本发明涉及中药配伍及炮制技术领域，特别涉及一种钩吻减毒存效的配伍组合物及其制备方法。
背景技术：
钩吻为马前科胡蔓藤属植物，是世界著名的有毒植物。中医对其早有记载与应用，《神农本草经》列为下品，谓其主金疮、中恶风、咳逆上气、水肿、杀鬼疰蛊毒。上世纪80年代以来，钩吻在临床上应用范围逐渐扩大，显示其具有良好的抗肿瘤、镇静镇痛、散瞳、影响免疫功能等多种药理功能，尤其在延长肝癌患者生存期和肿瘤患者镇痛方面有独特的优势。在国外，美国药物索引(1975年)收载了钩吻制剂13种，1986年增加到18种。生物碱是其主要化学成分，既是活性成分，也是毒性成分，由于其毒性太大，治疗量和中毒量非常接近，安全指数小，不乏有钩吻中毒的临床报道,极大影响临床安全用药。面对其极大的毒性和显著而独特的临床疗效，如何趋利避害，无疑是中医药应用钩吻研究的一大核心问题和关键所在。国内外学者通过多种途径探索了降低钩吻不良反应的方法，均未从根本上解决钩吻的毒性问题。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：如何通过配伍在保存钩吻药效的同时减轻钩吻的毒性。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种钩吻减毒存效的配伍组合物，由以下重量份的材料制备而成：
钩吻干品5-15份、水蛭粗粉12-20份、虻虫1-5份、大黄12-20份、桃仁1-3份。
本发明的另一技术方案为：
一种钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法，其包括以下步骤：
步骤1：称取同一植株的钩吻药材干品5-15g，浸泡1-3h，于水煎煮2次，每次30min，合并滤液，浓缩并转移定容至10ml，即得到钩吻提取液；
步骤2：称取水蛭粗粉12-20g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，将3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液；
步骤3：称取虻虫1-5g，在95％酒精中脱水1-3h，再移入丙酮液中脱脂2h，将已脱水脱脂的样品放置过夜，干燥，粉碎至粉末状，溶于0.01mol/l盐水中，进行3次浸泡并得到滤液，将3次浸泡得到的滤液混合，制得虻虫提取液；
步骤4：称取大黄中药材12-20g，以5倍质量95％乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，将3次回流提取得到的提取液混合，得到大黄提取液；
步骤5：称取桃仁1-3g，粉碎，加入6倍质量的沸水中，煎煮25-35min并过滤，经过2次煎煮及过滤，将2次得到的滤液混合，得到桃仁提取液；
步骤6：将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25-35ml纯水溶解，得到抵当汤药液；
步骤7：将钩吻提取液与抵挡汤药液混合，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。
本发明的有益效果在于：通过对具有毒性的钩吻进行配伍，通过对抵当汤中的水蛭、虻虫、大黄及桃仁的配比及炮制方法的改进，相比传统的抵当汤炮制方法，采用分别提取后混合的方式，其中水蛭、大黄均采用醇提的方式，代替传统技术炮制中将各成分混合煎煮的炮制方法；将分别制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25-35ml纯水溶解，得到抵当汤药液后与钩吻提取液混合，使得到的组合物能够消减钩吻的毒性，同时能够保持钩吻的药效。
附图说明
图1为本发明具体实施方式中的小鼠醋酸扭体实验结果中各实验组的扭体次数柱状图；
图2为本发明具体实施方式中的小鼠醋酸扭体实验结果中各实验组的镇痛率柱状图；
图3为本发明具体实施方式中的小鼠热板法镇痛实验结果中各试验组的痛阈值柱状图；
图4为本发明具体实施方式中的小鼠对福尔马林致痛实验结果中各实验组的疼痛指数柱状图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：通过对具有毒性的钩吻进行配伍，对抵当汤中的配比及炮制方法的改进，得到抵当汤药液后与钩吻提取液混合，使得到的组合物能够消减钩吻的毒性，同时能够保持钩吻的药效。
本发明涉及一种钩吻减毒存效的配伍组合物，由以下重量份的材料制备而成：
钩吻干品5-15份、水蛭粗粉12-20份、虻虫1-5份、大黄12-20份、桃仁1-3份。
一种钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：称取同一植株的钩吻药材干品5-15g，浸泡1-3h，于水煎煮2次，每次30min，合并滤液，浓缩并转移定容至10ml，即得到钩吻提取液；
步骤2：称取水蛭粗粉12-20g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，将3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液；
步骤3：称取虻虫1-5g，在95％酒精中脱水21-3h，再移入丙酮液中脱脂2h，将已脱水脱脂的样品放置过夜，干燥，粉碎至粉末状，溶于0.01mol/l盐水中，进行3次浸泡并得到滤液，将3次浸泡得到的滤液混合，制得虻虫提取液；
步骤4：称取大黄中药材12-20g，以5倍质量95％乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，将3次回流提取得到的提取液混合，得到大黄提取液；
步骤5：称取桃仁1-3g，粉碎，加入6倍质量的沸水中，煎煮25-35min并过滤，经过2次煎煮及过滤，将2次得到的滤液混合，得到桃仁提取液；
步骤6：将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25-35ml纯水溶解，得到抵当汤药液；
步骤7：将钩吻提取液与抵挡汤药液混合，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。
上述钩吻减毒存效的配伍组合物及其制备方法中：通过对具有毒性的钩吻进行配伍，对抵当汤中的水蛭、虻虫、大黄及桃仁的配比及炮制方法的改进，相比传统的抵当汤炮制方法，采用分别提取后混合的方式，其中水蛭、大黄均采用醇提的方式，代替传统技术炮制中将各成分混合煎煮的炮制方法；将分别制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25-35ml纯水溶解，得到抵当汤药液后与钩吻提取液混合，使得到的组合物能够消减钩吻的毒性，同时能够保持钩吻的药效。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物由以下重量份的材料制备而成：
钩吻干品10份、水蛭粗粉16份、虻虫1份、大黄16份、桃仁2份。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物由以下重量份的材料制备而成：
钩吻干品5份、水蛭粗粉12份、虻虫1份、大黄12份、桃仁1份。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物由以下重量份的材料制备而成：
钩吻干品15份、水蛭粗粉20份、虻虫5份、大黄20份、桃仁3份。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法中，所述步骤1中钩吻药材干品的称取量为10g；所述步骤2中水蛭粗粉的称取量为16g；所述步骤3中虻虫的称取量为3g；所述步骤4中大黄的称取量为16g；所述步骤5中桃仁的称取量为2g。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法中，所述步骤1中钩吻药材干品的称取量为5g；所述步骤2中水蛭粗粉的称取量为12g；所述步骤3中虻虫的称取量为1g；所述步骤4中大黄的称取量为12g；所述步骤5中桃仁的称取量为1g。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法中，所述步骤1中钩吻药材干品的称取量为15g；所述步骤2中水蛭粗粉的称取量为20g；所述步骤3中虻虫的称取量为5g；所述步骤4中大黄的称取量为20g；所述步骤5中桃仁的称取量为3g。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法中，所述步骤2具体为：
称取水蛭粗粉12-20g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，其中第一次为将水蛭粗粉于10倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取2h，第二次为将第一次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，第三次为将第二次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液。
进一步的，上述钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法中，所述步骤6具体为：
将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，通过旋转蒸发浓缩至粉末，用30ml纯水溶解，得到抵当汤药液。
实施例1
一种钩吻减毒存效的配伍组合物，由以下材料制备而成：钩吻干品10g、水蛭粗粉16g、虻虫1g、大黄16g、桃仁2g。
一种钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：称取同一植株的钩吻药材干10g，浸泡2h，于水煎煮2次，每次30min，合并滤液，浓缩并转移定容至10ml，即得到钩吻提取液；
步骤2：称取水蛭粗粉16g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，其中第一次为将水蛭粗粉于10倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取2h，第二次为将第一次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，第三次为将第二次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液；
步骤3：称取虻虫1g，在95％酒精中脱水2h，再移入丙酮液中脱脂2h，将已脱水脱脂的样品放置过夜，干燥，粉碎至粉末状，溶于0.01mol/l盐水中，进行3次浸泡并得到滤液，将3次浸泡得到的滤液混合，制得虻虫提取液；
步骤4：称取大黄中药材16g，以5倍质量95％乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，将3次回流提取得到的提取液混合，得到大黄提取液；
步骤5：称取桃仁2g，粉碎，加入6倍质量的沸水中，煎煮30min并过滤，经过2次煎煮及过滤，将2次得到的滤液混合，得到桃仁提取液；
步骤6：将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用30ml纯水溶解，得到抵当汤药液；
步骤7：将钩吻提取液与抵挡汤药液混合，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。
实施例2
一种钩吻减毒存效的配伍组合物，由以下材料制备而成：钩吻干品5g、水蛭粗粉12g、虻虫1g、大黄12g、桃仁1g。
一种钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：称取同一植株的钩吻药材干品5g，浸泡1h，于水煎煮2次，每次30min，合并滤液，浓缩并转移定容至10ml，即得到钩吻提取液；
步骤2：称取水蛭粗粉12g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，其中第一次为将水蛭粗粉于10倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1h，第二次为将第一次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，第三次为将第二次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液；
步骤3：称取虻虫1g，在95％酒精中脱水1h，再移入丙酮液中脱脂2h，将已脱水脱脂的样品放置过夜，干燥，粉碎至粉末状，溶于0.01mol/l盐水中，进行3次浸泡并得到滤液，将3次浸泡得到的滤液混合，制得虻虫提取液；
步骤4：称取大黄中药材12g，以5倍质量95％乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，将3次回流提取得到的提取液混合，得到大黄提取液；
步骤5：称取桃仁1g，粉碎，加入6倍质量的沸水中，煎煮25min并过滤，经过2次煎煮及过滤，将2次得到的滤液混合，得到桃仁提取液；
步骤6：将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25ml纯水溶解，得到抵当汤药液；
步骤7：将钩吻提取液与抵挡汤药液混合，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。
实施例3
一种钩吻减毒存效的配伍组合物，由以下材料制备而成：钩吻干品15g、水蛭粗粉20g、虻虫5g、大黄20g、桃仁3g。
一种钩吻减毒存效的配伍组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：称取同一植株的钩吻药材干品15g，浸泡3h，于水煎煮2次，每次30min，合并滤液，浓缩并转移定容至10ml，即得到钩吻提取液；
步骤2：称取水蛭粗粉20g，于70％的乙醇中浸泡并回流提取3次，其中第一次为将水蛭粗粉于10倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取2h，第二次为将第一次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，第三次为将第二次回流提取后的水蛭粗粉于8倍质量70％的乙醇中浸泡4h，回流提取1.5h，3次浸泡及回流提取得到的提取液混合，制得水蛭提取液；
步骤3：称取虻虫5g，在95％酒精中脱水3h，再移入丙酮液中脱脂2h，将已脱水脱脂的样品放置过夜，干燥，粉碎至粉末状，溶于0.01mol/l盐水中，进行3次浸泡并得到滤液，将3次浸泡得到的滤液混合，制得虻虫提取液；
步骤4：称取大黄中药材20g，以5倍质量95％乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，将3次回流提取得到的提取液混合，得到大黄提取液；
步骤5：称取桃仁3g，粉碎，加入6倍质量的沸水中，煎煮35min并过滤，经过2次煎煮及过滤，将2次得到的滤液混合，得到桃仁提取液；
步骤6：将制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用35ml纯水溶解，得到抵当汤药液；
步骤7：将钩吻提取液与抵挡汤药液混合，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。
动物实验：
实验动物选用健康昆明种6-8周龄小鼠，雌雄各半，体重20±2g，由福建医科大学实验动物中心代购，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。
1、钩吻毒性消减实验：
1.1、钩吻急性预实验：目的在于先确认引起100％(dm)死亡率的剂量。取小鼠12只，随机分成4组，每组4只，禁食24h，自由饮水。按1.5、1.2、1g·kg-1的剂量分别给4组小鼠一次性灌胃给药钩吻水煎液，观察并记录小鼠24h内的中毒症状和死亡情况。实验结果如下：
表1钩吻的急性毒性预试验1
急性毒性预试验结果表明，钩吻不同剂量给药后，小鼠出现痉挛、惊厥、跳跃，最后呼吸衰竭而死，死亡时间均在给药后0.5h内。当钩吻剂量≥1.5g·kg-1时，小鼠死亡率均为100％，故确定钩吻的dm剂量为1.5g·kg-1，进行下一步急性毒性实验。
1.2、钩吻急性毒性实验：将72只小鼠随机分成9组，钩吻组(给药剂量为预试dm剂量，下同)、水提抵当汤组、醇提抵当汤组、先钩吻后水提抵当汤组、先水提抵当汤后钩吻组、钩吻与水提抵当汤混合液组、先钩吻后醇提抵当汤组、先醇提抵当汤后钩吻组、钩吻与醇提抵当汤混合液组，每组8只，用苦味酸标记，试验前禁食不禁水24h，然后将各组小鼠计算所得的剂量进行一次性灌胃给药，观察并记录小鼠24h内的中毒症状和死亡情况；实验结果如下：
表2钩吻不同配伍的急性毒性试验
注：与钩吻组比，*p＜0.05
钩吻不同配伍的急性毒性试验结果表明，小鼠给予钩吻1.5g·kg-1时，全部死亡，但钩吻配伍抵当汤后，小鼠死亡率均下降直至为零，且有死亡现象者死亡时间亦明显延长，与钩吻组比有显著性差异(p＜0.05)。
1.3、抵当汤缓解钩吻毒性实验：将76只小鼠随机分成9组，钩吻组(给药剂量为预试dm剂量，下同)、醇提抵当汤组、先钩吻后醇提抵当汤组、钩吻与醇提抵当汤混合液组，前两组各8只，后两组各30只，用苦味酸标记，试验前禁食不禁水24h，然后将各组小鼠按照0.2ml/10g剂量进行一次性灌胃给药，观察并记录小鼠24h内的中毒症状和死亡情况；实验结果如下：
表3抵当汤减缓钩吻毒性实验
注：与钩吻组比，*p＜0.05
结果表明，钩吻与抵当汤混合组的小鼠的死亡率最低。
由上述描述可知，本发明涉及的钩吻减毒存效的配伍组合物相比单独服用钩吻具有显著的减毒效果。
2、钩吻药效实验
2.1、小鼠醋酸扭体实验
将32只小鼠随机分成4组，生理盐水组、钩吻组、抵当汤组、钩吻配抵当汤组，每组8只，用苦味酸标记，钩吻组、钩吻配抵当汤组钩吻剂量分别按0.5g·kg-1灌胃给药，1h后，每只小数腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，观察并记录注射醋酸溶液后15min内小鼠因疼痛扭体的次数。
实验结果参照图1及图2。
2.2、小鼠热板法镇痛实验
热板温度控制在55℃士5℃，预热10min后，取18-22g雄性km种小鼠数只，将小鼠分别置于热板上，以舐后足作为痛反应指标，自小鼠放在热板上至出现舐后足所需时间(s)作为该鼠的痛阀值。凡舐后足所需时间小于5s或大于30s的小鼠弃之不用。选合格的上述小鼠70只，随机分为7组，分别为空白组、吲哚美辛阳性对照组(0.01g·kg-1)、钩吻组(0.27g·kg-1)、抵当汤组(以成人一剂剂量换算)、钩吻抵当汤组，每组10只，给药前禁食不禁水12h。每只小鼠按0.2ml/10g分别给药，空白组给予等体积生理盐水，测定给药后30、60、90、120min的痛阈值。60s不舐后足者立即取出，其痛阈值按60s计算。
计算出各组给药后不同时间痛阈值均值，进行t检验。
实验结果参照图3
2.3、小鼠对福尔马林致痛实验
取70只昆明种小鼠，雌雄各半，分组及给药剂量同”2.2”，每组10只。给药30min后，分别予小鼠左后足趾皮下注射2.5％福尔马林溶液30μl/只，立即观察ⅰ相(0-5min)，ⅱ相(20-30min)内小鼠的疼痛反应，记录1、5、20、30min出现的最高痛级，每个时间段记录15s。疼痛指数记录按以下评分标准：舔、咬或者摇晃注射过福尔马林的脚爪记3分；注射的脚爪抬离地面记2分；注射的脚爪轻触地面但不负重、跛行记1分；注射的脚爪仍可压在地板上并承受其体重记0分。实验结果参照图4。
从图1至图4看出，本发明涉及的钩吻减毒存效的配伍组合物依然能够保持镇痛的药效。
综上所述，本发明涉及的钩吻减毒存效的配伍组合物及其制备方法中，通过对具有毒性的钩吻进行配伍，对抵当汤中的水蛭、虻虫、大黄及桃仁的配比及炮制方法的改进，相比传统的抵当汤炮制方法，采用分别提取后混合的方式，其中水蛭、大黄均采用醇提的方式，代替传统技术炮制中将各成分混合煎煮的炮制方法；将分别制得的水蛭提取液、虻虫提取液、大黄提取液和桃仁提取液混合，浓缩至粉末，用25-35ml纯水溶解，得到抵当汤药液后与钩吻提取液混合，使得到的组合物能够消减钩吻的毒性，同时能够保持钩吻的药效。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。