包含朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花的混合提取物的预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物的制作方法

提供了包含朝鲜当归(angelicagigasnakai)提取物或朝鲜当归和西兰花(brassicaoleraceavar.italica)的混合提取物的用于预防和/或治疗神经退行性疾病的药物组合物，以及包含朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花的混合提取物的用于联合施用以预防和/或治疗神经系统疾病的药物组合物。

背景技术：

随着人口老龄化，退行性疾病的患病率和发病率正在增加。尤其是，由于全球人口的老龄化，患有痴呆症相关疾病的患者的数量正在迅速增加。根据阿尔茨海默病国际组织(adi)的数据，2013年全世界约有4435万人患有痴呆症，预计到2030年患有痴呆症的人数将达到7562万人，到2050年将达到1亿3546万人。在几种类型的痴呆中最常见的阿尔茨海默病中，逐渐揭示了病理生理学，并且已经进行了许多研究以开发治疗剂。但是，尚无有关开发出有效治疗剂的消息。

技术实现要素：

技术问题

一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的药物组合物、用于保护神经细胞的药物组合物和/或用于再生(或产生)神经细胞的药物组合物，所述药物组合物包含朝鲜当归(angelicagigasnakai)提取物或朝鲜当归和西兰花(brassicaoleraceavar.italica)的混合提取物作为活性成分。另一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的方法、用于保护神经细胞的方法和/或用于再生(或产生)神经细胞的方法，所述方法包括将朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花(brassicaoleraceavar.italica)的混合提取物施用于需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞的方法和/或再生(或产生)神经细胞的受试者。朝鲜当归和西兰花的混合提取物可以是朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合物、朝鲜当归和西兰花的混合物的提取物或其组合。

另一种实施方式提供了用于改善神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的健康功能食品，其包含朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花的混合提取物作为活性成分。朝鲜当归和西兰花的混合提取物可以是朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合物、朝鲜当归和西兰花的混合物的提取物或其组合。

另一种实施方式提供了用于制备对神经退行性疾病具有预防、治疗和/或改善作用的组合物的方法，该方法包括制备朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花的混合提取物。

另一种实施方式提供了用于联合施用以预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的药物组合物，所述药物组合物包含朝鲜当归提取物和西兰花提取物。另一种实施方式提供了预防和/或治疗神经退行性疾病的方法、和/或保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的方法，所述方法包括以下步骤：将朝鲜当归提取物施用于需要预防和/或治疗神经系统疾病的受试者，以及将西兰花提取物施用于该受试者。施用朝鲜当归提取物的步骤和施用西兰花提取物的步骤可以同时或以任何顺序依次进行。

技术方案

本文提供了朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花(brassicaoleraceavar.italica)的混合提取物用于预防和/或治疗神经退行性疾病的用途。

当归是属于伞形科(umbelfamily)的多年生草本植物，当归主要在韩国、日本和中国栽培用于药用目的。当归分为韩国生产的朝鲜当归(angelicagigasnakai)、日本生产的东当归(angelicaacutilobakitagaw)和中国生产的华当归(angelicasinensisdiels)。已知它们的成分和药理作用是不同的。自古以来，当归就以幼芽作为药材，而根则被用作诸如镇痛、抗癌、降低肾毒性、改善肝功能、治疗糖尿病性高血压等各种疾病的药物。本文使用的朝鲜当归(angelicagigasnakai)提取物可以通过提取朝鲜当归(angelicagigasnakai)的根(例如朝鲜当归的根的干燥和粉碎产物)来获得。

西兰花(brassicaoleraceavar.italica)是属于罂粟目十字花科的一年生双子叶植物，广泛用于食用。由于西兰花比卷心菜含有更多的维生素u，因此已知西兰花通过增强胃可有效预防和治疗慢性胃炎、胃溃疡等，并且对前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌和胰腺癌具有优异的抗癌作用。本文中使用的西兰花提取物可通过提取选自由西兰花的种子、芽、花、整个植株等组成的组中的一个或多个部分而获得。芽可能意味着从种子中产生的最初的茎和/或叶。

如本文所用，“治疗”是指包括减轻或改善症状，减小疾病范围，延迟或减轻疾病的进展，改善、减轻或稳定疾病状况或症状，部分或完全恢复、延长生存期和其他有益的治疗结果等。“预防”是指包括作用于没有特定疾病的受试者以防止该特定疾病的发作或延迟疾病的发生时间的所有机制和/或作用。

在本发明中，确认了朝鲜当归提取物，或朝鲜当归和西兰花的混合提取物对脑细胞具有保护作用，以抵抗由神经毒性蛋白引起的脑神经损伤(参见实施例1中保护脑细胞免受β-淀粉样蛋白引起的脑神经损伤的作用)，并且对患有神经损伤的动物模型具有神经再生(例如神经细胞生成)的作用(参见例如实施例2中在阿尔茨海默病诱导的小鼠中再生(或生成)脑神经细胞的作用)，因此表现出朝鲜当归提取物，或朝鲜当归和西兰花的混合提取物的神经保护作用和/或神经细胞再生(或产生)作用。神经细胞可以是中枢神经细胞，例如脑(神经)细胞。

一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的药物组合物、用于保护神经细胞的药物组合物和/或用于再生(或产生)神经细胞的药物组合物，所述组合物包含朝鲜当归提取物作为活性成分。另一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的方法、用于保护神经细胞的方法和/或用于再生(或产生)神经细胞的方法，所述方法包括将朝鲜当归提取物施用于需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的受试者。神经细胞可以是中枢神经细胞，例如脑(神经)细胞。该方法可以进一步包括在施用步骤之前确认需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的受试者的步骤。

一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的药物组合物、用于保护神经细胞的药物组合物和/或用于再生(或产生)神经细胞的药物组合物，所述组合物包含朝鲜当归和西兰花的混合提取物作为活性成分。另一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的方法、用于保护神经细胞的方法和/或用于再生(或产生)神经细胞的方法，所述方法包括将朝鲜当归和西兰花的混合提取物施用于需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的受试者。该方法可以进一步包括在施用步骤之前鉴定需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的受试者的步骤。神经细胞可以是中枢神经细胞，例如脑(神经)细胞。朝鲜当归和西兰花的混合提取物可以是朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合物，或朝鲜当归和西兰花的混合物的提取物。

另一种实施方式提供了用于联合施用以预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的药物组合物，所述组合物包含朝鲜当归提取物和西兰花提取物。另一种实施方式提供了用于联合施用以预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的试剂盒，所述试剂盒包含朝鲜当归提取物和西兰花提取物。用于联合施用的药物组合物或试剂盒中包含的朝鲜当归提取物和西兰花提取物可以是配制在一起的形式(例如，混合物的形式)，或者可以是分别配制的形式并包含在一个剂量单位中。另一种实施方式提供了用于预防和/或治疗神经退行性疾病的方法、用于保护神经细胞的方法和/或用于再生(或产生)神经细胞的方法，所述方法包括将朝鲜当归提取物施用于需要预防和/或治疗神经退行性疾病、保护神经细胞和/或再生(或产生)神经细胞的受试者。施用朝鲜当归提取物的步骤和施用西兰花提取物的步骤可以同时或以任何顺序依次进行。

朝鲜当归提取物可以通过用选自由水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇组成的组中的一种或多种提取溶剂提取朝鲜当归(例如根)来获得。在一种实施方式中，朝鲜当归提取物可以是通过用40％至100％(v/v)、50％至100％(v/v)、60至100％(v/v)、70至100％(v/v)、80至100％(v/v)、90至100％(v/v)、92至100％(v/v)、94至100％(v/v)、95至100％(v/v)、96至100％(v/v)、97至100％(v/v)或98至100％(v/v)乙醇水溶液(例如98％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取朝鲜当归(例如根)而获得的朝鲜当归乙醇水溶液提取物。进一步地，朝鲜当归提取物可以在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃的温度下提取。

本文使用的朝鲜当归提取物可以是这样的提取物，每100g所述提取物中，

(1)紫花前胡素(decursin)的含量为约2000mg或更多、约2200mg或更多、约2400mg或更多、约2600mg或更多、约2800mg或更多、约2900mg或更多、或约3000mg或更多，例如，2000至5000mg、2000至4500mg、2000至4000mg、2000至3500mg、2200至5000mg、2200至4500mg、2200至4000mg、2200至3500mg、2400至5000mg、2400至4500mg、2400至4000mg、2400至3500mg、2600至5000mg、2600至4500mg、2600至4000mg、2600至3500mg、2800至5000mg、2800至4500mg、2800至4000mg、2800至3500mg、2900至5000mg、2900至4500mg、2900至4000mg、2900至3500mg、3000至5000mg、3000至4500mg、3000至4000mg、或3000至3500mg，和/或

(2)紫花前胡醇当归酯(decursinolangelate)的含量为约1200mg或更多、约1400mg或更多、约1600mg或更多、约1700mg或更多、或约1800mg或更多，例如，1200至3000mg、1200至2800mg、1200至2600mg、1200至2400mg、1200至2200mg、1400至3000mg、1400至2800mg、1400至2600mg、1400至2400mg、1400至2200mg、1600至3000mg、1600至2800mg、1600至2600mg、1600至2400mg、1600至2200mg、1700至3000mg、1700至2800mg、1700至2600mg、1700至2400mg、1700至2200mg、1800至3000mg、1800至2800mg、1800至2600mg、1800至2400mg、或1800至2200mg，和/或

(3)紫花前胡苷的含量为约800mg或更多、约1000mg或更多、约1200mg或更多、约1500mg或更多、约1700mg或更多、约2000mg或更多、约2200mg或更多、约2400mg或更多、约2500mg或更多、或约2600或更多，例如，800至5000mg、800至4500mg、800至4000mg、800至3500mg、800至3200mg、1000至5000mg、1000至4500mg、1000至4000mg、1000至3500mg、1000至3200mg、1200至5000mg、1200至4500mg、1200至4000mg、1200至3500mg、1200至3200mg、1500至5000mg、1500至4500mg、1500至4000mg、1500至3500mg、1500至3200mg、1700至5000mg、1700至4500mg、1700至4000mg、1700至3500mg、1700至3200mg、2000至5000mg、2000至4500mg、2000至4000mg、2000至3500mg、2000至3200mg、2200至5000mg、2200至4500mg、2200至4000mg、2200至3500mg、2200至3200mg、2400至5000mg、2400至4500mg、2400至4000mg、2400至3500mg、2400至3200mg、2500至5000mg、2500至4500mg、2500至4000mg、2500至3500mg、2500至3200mg、2600至5000mg、2600至4500mg、2600至4000mg、2600至3500mg、或2600至3200mg，和/或

(4)β-谷甾醇的含量为30mg或更多、50mg或更多、100mg或更多、150mg或更多、200mg或更多、220mg或更多、250mg或更多、270mg或更多、或300mg或更多，例如，30至1000mg、30至800mg、30至600mg、30至500mg、30至400mg、50至1000mg、50至800mg、50至600mg、50至500mg、50至400mg、100至1000mg、100至800mg、100至600mg、100至500mg、100至400mg、150至1000mg、150至800mg、150至600mg、150至500mg、150至400mg、200至1000mg、200至800mg、200至600mg、200至500mg、200至400mg、220至1000mg、220至800mg、220至600mg、220至500mg、220至400mg、250至1000mg、250至800mg、250至600mg、250至500mg、250至400mg、270至1000mg、270至800mg、270至600mg、270至500mg、270至400mg、300至1000mg、300至800mg、300至600mg、300至500mg、或300至400mg。

西兰花提取物可以通过用选自由水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇组成的组中的一种或多种提取溶剂提取选自由西兰花的种子、芽、花、整个植株等组成的组中的一个或多个部分来获得。在一种实施方式中，西兰花提取物可以是通过用20至80％(v/v)、30至70％(v/v)、40至60％(v/v)、45至60％(v/v)、48至60％(v/v)、40至55％(v/v)、45至55％(v/v)、48至55％(v/v)、40至52％(v/v)、45至52％(v/v)或48至52％(v/v)乙醇水溶液提取西兰花(例如根)而获得的西兰花乙醇水溶液提取物。此外，可通过将提取时的ph调节至例如7至9、7.5至9、7.8至9、7至8.5、7.5至8.5、7.8至8.5、7至8.2、7.5至8.2或7.8至8.2来获得西兰花提取物，以便有利于提取活性成分的含量。通过在上述ph范围内提取西兰花，可以得到提取物中的活性成分含量高的提取物。可以通过将ph调节剂与提取西兰花的提取溶剂一起添加来调节提取ph。在一种实施方式中，ph调节剂可以选自由氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾等组成的组中的一种或多种，但不限于此，并且可以选自可以在上述范围内调节ph的所有物质。另外，西兰花提取物可以在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、30至45℃、35至60℃、35至50℃、35至45℃、35至60℃、35至50℃、35至45℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃的温度下提取。

朝鲜当归和西兰花的混合物的提取物可以通过用选自由水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇组成的组中的一种或多种提取溶剂提取朝鲜当归(根)和西兰花(种子、芽、花、整个植株等)的混合物来获得。

在一种实施方式中，朝鲜当归和西兰花的混合提取物可以是：

(1)(i)朝鲜当归(根)的40％至100％(v/v)、50％至100％(v/v)、60至100％(v/v)、70至100％(v/v)、80至100％(v/v)、90至100％(v/v)、92至100％(v/v)、94至100％(v/v)、95至100％(v/v)、96至100％(v/v)、97至100％(v/v)或98至100％(v/v)乙醇水溶液(例如98％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取物，和(ii)西兰花(种子、芽、花、整个植株等)的20至80％(v/v)、30至70％(v/v)、40至60％(v/v)、45至60％(v/v)、48至60％(v/v)、40至55％(v/v)、45至55％(v/v)、48至55％(v/v)、40至52％(v/v)、45至52％(v/v)或48至52％(v/v)乙醇水溶液(例如50％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取物(任选地在ph为7至9、7.5至9、7.8至9、7至8.5、7.5至8.5、7.8至8.5、7至8.2、7.5至8.2或7.8至8.2的条件下提取的提取物)，或

(2)朝鲜当归(根)和西兰花(种子、芽、花、整个植株等)的混合物的40至100％(v/v)，45至100％(v/v)，48至100％(v/v)，50至100％(v/v)，60至100％(v/v)，70至100％(v/v)，80至100％(v/v)，90至100％(v/v)，92至100％(v/v)，94至100％(v/v)，95至100％(v/v)，96至100％(v/v)，97至100％(v/v)或98至100％(v/v)的乙醇水溶液提取物，或

(3)其组合。

此外，提取物或混合提取物可以是在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃下提取的提取物或混合提取物。

朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合物中朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合比，或朝鲜当归和西兰花的混合物中朝鲜当归和西兰花的混合比可以为1:0.1至10、1:0.1至5、1:0.1至4、1:0.1至3、1:0.1至2.5、1:0.1至2.2、1:0.2至10、1:0.2至5、1:0.2至4、1:0.2至3、1:0.2至2.5、1:0.2至2.2、1:0.5至10、1:0.5至5、1:0.5至4、1:0.5至3、1:0.5至2.5、1:0.5至2.2、1:0.5至2、1:0.7至10、1:0.7至5、1:0.7至4、1:0.7至3、1:0.7至2.5、1:0.7至2.2、1:0.7至2、1:1至10、1:1至5、1:1至4、1:1至3、1:1至2.5、1:1至2.2、1:1至2、1:1.2至10、1:1.2至5、1:1.2至4、1:1.2至3、1:1.2至2.5、1:1.2至2.2、1:1.2至2、1:1.5至10、1:1.5至5、1:1.5至4、1:1.5至3、1:1.5至2.5、1:1.5至2.2、1:1.5至2、1:1.7至10、1:1.7至5、1:1.7至4、1:1.7至3、1:1.7至2.5、1:1.7至2.2或1:1.7至2(上文中，朝鲜当归的重量或朝鲜当归提取物的固体成分重量:西兰花的重量或西兰花提取物的固体成分重量)。固体成分重量是指除去提取物的溶剂组分后剩余的固体的重量。这是用来表示混合比的术语，是指当混合物是朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合物时，去除了提取溶剂使得提取物的性质和/或浓度不受影响的活性成分的重量之间的比率。

作为活性成分包含在药物组合物中的朝鲜当归提取物或朝鲜当归和西兰花的混合提取物可以是干燥产物、浓缩物或浓缩的干燥产物的形式。

可以根据使用形式和目的、患者的状况、症状的类型和严重程度等适当地调节药物组合物中作为活性成分而包含的朝鲜当归和西兰花的混合提取物的含量，基于固体成分重量，该含量可以是0.001至99.9重量％、0.01至99.9重量％、0.1至99.9重量％、1至99.9重量％、10至99.9重量％、30至99.9重量％、40至99.9重量％、50至99.9重量％、0.001至90重量％、0.01至90重量％、0.1至90重量％、1至90重量％、10至90重量％、30至90重量％、40至90重量％、50至90重量％、0.001至70重量％、0.01至70重量％、0.1至70重量％、1至70重量％、10至70重量％、30至70重量％、40至70重量％、50至70重量％、0.001至50重量％、0.01至50重量％、0.1至50重量％、1至50重量％、10至50重量％、30至50重量％或40至50重量％，但不限于此。固体成分重量是指如上所述从提取物中去除了溶剂组分的固体的重量。

如本文所用，神经退行性疾病可以选自由于神经细胞死亡、减少、功能下降、功能丧失等导致的在运动调节能力、认知功能、知觉功能、感觉功能和自主神经功能表现出异常的所有疾病。例如，神经退行性疾病可以选自由痴呆症(例如阿尔茨海默病(ad)、血管性痴呆、混合性痴呆、路易体痴呆、额颞痴呆等)、帕金森病(pd)、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化症(als)等组成的组。

本文提供的药物组合物的施用对象(例如，需要预防或治疗神经退行性疾病的患者，或需要保护神经细胞或再生神经细胞的患者等)可以选自由包括人、狗、猫、马、牛、猪、山羊、兔、小鼠、大鼠等在内的哺乳动物，或细胞或由其分离的组织或其培养物等组成的组。此外，可以通过各种途径施用药物组合物。施用方式可以是本领域常用的任何方式，并且可以是例如口服施用或肠胃外施用，例如静脉内施用、肌内施用、皮下施用、腹膜内施用和病变部位(例如大脑、脊髓等)局部施用。可以将药物组合物根据常规方法配制成口服制剂(例如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和气雾剂等)以及肠胃外制剂(例如表皮制剂、栓剂或无菌注射溶液)，然后使用。

所述药物组合物除所述提取物外还可包含药学上合适且生理学上可接受的佐剂，例如载体、赋形剂和稀释剂等。

载体、赋形剂和稀释剂的实例可以包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。当配制成制剂时，可以使用选自由常用填充剂、增重剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂和表面活性剂组成的组中的一种或多种稀释剂或赋形剂。用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、粉状药物和混悬剂等，这些固体制剂可以通过将提取物与至少一种赋形剂混合来制备，所述赋形剂例如为选自由淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等组成的组中的至少一种。除了简单的赋形剂外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石粉。口服施用的液体制剂包括选自由悬浮液、内用液体、乳剂、糖浆等组成的组中的至少一种。除了常用的简单稀释剂如水和液体石蜡以外，还可以包含各种赋形剂，例如，所述赋形剂选自由保湿剂，甜味剂，芳香剂，防腐剂等组成的组中的至少一种。肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂、透皮制剂等。非水溶液或悬浮液可包含选自由丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)、可注射酯(如油酸乙酯)等组成的组中的至少一种。

该药物组合物可以以药学有效量施用。可以根据各种因素来规定药物组合物的剂量，所述因素诸如配制方法、施用方式、患者的年龄、体重、性别、病理状况、饮食、施用时间、施用间隔、施用途径、排泄速率和反应敏感性。剂量可以根据患者的年龄、体重、性别、施用方式、健康状况和疾病的严重程度而变化。根据医生或药剂师的决定，它可以每天一次或以固定的时间间隔分数次服用。例如，基于活性成分的固体成分重量(朝鲜当归和西兰花的混合提取物)，药物组合物的单次剂量或每日剂量可以为0.001至10000mg/kg，特别是0.01至10000mg/kg、0.01至5000mg/kg、0.01至3000mg/kg、0.01至2500mg/kg、0.01至2000mg/kg、0.01至1800mg/kg、0.1至10000mg/kg、0.1至5000mg/kg、0.1至3000mg/kg、0.1至2500mg/kg、0.1至2000mg/kg、0.1至1800mg/kg、1至10000mg/kg、1至5000mg/kg、1至3000mg/kg、1至2500mg/kg、1至2000mg/kg、1至1800mg/kg、10至10000mg/kg、10至5000mg/kg、10至3000mg/kg、10至2500mg/kg、10至2000mg/kg、10至1800mg/kg、100至10000mg/kg、100至5000mg/kg、100至3000mg/kg、100至2500mg/kg、100至2000mg/kg或100至1800mg/kg，但不限于此。单次剂量或每日剂量可以作为一种制剂配制成单位剂型或分配成单独的剂型，或者可以被包含在多剂包装中。以上剂量说明了平均情况，也可能根据个人差异而是高的或低的。

本发明的另一种实施方式提供了制备具有预防、治疗和/或改善神经退行性疾病作用的组合物的方法，该方法包括制备朝鲜当归提取物，或朝鲜当归和西兰花的混合提取物。

制备朝鲜当归提取物的步骤可以包括以下步骤：在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃下，用选自由1至10倍体积、2至8倍体积或4至6倍体积的水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇(例如乙醇)组成的组中的至少一种，例如90至100％(v/v)、92至100％(v/v)、94至100％(v/v)、95至100％(v/v)、96至100％(v/v)、97至100％(v/v)或98至100％(v/v)的乙醇水溶液(例如，98％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取朝鲜当归(例如，根)。

制备朝鲜当归和西兰花的混合提取物的步骤可以包括：1)将朝鲜当归提取物和西兰花提取物混合，或2)用提取溶剂提取朝鲜当归和西兰花的混合物。对于提取步骤中使用的提取溶剂和提取温度，请参考先前对朝鲜当归和西兰花的混合提取物的描述。

例如，步骤1)将朝鲜当归提取物和西兰花提取物混合可以包括：

i)在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃下，用选自由1至10倍体积、2至8倍体积或4至6倍体积的水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇(例如乙醇)组成的组中的至少一种，例如90至100％(v/v)、92至100％(v/v)、94至100％(v/v)、95至100％(v/v)、96至100％(v/v)、97至100％(v/v)或98至100％(v/v)的乙醇水溶液(例如，98％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取朝鲜当归(例如，根)，

ii)在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、30至45℃、35至60℃、35至50℃、35至45℃、35至60℃、35至50℃或35至45℃下，用选自由1至10倍体积、2至8倍体积或4至6倍体积的水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇(例如乙醇)组成的组中的至少一种，例如20至80％(v/v)，30至70％(v/v)、40至60％(v/v)、45至60％(v/v)、48至60％(v/v)、40至55％(v/v)、45至55％(v/v)、48至55％(v/v)、40至52％(v/v)、45至52％(v/v)或48至52％(v/v)的乙醇水溶液(例如，50％(v/v)乙醇水溶液(酒精))提取西兰花(例如，种子、芽、花、整个植株等)，和

iii)将步骤i)中提取的朝鲜当归提取物与步骤ii)中提取的西兰花提取物混合。

ii)制备西兰花提取物的步骤可任选地通过将西兰花和提取溶剂的混合物的ph调节至7至9、7.5至9、7.8至9、7至8.5、7.5至8.5、7.8至8.5、7至8.2、7.5至8.2或7.8至8.2来进行，可以通过添加常规的ph调节剂来调节ph。ph调节剂可包括选自由氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等组成的组中的至少一种，但不限于此。

制备朝鲜当归提取物的步骤和制备西兰花提取物的步骤可以同时或以任何顺序依次进行。

2)用提取溶剂提取朝鲜当归和西兰花的混合物的步骤可包括：i')将朝鲜当归和西兰花混合以制备混合物，和ii')在10至80℃、10至70℃、10至60℃、10至50℃、20至80℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、30至80℃、30至70℃、30至60℃、30至50℃、40至80℃、40至70℃、40至60℃或40至50℃下，用选自由1至10倍体积、2至8倍体积或4至6倍体积的水和具有1至4个碳原子的直链或支链醇(例如乙醇)组成的组中的至少一种，例如40至100％(v/v)、45至100％(v/v)、48至100％(v/v)、50至100％(v/v)、60至100％(v/v)、70至100％(v/v)、80至100％(v/v)、90至100％(v/v)、92至100％(v/v)、94至100％(v/v)、95至100％(v/v)、96至100％(v/v)、97至100％(v/v)或98至100％(v/v)的乙醇水溶液提取朝鲜当归和西兰花的混合物。

朝鲜当归提取物和西兰花提取物的混合比或朝鲜当归和西兰花的混合比与上述相同。

只要可以充分进行提取，朝鲜当归提取物/西兰花提取物的提取步骤的提取时间就是符合要求的，并且可以设定为1小时或更久、2小时或更久、3小时或更久或4小时或更久，例如1至24小时、2至24小时、3至24小时、4至24小时、1至12小时、2至12小时、3至12小时、4至12小时、1至6小时、2至6小时、3至6小时或4至6小时的水平，但不限于此。

上述方法中使用的提取过程可以通过任何常用的提取方法进行，并且，所述提取过程可以例如通过选自由热水提取、超声提取，回流提取等组成的组中的一种或多种方法来进行，但不限于此。该方法还可包括，任选地，在提取过程之后通过常规方法干燥和/或浓缩提取物。

另一种实施方式提供了用于预防和/或改善神经退行性疾病、用于保护神经细胞和/或用于再生(或产生)神经细胞的保健功能食品，其包含朝鲜当归提取物，以及朝鲜当归和西兰花的混合提取物。

保健功能食品是使用具有容易在日常膳食中缺乏的营养素和对人体有用的功能的原料和成分(以下称为“功能原料”)生产的食品，是指有助于维持健康或预防和/或改善某些疾病或症状的所有食品，并且最终产品的形式没有特别限制。例如，保健功能食品可以选自由各种食品、饮料组合物和食品添加剂组成的组，但不限于此。

保健功能食品中所含的朝鲜当归提取物，以及朝鲜当归和西兰花的混合提取物的含量根据食物的形式、期望的用途等适当地确定，并且没有特别限制。例如，按食物总重量计，含量可以为0.001至99重量％、0.01至99重量％、0.01至95重量％、0.01至90重量％、0.01至80重量％、0.01至50重量％、0.1至99重量％、0.1至95重量％、0.1至90重量％、0.1至80重量％、0.1至50重量％、1至99重量％、1至95重量％、1至90重量％、1至80重量％、1至50重量％、10至99重量％、10至95重量％、10至90重量％、10至80重量％、10至50重量％、25至99重量％、25至95重量％、25至90重量％、25至80重量％、25至50重量％、40至99重量％、40至95重量％、40至90重量％、40至80重量％、40至50重量％、50至99重量％、50至95重量％、50至90重量％、50至80重量％、60至99重量％、60至95重量％、60至90重量％、或60至80重量％。

保健功能食品还可包括选自由各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、调味剂(例如合成香料或天然香料)、着色剂、增强剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸或其盐、藻酸或其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等组成的组中的至少一种。这些添加剂的比例通常选自每100重量份总保健功能食品0.001至约20重量份，但不限于此。

有益效果

本发明提出朝鲜当归提取物以及朝鲜当归和西兰花的混合提取物的神经元细胞保护作用和神经元细胞再生(或产生)作用，从而提供了在预防和治疗神经退行性疾病上都非常有效的新疗法。

附图说明

图1是显示β-淀粉样蛋白和混合提取物的施用方案的示意图，所述施用方案用于在小鼠模型中进行证实提取物对β-淀粉样蛋白诱导的神经损伤的神经保护作用的测试。

图2是显示根据一种实施方式在施用提取物之后施用β-淀粉样蛋白的小鼠的海马体组织的cv(甲酚紫乙酸盐)染色的结果的照片。

图3是显示对图2的染色海马体组织定量的结果的图。

图4显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认bdnf(脑源性神经营养因子)表达水平的结果。

图5是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图4的蛋白质印迹确认的bdnf的表达水平(bdnf表达水平/β-肌动蛋白表达水平)进行定量的结果的图。

图6显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时通过蛋白质印迹确认map2(微管相关蛋白2)、synap(突触素)和psd-95(突触后密度蛋白-95)的表达水平的结果。

图7是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图6的蛋白质印迹确认的map2的表达水平(map2表达水平/β-肌动蛋白表达水平)进行定量的结果的图。

图8是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图6的蛋白质印迹确认的synap的表达水平(synap表达水平/β-肌动蛋白表达水平)进行定量的结果的图。

图9是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图6的蛋白质印迹确认的psd-95的表达水平(psd-95表达水平/β-肌动蛋白表达水平)进行定量的结果的图。

图10显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认trkb(酪氨酸蛋白激酶受体b)表达水平的结果。

图11是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图10的蛋白质印迹确认的trkb的表达水平(trkb表达水平/β-肌动蛋白表达水平)进行定量的结果的图。

图12显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认camkii(ca²⁺/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ii)表达水平的结果。

图13是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图12的蛋白质印迹确认的磷酸化camkii的表达水平(磷酸化camkii表达水平/非磷酸化camkii表达水平)进行定量的结果的图。

图14显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认erk(胞外信号调节激酶)的表达水平的结果。

图15是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图14的蛋白质印迹确认的磷酸化erk的表达水平(磷酸化erk表达水平/非磷酸化erk表达水平)进行定量的结果的图。

图16显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认akt(rac-α丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶)表达水平的结果。

图17是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图16的蛋白质印迹确认的磷酸化akt的表达水平(磷酸化akt表达水平/非磷酸化akt表达水平)进行定量的结果的图。

图18显示当将根据一种实施方式的提取物施用至阿尔茨海默病小鼠模型(3x-tg)时，通过蛋白质印迹确认creb(camp应答元件结合蛋白)表达水平的结果。

图19是显示使用蛋白质印迹光密度分析对通过图18的蛋白质印迹确认的磷酸化creb的表达水平(磷酸化creb表达水平/非磷酸化creb表达水平)进行定量的结果的图。

图20是显示在施用以各种浓度的提取试剂提取的提取物之后施用β-淀粉样蛋白的小鼠的海马体组织的cv(甲酚紫乙酸盐)染色的结果的照片。

图21是显示对图20中染色的海马体组织定量的结果的图。

具体实施方式

在下文中，将参考实施例描述本发明。然而，这些实施例仅用于说明性目的，并且本发明的范围不限于此。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在不脱离本发明的基本要旨的范围的情况下修改以下描述的实施例。

实施例1：提取物的制备

1.1：朝鲜当归提取物的制备

1.1.1.98％乙醇提取物的制备

将朝鲜当归(angelicagigasnakai)根用清水洗净并充分干燥。将干燥的朝鲜当归根压碎，将5倍体积(500ml)的乙醇(98％(v/v)乙醇(酒精))添加到100g的所得粉末中，在40至60℃的温度下提取4小时或更久，然后通过1μm(微米)的过滤器过滤，将滤液加热并浓缩直至其变为原始重量的10重量％。将结晶纤维素逐渐添加到所获得的浓缩物中，连续浓缩，完全干燥，然后粉末化以制备朝鲜当归乙醇提取物粉末(以下称为age)。

1.1.2.90％乙醇提取物的制备

将朝鲜当归根用清水洗净并充分干燥。将干燥的朝鲜当归根压碎，将5倍体积(500ml)的乙醇(90％(v/v))添加到100g的所得粉末中，在约40至60℃的温度下提取4小时或更久，然后通过1μm(微米)的过滤器过滤，将滤液加热并浓缩直至其变为原始重量的10重量％。将结晶纤维素逐渐添加到所获得的浓缩物中，连续浓缩，完全干燥，然后粉末化以制备朝鲜当归乙醇提取物粉末。

1.2：西兰花提取物的制备

将西兰花的整个植株用清水洗净并充分干燥。将干燥的西兰花压碎，将5倍体积(500ml)的乙醇(50％(v/v))添加到100g的所得粉末中，并添加naoh直到ph达到8。之后，将混合物在40℃下提取三次，共3小时或更久，然后通过1μm(微米)过滤器过滤，将滤液加热并浓缩直至其变为原始重量的10重量％。将获得的浓缩物连续浓缩，完全干燥，然后粉末化以制备西兰花乙醇提取物粉末(以下称为bke)。

1.3.测试动物的准备

在恒定的明暗循环，从上午7点至晚上7点，每次12小时进行光照，温度为22℃至25℃，湿度为60％的条件下，饲养所有用于测试的动物。自由摄取水和食物，并使用一般的颗粒干燥饲料。

实施例2：神经保护活性测试

将β-淀粉样蛋白1-42(americanpeptide，美国)和β-淀粉样蛋白42-1(bachem，瑞士)在灭菌的0.1m磷酸盐缓冲液(ph7.4)中以37μl/μl的浓度溶解，并储存直到使用该制备溶液。另一方面，将实施例1.1.1中制备的200mg/kg朝鲜当归乙醇提取物(age)、实施例1.2中制备的400mg/kg西兰花乙醇提取物(bke)、或200mg/kg朝鲜当归乙醇提取物(age)和400mg/kg西兰花乙醇提取物的混合物溶解于10ml蒸馏水中，然后每天一次施用至实施例1.3中准备的正常小鼠(icr小鼠；体重18-26g，每组5只小鼠)，持续4周。为了进行比较，准备以10ml的量施用蒸馏水而非以上制备的提取物作为对照组。在施用提取物持续4周的小鼠的前囟中，使用配备有26号针头的50μlhamilton微注射器在2.4mm的深度进行注射，并分别以5μl的量施用上述制备的β-淀粉样蛋白1-42和β-淀粉样蛋白42-1。对于施用以上提取物持续4周的小鼠的前囟，使用配备有26号针头的50μlhamilton微注射器在2.4mm的深度进行注射，并分别以5μl的量施用制备的β-淀粉样蛋白1-42和β-淀粉样蛋白42-1。图1中示意性地显示了该测试的过程。

对于如上所述施用提取物持续4周(28天)并施用β-淀粉样蛋白的小鼠，在施用β-淀粉样蛋白后的第三天，对实验动物使用将3％(v/v)异氟烷(baxtor，美国)与氮氧混合气体(以7:3的比例)混合的气体进行全身麻醉。在通过使用将2.5％(v/v)异氟烷与氮氧混合气体混合的气体来维持实验动物的麻醉状态的同时，对实验动物进行手术。以每1kg体重各30mg的剂量腹膜内注射噻吩钠(yanhancorporation，韩国)，然后麻醉，然后向左心室注射每1,000ml含1,000iu肝素的生理盐水(4℃)，并通过灌注洗涤。使用在0.1m磷酸盐缓冲液(pb，ph7.4)中的4％(w/v)多聚甲醛(4℃)对灌注并洗涤过的动物进行灌注固定。

使用切骨刀打开完成灌注固定的实验动物的头部的骨空间，并取出大脑。然后将取出的实验动物的大脑在室温下使用搅拌器在4％多聚甲醛(0.1m磷酸盐缓冲液(pb)，ph7.4)溶液(4℃)中进行后固定4小时。将后固定的大脑置于30％(w/v)的蔗糖溶液(在0.1m磷酸盐缓冲液中)中，使其沉降直至沉入底部。然后，用滑动切片机(reichert-jung，德国)将脑组织切成30μm的厚度，来制作组织切片。将组织切片放置在含有储存溶液的6孔板中，并在4℃下储存直至进行染色。

选择所制备的组织切片中海马体形成良好的组织。为了消除粘附在组织切片上的防腐剂溶液，用0.01mpbs(ph7.4)洗涤组织3次，每次10分钟。将洗涤后的组织切片涂在涂覆有明胶的载玻片上，并在37℃充分干燥。将组织切片浸入蒸馏水中一段时间。然后将其浸入2％(w/v)的甲酚紫乙酸盐(sigma，usa)溶液中1分钟，并对组织切片进行染色。随后，将染色的组织切片用流动的水充分清洗以除去粘附在载玻片上的过量染料，浸入蒸馏水中一段时间，然后依次用50％(v/v)、70％(v/v)、80％(v/v)、90％(v/v)、95％(v/v)和100％(v/v)乙醇溶液依次处理，并进行脱水和过量甲酚紫洗涤。确认尼氏体在组织切片中可见后，将其浸入二甲苯(junsey，日本)中使其透明，然后封装在加拿大香脂中(kanto，日本)。

使用配备有数码相机(axiocam，calzeiss，德国)的axiom1显微镜，对正常组(icr小鼠；未经β-淀粉样蛋白处理)、对照组(未经提取物处理，经β-淀粉样蛋白处理)和实验组(经提取物和β-淀粉样蛋白处理)各自的组织的整个海马体区放大40倍，对ca1区域放大20倍，并对各组织切片进行拍照。图2显示了整个海马体区的照片。进一步地，在对图1中测量的海马区染色后，图3中显示了使用显微镜的定量结果，该结果为相对于对照组的相对值。

如图2和图3所示，证实了用β-淀粉样蛋白处理的组在用提取物处理后，对海马体区的保护作用与对照组(未经提取物处理，经β-淀粉样蛋白处理)相比是优异的。特别地，在用朝鲜当归提取物(age)处理的组以及用朝鲜当归提取物(age)和西兰花提取物(bke)一起处理的组中，观察到了与正常组相似的优异的海马体区保护作用。这些结果表明朝鲜当归提取物以及朝鲜当归和西兰花的混合提取物对由神经毒性物质引起的神经损伤具有神经保护作用。此外，它表明它对由神经毒性物质引起的神经退行性疾病具有预防作用。

实施例3：神经再生活性测试

购买并使用通过基因操作诱发阿尔茨海默病的小鼠(3xtg-ad，ad三重转基因小鼠模型，12月龄，以下称为“3x-tg小鼠”；thejacksonlaboratory(美国)；雌性，每组4只小鼠，体重约40g)。这些小鼠逐渐表达斑块和混乱(tangle)，并显示学习能力和记忆力不足。

对准备的12月龄的3x-tg小鼠口服施用6周，其中将实施例1.1.1中制备的200mg/kg朝鲜当归乙醇提取物(age)和/或实施例1.2中制备的400mg/kg西兰花乙醇提取物(bke)溶解在10ml蒸馏水中，并每周6次单独或联合施用，持续6周。为了比较，准备了施用10ml蒸馏水而非提取物的组作为对照组。使用b6129sf2/j小鼠(雌性；4只小鼠，体重40g；thejacksonlaboratory(美国))作为正常组，进行了相同的测试。

为了进行免疫组织化学分析，将施用提取物持续6周的小鼠麻醉，并用0.01mpbs和4％(w/v)多聚甲醛(pfa)进行心内灌注。取出脑并在4％(w/v)的pfa中进行后固定2天，然后在含有30％(w/v)蔗糖的pbs中冷冻保存2天。然后，将其在干冰粉末上冷冻并在-80℃下保存直至使用。此后，如下通过蛋白质印迹分析确认与神经再生有关的生物标志物的变化。

具体地，进行的蛋白质印迹分析如下进行：

在放射免疫沉淀分析缓冲液(cellsignalingtechnology，beverly，mia，美国)中将冷冻及制备的脑组织和细胞均质化，并使用蛋白质分析试剂(bio-rad，hercules，ca，美国)测量可以确认大脑(神经)细胞产生的生物标志物蛋白的浓度。通过在10％(w/v)十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶上电泳来分离蛋白质，并电泳转移至聚偏二氟乙烯膜(millipore，bellerica，ma，usa)。将膜用5％(v/v)的脱脂奶粉或5％(v/v)的fbs封闭，并用抗生物标志物(例如β-肌动蛋白)的一抗进行孵育。与辣根过氧化物酶缀合的二抗孵育后，使用增强的化学发光检测试剂盒(gehealthcare，st.giles，英国)测量蛋白质条带。使用imagej软件(国立卫生研究院，bethesda，md，美国)对获得的结果进行定量。

下表1中总结了该实施例中使用的生物标志物蛋白及其抗体：

[表1]

(上表中，“^*”为参考标志物)

从生物标志物蛋白质获得的电泳结果和其定量结果示于图4至19中。

如图4至19所示，在经提取物处理的3x-tg小鼠(‘3x-tg小鼠+age’、‘3x-tg小鼠+bke’和‘3x-tg小鼠+age+bke’)的大多数情况下，证实了与对照组相似的产生神经细胞的效果(未经提取物处理的3x-tg小鼠；表示为‘3x-tg小鼠’)。特别地，观察到用西兰花提取物(bke)处理的组('3x-tg小鼠+bke')以及用朝鲜当归提取物(age)和西兰花提取物(bke)一起处理的组(‘3x-tg小鼠+age+bke’)具有优异的产生神经细胞的效果。其中，‘3x-tg小鼠+age+bke’中产生神经细胞的效果特别优异。这些结果表明朝鲜当归提取物、西兰花提取物以及朝鲜当归和西兰花的混合提取物对神经损伤小鼠模型(例如，阿尔茨海默病小鼠模型)具有神经产生(再生)作用。此外，它表明它对具有神经损伤的神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)具有治疗作用。

实施例4：根据提取条件分析活性成分(hplc)

4.1.测试溶液的准备

制备实施例1.1.1中制备的朝鲜当归98％乙醇提取物(表2的提取物(1))和实施例1.1.2中制备的朝鲜当归90％乙醇提取物(表2的提取物(2))。

为了比较，参考上述实施例1.1.1，通过改变提取溶剂的类型(乙醇或水)和浓度(30％、50％、75％、80％；w/v)在各种温度条件下制备了六种朝鲜当归提取物(表2中的提取物(2)至(8))。

精确地取1g制备的朝鲜当归提取物，放入50ml容量瓶中，然后通过添加约30ml甲醇(100％)使其溶解，加满甲醇至标记线，过滤并用作样品溶液。

4.2.配制标准溶液

取10mg紫花前胡醇标准品(纯度98％或更高)、5mg紫花前胡醇标准品(纯度98％或更高)和5mg紫花前胡醇当归酯标准品(纯度98％或更高)并放入25ml烧瓶中，通过添加100％甲醇溶解，加满甲醇至标记线，过滤并用作样品溶液。由该标准溶液制备浓度为12.5-25-50-100-200μl/ml的标准溶液，并用于测量校准曲线。

4.3.hplc操作条件

根据以下液相色谱操作条件，用制备的样品溶液和标准溶液进行测试，以计算紫花前胡醇和紫花前胡醇当归酯的含量：

色谱柱：cadenzacwc18(150*4.6mm，3μm)或等效色谱柱；

检测器：紫外分光光度计(检测波长：330nm)；

流速：0.7ml/分钟；

流动相：水(a％)，乙腈(b％)，

0-5分钟(20，b)，5-6分钟(20→40，b)，6-22分钟(40→55，b)，

22-23分钟(55→80，b)，23-25分钟(80，b)，25-27分钟(20，b)；

进样量：10μl。

4.4.结果

每种获得的提取物的成分分析结果示于下表2中。

[表2]

如上表1所示，可以确认实施例1.1.1和1.1.2的朝鲜当归乙醇提取物与提取条件(提取溶剂的浓度、类型、提取温度等)不同的其他提取物相比，提取物中的有用化合物的含量显著更高。

实施例5：根据提取溶剂(乙醇)的浓度进行神经保护活性测试

在实施例4中制备的各种提取条件下获得的朝鲜当归提取物中，对98％(w/v)乙醇提取物(提取物(1)；实施例1.1.1提取物)、90％(w/v)乙醇提取物(提取物(2)；实施例1.1.2提取物)、80％(w/v)乙醇提取物(提取物(4)；相当于常规提取物inm-176)、75％(w/v)乙醇提取物(提取物(5))和50％(w/v)乙醇提取物(提取物(6))进行神经保护活性测试。(提取物的提取温度：40～60℃)。参照实施例2的测试程序进行神经保护活性测试。

所获得的海马组织的cv(甲酚紫乙酸盐)染色的结果示于下图20中，染色海马组织的定量结果示于图21中。

如图20和图21所示，可以确认，与在提取溶剂的浓度范围以外的条件下的提取物相比，98％乙醇提取物(提取物(1))和90％乙醇提取物(提取物(2))具有优异的神经保护活性。