一种大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂以及制备方法与流程

文档序号:15137821发布日期:2018-08-10 19:31
本发明涉及一种大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂,具体涉及一种治疗干眼症的聚合物脂质纳米粒制剂,属于中药纳米制剂
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:干眼症,即眼睛干燥综合征,多为中老年人常见的一种眼睛问题,主要是由于泪液量减少或泪液质量异常所致的泪膜稳定性下降,并伴有眼睛不适、干涩和异物感,继而引发眼睛表面组织的病变,严重可导致失明。近年来,干眼症的病发群呈现越来越年轻化的趋势,长时间用眼、戴隐型眼镜、空调抽湿作用等都会直接导致泪水的量减少,而暴露在空气中的泪膜会被快速蒸发,失去对眼球的保护力,继而出现眼睛发干、发涩等症状。除此之外,很多药物也会诱发干眼症发生,包括原发性泪腺疾病、泪腺阻塞、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、系统性硬化症、砂眼、神经麻痹性角膜炎、面瘫、睑板腺功能障碍、睑缘炎、粘蛋白缺乏、瞬目异常、睑缘位置异常、角结膜手术切口、抗高血压及抗心律失常药等。目前针对干眼症的药物治疗主要包括:人工泪液、糖皮质激素、免疫抑制剂、自体血清、性激素和中药制剂等,各种治疗药物具有各自的疗效优势。聚合物脂质纳米粒(Polymernanoparticle,PLN),由于其纳米粒子的微小体积和特殊结构,使其可以包载生物活性成分穿透皮肤屏障,提高有效成分的生物利用度,降低机体对药物的耐受性。同时,纳米制剂还可增加生物活性物质的热稳定性,延长水溶性药物的释放时间。大蒜素和螺旋藻多糖均取之天然,在人体内无残留,具有多种生物学功能,且具有刺激性小、无毒副作用、挥发性大等特性,可以刺激泪腺腺体分泌,与一般刺激腺体分泌药物不同的是两者合用可以影响机体的负反馈调节,保护机体的正常调节机制,但两者对热、碱均不稳定;如果直接以原料药给药,药物释放时间周期短。纳米载体具有缓控释、提高活性物质稳定性和增强生物利用度等作用,正好可以解决上述问题。利用纳米包裹可解决功能性成分释放快、稳定性低等问题,同时,制备所用原料都可被机体代谢降解,大大提高其安全性。外用皮肤擦剂是指含油、醇或其他活性成分等制成的外用液体制剂,相比于目前已经报道过的口服、滴眼和外用雾化等给药途径,其应用于治疗干眼症方面的优点在于安全性更高,且吸收缓慢,可达到更长时间的作用效果。口服给药途径靶向性差,容易引起全身性的不良反应,而且在给药后容易被胃肠道中的酶消化,使最终的有效药量减少;滴眼给药途径最大的缺点就是滴眼液容易被空气中的细菌病毒等污染,且患者的顺应性差;外用雾化的给药途径最难控制的是雾化时的温度,温度过高容易灼伤眼部敏感的皮肤,温度过低达不到理想的效果。在已经公开的专利中,干眼症的治疗最常见的是中药配伍组合物和化学制剂,常见的治疗方法为口服、滴眼和外用雾化等给药途径,直接用于皮肤擦剂的给药途径目前未见报道。中国发明专利公开号CN104623309B公开了“治疗干眼症的中药制剂”,该发明涉及治疗干眼症的中药制剂,由下述重量配比的组份制作而成:密蒙花10~15g,石斛15~20g,枸杞子15~20g,菊花3~6g,玄参10~12g、麦冬10~12g、五味子15~20g、生地10~12g、白芍10~15g、天冬10~15g、山茱萸10~12g、炒山药10~12g。制取方法:取上述原料药,加入适水,浸泡半个小时后,文火煎煮至药液剩300ml,滤出药液。再次加水适量,文火煎煮至药液剩200ml,滤出药液,将两次药液混合,平均分成二份,分早晚二次服用;中国发明专利公开号CN105848651A公开了“干眼症治疗用滴眼剂”,该发明提供一种用于抑制由泪液的高渗透压导致的细胞凋亡的干眼症治疗用滴眼剂,其包含双氯芬酸或其药学上可接受的盐,且用于抑制由泪液的高渗透压导致的细胞凋亡;中国发明专利公开号CN105853645A公开了“一种治疗干眼症的中药组合物”,该发明以中药材蓬子菜、万年蒿、蒲葵子、冬青皮和吊竹梅为原料组合制成活性组分,与常用药物制剂辅料制成中药颗粒剂、泡腾剂或散剂,使用时熏蒸或雾化眼部。技术实现要素:本发明以大蒜素和螺旋藻多糖为活性物质,提供一种通过优化成分及制备条件而获得的用于治疗干眼症的大蒜素-螺旋藻多糖-PLN制剂,以及该种纳米粒制剂的制备方法。为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:一种大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂由以下重量份的各物质制成:优选的,所述一种大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂由以下重量份的各物质制成:2-6份大蒜素、5-16份螺旋藻多糖、20-35份聚丙交酯-乙交酯、30-90份维生素E、5-7份分子蒸馏单甘油酯、5-7份蔗糖脂肪酸酯。更优选的,所述一种大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂由以下重量份的各物质制成:5份大蒜素、10份螺旋藻多糖、30份聚丙交酯-乙交酯、60份维生素E、6份分子蒸馏单甘油酯和6份蔗糖脂肪酸酯。优选的,以上所述聚丙交酯-乙交酯中的乳酸与羟基乙酸的质量比例为1∶2。优选的,以上所述分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯的添加量比例为1∶1。以上所述大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的制备方法,包括以下步骤:1)按所述重量份分别称取大蒜素、螺旋藻多糖、聚丙交酯-乙交酯、维生素E、分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯备用。将大蒜素和螺旋藻多糖溶于蒸馏水水中,形成水相;备用;所述大蒜素的质量与蒸馏水的体积比是10-60g∶1-3mL。2)将聚丙交酯-乙交酯、维生素E、分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯溶于乙醇溶液中,形成有机相,备用;所述维生素E的质量与乙醇溶液的体积比为2-10g∶1mL。优选的,所述乙醇溶液中乙醇的质量分数为45%。3)将有机相缓慢注入水相中,形成混合液;加热混合液至50-60℃后以400-500rmp的转速搅拌混合液60-120min,形成均一溶液。优选的,将混合液加热至55℃后进行搅拌。优选的,以450rmp的转速搅拌混合液1h。优选的,用注射器将有机相均匀的注入水相中。4)将均一溶液倒入冰水中,并以20-50rmp的转速搅拌混合物30-60min,形成纳米粒溶液。优选的,以30rmp的转速搅拌混合物1h。5)纳米粒溶液经离心处理后,用0.25μm的水系滤膜过滤上层清液,得大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂。优选的,所述纳米粒溶液在1200rmp的转速下离心10min。本发明的有益效果是:本发明以适量的大蒜素、螺旋藻多糖、聚丙交酯-乙交酯、维生素E、分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯为原料,尤其是以分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯混合物(1∶1)为复合表面活性剂,以维生素E为脂质,可制备包封率高达80%以上且有良好的干眼症治疗效果的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂。附图说明附图1实施例5中所制得的大蒜素螺旋藻多糖-PLN粒径分布图附图2实施例5中所制得的大蒜素螺旋藻多糖-PLN电位分布图具体实施方式为了更充分的理解本发明的技术内容,下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步介绍和说明。(一)制备方法实施例1-77实施例1-77提供的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的制备方法,具体步骤如下:(各实施例中各物料的用量及工艺参数如表1和表2所示):1)取料:按各组分的用量分别称取大蒜素、螺旋藻多糖、聚丙交酯-乙交酯(PLGA)、维生素E、分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯,备用。2)制有机相:将PLGA、维生素E、分子蒸馏单甘油酯和蔗糖脂肪酸酯混合物(1∶1)溶解于有机溶剂中,形成有机相;备用。3)制水相:将大蒜素和螺旋藻多糖溶于蒸馏水中,形成水相,备用。4)制乳液:用注射器将有机相均匀的注入水相中,形成混合液;加热混合液至50-60℃后以400-500rmp的转速搅拌混合液60-120min,形成均一乳液。5)制纳米粒溶液:将均一乳液倒入冰水中,并以20-50rmp的转速搅拌混合物30-60min,形成纳米粒溶液。6)纳米粒制剂:将所得纳米粒溶液在1200rmp的转速下离心10min,用0.25μm的水系滤膜过滤上层清液,得大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂。表1实施例1-77中各物料的用量表1中PLGA是乳酸与羟基乙酸质量比为1∶2的聚丙交酯-乙交酯。表2实施例1-77中的制备参数实施例78本实施例提供的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的制备方法与实施例5(更优选的)的制备方法基本一致,不同之处在于:步骤1)取料为:分别称取5mg大蒜素、10mg螺旋藻多糖、30mg聚丙交酯-乙交酯、60mg维生素E(与实施例5的相同)、8.3mg合成磷脂(DLPC)和100mg吐温-80,备用。步骤3)制有机相为:将维生素E、合成磷脂和吐温-80溶于20mL的50%乙醇水溶液中,形成有机相,备用。实施例79本实施例提供的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的制备方法与实施例5的制备方法基本一致,不同之处在于:步骤1)取料为:分别称取5mg大蒜素、螺旋藻多糖30mg聚丙交酯-乙交酯(与实施例5的相同)、8.6mg合成磷脂(DLPC)和120mg二甲胺基甲硼烷(DMAB),备用。步骤3)制有机相为:将合成磷脂和二甲胺基甲硼烷溶于20mL的45%乙醇水溶液中,形成有机相,备用。实施例80本实施例提供的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的制备方法与实施例5的制备方法基本一致,不同之处在于:步骤1)取料为:分别称取5mg大蒜素、螺旋藻多糖30mg聚丙交酯-乙交酯(与实施例5的相同)、6.5mg合成磷脂(DLPC)、30.5mg维生素E和100mg二甲胺基甲硼烷(DMAB),备用。步骤3)制有机相为:将维生素E、合成磷脂和二甲胺基甲硼烷溶于20mL的45%乙醇水溶液中,形成有机相,备用。(二)检测结果1.包封率、粒径、电位和PDI以上实施例1-80制备的大蒜素螺旋藻多糖聚合物脂质纳米粒制剂的包封率、粒径、电位及PDI(聚合物脂质分散性指数)如下表3所示。表3实施例1-80制备的大蒜素螺旋藻多糖-PLN的包封率、粒径、电位和PDI2.干眼症治疗(实施例5)2.1病例选择和分组选择干眼病患者80例(160只眼球),症状均为双眼干涩、有异物感、不能久视、眼疲劳等,经诊断均属于干眼症。其中,男性46例,女性34例,年龄37.5±3.6岁。所有患者均为长期用眼所致的干眼症,排除其他因眼部手术、自身免疫疾病、眼科疾病引起的干眼症患者。病例按照随机分组的原则分为两组:对照组和外用擦剂组(本发明纳米制剂)。其中,外用擦剂组40例(80只眼球),对照组40例(80只眼球);两组患者在病例数、年龄、性别上比较无显著性差异,具有可比性(p>0.05)。2.2治疗方法外用擦剂组在用毛巾热敷眼部15分钟后,直接以逆时针方向涂抹眼周皮肤,涂抹量约每只眼两个黄豆粒大小为宜(下眼周皮肤可适量加大用量),每天涂抹4次;对照组使用卡波姆滴眼液,每天4次,每次1滴,滴入眼睑内。2.3评价指标2.3.1干眼症症状评分治疗前后患者自评计分。无症状者、偶有症状、经常有症状、有明显症状分别计0分、0.5分、1分和2分。2.3.2泪液分泌试验采用泪液分泌Schirmer试验,按四个等级评价。治愈:泪液分泌大于等于10mm/5min;显效:泪液量增加3mm/min以上;好转:泪液量增加1mm/min以上;无效:泪液量无变化。治疗前后检测记录。总有效率=治愈率+显效率。2.4数据统计数据用SPSS17.0软件包进行统计分析,计量资料以均值±标准差表示,组间计量资料采用t检验,计数资料用x2检验。3.结果3.1干眼症症状评分比较两组患者治疗前干眼症症状基本相同,治疗后较治疗前均有明显改善,两组治疗后症状评分与治疗前评分比较具有显著性差异(p<0.05);外用擦剂组治疗后评分与对照组评分比较具有显著性差异(p<0.05),且外用擦剂组疗效优于对照组治疗,两组治疗前后症状评分结果见表4。表4两组患者干眼症症状评分比较#代表治疗前后比较,p<0.05;*代表组间比较,p<0.053.2泪液分泌试验结果两组患者治疗后总有效率分别为80%(对照组)和95%(外用擦剂组),总有效率组间比较具有显著性差异(p<0.05),两组泪液分泌试验结果见表5。表5两组泪液分泌试验结果组别例数眼数治愈显效好转无效总有效率(%)对照组4080322481680外用擦剂组4080382612495**代表组间比较,p<0.05由上述实施例1-80制备的大蒜素螺旋藻多糖-PLN的包封率、粒径、电位和PDI可见,大蒜素螺旋藻多糖-PLN的包封率、粒径、电位和PDI等性质受到诸多因素的影响,不仅制备大蒜素螺旋藻多糖-PLN的主要组分会显著影响其性质,制备乳液过程中的温度甚至搅拌的速度和时间均会对其性质产生显著的影响,因此需综合平衡各因素才能制备出包封率高且稳定性高的大蒜素螺旋藻多糖-PLN。由上述实施例5制备的大蒜素螺旋藻多糖-PLN治疗干眼症的疗效评价结果可知,因其纳米结构的特殊性,使得有效成分大蒜素和螺旋藻多糖能透过皮肤屏障,直接到达靶点,调节泪腺分泌,且降低了药物的耐受性,提高药物累计使用效果,综合表现出良好的治疗效果。以上所述仅以实施例来进一步说明本发明的技术内容,以便于读者更容易理解,但不代表本发明的实施方式仅限于此,任何依本发明所做的技术延伸或再创造,均受本发明的保护。当前第1页1 2 3 
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