含用常温真空干燥法获得的人参冷凝液皮肤外用剂组合物的制作方法

本申请主张基于2017年08月31日提出申请的韩国专利申请第10-2017-0110958号以及2018年08月24日提出申请的韩国专利申请第10-2018-0099176号的优先权权益，相应韩国专利申请文件中公开的全部内容作为本说明书的一部分包含在申请中。

本发明涉及一种含用常温真空干燥法获得的人参冷凝液皮肤外用剂组合物，更具体而言，涉及一种利用并非人参提取物的人参冷凝液或者水参蒸熟液以不损失人参有效成分的方式回收人参有效成分而具有皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果的含用常温真空干燥法获得的人参冷凝液皮肤外用剂组合物。

背景技术：

人参(panaxginsengc.a.meyer)是属于五加科人参属的植物，是在韩国、中国及日本等地2000多年之前开始一直以来使用的生药，一直以来以预防疾病和延长寿命为目的经验性地加以使用。至今为止，已知的人参功能及效果有：对中枢神经系统的作用、抗癌作用、抗癌活性、免疫功能调节作用、抗糖尿作用、肝功能亢进功能、心血管障碍改善、抗动脉硬化作用、血压调节作用、更年期障碍改善、对骨质疏松症的效果、抗压力及抗疲劳作用、抗氧化活性以及老化抑制功能等(最新高丽人参“成分及功能篇”，韩国人参烟草研究院，56-112，1996)。

众所周知，人参的代表性生理活性成分即人参皂苷(ginsenoside)均匀地分布在人参的地上及地下部分，尤其是，根据人参根(根部)、人参叶及人参果实等部位，不仅是人参皂苷含量，其组成也不同(atteleasetal，biochempharmacol，58；1685-1693，1999)。

人参属(panax)高丽人参(ginseng)有4种变种即紫茎变种(var.jakeungjong)、黄熟变种(var.hwangsookjong)、绿茎变种(var.chungkeangjong)以及橙黄熟变种(var.deunghwangsookjong)。

随之，正在积极地进行使用人参制备皮肤化妆料以及药物组合物的研究。

例如，作为关于包含人参提取物的化妆料组合物的现有技术，大韩民国授权专利第10-1711002号记载了一种关于通过中药炮制法来加工人参叶并改良的方法和作为主要活性成分含有改良的人参叶提取物的化妆料组合物的技术，大韩民国公开专利第10-2013-0090029号公开了一种以蒸熟人参籽为主要成分的皮肤外用剂以及利用其的以蒸熟人参籽为主要成分的皮肤外用剂的制备方法，其特征在于，所述皮肤外用剂由通过从水、乙醇或者正己烷中选择的任意一个溶剂提取的蒸熟人参籽提取物以及从蒸熟人参籽中提取的蒸熟人参籽油组成，所述蒸熟人参籽经过蒸熟处理过程。

然而，如上所述的现有技术存在如下局限：作为人参提取物含有极微量的人参有效成分，因此无法表现出显著的效果；由于利用有机溶剂来制备人参提取物，可能会使得有机溶剂残留；为了提取大量的有效成分，需要执行多个步骤。

因此，需要开发含有大量的人参有效成分并表现出皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果的化妆料组合物。

现有技术文献

专利文献

大韩民国授权专利第10-1711002号(人参叶提取物制备方法以及作为有效成分含有其的化妆料组合物)

大韩民国公开专利第10-2013-0090029号(以蒸熟人参籽为主要成分的皮肤外用剂组合物以及利用其的以蒸熟人参籽为主要成分的皮肤外用剂的制备方法)

技术实现要素：

为了解决如上问题，本发明人等制备了含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液或者水参蒸熟液的化妆料组合物，确认了这些组合物相比于以往的人参提取物不仅不包含对皮肤有害的物质还包含更多的表现出皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果的人参有效成分而皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果优异，由此完成了本发明。

因此，本发明的目的在于提供一种以不损失人参有效成分的方式只回收有效成分而具有皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果的含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液的化妆料组合物。

为了达到上述目的，根据本发明的一实施例，提供一种化妆料组合物，用于防止皮肤老化，所述化妆料组合物作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液。

另外，根据本发明的一实施例，一种化妆料组合物，用于抗炎，所述化妆料组合物作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液。

另外，根据本发明的一实施例，一种化妆料组合物，用于皮肤保湿，所述化妆料组合物作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液。

可以是，所述人参冷凝液为水参蒸熟液。

可以是，相对于组合物总重量，所述化妆料组合物含有0.001～50重量％的人参冷凝液。

可以是，所述化妆料组合物具有从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华液、眼霜、眼部精华液、清洁膏、清洁泡沫、清洁水、面膜、粉、身体乳、身体霜、身体油以及身体精华液所组成的组中选择的剂型。

可以是，所述化妆料组合物通过减少紫外线照射引起的mmp-1(基质金属蛋白酶-1：matrixmetalloproteinase-1)的表达量来防止皮肤老化。

可以是，所述化妆料组合物通过减少因干扰素γ(interferongamma，ifn-γ)而增加的炎症基因(环氧合酶-2，cox-2)的表达量来改善或者缓解皮肤炎症。

可以是，所述化妆料组合物通过使透明质酸的生成量浓度依赖性地增加而有助于皮肤保湿。

可以是，所述化妆料组合物促进胶原蛋白生成。

可以是，所述胶原蛋白是因uv照射而减少的前胶原蛋白。

可以是，所述水参蒸熟液含有从八甲基环四硅氧烷(octamethylcyclotetrasiloxane)、十甲基环五硅氧烷(decamethylcyclopentasiloxane)以及十二甲基环六硅氧烷(dodecamethylcyclohexasiloxane)中选择的任意一种以上的化合物。

根据本发明的一实施例，提供一种化妆料组合物的制备方法，所述化妆料组合物是上述的化妆料组合物，所述化妆料组合物的制备方法包括：s1)去除并清洁沾在人参上的异物的步骤；s2)对清洁后的人参进行常温真空干燥来制备人参蒸气的步骤；以及s3)冷凝所述人参蒸气来制备人参冷凝液的步骤。

可以是，在所述s1)步骤和所述s2)步骤之间还包括利用水蒸气蒸熟人参的步骤。

可以是，所述s2)步骤中的真空压力为5～150kpa。

本发明的含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液的化妆料组合物包含仅去除水分的人参冷凝液或者水参蒸熟液，从而能够防止皮肤老化且能够抑制紫外线引起的皮肤老化。

另外，本发明的含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液或者水参蒸熟液的化妆料组合物能够减少炎症基因的表达量而改善或者缓解皮肤炎症。

另外，本发明的含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液或者水参蒸熟液的化妆料组合物能够有助于保湿。

另外，本发明的含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液或者水参蒸熟液的化妆料组合物能够通过简单的制备方法大量生产具有皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果的化妆料组合物。

附图说明

图1是示出本发明一实施例的常温真空干燥装置的图。

图2是示出评价实施例1的皮肤老化防止效果的结果的图。

图3是示出评价实施例1的抗炎效果的结果的图。

图4是示出评价实施例1的保湿效果的结果的图。

图5是示出评价实施例2的细胞毒性的结果的图。

图6是示出对实施例2的胶原蛋白生成效果进行评价的结果的图。

(附图标记说明)

100：干燥器

200：加热器

201：空气通道

300：蒸气排出管

400：蒸气冷凝器

401：压缩器

402：冷凝器

500：贮存罐

具体实施方式

本发明一实施例的化妆料组合物作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液。

本说明书中提及的“常温”是压力减压至真空时的内部温度，意指20℃至37℃范围的温度。

本说明书中提及的“常温真空干燥法”是干燥食物或食品的方法，是在常温下快速传递真空状态的压力和能量来进行干燥的干燥方法。

所述常温真空干燥法可通过真空干燥装置来执行。

作为本发明的一实施例，所述真空干燥装置示于图1中，所述真空干燥装置可包括：干燥器100，可以容纳人参；加热器200，加热所述干燥器100的内部；蒸气排出管300，与所述干燥器100的内部连接；蒸气冷凝器400，连接于所述蒸气排出管300的下游侧；以及贮存罐500，连接于所述蒸气冷凝器400的下游侧而贮存人参冷凝液。

所述干燥器100是可以将人参堆积在内部进行干燥的装置，为此，干燥器100可以通过内部密闭而能够保持真空状态的容器形态来实施，可以是在其下方设置加热器200，在内部设置能够在其上方堆积人参并进行干燥的干燥架。

所述加热器200直接或者间接地加热干燥器100，可以实施为具有连接于所述干燥器100内部的空气通道201，加热的空气沿着所述空气通道201通过的同时热间接传递到干燥器100内部。

所述蒸气排出管300是使得在所述干燥器100内部加热的空气排出到外部的通道，该蒸气排出管300的下游侧可以与蒸气冷凝器400连接而使干燥器100内部的蒸气通过蒸气排出管300供应到蒸气冷凝器400。

所述蒸气冷凝器400是压缩并冷凝从干燥器100通过所述蒸气排出管300供应的蒸气来收集人参的有效成分的装置，为此，蒸气冷凝器400可包括压缩器401和冷凝器402，此时，所述压缩器401是连接于蒸气排出管300而压缩蒸气的装置，所述冷凝器402可以连接于压缩器401的下游侧而冷凝被压缩的蒸气。

所述贮存罐500是贮存通过蒸气冷凝器400收集的人参冷凝液的装置，可以设置在蒸气冷凝器400的下游侧。

在后面叙述更加具体的作为有效成分含有人参冷凝液的化妆料组合物的制备方法。

本说明书中提及的“人参”是属于五加科的多年生草本植物，可包括水参、白参、红参。

另外，本发明中“水参”是指刚收获的人参，意指未晾干或干燥而在自然条件下直接采挖的参。

所述白参是指采挖4～6年生根并剥去皮后在阳光下晾干的参，晾干成直形的称为直参，弯曲晾干的称为曲参。另外，红参意指将带皮的5～6年生根用水蒸气蒸而晾干的参。

本说明书中提及的“冷凝液”意指水蒸气冷凝而制成的液体，例如，意指水蒸气失去热量而相变所生成的水。所述冷凝液通常可以具有与水蒸气相同或者相似程度的温度。

以下，详细说明本发明。

在本发明的一实施例中，作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液的化妆料组合物可以提供皮肤老化防止或者皱纹改善用化妆料组合物。

另外，所述化妆料组合物可通过减少紫外线照射引起的mmp-1(基质金属蛋白酶-1：matrixmetalloproteinase-1)的表达量来调节胶原蛋白裂解酶以及胶原蛋白合成酶的平衡，通过减少mmp-1的表达量来防止皮肤老化。

另外，可以提供作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液的抗炎用化妆料组合物，该抗炎用化妆料组合物可通过皮脂调节或者抗炎效果即通过抑制生成炎症因子来改善包括粉刺在内的皮肤过敏。

另外，所述化妆料组合物可通过减少因干扰素γ(interferongamma，ifn-γ)而增加的环氧合酶-2(cox-2)的表达量来改善或者缓解皮肤炎症。

另外，可以提供作为有效成分含有利用常温真空干燥法获得的人参冷凝液的皮肤保湿用化妆料组合物，该皮肤保湿用化妆料组合物可有助于皮肤保湿。

另外，所述化妆料组合物可以浓度依赖性地增加透明质酸的生成量来提高皮肤弹性并改善皮肤皱纹，同时透明质酸作为亲水性物质可以对皮肤提供优异的保湿效果。

在本发明的一实施例中，所述人参冷凝液可以是水参蒸熟液。如上所述，所述人参包括水参，所述水参蒸熟液意指经过蒸熟步骤之后利用常温真空干燥法冷凝的液体。

其中，“人参冷凝液”是指利用常温真空干燥法获得的液体，意指常温下真空干燥未晾干或干燥的人参而使人参内含有的水蒸气冷凝而制成的液体。

另外，所述水参蒸熟液可以包含从八甲基环四硅氧烷(octamethylcyclotetrasiloxane)、十甲基环五硅氧烷(decamethylcyclopentasiloxane)以及十二甲基环六硅氧烷(dodecamethylcyclohexasiloxane)中选择的任意一种以上的化合物。由此，与含有人参冷凝液的相比，所述化妆料组合物通过含有水参蒸熟液而能够进一步提高皮肤老化防止、抗炎或者保湿效果。

在本发明的一实施例中，所述化妆料组合物促进胶原蛋白生成，从而能够浓度依赖性地增加胶原蛋白的生成量，切断皮肤干燥而提高保湿力，提高皮肤弹性并改善皮肤皱纹。

此时，所述胶原蛋白可以是因uv照射而减少的前胶原蛋白(procollagen)。其中，前胶原蛋白是构成皮肤真皮层的蛋白质成分，起到与水分相结合而保持皮肤的湿润感及弹性的作用。另外，前胶原蛋白在细胞内合成之后向细胞外分泌而聚合成胶原蛋白纤维，因此可以提高前胶原蛋白的生成而促进胶原蛋白合成。

在本发明的一实施例中，相对于组合物总重量，所述化妆料组合物可以含有0.001～50重量％的人参冷凝液，当相对于所述化妆料组合物总重量，人参冷凝液小于0.001重量％时，可能不具有皮肤老化防止或者抗炎效果，当大于50重量％时，可能引起皮肤过敏反应而产生预料不到的副作用。优选的是0.01～30重量％，更优选的是0.05～25重量％，但并不限于此。

在本发明的一实施例中，所述化妆料组合物可以还含有本领域中常用的美容学或者皮肤病学上可接受的介质或者基质。可以通过本领域的常规方法将其提供为适于局部用药的所有剂型，例如溶液、凝胶、固体或糊状无水生成物、水相中分散油相而获得的乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊、微颗粒球或离子型(脂质体)和/或非离子型小囊分散剂形态，或者膏、柔肤水、乳液、粉、软膏、喷雾或遮瑕棒形态。可以通过本领域的常规方法来制备这些组合物。

在本发明的一实施例中，所述化妆料组合物可以具有从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华液、眼霜、眼部精华液、清洁膏、清洁泡沫、清洁水、面膜、粉、身体乳、身体霜、身体油以及身体精华液所组成的组中选择的剂型。

另外，关于所述化妆料组合物，本领域技术人员可以毫无困难地根据其它外用剂的种类或者使用目的等适宜选出并配制各剂型中上述必要成分之外的其它成分。例如，可以还包含紫外线阻断剂、头发调理剂、香料等。

当本发明的剂型为溶液或者乳浊液时，作为载体成分使用溶剂、增溶剂或者乳浊剂，例如存在水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或者脱水山梨醇的脂肪酸酯。

当本发明的剂型为悬浮液时，作为载体成分可以使用水、乙醇或者丙二醇之类液体稀释剂、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯之类悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或者胺黄树胶(traganth)等。

当本发明的剂型为糊剂、膏或者凝胶时，作为载体成分可以使用动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、胺黄树胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石粉或者氧化锌等。

当本发明的剂型为粉或者喷雾时，作为载体成分可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或者聚酰胺粉，尤其是喷雾时，可以附加包含氯氟烃、丙烷/丁烷或者二甲醚之类推进剂。

在本发明的一实施例中，所述化妆料组合物中可以附加包含增稠剂。所述化妆料组合物中包含的增稠剂可以使用甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基羟基鸟嘌呤、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧乙烯基聚合物、聚季铵盐、鲸蜡硬脂醇、硬脂酸、卡拉胶等，优选的是可以使用羧甲基纤维素、羧乙烯基聚合物、聚季铵盐中的一种以上，最优选的是羧乙烯基聚合物。

在本发明的一实施例中，所述化妆料组合物可以根据需要包含适宜的各种基质和添加剂，发明人可以容易地选择这些成分的种类和量。可以根据需要包含可接受的添加剂，例如可以附加包含本领域中常用的防腐剂、色素、添加剂等成分。

所述防腐剂可以具体为苯氧乙醇(phenoxyethanol)或者1，2-己二醇(1，2-hexanediol)等，香料可以是合成香料等。

另外，在本发明的一实施例中，化妆料组合物可以包含从水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂以及海藻提取物所组成的组中选择的组合物。作为可添加的其它配制成分，可以列举油脂成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机及无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、ph调节剂、乙醇、色素、香料、血循环促进剂、凉感剂、止汗剂、纯净水等。

另外，可添加的其它配制成分并不限于此，而且，在不损害本发明的目的及效果的范围内也可以配合上述任意成分。

本发明的一实施例的化妆料组合物的制备方法包括：s1)去除并清洁沾在人参上的异物的步骤；s2)对清洁后的人参进行常温真空干燥而制备人参蒸气的步骤；以及s3)冷凝所述人参蒸气来制备人参冷凝液的步骤。

所述s1)步骤是去除并清洁沾在人参上的异物的步骤，是去除沾在或粘在人参上的土或者农药而用于真空干燥的准备步骤。

此时，所述异物可包含土、农药、石头。

所述清洁优选的是用流动水进行清洁以防人参受损，但只要是本领域中常用的人参清洁方法则不受限制。另外，因为用水清洁，人参可称为水参。

所述s2)步骤是对清洁后的人参进行常温真空干燥而制备人参蒸气的步骤，利用了降低压力并保持为真空状态来使水沸点降低从而使水分在常温下容易蒸发的原理，所述s2)步骤是常温下使得人参所具有的水分蒸发来干燥人参的步骤。

此时，可以利用前面叙述的真空干燥装置。具体地，可以在所述干燥器100中堆积清洁后的人参之后，将压力降低成真空状态。另外，可以利用与所述干燥器100连接的加热器200将干燥器100内部的温度保持在常温。

所述常温真空干燥是干燥人参的方法，通过在常温下快速传递真空状态的压力和能量来进行干燥。

所述s2)步骤是用蒸气提取包含在人参中表现出皮肤老化防止或者抗炎效果的有效成分的步骤。

在所述s2)步骤中，真空压力可以是5～150kpa，其中，真空压力意指干燥器100内部或者要进行干燥的空间的压力。此时，当真空压力小于5kpa时，因压力过低，可能使人参的有效成分之外的成分一同蒸发，当真空压力大于150kpa时，人参的蒸气发生率可能降低。优选的是10kpa至99kpa，更优选的是80kpa至100kpa，但并不限于此。

在所述s2)步骤中，优选的是，加热温度设定为20～37℃的常温，干燥时间为2～15小时。当干燥时间小于2小时时，人参的有效成分可能无法全部汽化，当干燥时间大于15小时时，并非人参有效成分的其它异物可能一同蒸发。优选的是5小时至10小时，但并不限于此。

在本发明的一实施例中，在所述s1)步骤和s2)步骤之间可以还包括利用水蒸气蒸熟人参的步骤。

所述蒸熟是指利用加热的水蒸气蒸熟人参，可以通过蒸熟来诱导人参所具有的有效成分的变化，期待皮肤老化防止或者抗炎效果的提高。

所述蒸熟时间可以是30分钟至2小时，当蒸熟时间小于30分钟时，难以诱导人参的有效成分的变化，当蒸熟时间大于2小时时，人参的有效成分可能与水蒸气一同飞散蒸发。可以优选的是30分钟至1时间，但并不限于此。

所述蒸熟温度是80～120℃，优选的是90～110℃，但只要是能够蒸熟人参的温度，不受特别限制。

所述s3)步骤是冷凝所述人参蒸气来制备人参冷凝液的步骤，是将含有所述人参有效成分的蒸气冷凝并液化的步骤。

此时，可以利用前面叙述的真空干燥装置的蒸气冷凝器400制备人参冷凝液。具体地，将通过所述蒸气排出管300供应的人参蒸气输送到蒸气压缩器401。然后，可以经所述蒸气压缩器401的压缩器401压缩人参蒸气，压缩的人参蒸气通过所述蒸气压缩器401的冷凝器402被冷凝。之后，冷凝的人参蒸气可以收集到位于所述冷凝器402下游的贮存罐500中。

以下，为了帮助理解本发明，提供优选的实施例。但是，下述实施例仅用于例示本发明，可以在本发明的范畴及技术构思范围内进行各种变更以及修改，这对于本领域中普通技术人员而言是显而易见的，显然，这些变更以及修改也属于所附的权利要求书范围。

制备例1：人参冷凝液制备

1)清洁：通过韩国锦山人参批发中心获得人参之后，去除沾在其上的土。

2)常温真空干燥：将人参放入真空干燥器100中，真空压力设为90～100kpa，加热温度设为20～37℃，然后干燥5～10小时。

3)冷凝液制备：将通过常温真空干燥获得的人参蒸气冷凝并制备人参冷凝液。

制备例2：水参蒸熟液制备

1)清洁：通过韩国锦山人参批发中心获得水参之后，去除沾在其上的土。

2)蒸熟：将水参用水蒸气在100℃下蒸熟30分钟。

3)常温真空干燥：将蒸熟的人参放入真空干燥器100中，真空压力设为90～100kpa，加热温度设为20～37℃，然后干燥5～10小时。

4)蒸熟液制备：将通过常温真空干燥获得的人参蒸气冷凝并制备水参蒸熟液。

实施例1

含有由所述制备例1制备的人参冷凝液的组合物。

实施例2

含有由所述制备例2制备的水参蒸熟液的组合物。

实验例1：利用gc-ms分析成分

为了确认由所述制备例1制备的人参冷凝液的成分，并与由所述制备例2制备的水参蒸熟液进行成分比较，执行顶空气相色谱质谱测定(headspacegc-ms)。分别取2g人参冷凝液以及水参蒸熟液并放入顶空瓶(headspacevial)中，在80℃下加热30分钟后，注入gc-ms中实施成分分析。此时，gg-ms的操作条件如下。注入口温度设为250℃，gc色谱柱使用hp-5色谱柱(column)。烘箱的温度在40℃下保持2分钟之后，以5℃/分钟的速度升温并在300℃下保持5分钟。作为载气(carriergas)，将氦(he)以1ml/分钟的速度使用。用扫描模式(scanmode)分析(20～550)m/z区域，通过谱库(library)检索来定性确认检测到的峰值质谱。其结果示出于下表1。

[表1]

如上表1所示，与人参冷凝液不同，水参蒸熟液还含有八甲基环四硅氧烷(octamethylcyclotetrasiloxane)、十甲基环五硅氧烷(decamethylcyclopentasiloxane)以及十二甲基环六硅氧烷(dodecamethylcyclohexasiloxane)。

另一方面，与水参蒸熟液不同，人参冷凝液含有2-乙基-1-己醇(2-ethyl-1-hexanol)以及2-异丙基-3-甲氧基吡嗪(2-isopropyl-3-methoxypyrazine)。

由此，确认到所含的有效成分会根据有无蒸熟工艺而不同。

实验例2：人参冷凝液的皮肤老化防止效果

为了确认人参冷凝液的皮肤老化防止效果，确认处理人参冷凝液是否减少因紫外线而增加的mmp-1的表达量，其结果示于图2。

首先，将人成纤维细胞以7.5*10⁴个的浓度在12孔平板培养器中通过使用含有10％fbs(胎牛血清，fetalbovineserum)的dmem培养基进行接种(seeding)。次日，用pbs清洁培养基之后放入没有fbs的dmem培养基，进行至少6小时的细胞饥饿培养(cellstarvation)。然后，用pbs清洁培养基后以20mj/cm²照射uvb，之后加入按照各种浓度(50ppm、100ppm、200ppm)含有所述实施例1的没有fbs的dmem，追加培养48小时。培养第二天收获(harvest)细胞培养基并用elisa方法定量所生成的mmp-1(基质金属蛋白酶1，matrixmetalloproteinase-1)的量。其结果，将未含有测试物质的对照组作为100而与测定的值进行比较来算出比较值，阳性对照组使用了2μm的ra(维甲酸(retinoicacid)；sigma)。另外，紫外线对照组意指对未含有测试物质的对照组照射uvb。

如图2所示，确认到实施例1的人参冷凝液能够使得因紫外线照射而增加的mmp-1表达量降低90％至100％。另外，确认到即使处理极微量50ppm的人参冷凝液，也显著降低mmp-1表达量。

其中，mmp-1是起到分解胶原蛋白作用的酶，若mmp-1量增加则皮肤的紧致感降低，容易形成皱纹。因此，确认到本发明的人参冷凝液具有改善或者预防皱纹的效果。

实验例3：人参冷凝液的抗炎效果

为了确认人参冷凝液的抗炎效果，确认处理人参冷凝液是否减少因干扰素γ(interferongamma，ifn-γ)而增加的炎症基因的表达量。

在6孔平板培养器中以5*10⁵个的浓度培养人角质形成细胞，24小时后替换成含有125ppm、250ppm以及500ppm的实施例1的人参冷凝液的dmem培养基并实施预处理。预处理6小时后处理干扰素γ(50ng/ml)来引发炎症。24小时后收获(harvest)细胞，通过rt-qpcr方法分析所生成的环氧合酶-2(cox-2：cyclooxygenase-2)的量。以内标(internalcontrol)rplp0为基准计算基因表达量并将比较值示于图3。此时，对照组是未处理实施例1的人参冷凝液就培养的非处理组。另外，ifn-γ对照组是对所述对照组处理干扰素γ的组。

如图3所示，确认到实施例1的人参冷凝液使得因干扰素γ而增加的环氧合酶-2的表达量降低约40％至60％。

其中，环氧合酶-2是与炎症相关的酶，已公知通过选择性地抑制环氧合酶-2来治疗炎症的机制。因此，确认到本发明的人参冷凝液抑制环氧合酶-2，从而确认到其对炎症有治疗和预防效果。

实验例4：人参冷凝液的保湿效果

为了确认人参冷凝液的保湿效果，对角质形成细胞株即hacat细胞处理人参冷凝液而测定所生成的透明质酸(hyaluronicacid，ha)量，示于图4。

首先，使用含有100单位/ml(units/ml)青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin)和10％fbs的dmem培养基，在37℃、5％co2恒温箱中培养角质形成细胞株即hacat细胞，每3～4天传代培养一次，之后用于保湿评价。

将如上培养的hacat细胞以5*10⁵个的浓度接种(seeding)到24孔平板培养器中，18小时后将培养基替换成无血清(serum-free)dmem，按照各种浓度(1％、10％、20％)在不同孔中处理所述实施例1的冷凝液。24小时后收集培养基，15000xg下离心分离5分钟，收集上清液并用elisa方法定量所生成的透明质酸的量。此时，收集培养基并在-20℃下保存直至elisa分析。elisa使用了ha-elisa试剂盒(伊莱瑞特生物科技股份有限公司，elabsciencebiotechnologyco.，ltd)。其结果，将未含有测试物质的对照组作为100而与测定的值进行比较来算出比较值，阳性对照组使用了2μm的ra(维甲酸(retinoicacid)；sigma)。

如图4所示，对已诱导干燥的角质形成细胞(humankerationcyte)按照不同浓度处理所述实施例1的结果，确认到保湿相关因素即透明质酸的生成量浓度依赖性地增加。透明质酸是皮肤组成物质之一，若皮肤内透明质酸的量减少则引发皮肤老化，弹性降低而引发皮肤皱纹。另外，由于透明质酸羟基(-oh)多，其作为亲水性物质对动物等皮肤起到保湿作用。因此，确认到本发明的人参冷凝液诱导透明质酸的生成，其不仅具有皱纹预防效果，且保湿效果优异。

实验例5：水参蒸熟液的皮肤老化防止效果-细胞毒性评价

为了确认水参蒸熟液的皮肤老化防止效果，按照不同浓度处理实施例2的水参蒸熟液来确认是否能够阻挡紫外线(uvb)处理后的细胞的毒性，其结果示于图5。

首先，将人真皮成纤维细胞新生(humandermalfibroblasts，neonatal；hdfn)以7.5*10⁴个的浓度在24孔平板培养器中通过使用含有10％fbs(胎牛血清，fetalbovineserum)的dmem培养基进行接种(seeding)。次日，用pbs清洁培养基之后放入没有fbs的dmem培养基，进行至少6小时细胞饥饿培养(cellstarvation)。然后，用pbs清洁培养基后以20mj/cm²照射uvb，之后添加按照各种浓度(0.5重量％、1重量％、2重量％)含有所述实施例2的水参蒸熟液的没有fbs的dmem，追加培养48小时。在培养第二天收获(harvest)细胞培养基并利用mtt试剂盒测定细胞毒性。其结果，将未含有测试物质的对照组作为100而与测定的值进行比较来算出比较值，阳性对照组使用了5ng/ml的tgfβ。另外，对照组意指未含有测试物质并照射uvb的情况。

如图5所示，确认到实施例2的水参蒸熟液在紫外线照射条件下不影响细胞毒性。另外，确认到即使处理极微量0.5重量％的水参蒸熟液，细胞存活率为98％。

因此，确认到本发明的水参蒸熟液即使在紫外线照射下仍可阻挡细胞毒性并保持细胞存活率，从而能够防止紫外线引起的皮肤老化。

实验例6：水参蒸熟液的皮肤老化防止效果-胶原蛋白生成评价

为了确认水参蒸熟液的皮肤老化防止效果，按照不同浓度处理实施例2的水参蒸熟液来确认能否在紫外线(uvb)处理后的细胞中促进胶原蛋白的生成，其结果示于图6。

首先，将人真皮成纤维细胞新生(humandermalfibroblasts，neonatal；hdfn)以7.5*10⁴个的浓度在24孔平板培养器中通过使用含有10％fbs(胎牛血清，fetalbovineserum)的dmem培养基进行接种(seeding)。次日，用pbs清洁培养基之后放入没有fbs的dmem培养基，进行至少6小时细胞饥饿培养(cellstarvation)。然后，用pbs清洁培养基后以20mj/cm²照射uvb，之后添加按照各种浓度(0.5重量％、1重量％、2重量％)含有所述实施例2的水参蒸熟液的没有fbs的dmem，追加培养48小时。在培养第二天收获(harvest)细胞培养基并利用前胶原蛋白型ic-肽eia试剂盒(宝生物工程(takarabio)，目录编号(catno.)mk101，日本)测定分泌到培养基的前胶原蛋白量。将胶原蛋白测定试剂盒中含有的标准溶液稀释至各种浓度并在450nm下测定吸光度，制作标准浓度曲线而算出前胶原蛋白生成量。其结果，将未含有测试物质的对照组作为100而与测定的值进行比较来算出比较值，阳性对照组使用了5ng/ml的tgfβ。另外，对照组意指不含测试物质并照射uvb的情况。

如图6所示，对照射紫外线的人真皮成纤维细胞，按照不同浓度处理所述实施例2的结果，确认到皱纹改善以及保湿相关因素即前胶原蛋白的生成量浓度依赖性地增加。前胶原蛋白在细胞内生成，是一种释放到细胞外时聚合成胶原蛋白的物质。另外，皮肤内胶原蛋白起到防止外部环境引起皮肤内水分飞散的阻断作用而与皮肤保湿相关，锁住皮肤内水分而防止皮肤皱纹及老化。因此，确认到本发明的水参蒸熟液促进胶原蛋白生成，不仅具有皱纹预防效果，且保湿效果优异。