用于生发或防止脱发的外用剂的制作方法

本发明涉及一种用于生发并防止脱发的外用剂。

背景技术：

已知属于肠球菌(enterococcus)属的乳酸菌对活生物体具有多种作用。

例如，据报道粪肠球菌(enterococcusfaecalis)nf-1011菌株具有以下作用：抑制血压升高和预防心脏肥大(专利文献1)、免疫刺激作用(专利文献2)、增强干扰素产生(专利文献3)、防止感染(专利文献4)、增强抗癌性(专利文献5)、降低抗癌药的毒性(专利文献6)和激活生物抗氧化能力(专利文献7)。

然而，专利文献1-7基本上公开了乳酸菌的口服给药，并且没有假定其作为外用剂使用。

引文清单

专利文献

专利文献1：jp1993-201871a

专利文献2：jp1996-99887a

专利文献3：jp1996-259450a

专利文献4：jp1996-283166a

专利文献5：jp1996-295631a

专利文献6：jp1997-48733a

专利文献7：jp2017-1961a

技术实现要素：

技术问题

本发明旨在提供一种具有生发和防止脱发的优异效果的外用剂。

解决技术问题的技术方案

为了实现上述目的，本发明人进行了广泛的研究。结果，他们发现粪肠球菌(enterococcusfaecalis)nf-1011菌株的细胞及其细胞成分对生发和预防脱发具有显著高的作用。

基于上述发现，作为进一步研究的结果，完成了本发明。本发明提供以下用于生发或防止脱发的外用剂。

项1.一种用于生发或防止脱发的外用剂，其包含选自属于肠球菌(enterococcus)属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分。

项2.根据项1的外用剂，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌(enterococcusfaecalis)。

项3.根据项1或2的外用剂，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌nf-1011菌株(fermbp-10902)。

项4.根据项1-3中任一项的外用剂，其中细胞为死细胞。

项5.根据项1-4中任一项的外用剂，其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。

项6.一种用于生发或防止脱发的方法，其包括以下步骤：将选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分应用于需要生发或防止脱发的哺乳动物的皮肤上的步骤。

项7.根据项6的方法，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌。

项8.根据项6或7的方法，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌nf-1011菌株(fermbp-10902)。

项9.根据项6-8中任一项的方法，其中细胞为死细胞。

项10.根据项6-9中任一项的方法，其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。

项11.选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分在生产用于生发或防止脱发的外用剂中的用途。

项12.根据项11的用途，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌。

项13.根据项11或12的用途，其中属于肠球菌属的乳酸菌为粪肠球菌nf-1011菌株(fermbp-10902)。

项14.根据项11-13中任一项的用途，其中细胞为死细胞。

项15.根据项11-14中任一项的用途，其中乳酸菌的细胞成分是通过对乳酸菌进行溶解酶处理和热处理而获得的成分。

发明的有益效果

由于属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分具有显著的生发和防止脱发的效果，因此，它们可用作用于生发或防止脱发的外用剂的活性成分。

附图说明

图1为示出了实验例1中的男性个体的头顶的照片。

图2为示出了实验例2中的每个个体的头部的头顶的照片。

图3为示出了实验例2中的每个个体的头部的头顶的照片。

具体实施方式

下面详细说明本发明的实施方案。

在本说明书中，术语“包括”包括基本上由...组成和由...组成的含义。

根据本发明的用于生发或防止脱发的外用剂包括选自属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分中的至少一种组分。

属于肠球菌属的乳酸菌没有特别限制。实例包括粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(enterococcusfaecium)、鸟肠球菌(enterococcusavium)、铅黄肠球菌(enterococcuscasseliflavus)、鹑鸡肠球菌(enterococcusgallinarum)、黄色肠球菌(enterococcusflavescens)等。其中，粪肠球菌、屎肠球菌等是优选的，粪肠球菌是更优选的。粪肠球菌中，优选从健康个体的粪便中分离的粪肠球菌nf-1011株。粪肠球菌nf-1011菌株于1991年10月8日保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566))，保藏号为fermp-12564。此外，该菌株已被转化为国际保藏，其保藏号为fermbp-10902。另外，独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心已于2012年4月与国家高级工业科学技术学院(nite)专利生物保藏中心合并，国家高级工业科学技术学院国际专利生物保藏中心(nite-ipod)(〒292-0818日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8120号室)现在接替了独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心的微生物保藏工作。

对属于肠球菌属的乳酸菌的细胞没有特别限制，只要它们是属于肠球菌属的乳酸菌的完整结构即可。细胞可以是活细胞或死细胞。细胞可以是干燥产品，例如冻干产品。属于肠球菌属的乳酸菌的活细胞可以从国家或国际分销组织(例如atcc、ifo和jcm)订购，或者可以从生物体中分离出来。

由于可以通过培养容易地大量生产活细胞，因此使用培养的活细胞经济且生产成本低。属于肠球菌属的乳酸菌的活细胞也可以根据已知方法通过培养来增殖。例如，可以通过如下方法获得大量的活细胞：将乳酸菌接种到适量的无菌rogosa液体培养基中，将细菌在35-37℃下有氧静态培养10-16小时，以获得预培养液，将预培养液添加到大量无菌rogosa液体培养基中，以相同的方式进行静态培养。当使用活细胞时，可使用培养液本身，或可以使用培养液的固体(例如，通过离心等在培养液中沉淀活细胞，并任选用生理盐水溶液洗涤而获得的沉淀)，或可以使用固体悬浮液(例如，通过将活细胞悬浮在等渗溶液(例如生理盐溶液)中而获得的悬浮液)。

属于肠球菌属的乳酸菌的死细胞没有特别限制。例如，可以使用热处理的活细胞。热处理的温度没有特别限制,只要为100℃以上即可。优选为可以进行高压釜处理的温度(例如110-125℃)。热处理时间例如为1分钟以上，优选为5-20分钟，更优选为约5-15分钟。

乳酸菌粪肠球菌nf-1011菌株的细胞可商购获得，例如，尼奇制药株式会社(ニチニチ製薬株式会社)的fk-23(商标)。

在本发明中，术语“乳酸菌的细胞成分”是指由于破坏乳酸菌的细胞壁而释放到细胞外的成分。

乳酸菌的细胞成分没有特别限制。它是例如其中活细胞的细胞壁被破坏的成分。要破坏的细胞壁可以是活细胞的全部或部分细胞壁。细胞壁破坏方法的实例包括热处理、通过物理力处理、用溶解酶处理及其组合。其中，包括用溶解酶处理的方法是优选的。更优选的一种方法，其包括：(a)用溶解酶处理和(b)选自热处理和通过物理力处理(优选热处理)中的至少一种的处理；进一步优选的方法为：其中在(a)经溶解酶处理后进行(b)选自热处理和通过物理力处理(优选热处理)中的至少一种处理。

热处理的温度没有特别限制，只要为100℃以上即可。优选为可以进行高压釜处理的温度(例如110-125℃)。热处理时间没有特别限制，只要可以破坏细胞壁的全部或部分即可，并且可以根据热处理温度适当设定。热处理时间例如为1分钟以上，优选为5-20分钟，更优选为5-15分钟左右。

通过物理力进行处理的方法没有特别限制，只要可以破坏细胞壁的全部或部分即可。实例包括超声处理、弗氏压碎(フレンチプレス)等。

对用于溶解酶处理的酶没有特别限制，只要其可以破坏全部或部分细胞壁即可。可以使用通常用于裂解细菌的各种酶。实例包括溶菌酶、actinase(アクチナーゼ)、消解酶(ザイモリエース)、chitarase(キタラーゼ)、mutanosylin(ムタノシリン)和acromopeptidase(アクロモペプチターゼ)。其中，优选为溶菌酶。可以使用一种溶解酶，并且可以组合使用两种或多种溶解酶。

可以根据溶解酶的种类、裂解靶(活细胞)的量等适当地确定用溶解酶处理的条件。例如，可以将溶解酶添加至活细胞悬液中，以使最终浓度为0.01-1mg/ml，并且处理在30-40℃下进行1-10小时。

乳酸菌的细胞成分没有特别限制，只要其为构成乳酸菌的细胞的成分即可。细胞成分优选是水溶性成分。水溶性成分例如通过离心分离等从细胞壁被破坏的乳酸菌中除去固体而得到。

粪肠球菌nf-1011菌株的细胞成分可商购获得，例如，尼奇制药株式会社(ニチニチ製薬株式会社)的lfk(商标)。

由于本发明的外用剂由于属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分而显示出生发和防止脱发的效果，因此，它们适合用作外用剂的活性成分，以使头发生长或防止脱发。本发明的外用剂包括外用药物和化妆品。化妆品还包括准药物(医薬部外品)。本发明的外用剂被应用于包括人的哺乳动物的皮肤(包括头皮)。在本发明中，生发包括头发发育和头发营养的概念。

在制备药物时，将乳酸菌的细胞及其细胞成分与已知成分一起制备成外用固体制剂、外用液体制剂、喷雾剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂等形式，从而获得外用制剂。

药物可以包括一种或多种已知的用于外用剂的添加剂，即选自抗菌剂、冷却剂、乳化剂、油、抗氧化剂、表面活性剂、香料、紫外线吸收剂、染料、乙醇、水、保湿剂、增稠剂、增溶剂、胶凝剂等中的一种或多种已知添加剂。

药物中所包含的乳酸菌的细胞或其细胞成分的比例没有特别限制。该比例例如为0.01-99质量％。

化妆品可以以各种形式配制，包括水溶液、增溶剂(可溶化系)、乳剂、油液、粉剂、凝胶剂、软膏剂、气雾剂、水油两层形式和水油粉三层形式。

化妆品也可以用于任何应用。实例包括洗发剂、漂洗剂、头发处理剂、头发调理剂、头发定型产品、头发滋补剂、染发剂、美发、润发油、发液、发胶、发乳、头发生长剂等。

除了乳酸菌的细胞或其细胞成分以外，化妆品还根据需要适当含有化妆品中通常使用的成分。实例包括保湿剂、抗氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇、着色剂、消毒剂、防腐剂、香料、溶剂、ph调节剂、血液循环刺激剂等。

化妆品中乳酸菌的细胞或其细胞成分的比例没有特别限制。例如，该比例为0.01-99质量％。

由于属于肠球菌属的乳酸菌的细胞及其细胞成分具有生发和防止脱发的作用，因此，它们作为用于生发或防止脱发的外用剂的有效成分是有用的。

实施例

给出以下实施例以更详细地说明本发明。然而，本发明不限于这些实施例。

1.细胞样品的制备：fk-23

将粪肠球菌nf-1011菌株在液体培养基(葡萄糖：2％、酵母提取物：2％、蛋白胨：2％、磷酸氢二钾：4％)中于37℃培养18小时。使用微滤膜，进行收获和洗涤以收集活细胞。将活细胞在110℃下热处理10分钟，然后通过喷雾干燥进行干燥。所得的干燥的死细胞在以下实验中用作细胞样品(fk-23)。

2.细胞样品的制备：lfk

将粪肠球菌nf-1011菌株接种在10mlrogosa液体培养基中，并在37℃下有氧静态培养(初步培养)15小时，以获得细胞浓度约为10⁹个细胞/ml的细胞溶液(种子)。将细胞接种在10l的rogosa液体培养基中(细胞浓度：10⁶个细胞/ml)，并在37℃下进行有氧静态培养16小时，以获得活细胞数约为10⁹个细胞/ml的细胞溶液。通过离心(12,000×g，20分钟)收集获得的细胞溶液，然后用生理盐水溶液(0.85％氯化钠溶液)洗涤两次，并悬浮在100ml蒸馏水中，从而获得细胞悬浮液。将溶菌酶(リゾチーム)添加到细胞悬浮液中，以使最终浓度为0.1mg/ml，然后在37℃处理4小时。此后，在110℃下热处理10分钟以获得处理过的细胞。在以下实验中，将得到的处理过的细胞用作细胞样品(lfk)。

实验例1

在39岁男性个体中，每天使用一次头发定型产品，该产品通过将1％的粉末(其中fk-23和lfk以1:1的比例混合)悬浮在以乙醇和水为主要成分的溶液中而获得，主要用于头皮上可见的裸露的皮肤以及个体关注的部位。使用时间没有特别规定。然而，个体主要在就寝之前以及在洗发时头发干燥后使用该产品。

图1为示出了代表开始使用后男性个体的头顶的照片。个体于2018年6月5日开始使用该产品。从2018年6月19日至7月3日，肉眼观察到头发增加。

实验例2

每天一次在40-70岁的五名男性和女性个体上使用与实验例1相同的定型产品，主要用于头皮上可见的裸露的皮肤以及个体关注的部位。使用时间没有特别规定。然而，个体主要在就寝之前以及在洗发时头发干燥后使用该产品。

图2和图3为示出了代表开始使用后每个个体的头顶的照片。可以确认的是，在迅速获得结果的个体中，裸露的皮肤在使用第四周后变得不那么明显，而在缓慢获得结果的个体中，裸露的皮肤在第八周变得不那么明显。

pct/ro/134表