(s，1h)，5.92(ddt，j＝15.9，10.8，5.6hz，1h)，5.33-5.25(m，2h)，4.69(d，j＝5.6hz，2h)，3.94(dt，j＝13.0、4.1hz，2h)，3.88(s，3h)，3.76(t，j＝6.3hz，2h)，3.54(t，j＝6.3hz，2h)，3.43(s，3h)，3.31(td，j＝12.8，3.0hz，2h)，3.04(s，2h)，2.78(td，j＝13.6，4.7hz，2h)，1.52(d，j＝13.8hz，2h)。
实施例化合物48：(3-烯丙基-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-羰基)甘氨酸乙酯(ccg-211972)。以与实施例化合物46类似的方式，使用2-异氰酸基乙酸乙酯作为酰化剂来合成。分离26mg(67％产率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ8.02(d，j＝8.6hz，1h)，6.86(dd，j＝8.6，2.5hz，1h)，6.74(d，j＝2.5hz，1h)，5.91(ddt，j＝15.9，10.8，5.6hz，1h)，5.32-5.23(m，2h)，4.94(t，j＝5.0hz，1h)，4.67(d，j＝5.6hz，2h)，4.22(q，j＝7.1hz，2h)，4.02(d，j＝5.0hz，2h)，3.87(s，3h)，3.82(dt，j＝12.9、4.0hz，2h)，3.75(t，j＝6.3hz，2h)，3.52(t，j＝6.3hz，2h)，3.42(s，3h)，3.23(td，j＝12.7，3.0hz，2h)，3.01(s，2h)，2.75(td，j＝13.3，4.8hz，2h)，1.45(d，j＝13.6hz，2h)，1.29(t，j＝7.1hz，3h)。
实施例化合物49：2-((4，8-二甲氧基-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-2-基)硫基)乙腈(ccg-212014)。以与实施例化合物27类似的方式，由实施例化合物40来合成。分离16mg(100％产率)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.18(d，j＝9.3hz，1h)，6.98-6.91(m，2h)，4.12(s，2h)，4.10(s，3h)，3.86(s，3h)，3.43-3.25(m，4h)，3.20(s，2h)，2.75(td，j＝14.2，5.0hz，2h)，1.72(d，j＝15.2hz，2h)。
实施例化合物50：2-((4-(氰基甲氧基)-8-甲氧基-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-2-基)硫基)乙腈(ccg-212015)。以与实施例化合物27类似的方式，使用实施例化合物41作为底物来合成。分离9mg(56％产率)。1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.24(d，j＝8.7hz，1h)，7.02-6.89(m，2h)，5.28(s，2h)，4.16(s，2h)，3.87(s，3h)，3.43-3.33(m，2h)，3.33-3.26(m，2h)，3.24(s，2h)，2.67(td，j＝14.3，13.8，5.1hz，2h)，1.80(d，j＝15.1hz，2h)。
实施例化合物51：1-(4-(烯丙氧基)-8-甲氧基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-6h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-基)戊-1-酮(ccg-208863)。将化合物k3(94mg，0.178mmol)溶解在4mhcl-二噁烷溶液(1ml)中。30分钟后，从溶液沉淀出白色固体。向溶液中添加5ml乙醚并通过过滤收集固体。用乙醚洗涤固体并在高真空下干燥产生89mg游离胺中间体(定量)。将一部分此物质(30mg，0.070mmol)溶解在dcm(350μl)中，并添加dipea(37μl，0.210mmol)和戊酰基氯(10μl，0.084mmol)。在室温下搅拌12小时后，在真空下除去溶剂并使用柱色谱(10-50％etoac：hex)来纯化最终产物。分离27mg(74％产率)。1hnmr(400mhz，氯仿-d)δ8.16(d，j＝8.6hz，1h)，6.87(dd，j＝8.6，2.1hz，1h)，6.73(d，j＝2.1hz，1h)，6.04(ddt，j＝16.9，10.6，5.6hz，1h)，5.35(d，j＝16.9hz，1h)，5.26(d，j＝10.6hz，1h)，4.91(d，j＝5.6hz，2h)，4.43(d，j＝13.7hz，1h)，3.86(s，3h)，3.72(t，j＝6.8hz，2h)，3.44-3.34(m，6h)，3.15-3.00(m，2h)，2.96(t，j＝12.0hz，1h)，2.57(td，j＝13.3，4.7hz，1h)，2.44(td，j＝13.3，4.7hz，1h)，2.35(td，j＝7.3，3.4hz，2h)，1.70-1.58(m，3h)，1.58-1.46(m，2h)，1.46-1.33(m，2h)，0.94(t，j＝7.3hz，3h)。
实施例化合物52：4-(2-甲氧基乙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5-甲基-6-苯基嘧啶(ccg-205360)。在室温下将2-溴乙基甲基醚(0.35g，2.4mmol)一次性添加到碳酸铯(0.82g，2.5mmol)和5-甲基-6-苯基-2-硫代-2，3-二氢嘧啶-4(1h)-酮(n3)(0.5g，2.29mmol)在二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌混合物中。将混合物加热至70℃经历41/2小时，然后使其冷却。另外添加碳酸铯(0.82g，2.5mmol)，接着添加溴乙基甲基醚(0.4g，2.9mmol)。18小时后，将混合物倒入水中并搅拌，然后用二氯甲烷萃取三次。将合并萃取物用水洗涤，然后用饱和盐水洗涤并经mgso4干燥。在真空中除去溶剂并通过快速色谱(25-33％etoac：hex)进一步纯化产生透明无色油状的标题化合物(0.4g)；质谱es+m/z＝335，357(m+1，m+23)；1hnmr(500mhz，dmso)δ7.58(dd，2h)，7.54-7.40(m，3h)，4.51(t，2h)，3.70(t，2h)，3.60(t，2h)3.31(s，6h)，3.30(m，2h)，2.09(s，3h)。
实施例化合物53：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5-甲基-6-苯基嘧啶-4(3h)-酮(ccg-205381)。将化合物n4溶解在二甲基甲酰胺(5ml)中并在室温下搅拌。添加碳酸铯(0.55g，1.67mmol)，接着添加烯丙基溴(0.22g，1.82mmol)。3小时后，用40ml水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的萃取物用水洗涤，然后用饱和盐水洗涤并经mgso4干燥。在减压下除去溶剂并在用hxa/etoac6：1洗提的硅胶上对残留物进行色谱分析，来提供透明浅黄色油状的产物(0.052g)；质谱es+m/z＝317，339(m+1，m+23)；1hnmr(500mhz，dmso)δ7.61(d，2h)，7.50-7.46(m，3h)，5.97-5.83(m，1h)，5.24(d，1h)，5.17(d，1h)，4.66(d，2h)，3.60(t，2h)，3.38(t，2h)，3.25(s，3h)，2.03(s，3h)。
实施例化合物54：4-(烯丙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5-甲基-6-苯基嘧啶(ccg-205382)将来自实施例53的不纯色谱部分合并，且除去溶剂。在用hxa/etoac12∶1洗提的硅胶上对残留物进行色谱分析，产生混浊无色油状的产物(0.02g)；质谱es+m/z＝317，339(m+1，m+23)；1hnmr(500mhz，dmso)δ7.58(dd，2h)，7.52-7.49(m，3h)，6.22-6.01(m，1h)，5.43(dd，1h)，5.30(d，1h)，4.94(d，2h)，3.61(t，2h)，3.31-3.21(m，5h)，2.11(s，3h)。
实施例化合物55：4-(2-甲氧基乙氧基)-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-5-甲基-6-苯基嘧啶(ccg-205361)。在室温下将2-溴乙基甲基醚(0.35g，2.4mmol)一次性添加到碳酸铯(0.82g，2.5mmol)和来自步骤2的5-甲基-6-苯基-2-硫代-2，3-二氢嘧啶-4(1h)-酮(0.5g，2.29mmol)在二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌混合物中。使混合物加热至70℃经历41/2小时，然后使其冷却。另外添加碳酸铯(0.82g，2.5mmol)，接着添加溴乙基甲基醚(0.4g，2.9mmol)。18小时后，将混合物倒入水中并搅拌，然后用二氯甲烷萃取三次。将合并的萃取物用水洗涤，然后用饱和盐水洗涤并经mgso4干燥。在减压下除去溶剂，留下含有标题化合物和其n-烷基化异构体的粗混合物。在首先以2柱体积的hxa/etoac4∶1洗提、然后以hxa/etoac3∶1洗提的硅胶上进行色谱分析，产生透明无色油状的产物(0.4g)；质谱es+m/z＝335，357(m+1，m+23)；1hnmr(500mhz，dmso)δ7.58(dd，2h)，7.54-7.40(m，3h)，4.51(t，2h)，3.70(t，2h)，3.60(t，2h)3.31(s，6h)，3.30(m，2h)，2.09(s，3h)。
实施例化合物56：3-烯丙基-2-((2-甲氧基乙基)硫基)-4-氧代-4，6-二氢-3h-螺[苯并[h]喹唑啉-5，4′-哌啶]-1′-甲酸乙酯(ccg-206233)：30mg(82％)；1hnmr(cdcl3/tms)δ8.08(dd，1h，j＝7.5&1.4hz)，7.32-7.40(m，2h)，7.23(d，1h，j＝7.0hz)，5.91(m，1h)，5.28(m，2h)，4.68(d，2h，j＝5.2hz)，4.13(q，2h，j＝7.1hz)，3.98-4.08(m，2h)，3.76(t，2h，j＝6.2hz)，3.54(t，2h，j＝6.2hz)，3.42(s，3h)，2.98-3.18(m，4h)，2.9(m，1h)，2.7(m，1h)，1.43(m，2h)和1.25(t，3h，j＝7.1hz)。
上文说明书中提到的所有公布和专利都以引用的方式并入本文中。尽管已经结合具体优选实施方案描述本发明，但应了解要求的本发明不应该不当地受限于这些具体实施方案。实际上，本领域技术人员显而易见的对于所述的用来进行本发明的模式的各种修改希望在下文权利要求书的范畴内。