包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或治疗用药学组合物

本申请主张2018年12月07日申请的韩国专利申请第10-2018-0157405作为优先权，所述说明书通篇为本申请的参考文献。本发明涉及包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或治疗用药学组合物。
背景技术：
：将位于眼睛内侧视网膜中心部的神经组织称为黄斑，视细胞中的视锥细胞密集，物体的像聚集之处也是黄斑的中心，因而对视力发挥极为重要的作用。所谓视力，是指识别对象的存在与形态的能力，物体的像聚集于黄斑中心凹处时最敏锐(中心视力)，越向视网膜周边(周边视力)，则越低下。如果黄斑部由于老化、遗传因素、毒性、炎症等而发生变形或功能下降，则视力减弱，严重时还会完全丧失视力，所谓黄斑变性，是指在作为对视力重要的部位的黄斑部位产生损伤的疾病。黄斑变性大致分为干性及湿性黄斑变性，把在视网膜发生诸如玻璃疣(代谢物在黄斑部堆积的状态)或视网膜色素上皮萎缩的病变的情形称为干性黄斑变性，作为常见形态，年龄相关黄斑变性占所有病例的约90％，一般不诱发严重的视力丧失，但会发展为湿性形态，因而定期病程观察和预防很重要。所谓湿性黄斑变性，是指在视网膜下脉络膜新生血管生长而产生的疾病，占全体黄斑变性的约10％。这种新生血管在我们眼睛的视网膜中尤其重要的黄斑部引起渗出物、出血等，对中心视力造成影响，严重时导致失明。就黄斑变性开发了多样的治疗方法，但无法实现抑制症状发展的根本性治疗，相比治疗，更需要预防。例如，韩国公开专利第10-2011-0021309号公开一种含有乌饭果提取物或乌饭果分馏物作为有效成分的黄斑变性症的治疗、预防或改善用组合物，韩国公开专利第10-2014-0045263号公开一种借助于人参皂苷rg1的通过视网膜再生的眼功能低下及黄斑变性疾病的预防及治疗用组合物。另一方面，桃叶珊瑚(aucubajaponica)是生长于韩国南海及济州一带的丝缨花科阔叶灌木，主要在温暖的山地作为园林树栽培，作为构成温带针叶林的典型种类，分布于韩国南部特别是郁陵岛地区。桃叶珊瑚的果实美丽，作为观赏用而受到喜爱，叶与树皮用于药用，中药名称为桃叶珊瑚、天脚板或青木。桃叶珊瑚传统上一直用于治疗诸如神经痛或关节炎、通风的炎症，因此，本发明人在天然物中研究黄斑变性预防及治疗用组合物，这期间确认了桃叶珊瑚热水提取物及乙醇提取物抑制作为干性黄斑变性原因物质的脂褐质(lipofuscin)的光氧化(photo-oxidation)，特别是相比热水提取物，乙醇提取物更有效抑制脂褐质的光氧化，另外，利用桃叶珊瑚提取物进行动物实验的结果，确认了桃叶珊瑚提取物能够抑制在干性黄斑变性中出现的视网膜视神经细胞的损伤，抑制在湿性黄斑变性中出现的脉络膜新生血管的生成，从而完成了本发明。技术实现要素：技术问题本发明正是为了解决上述问题而研发的，本发明人在天然物中研究黄斑变性预防及治疗用组合物，这期间确认了桃叶珊瑚热水提取物及乙醇提取物抑制作为干性黄斑变性原因物质的脂褐质的光氧化，特别是相比热水提取物，乙醇提取物更有效抑制脂褐质的光氧化，另外，利用桃叶珊瑚提取物进行动物实验的结果，确认了桃叶珊瑚提取物能够抑制在干性黄斑变性中出现的视网膜视神经细胞的损伤，抑制在湿性黄斑变性中出现的脉络膜新生血管的生成，从而完成了本发明。本发明的目的是提供一种包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或治疗用药学组合物。本发明的又一目的是提供包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或改善用保健功能食品组合物。技术方案本发明可以提供一种包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或治疗用药学组合物。所述黄斑变性可以为老年性黄斑变性。所述桃叶珊瑚提取物可以是提取桃叶珊瑚的叶、茎或他们的混合物。所述桃叶珊瑚提取物可以以水、碳数1至4的低级醇或他们的混合溶剂提取。所述桃叶珊瑚提取物可以以20％至40％乙醇(w/w)水溶液提取。本发明可以提供一种包含桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物的黄斑变性预防或改善用保健功能食品组合物。所述黄斑变性可以为老年性黄斑变性。所述桃叶珊瑚提取可以是提取桃叶珊瑚的叶、茎或他们的混合物。所述桃叶珊瑚提取物可以以水、碳数1至4的低级醇或他们的混合溶剂提取。所述桃叶珊瑚提取物可以以20％至40％乙醇(w/w)水溶液提取。本发明可以提供一种黄斑变性治疗方法，包括将桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物按药学上有效的量向需要桃叶珊瑚的个体给药的步骤。本发明可以提供一种将桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物用于黄斑变性治疗用组合物的用途。技术效果本发明的桃叶珊瑚热水提取物及乙醇提取物具有抑制作为干性黄斑变性原因物质的脂褐质的光氧化的效果，特别是相比热水提取物，乙醇提取物更有效抑制脂褐质的光氧化。进而，利用桃叶珊瑚提取物进行动物实验的结果表明，桃叶珊瑚提取物具有抑制在干性黄斑变性中出现的视网膜视神经细胞的损伤、抑制在湿性黄斑变性中出现的脉络膜新生血管的生成的效果。附图说明图1是本发明的桃叶珊瑚乙醇提取物及桃叶珊瑚提取物的hplc(高效液相色谱法)分析结果。图2是确认本发明的桃叶珊瑚乙醇提取物及桃叶珊瑚提取物的脂褐质(a2e)光氧化抑制效果的结果。图3是将aje分别以100、250mg/kg/天浓度向用mnu诱导的视神经损失动物模型经口给药1周时间后，测量视神经细胞损失导致的视网膜外核层(outernuclearlayer)厚度的组织病理学结果。图4是将aje分别以100及250mg/kg/天浓度向用mnu诱导的干性黄斑变性动物模型经口给药1周时间后，测量视网膜电图(erg)的结果。图5是将aje分别以100及250mg/kg/天浓度向用二极管激光器诱导的湿性黄斑变性动物模型经口给药1周时间后，测量cnv(脉络膜新生血管)形成的结果。具体实施方式下面详细说明本发明。本发明人在天然物中研究黄斑变性预防及治疗用组合物，这期间确认了桃叶珊瑚热水提取物及乙醇提取物抑制作为干性黄斑变性原因物质的脂褐质(a2e)的光氧化(图2)，特别是相比热水提取物，乙醇提取物更有效抑制脂褐质(a2e)的光氧化，另外，利用桃叶珊瑚提取物进行动物实验的结果，确认了桃叶珊瑚提取物能够抑制视网膜视神经细胞的损伤(图3及图4)，抑制在湿性黄斑变性中出现的脉络膜新生血管的生成(图5)，从而完成了本发明。本发明的目的是提供一种包含桃叶珊瑚提取物的黄斑变性预防或治疗用药学组合物。“桃叶珊瑚(aucubajaponica)”是指双子叶植物伞形花目山茱萸科的常绿灌木的一种，主要分布于韩国南部特别是郁陵岛地区。又称为东瀛珊瑚、天脚板或青木。对于黄斑变性症的发生原因及其发展，根据迄今的已知内容，黄斑变性症的最大危险因素是不在体内分解而随着年龄增加而在视网膜色素上皮积累的a2e(pyridniumbis-retinoid：吡啶双类视黄醇)。所述黄斑变性症可以为因老化导致的黄斑变性症。黄斑变性大致分为干性及湿性黄斑变性，把在视网膜发生诸如玻璃疣(代谢物在黄斑部堆积的状态)或视网膜色素上皮萎缩的病变的情形称为干性黄斑变性，将在视网膜下脉络膜新生血管生长产生的疾病称为湿性黄斑变性。本发明对利用n-甲基-n-亚硝基脲(n-methyl-n-nitrosourea：mnu，美国西格玛公司)诱导干性黄斑变性的动物模型进行桃叶珊瑚提取物处理的结果，确认了以浓度依赖方式抑制神经细胞消失导致的视网膜外核层(outernuclearlayer)厚度减小，改善a波及b波的神经传导抑制，抑制视细胞活性减少(图3及图4)。另外，对利用二极管激光器诱导湿性黄斑变性的动物模型进行桃叶珊瑚提取物处理的结果，以浓度依赖方式抑制cnv(choroidalneovascularization：脉络膜新生血管)。因此，确认了桃叶珊瑚提取物对干性及湿性黄斑变性均有效(图5)。所述提取物可以是从所述桃叶珊瑚的全体地上部分、其一部分或来源于其的材料，借助于溶剂而提取的提取物。所述一部分可以为桃叶珊瑚的茎、叶、花、花瓣或果实，最优选地，可以为叶或茎。提取所使用的所述桃叶珊瑚的全部、其一部分或来源于其的材料，可以粉碎或细切，或适当干燥。所述桃叶珊瑚提取物可以以水、碳数1至4的低级醇或他们的混合溶剂提取，优选地，可以为水或乙醇水溶液，最优选地，可以为乙醇水溶液。所述乙醇可以为20％至40％乙醇(w/w)水溶液，优选地，可以为25至35％乙醇(w/w)水溶液，最优选地，可以为35％乙醇(w/w)水溶液。所述提取可以借助于加热液体提取、加压液体提取(pressurizedliquidextraction：ple)、超声波辅助提取(microwaveassistedextraction：mae)、亚临界提取(subcriticalextraction：se)或他们的组合而执行。所述亚临界提取可以为亚临界水提取(subcriticalwaterextraction：swe)。亚临界水提取也称为过热水提取(superheatedwaterextraction)或加压热水提取(pressurizedhotwaterextraction：phwe)。所述加热流体提取可以为回流提取。所述提取可以在4℃至70℃下执行，例如可以在4℃至50℃、4℃至40℃、4℃至30℃、10℃至70℃、15℃至70℃、20℃至70℃、4℃至50℃、10℃至50℃、4℃至40℃、4℃至30℃、10℃至40℃、10℃至35℃或10℃至30℃下执行。当所述提取为加热提取时，可以在提取所使用的溶剂沸腾的温度或从植物体提取所需成分的温度下执行，例如，可以在40℃以上、50℃以上、60℃以上、70℃以上、80℃以上、90℃以上、100℃以上、120℃以上、140℃以上、160℃以上或200℃以上的温度下执行，具体例如，可以利用水作为溶剂，在90℃至120℃温度下执行。所述提取需要的时间会因选择的温度而不同，可以为1小时至2个月，例如，可以为1小时至1个月、1小时至15日、1小时至10日、1小时至5日、1小时至3日、1小时至2日、1小时至1日、5小时至1个月、5小时至15日、5小时至10日、5小时至5日、5小时至3日、5小时至2日、5小时至1日、10小时至1个月、10小时至15日、10小时至10日、10小时至5日、10小时至3日或10小时至2日。所述提取可以包括在所述溶剂中混合从桃叶珊瑚的全体地上部分、其一部分或来源于其的材料后放置既定时间。所述放置可以包括适当的搅拌。所述提取可以反复1次以上，例如，可以反复1至5次。所述提取可以还包括将植物体残余物及提取液借助于过滤等已知方法而分离的过程。所述提取还包括从获得的提取液借助于诸如减压浓缩的已知方法而去除溶剂。所述提取还可以包括将获得的提取物借助于诸如氮气干燥或冷冻干燥的干燥而制备干燥提取物。所述提取物在干燥之后，可以根据需要而以适当溶剂进行再溶剂化。所述组合物相对于组合物总重量，可以包含0.001重量％至80重量％的桃叶珊瑚提取物，例如，可以包含0.01重量％至60重量％、0.01重量％至40重量％、0.01重量％至30重量％、0.01重量％至20重量％、0.01重量％至10重量％、0.01重量％至5重量％、0.05重量％至60重量％、0.05重量％至40重量％、0.05重量％至30重量％、0.05重量％至20重量％、0.05重量％至10重量％、0.05重量％至5重量％、0.1重量％至60重量％、0.1重量％至40重量％、0.1重量％至30重量％、0.1重量％至20重量％、0.1重量％至10重量％或0.1重量％至5重量％的桃叶珊瑚提取物。所述组合物可以根据其用途而按有效的量包含所述提取物作为有效成分。所述有效的量可以根据个体而适当选择。可以根据包括疾病以及状态的轻重、个体的年龄、体重、健康、性别、个体对提取物的敏感度、给药时间、给药途径及排出比率、给药时间、与所述组合物配合或同时使用的其他组合物在内的要素以及其他生理乃至医学领域已知的要素来决定。本发明还可以提供一种包含桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物的黄斑变性预防或改善用保健功能食品组合物。当所述组合物为保健功能食品用组合物时，可以制成相应
技术领域：
公知的通常的保健功能食品剂型。所述保健功能食品用组合物例如既可以制成散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂、针剂、液剂、精华剂等普通剂型，也可以制备成肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、零食类、点心类、比萨、拉面、其他面条类、口香糖类、果冻、包括冰淇淋类在内的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料及维生素复合剂等任意的保健食品形态。为了制成所述保健食品，可以使用食品学上可接受的载体或添加剂，可以利用相应
技术领域：
公知可以用于要制备剂型的制备的任意载体或添加剂。作为所述添加剂，可以含有各种营养剂、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸盐饮料中使用的碳酸盐等。此外，也可以含有用于制备天然果汁、果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。这种添加剂成分可以独立或组合使用，添加剂的比率以组合物全体重量为基准，可以为0.001至5重量％，或0.01至3重量％。所述保健功能食品用组合物中的所述提取物含量可以根据使用目的(预防或改善)而适当决定。一般而言，可以含有全体食品重量的0.01至15重量％，当制备成饮料时，以100ml为基准，可以含有0.02至10g，优选地，可以含有0.3至1g比率。所述饮料可以还包含所述提取物之外的其他成分，可以还含有通常用于饮料的多样香味剂或天然碳水化合物等。作为所述天然碳水化合物，可以含有诸如单糖类(例：葡萄糖、果糖等)、二糖类(例：麦芽糖、蔗糖等)、多糖类(例：糊精、环糊精等)的通常的糖及木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等糖醇。另外，作为香味剂，可以含有天然香味剂(例：奇异果甜蛋白、甜叶菊提取物等)及合成香味剂(例：糖精、阿斯巴甜等)。所述天然碳水化合物的比率，每100ml饮料一般可以含有约1至20g，优选地，可以含有约5至12g。当所述组合物为药学组合物时，可以包含药剂学上可接受的稀释剂或载体。所述稀释剂可以为乳糖、玉米淀粉、豆油、微晶纤维素或甘露醇，润滑剂可以为硬脂酸镁、滑石粉或其组合。所述载体可以为赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或其组合。所述赋形剂可以是微晶纤维素、乳糖、低取代度羟基纤维素或其组合。所述崩解剂可以是羧甲基纤维素钙、淀粉羟乙酸钠、无水磷酸一氢钙或其组合。所述粘合剂可以是聚乙烯吡咯烷酮、低取代度羟丙基纤维素、羟丙基纤维素或其组合。所述润滑剂可以是硬脂酸镁、二氧化硅、滑石粉或其组合。所述药学组合物可以按有效的量包含所述提取物作为有效成分。所述有效的量可以根据个体而适当选择。可以根据包括疾病的轻重、患者的年龄、体重、健康、性别、患者对药物的敏感度、给药时间、给药途径及排出比率、治疗时间、与所述组合物配合或同时使用的药物在内的要素以及其他医学领域已知的要素来决定。本发明可以提供一种黄斑变性治疗方法，包括将桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物按药学上有效的量向需要其的个体给药的步骤。在本发明中，所谓“个体”，意味着需要疾病治疗的对象，更具体而言，意味着包括包含人类在内的猴、牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、老鼠、兔或豚鼠在内的所有动物，将本发明的药学组合物向个体给药，从而可以有效预防或治疗所述疾病。本发明的药学组合物可以与原有治疗剂联合给药。本发明可以提供一种将桃叶珊瑚(aucubajaponica)提取物用于黄斑变性治疗用组合物的用途。下面通过实施例，更详细地说明本发明。这些实施例只用于更具体地说明本发明，根据本发明的要旨，不得将本发明范围限定于这些实施例，这是本领域的技术人员不言而喻的。实施例1.桃叶珊瑚乙醇回流提取物的制备桃叶珊瑚叶和茎于2018年8月在庆尚南道巨济市一运面知世浦里林地采集，证据标本保管于全北大学试剂保管室。将桃叶珊瑚50g(叶和茎混合物)加入30％乙醇(w/w)1500ml中，在70～100℃下按3小时1次回流提取后，进行减压浓缩及冷冻干燥，获得了30％乙醇回流提取物。实施例2.桃叶珊瑚热水提取物的制备桃叶珊瑚叶和茎于2018年8月在庆尚南道巨济市一运面知世浦里林地采集，证据标本保管于全北大学试剂保管室。之后，在桃叶珊瑚50g(叶和茎混合物)中加入900ml蒸馏水后，在100℃下加热3小时，进行减压浓缩后干燥，制备了桃叶珊瑚热水提取物。实施例3.通过桃叶珊瑚提取物的hplc分析来分析桃叶珊瑚甙含量3-1.试剂及设备标准品桃叶珊瑚甙(aucubin：纯度99.5％)购自成都普瑞法科技开发有限公司(中国成都)。用于hplc分析的流动相溶剂乙腈和水(j.t.backer，美国)均使用hplc级。在hplc分析中使用安捷伦科技公司的1200analyticalhplc系统，由二元泵(g1312a)、真空除气机(g1322a)、柱温调节装置(g1316a)、多波长uv检测仪(1365b、mwd)、试剂自动注入器(g1329a)构成。化学工作站软件用于装备操作及分析结果处理。3-2.标准溶液的制备及校准曲线的制定标准品桃叶珊瑚甙(aucubin)按2mg/ml浓度溶解于meoh后，分阶段稀释，分别按2000、1000、500、100ug/ml浓度制备了校准曲线用标准溶液。将各个校准曲线用标准溶液注入柱，实施hplc分析，获得了色谱图，将该峰值数据进行制图，制作用于定量分析的各校准曲线。3-3.试液的制备将桃叶珊瑚提取物100mg加入10ml容量瓶，使用50％meoh调至标线后，超声波提取5分钟。从制备的试液中取1ml，用0.45μm沃特曼pvdf注射器式滤器过滤后，用于hplc分析。3-4.hplc分析hplc分析使用zorbaxeclipseplusc18(4.6x250mm/5.0μm，安捷伦科技公司)，柱温度设置为35°，uv检测仪波长设置为210nm，试剂注入利用试剂自动注入器，注入3μl。流动相使用水(a)与乙腈(b)混合溶液，设置为流速1.0ml/分钟，流动相的组成比率梯度如下表1所示。[表1]hplc分析的组成比率时间(分钟)溶剂a(％)a溶剂b(％)b09738973307525以hplc-dad(高效液相色谱-二极管阵列检测器)分析法进行分析的结果，在色谱图中，标准品桃叶珊瑚甙(aucubin)在11.33分左右被检测到，将桃叶珊瑚甙在100～2000μg/ml浓度范围进行分析后制作校准曲线的结果，校准曲线相关系数(r2)为0.999以上，表现出良好的直线性。以开发的分析法执行了桃叶珊瑚叶及茎提取物中桃叶珊瑚甙的含量分析。在桃叶珊瑚提取物的色谱图中，求出与桃叶珊瑚甙相应的峰面积后，将其代入桃叶珊瑚甙的校准曲线，求出含量。各提取物中桃叶珊瑚甙的含量分析结果如下表2所示。[表2]实施例4.桃叶珊瑚提取物的脂褐质(a2e)光氧化抑制效果分析将a2e(基因细胞技术公司(geneandcelltechnologies)，美国)按100μm溶解于包含0.5％dmso的pbs后，在96孔微孔板中分别各添加180μl，然后在所述培养液中各添加溶媒(对照组)或实施例1及实施例2的桃叶珊瑚提取物20μl。将所述混合物暴露于蓝光(430nm、亮度：2.0-2.5mw/cm2)10分钟。为了测量a2e被光氧化的程度，在uva照射前、后，使用微孔板导板，测量了440nm下的吸光度。脂褐质(a2e)作为黄斑变性原因物质而沉积于视网膜色素上皮细胞，被蓝光等进行光氧化，表现出细胞毒性。如图2所示，确认了桃叶珊瑚30％乙醇提取物的50％抑制脂褐质光氧化的浓度(inhibitoryconcentration50％、ic50)为15.2ug/ml，热水提取物的ic50为82.6ug/m。可知30％乙醇提取物的效力比热水提取物优秀5倍。因此，之后的所有利用动物模型的试验利用桃叶珊瑚30％乙醇提取物(以后标记为“aje”)执行。实施例5.确认桃叶珊瑚提取物在干性黄斑变性模型动物(n-甲基-n-亚硝基脲(mnu)诱导的感光细胞变性小鼠)中的效力5-1.组织病理学评价从东方公司(orient，韩国城南市)购入6周龄雄性c57bl/6小鼠，适应环境1周时间后使用。在干性黄斑变性中出现的视网膜组织形态学变化中，为了诱发感光细胞损伤及变性，将n-甲基-n-亚硝基脲(mnu，西格玛公司，美国)加入0.05％醋酸溶液而制备成1％浓度，向7周龄雄性c57bl/6小鼠腹腔给药1％mnu溶液，每个个体腹腔给药60mg/kg。正常组只腹腔给药等量的0.05％醋酸。桃叶珊瑚30％乙醇提取物(aje)溶解于灭菌3次蒸馏水而配制后，自mnu给药后同一天起，在7天期间，每天经口给药1次，使浓度达到100及250mg/kg/天。作为对照药物，将叶黄素(lutein)按50mg/kg/天浓度同期经口给药。试验药物给药结束后，实施解剖检查而摘取眼球，然后在10％中性福尔马林中固定一天时间后，用石蜡包埋并制作载玻片切片。载玻片切片进行伊红(h&e)染色，在光学显微镜下观察。对于感光细胞的损伤及变形，测量视网膜组织的视网膜外核层的厚度变化进行评价。将桃叶珊瑚30％乙醇提取物(aje)对用mnu诱导的视神经损失动物模型分别按100、250mg/kg/天浓度经口给药1周的结果，确认了以浓度依赖方式抑制视神经细胞损失导致的视网膜外核层(outernuclearlayer)厚度减小(图3)。特别是与广泛用于干性黄斑变性预防的叶黄素(lutein)进行效能比较的结果，确认了桃叶珊瑚30％乙醇提取物(aje)材料表现出更优秀效能。5-2.视网膜电图(erg)测量所谓视网膜电图(erg：electroretinogram)，是指显示出因视神经对光线的反应而产生的电信号的视网膜视神经的电图，用作确认有无视网膜损伤或疾病的指标。本发明人测量了视网膜电图。在解剖检查一天前进行了16小时以上暗适应后，为了erg测量，用异氟烷(中外制药公司)进行呼吸麻醉后，利用0.5％托吡卡胺使瞳孔散大，在全身麻醉下，在保持体温的状态下，在眼球涂覆适量的1％甲基纤维素，将金丝环记录电极(recordingelectrode)接地于角膜，将参比电极(referenceelectrode)接地于脸颊部位，接地电极(groundeletrode)接地于尾部后，erg的测量利用眼电生理仪(retiport，德国罗兰(rolandconsult)公司)进行测量。刺激利用白色led光从暗适应闪光反应(scotopicflashresponse)求出a波和b波。erg一般由a波及b波构成，a波由受光体产生，b波是视网膜因光刺激，内核层(innernuclearlayer)中的双极性细胞去极化(depolarization)而产生。在动物模型中测量视网膜电图(electroretinography：erg)的结果，桃叶珊瑚30％乙醇提取物(aje)给药改善a波及b波的神经传导抑制，抑制视细胞的活性减少。实施例6.确认桃叶珊瑚提取物(aje)在湿性黄斑变性模型动物(激光诱发的脉络膜新生血管(cnv)大鼠)中的效力使7周龄雄性棕色挪威(bn)大鼠(日本slc公司，东京，日本)适应1周时间后，腹腔注射戊巴比妥钠(pentobarbitalsodium，翰林制药公司，25mg/kg)进行麻醉。然后利用1％托吡卡胺滴眼液使瞳孔扩张后，利用二极管激光器(波长：532nm、直径：100μm、功率：150mw、时间：0.1秒)，在视神经乳头(opticnervehead)周围形成6处光凝固(photocoagulation)点，通过特征性泡的形成验证了布鲁赫膜(bruch’membrane)的损坏。光凝固处理后，雄性大鼠随机分成5组，每组10只，然后按与各组相应的浓度制备药物，经口给药10日。试验药物溶解调配于灭菌3次蒸馏水后，自光凝固处理后同一天起，在10天期间，每天经口给药1次，使浓度达到100及250mg/kg/天。作为对照药物，将叶黄素(lutein)按100mg/kg/天浓度同期经口给药。药物给药10后处死动物，然后摘取眼球，在光学显微镜下，在角膜与巩膜(白眼球)邻接部位切开眼球后，利用眼球后部分组织摘下视网膜后，分离包括视网膜下部位的结膜组织。分离的组织在4％多聚甲醛(paraformaldehyde)中固定1小时后，利用pbs清洗，在包含5％tritonx-100和1％bsa的pbs中搅拌3小时时间后再次清洗，将以1mg/ml溶于pbs的作为内皮细胞标记物的异凝集素b4(西格玛公司)稀释为1:50，在4℃下过夜。利用包含0.05％吐温20的pbs清洗2小时后，将四甲基异硫氰酸罗丹明标记链霉亲和素(streptavidintritc)稀释为1:500，在37℃下放置4小时后，用pbs洗涤30分钟，在荧光显微镜(bx51，奥林巴斯公司，日本)下观察，视网膜新生血管部位的大小利用imagej软件(美国国立卫生研究院(nih)，美国)进行分析。湿性黄斑变性以在视网膜下部位发生未成熟新生血管及浮肿为特征。为了在实验上诱发脉络膜新生血管(choroidalneovascularization)，利用激光器(laser)使布鲁氏膜破裂而诱发cnv后，将aje分别按100、250mg/kg/天浓度经口给药10天时间的结果，确认了以浓度依赖方式抑制cnv的形成。特别是与广泛用于干性黄斑变性预防的叶黄素(lutein)进行效能比较的结果，确认了aje表现出更优秀效能。当前第1页12