一种补肾活血方及其制备方法与流程

本发明涉及中药领域，更具体涉及一种含白藜芦醇的中药制剂及其制备方法。

背景技术：

白藜芦醇(resveratrol，简称res)是非黄酮类的多酚化合物，化学名称为(e)一3，5，4一三羟基二苯乙烯，分子式为c14h1203，相对分子质量为228.25g/mol，为白色针状晶体，存在于许多植物中，是植物受到生物或非生物胁迫时产生的一种植物抗毒素（宋海南，钱善军，刘玮．虎杖中白藜芦醇的提取及分析检测技术研究进展[j]广州化工，2014，42(21)：18—19．）。高剂量的白藜芦醇在体内具有抗炎、清除自由基、抑菌和防癌的作用。在我国，早已使用含白藜芦醇的中药材虎杖已用于治疗和预防高血脂、动脉硬化。同时，白藜芦醇可以从多个方面对心血管发挥保护作用。

有实验表明res具有良好的延缓衰老的作用,可以提高机体抗氧化能力、改善睾丸内分泌细胞的功能、促进生精功能的恢复、延缓性腺机能的衰退。并且可以改善衰老雄性小鼠精子质量(如增加精子密度，活率和活力；并减少畸形精子比率等)，并改善主要生殖器官(睾丸)的生精上皮结构和功能从而改善衰老机体生殖功能。另有大量实验证据表明白藜芦醇具有抗衰老、抗肿瘤、抗炎症和免疫调节的作用，可以提高老龄小鼠和人的免疫功能。

一般的中药制剂都为水煎剂，即把中药饮片置于沸水中煎煮，患者服用其水提取产物。但对于很多疗效显著的治疗肾病及延缓衰老的药方，其复方中的白藜芦醇含量的高低与疗效有直接关系。然而白藜芦醇在水中的溶解度较低，因此煎煮不能充分地提取中药材中的白藜芦醇。因此，把传统的中医药理论与现代的天然产物研究方法相结合，开发出一种提高治疗肾病及延缓衰老的药方中的白藜芦醇含量的制备方法，具有很好的生产应用前景，并对于发扬和继承传统中医药文化有很重要的意义。

技术实现要素：

一般的中药制剂都为水煎剂，即把中药饮片置于沸水中煎煮，患者服用其浸出物。但对于很多疗效显著的治疗肾病及延缓衰老的药方，其复方中的白藜芦醇含量的高低与疗效有直接关系。然而白藜芦醇在水中的溶解度较低，因此一般的水煎剂不能充分地提取中药材中的白藜芦醇。为此，本发明提供了一种补肾活血方，由以下按重量份计算的中药组成：枸杞子5-15份，虎杖4-8份，桑葚5-15份，当归5-15份，三七2-6份。

一种补肾活血方，由以下按重量份计算的中药组成：枸杞子10份，虎杖6份，桑葚10份，当归10份，三七4份。

一种补肾活血方，其制备方法如下：

（1）按重量份称取枸杞子，虎杖，桑葚，当归和三七，对药材进行预处理；

（2）向上一步预处理后的药材加4-10倍于药材量的30-60%乙醇，浸泡1-21天，药液过滤后离心，取上清液；

（3）把上一步所得的上清液置于蒸发皿中，旋转蒸干，压力30-50pka，温度30-70℃，转速60-90r/min，取出，置干燥器皿中冷却10-60min，即得中药浸膏。

所述的预处理方法包括制成饮片或粉碎。

本发明的有益效果为：本发明公开的中药制剂的临床疗效包括：健脾益肾、活血化浊、抗衰老、有助于肾病的治疗、防治雷公藤制剂引起的卵巢早衰和治疗腰痛等。用本发明公布的制备方法制备的中药制剂，白藜芦醇的含量明显提高，白藜芦醇在水中的溶解度较小，用乙醇提取的工艺可以最大程度地萃取其中的白藜芦醇，提高中药方的有效成分，优化治疗效果。制备方法简单，最后制成的浸膏方便患者服用。

附图说明

图1对照品溶液的hplc图谱。

图2样品溶液的hplc图谱。

图3阴性样品的hplc图谱。

具体实施方式

一种补肾活血方，由以下按重量份计算的中药组成：枸杞子5-15份，虎杖4-8份，桑葚5-15份，当归5-15份，三七2-6份。

优选例：枸杞子10份，虎杖6份，桑葚10份，当归10份，三七4份。

其制备方法如下：

（1）按重量份称取枸杞子，虎杖，桑葚，当归和三七，对药材进行预处理。

（2）向上一步预处理后的药材加4-10倍于药材量的30-60%乙醇，浸泡1-21天，药液过滤后离心，取上清液。

（3）把上一步所得的上清液置于蒸发皿中，旋转蒸干，压力30-50pka，温度30-70℃，转速60-90r/min；取出，置干燥器皿中冷却10-60min，即得中药浸膏。

所述的预处理方法包括制成饮片或粉碎。

分析条件与方法：

1.hplc条件：预柱（phenomenex-kj0-4282）；色谱柱：phenomenex-c18（250×4.6mm，5µm）；流动相：乙腈(a)-0.1%磷酸水溶液(b)（28∶72），洗脱条件：0.01~8.50min，28%a；8.51~14.00min，28%~40%a；14.01~20.00min，90%a；20.10~28.00min，28%a；流速：0.01~5.00min，1.0ml/mim；5.01~5.50min，1.0ml/min~0.8ml/min；5.50~9.00min，0.8ml/min；9.01~9.50min，0.8~1.0ml/min；9.51~28.00min，1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：310nm；进样量：5µl。

2.药材预处理步骤中白藜芦醇的标准曲线制备：精密吸取白黎芦醇对照品溶液（61.628µg/ml）1µl，2µl，3µl，5µl，10µl，溶于甲醇溶液中，定容至10ml：按上述hplc的检测方法进行检测，记录色谱峰面积的积分值，以白黎芦醇进样量(µg)为横坐标（x），以测得峰面积积分值为纵坐标（y），绘制标准曲线。回归方程为y=(7.81425×10⁶)x，（r=0.9999，检测范围：0.061628-0.61628µg/ml）。

3.浸膏中白藜芦醇的标准曲线的制备：精密称取白藜芦醇对照品适量，加甲醇溶解，制成质量浓度为0.234mg/ml的对照品储备液，等比稀释，制成系列对照品溶液（白藜芦醇浓度依次为0.234、0.117、0.0585、0.02925、0.01463、0.0073125、0.0036563mg/ml）。精密量取上述系列对照品溶液各5μl，按照上述的hplc方法检测，得到每个浓度样品的峰面积，绘制标准曲线。回归方程为y=3.92×10⁷x-55939.2（r=0.9999，检测范围为：36.56~234.00µg/ml）。

4.对照品(a)溶液制备：白藜芦醇对照品，浓度为0.234mg/ml。

5.样品溶液（b）的制备：

取枸杞子10g，桑葚10g，虎杖6g，当归10g，三七4g，磨成粉，加入320ml55%乙醇溶液，浸泡14天，取乙醇提取液上清液，45000r/min离心10min，取上清液，定容至250ml，精密吸取10ml，旋转蒸干（压力：40pka；温度：50℃；转速：75r/min），残渣加乙腈-0.1%磷酸（28∶72）溶液定容至10ml，经0.45µm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

6.阴性样品（c）溶液制备：

取枸杞子10g，桑葚10g，当归10g，三七4g，磨成粉，用55%乙醇浸泡14天。取乙醇提取液，45000r/min离心10min，取上清液，定容至250ml，精密吸取10ml，旋转蒸干（压力：40pka；温度：50℃；转速：75r/min），残渣加乙腈-0.1%磷酸（28∶72）溶液定容至10ml，经0.45µm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

7.干膏率的计算方法：

精密吸取供试品溶液25.0ml，置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出，置干燥器中冷却30min，精密称定质量，根据公式（出膏率＝干膏质量×10/药材质量×100%）即为干膏率。

实验部分：

1.药材预处理方法对白藜芦醇含量的影响。

第一种预处理方法：取处方量饮片2份，分别加处方量5倍黄酒，浸泡1个月。药液过滤后离心，取上清液用黄酒定容至200ml，摇匀，即得，记饮片-1、饮片-2。

第二种预处理方法，取处方量药粉2份，分别用纱布包裹药粉，加处方量5倍黄酒，浸泡1个月。药液过滤后离心，取上清液用黄酒定容至200ml，摇匀，即得，记粉末-1、粉末-2。

表-1不同预处理方法的白藜芦醇的总含量。

上述结果表示，把药材粉碎得到的白藜芦醇含量更理想，故在以下的实施例中，对药材进行粉碎预处理。

2.不同制备工艺对白藜芦醇含量的影响。

把上述的对照品溶液（a）、样品溶液（b）和阴性样品（c）按照上述的hplc检测法检测，得出的hplc图谱如图1至图所示：

白藜芦醇主要存在于中药虎杖中，因此，结合白藜芦醇对照品和阴性对照品溶液（缺少虎杖这一味中药）的hplc图谱，可以确定图2中的峰1(t=12.5min)为白藜芦醇峰。

把影响白藜芦醇提取量的因素作为可变量，其中，乙醇浓度/%（a），浸泡天数/天（b），粒度（c），料液比（d），如下表：

表1影响白藜芦醇含量的可变因素。

按l9(3⁴)正交试验，把用各种可变量组合的正交试验条件下得出的提取物用上述的hplc分析方法检测，得出其中白藜芦醇的含量，以白藜芦醇、干膏率作为评价指标。结果如下表所示：

表2l9(3⁴)正交试验设计与结果。

从表2得知，在条件为a1（乙醇浓度55%）、b3（浸泡天数21天）、c3（中粉）和d3（料液比8）下，提取物中的白藜芦醇含量最高，干膏率也较理想。

利用spss19.0对正交试验结果进行分析，方差分析结果见表4。由直观分析可知，各因素对本发明公开的中药制剂醇提工艺作用主次为a乙醇浓度＞d料液比＞c粒度＞b浸泡天数；方差分析表明，乙醇浓度（a）、料液比（d）对试验结果具有显著影响（p＜0.05）。b浸泡天数与c粒度的数据拟合效果不显著。

表3正交因素的方差分析。

从表3可知，浸泡天数与粒度对于白藜芦醇的含量没有显著性；另外，b浸泡天数对结果的影响很小，结合实际生产，浸泡14天和浸泡21天的时间成本差别较大，因此，选浸泡14天作为最优条件。

枸杞子：能补益精诸不足，易颜色，变白，明目，安神。

虎杖：具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效。

桑葚：性味甘寒，具有补肝益肾、生津润燥、乌发明目等功效。

当归：具有补血和血，调经止痛，润燥滑肠、抗癌、抗老防老、提高免疫之功效。

三七：散瘀止血，消肿定痛。

临床实施案例：

案例一：

本发明公开的中药制剂可用于防治雷公藤制剂引起的卵巢早衰。

本研究选取40例慢性肾炎女性患者，随机分治疗组与对照组各20例。治疗组以雷公藤多苷片20mg每天三次和本发明公开的中药制剂，对照组以雷公藤多苷片20mg每天三次治疗，3个月后根据患者临床症状评分表、生化指标和月经情况评估两组疗效，若3个月后患者出现月经周期缩短、月经量减少、甚至闭经，予停服雷公藤多苷片，定期随访，追踪患者月经恢复情况。结果显示本发明制剂能有效减轻慢性肾炎患者尿蛋白，改善肾功能，缓解临床症状，延缓肾病进展。特别是有助于拮抗雷公藤制剂所致女性卵巢功能低下、排卵障碍情况。停用雷公藤制剂后，比较治疗组与对照组，发现服用本发明公开的中药制剂患者月经恢复时间较其他患者快，且同时应用过程中，出现月经紊乱的比例降低，血清激素水平异常比例较对照组低。

雷公藤多苷片广泛用于慢性肾脏病及多种免疫性疾病的冶疗，比常用的激素和免疫抑制剂副作用少，尤其可以避免使用激素所致的眼睑浮肿、向心性肥胖、血糖升高等副作用，对于糖尿病肾病，无症状性蛋白尿，iga肾病等多种肾脏疾病有良好效果。美中不足的是，约30%患者服用雷公藤多苷片后可出现生殖功能低下，表现为月经量少，闭经、性欲减退、功能失调性子宫出血、性激素水平下降，b超表现为卵巢或子宫萎缩、女性子宫小于正常等卵巢功能早衰的表现。尽管部分患者停用雷公藤制剂后，患者生殖功能低下可缓慢改善，但仍有一些患者会出现不可逆的卵巢损害。针对上述问题临床应用中，发现补肾活血类中药有明显改善上述状况的作用。我们观察到服用本发明公开的中药制剂患者，在服用雷公藤多苷片后月经量少、闭经、性激素水平达到正常水平所需时间较对照组明显缩短，且卵巢早衰的表现明显减轻。本发明公开的中药制剂可具有益肾调经，健脾泄浊之功。

案例二：

治疗肾虚型患者临床观察：

临床观察60例中医诊断为肾虚的患者，治疗组30例予本发明公开的中药制剂治疗，对照组30例予六味地黄丸治疗。疗程6周，以患者症状积分作为评价标准。

注：肾虚辨证标准参考1982年全国中西医结合虚证研究与防治老年病会议：①腰背酸痛，②腰酸膝软或足跟痛，③耳鸣耳聋，④发脱齿摇，⑤尿有余沥或失禁，⑥阳痿、早泄或月经不调。具备三项即可诊断为肾虚。

本研究发现本发明公开的中药制剂较六味地黄丸有明显的改善肾虚患者症状，抗衰老效果佳，本方补肾固精，调节肾中精气，平衡肾阴肾阳，使人体真气内存，五脏健旺。可能与其具有清除自由基、调控基因信号、增强免疫功能，修复神经内分泌失调，具有延缓机体衰老、缓解衰老症状，延长老年患者寿命作用。

案例三：

用于治疗腰痛：

对于临床表现为肾虚，夹有寒湿及气滞血瘀型腰痛的患者，辨证使用上方（即泡酒方）可以明显缓解其腰痛症状。药酒是中药的多种剂型之一，《黄帝内经》有“汤液醪醴论篇”，专门讨论用药之道。“醪醴”即药酒也。“酒为百药之长”，酒较容易进入中药材组织细胞中，将各种不同有机物质溶解出来，以发挥生药原有的治疗作用。药酒用于治疗本型腰痛，可内服外敷，方便有效。

本发明公开的中药制剂中白藜芦醇有类雌激素作用，能调控卵巢细胞凋亡，修复卵巢功能不全，提高卵巢成熟率，减轻糖尿病肾脏纤维化、缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡，改善肾功能。同时可修复内皮细胞氧化损伤、抑制肾脏组织氧化应激反应。还具有可提高记忆力，调控线粒体通路，保护脑神经细胞。在治疗慢性肾脏疾病及抗衰老治疗中疗效可靠。