本发明属于制药领域，涉及一种防治鸡减蛋综合征中药组合物。本发明还涉及该中药组合物的制备方法及该中药组合物在制备防治鸡减蛋综合征的药中的应用。
背景技术：
鸡减蛋综合征(eggdropsyndrome,eds-76)是由减蛋综合征病毒(edsv)引起的一种传染病。其主要特征为产蛋率下降、蛋壳异常、蛋体奇型、蛋质低劣，无壳蛋增多。自从我国1991年最早分离到该病毒，该病已成为我国养鸡业较为普通的传染病之一，给广大养殖户造成了极大的损失。目前，该病已成为世界范围内引起产蛋损失的主要原因，据mcferranj.b.报道，eds可使产蛋率下降10％～30％，甚至高达41％，蛋的破损率达38％～40％。鸡减蛋综合征发生后，抗生素、磺胺类药物无治疗作用，采用疫苗接种预防该病亦有一定的免疫失败几率，因此，通过对传统中药进行合理筛选和组方，研发防治鸡减蛋综合征的药，具有非常重要的生产实践意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种防治鸡减蛋综合征的中药组合物。
本发明另一个目的是提供上述防治抗减蛋综合征中药组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供中药组合物在制备防治鸡减蛋综合征的药物中的应用。
本发明的目的是通过下列技术措施来实施的：
一种防治鸡减蛋综合征的中药组合物，该组合物由下列重量份的原料药制成：大黑头草11～33重量份，长白蔷薇果9～27重量份，毛叶丁香罗勒10～30重量份，木蝴蝶树皮30～90重量份，藓生马先蒿6～18重量份，弹裂碎米荠15～45重量份，大金刀13～39重量份。
上述组合物优选由下列重量份的原料药组成：大黑头草13～16重量份，长白蔷薇果10～12重量份，毛叶丁香罗勒12～14重量份，木蝴蝶树皮35～40重量份、藓生马先蒿8～10重量份，弹裂碎米荠17～20重量份，大金刀15～18重量份。
上述防治鸡减蛋综合征的中药组合物与药学可接受的辅料制成制剂，优选制剂为口服液。
上述防治鸡减蛋综合征的中药组合物的制备方法包括以下步骤：将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加水浸泡，煮沸，过滤，滤渣再加水，煮沸，过滤，合并两次滤液，浓缩。
上述防治鸡减蛋综合征的中药组合物的方法具体为：将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加药材总重6～8倍量水浸泡8～24h，煮沸并维持0.5～1.5h，过滤，滤渣再加药材总重5～6倍量水，煮沸并维持0.5～1.5h，过滤，合并两次滤液，浓缩。
上述防治鸡减蛋综合征的中药口服液是通过下列步骤制备得到的：
将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合加水浸泡，煮沸，过滤，滤渣再加水煮沸，过滤，两次滤液合并后浓缩至稠状，加乙醇调至醇浓度为60％～70％，充分搅拌混匀，冷藏沉淀，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加乙醇调至醇浓度为75％～80％，搅匀，冷藏沉淀，过滤，滤液回收乙醇后再浓缩至无醇味，药液加水冷藏沉淀，过滤，滤液浓缩得浓度为每毫升含1～2g生药量的药液，调ph7.0，制成口服液。
该鸡用减蛋综合征中药组合物在防治鸡减蛋综合征传染病中应用，具有显著疗效，可应用于制备防治鸡减蛋综合征的药物。
本发明的有益效果：本发明吸取医学精髓；大黑头草，为唇形科植物垂花香薷elsholtziapendulifloraw.w.smith的全草，功能有清热止咳，解热解毒。主治流感，肺炎，支气管炎，胆囊炎，尿路感染，扁桃体炎，乳腺炎，炭疽，外伤感染。长白蔷薇果，为蔷薇科植物长白蔷薇rosakoreanakom.的果实。功能有滋补强壮，健胃消食。主治身体衰弱，贫血，肺结核，气滞腹胀，胃溃疡。毛叶丁香罗勒，为唇形科植物毛叶丁香罗勒ocimumgratissimumlinn.var.suavewilld.的全草。功能有疏风解表，化湿和中，散瘀止痛。主治外感风寒，头痛，脘腹胀痛，消化不良，泄泻，风湿痹痛，湿疹瘙痒，跌打损伤，蛇咬伤。木蝴蝶树皮，为紫薇科植物木蝴蝶oraxylumindicum(linn.)kurz的树皮，功能有清热利湿，退黄，利咽消肿。主治传染性黄疸肝炎，咽喉肿痛。藓生马先蒿，为玄参科植物藓生马先蒿pedicularismuscicolamaxim的根，功能有补气固表，安神。主治气血不足，体虚多汗，心悸泛力。弹裂碎米荠，为十字花科植物弹裂碎米荠cardamineimpatiensl.的全草，功能有活血，清热解毒，利尿通淋。主治痈肿，淋证。大金刀，为水龙骨科植物盾蕨neolepisorusovatus(bedd.)ching的全草。功能有清热利湿，止血，解毒。主治高热，热淋，小便不利，肺痨咯血，痈肿，水火烫伤。
本发明将七味中药配伍，对鸡减蛋综合征有显著的防治作用，达到标本兼治的目的。
下面就本发明的效果进一步说明本发明的疗效。
一、本发明体外抗鸡减蛋综合征病毒试验
1.药品
(1)本发明样品1
按照实施例1方法制备得到，用生理盐水配成每毫升药液含1g生药的浓度。
(2)本发明样品2
按照实施例3方法制备得到，用生理盐水配成每毫升药液含1g生药的浓度。
(3)西药对照药品
将阿德福韦酯胶囊，稀释成2.5mg/ml阿德福韦酯溶液。
2.鸡减蛋综合征病毒毒株
由扬州大学提供，鸭胚尿囊液的ha效价9log2，经测定，最小致死量为1：1000万倍稀释。(鸡减蛋综合征病毒毒株只对产蛋鸡致病，但其自然宿主是家鸭和野鸭)
3.非免鸭胚
非免鸭胚10日龄67枚，购自高邮种鸭场，其中27枚用于药物毒性试验，40枚用于发明药物对病毒的抑制作用测定。
4.试验方法
(1)药物毒性试验
药物毒性试验设计为9个组：样品1原液组、样品1(1:1)组、样品1(1:2)组、样品1(1:4)组、样品2原液组、样品2(1:1)组、样品2(1:2)组、样品2(1:4)组、生理盐水对照组。将本发明样品1和本发明样品2分别用生理盐水稀释后，将原液及不同浓度药液分别接种于上述9个组，每组3枚鸭胚的尿囊腔中，接种量每枚0.2ml，置37.8℃温箱孵育96h，每天观察存活情况，鸭胚全部存活的最高药液浓度为正式试验起始浓度。见表1。
表1中药对鸭胚毒性试验结果
注：*分母为接种胚数，分子为存活胚数。
(2)本发明药物对鸡减蛋综合征病毒的抑制作用测定
将40枚鸭胚，分成5组，每组8枚。分组及每组具体处理方法如下：
试验i组：每枚鸭胚尿囊腔同时接种本发明样品1药液0.2ml、病毒稀释液0.1ml；
试验ⅱ组：每枚鸭胚尿囊腔同时接种本发明样品2药液0.2ml、病毒稀释液0.1ml；
试验iii组：每枚鸭胚尿囊腔同时接种2.5mg/ml的阿德福韦酯0.2ml、病毒稀释液0.1ml；
阳性对照组：每枚鸭胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2ml、病毒稀释液0.1ml；空白对照组：不给药，不接种病毒稀释液。
上述鸭胚在37.8℃恒温箱中继续孵化，每天照蛋2～3次，弃去48h内死胚，收取48～96h死胚和96h活胚的尿囊液，低温保存备用。以血凝(ha)试验检测鸭胚尿囊液的病毒效价。
本发明药物对病毒的抑制作用测定的分组及处理见表2。
表2药物对病毒的抑制作用测定的分组及处理情况
本发明药物对鸡减蛋综合征病毒增殖的影响，结果见表3。
表3药物对鸡减蛋综合征毒增殖的抑制作用测定结果
注：与阳性对照组比较：*p<0.05，**p<0.01
二、本发明药物对试验性鸡减蛋综合征预防与治疗试验
1.试验动物
本试验用200日龄罗曼蛋鸡420只，随机分为14组，每组30只，即本发明样品1(按实施例2制备)预防组与治疗组，本发明样品2(按实施例4制备，使用时稀释成每毫升含1g生药浓度)预防组与治疗组，对比样品1(药材仅用大黑头草110g，其余制备步骤同实施例1，使用时稀释成每毫升含1g生药浓度)，对比样品2(药材仅用弹裂碎米荠110g，其余制备步骤同实施例1，使用时稀释成每毫升含1g生药浓度)，对比样品3(药材仅用大金刀110g，其余制备步骤同实施例1，使用时稀释成每毫升含1g生药浓度)，西药预防组与治疗组，感染对照组，空白对照组。
2.鸡减蛋综合征病毒毒株由扬州大学提供，鸭胚尿囊液的ha效价为9log2。
3.试验方法
(1)接种病毒
每只鸡肌肉注射尿囊液1ml。
(2)操作
空白对照组的鸡不用药，不接种尿囊液，其余13组鸡在同一时间，每只肌肉注射9log2尿囊液1ml。
(3)用药方法与疗效
本发明样品1预防组在接种病毒尿囊液的同时，开始用本发明样品1口服，每只鸡每次2ml，每天用药2次，连用6d。本发明样品1治疗组在接种病毒尿囊液2d后(出现症状)用药，每只鸡每次口服2ml，每天用药2次，连用6d。本发明样品2预防组在接种病毒尿囊液的同时，用本发明样品2口服，每只鸡每次2ml，每天用药2次，连用6d；本发明样品2治疗组在接种病毒尿囊液2d后(出现症状)用药，每只鸡每次口服2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品1预防组在接种病毒尿囊液的同时，开始用对比样品1口服，每只鸡每次2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品1治疗组在接种病毒尿囊液2d后(出现症状)用药，每只鸡每次口服2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品2预防组在接种病毒尿囊液的同时，开始用对比样品2口服，每只鸡每次2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品2治疗组在接种病毒尿囊液2d后(出现症状)用药，每只鸡每次口服2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品3预防组在接种病毒尿囊液的同时，开始用对比样品3口服，每只鸡每次2ml，每天用药2次，连用6d。对比样品3治疗组在接种病毒尿囊液2d后(出现症状)用药，每只鸡每次口服2ml，每天用药2次，连用6d。
阿德福韦酯预防组在接种病毒尿囊液的同时，用5mg/ml的阿德福韦酯口服，每只鸡每次0.5ml，每日2次，连用6d。阿德福韦酯治疗组在接种尿囊液2d后(出现症状)，用5mg/ml的阿德福韦酯药物治疗，每只鸡每次0.5ml口服，每天2次，连用6d。感染对照组鸡接种病毒尿囊液，不用任何药物，空白对照组不接种病毒尿囊液，不用任何药物。结果见表4。
表4药物对试验性鸡减蛋综合征预防与治疗结果
在试验期间，中药治疗组样品1和样品2用药6d后，产蛋率恢复正常，未出现软壳蛋、薄壳蛋、破损蛋等畸形蛋体。针对鸡蛋品质进行测定，蛋重量测定：采用电子天平对收集的鸡蛋进行蛋重量测定，精确到0.01g；蛋黄、蛋白、蛋壳重测定：蛋打开将其内容物倒入玻璃漏斗，使蛋白流人搪瓷缸内，并借助剪刀、铝匙使蛋黄和蛋白完全分离后，称取蛋黄重、蛋壳重，用蛋重量减去两者重量得出蛋白重量，对鸡蛋品种的影响，结果见表5。
表5药物对鸡蛋品质的影响
注：表中同一列中含相同字母表示差异不显著，不含相同字母表示差异显著(p<0.05)。
根据表5发现，本发明样品1和发明样品2的预防组与治疗组在蛋重、蛋黄重、蛋白重和蛋壳重等方面与空白对照组比较差异不显著(p>0.05)，与感染对照组比较差异显著(p<0.05)，说明中药对试验鸡无毒副作用，对蛋品质无影响。
三、本发明对鸡减蛋综合征治疗的临床观察
鸡群感染该病毒后，导致腺体明显炎症并致卵子及蛋壳形成机能紊乱，产生蛋壳异常。产蛋前本病成隐性感染，感染鸡无明显症状。产蛋开始后，本病由隐性转变为显性，产蛋母鸡群突然发生群体性产蛋下降，紧接着产薄壳、软壳或无壳蛋，蛋壳邹缩，蛋形改变，蛋壳表面附有数量不等的石灰斑且粗糙像沙砾样，产蛋率下降，并有采食量下降，出现一过性腹泻表现。2017年9月4日，江苏省东台某养鸡专业户饲养的2000只蛋鸡发病。临床症状：病鸡食欲减退、腹泻、羽毛蓬乱、精神呆滞，剖检可见卵巢萎缩，输卵管和子宫水肿，管内腔有白色渗出物，产蛋率降低约30％，诊断为蛋鸡产蛋下降综合征病，于是用实施例1所述中药口服液治疗(使用时稀释成每毫升含1g生药浓度)，每只鸡每次口服2ml，每天用药两次，用药5h后，病鸡精神状态明显好转，食欲明显增加，3d后产蛋率迅速上升，恢复正常，5d后所有症状消失，病鸡基本痊愈，治愈率达95％。用本发明样品1(按实施例2制备)每只鸡每次口服2ml，每天用药两次，连用5d。在江苏省射阳县洋马镇、东台县海丰镇、沭阳县胡集镇，泗阳县南刘集乡对200日龄左右发病鸡场的鸡实施中药组合物治疗试验，结果见表6。
表6本发明样品1对鸡减蛋综合征临床疗效结果
可见，本发明所制作的药物治疗鸡减蛋综合征几千例，均取得较好疗效，一般治疗5d后产蛋率恢复正常，表明本发明中药组合物治疗鸡减蛋综合征有甚高疗效。
四、安全性试验
取icr小鼠32只，体重在25～30g，按体重随机分组，每组8只，雌雄各半，口服溶液给药(按实施例2制备得到)，给药量分别为0.4ml/只、0.8ml/只、1.6ml/只和3.2ml/只。每天口服2次，连续给药5d，停药后连续观察20d，结果所有小鼠健存，其活动、饮食、毛发、排泄物未发现异常，未见毒性反应。对小鼠口腔和破损皮肤进行刺激性试验，未见有刺激性反应和其它不良反应。
具体实施方式
下面将结合具体实施例更详细地描述本发明的优选实施方式。
实施例1
组方：大黑头草13g，长白蔷薇果12g，毛叶丁香罗勒12g，木蝴蝶树皮40g，藓生马先蒿8g，弹裂碎米荠17g，大金刀15g。
具体制备过程如下：
将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加药材总重6倍的水浸泡24h后煎煮2次，第二次加水量为药材总重6倍量，每次煮沸后维持1h，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，冷藏静置沉淀48h以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，冷藏静置沉淀48h，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加其4倍量水冷藏沉淀48h，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例2：
组方：大黑头草16g，长白蔷薇果10g，毛叶丁香罗勒14g，木蝴蝶树皮35g，藓生马先蒿10g,弹裂碎米荠20g，大金刀18g。
具体制备过程如下：
将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加药材总重8倍的水浸泡24h后煎煮2次，每次煮沸后维持0.5h，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为60％，充分搅拌混匀，静置沉淀48h以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为75％，搅匀，静置沉淀48h，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加其4倍量水冷藏沉淀48h，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例3：
组方：大黑头草25g，长白蔷薇果20g，毛叶丁香罗勒18g，木蝴蝶树皮55g，藓生马先蒿15g，弹裂碎米荠26g，大金刀28g。
具体制备过程如下：
将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加药材总重4倍的水浸泡30h后煎煮2次，每次煮沸后维持0.5h，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为65％，充分搅拌混匀，静置沉淀48h以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，静置沉淀48h，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加其4倍量水冷藏沉淀48h，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药2g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例4：
组方：大黑头草33g，长白蔷薇果26g，毛叶丁香罗勒28g，木蝴蝶树皮90g，藓生马先蒿16g，弹裂碎米荠45g，大金刀35g。
具体制备过程如下：
将大黑头草、长白蔷薇果、毛叶丁香罗勒、木蝴蝶树皮、藓生马先蒿、弹裂碎米荠、大金刀混合，加药材总重5倍的水浸泡27h后煎煮2次，每次煮沸后维持0.5h，合并煎液并浓缩至稠状，加重量百分比浓度为95％乙醇调至醇浓度为70％，充分搅拌混匀，静置沉淀48h以上，过滤，滤液回收乙醇，回收乙醇后的药液再加浓度为95％的乙醇调至醇浓度为80％，搅匀，静置沉淀48h，过滤，滤液回收乙醇，再浓缩至无醇味，向得到的药液中加其4倍量水冷藏沉淀48h，过滤，滤液浓缩，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。