用于治疗糖尿病的肽片段的制作方法
本公开内容涉及可用于治疗糖尿病和有关病症的肽。
背景
响应于血液葡萄糖水平的升高，由胰腺中的胰岛的β-细胞产生的肽激素胰岛素被释放。因此，通过位于靶组织(例如脂肪组织、骨骼肌和肝脏)的细胞膜中的葡萄糖转运蛋白的胰岛素依赖性刺激，从血液中除去葡萄糖。胰岛素通过如下发挥其生物学作用：结合并激活膜结合的胰岛素受体(ir)，由此引发一系列细胞内信号传导事件，所述事件调节多种生物学过程，诸如葡萄糖和脂质代谢。
当前，糖尿病(1型和2型糖尿病)的治疗主要依靠胰岛素治疗。胰岛素治疗的补充是长效胰高血糖素-样肽-1(glp-1)受体激动剂，即与glp-1作用于相同受体的衍生物。glp-1是一种刺激胰岛素分泌的代谢激素。除了以葡萄糖依赖性方式增加来自胰腺的胰岛素分泌外，还已知glp-1增加α-和β-细胞两者中的胰岛素敏感性；增加β-细胞质量和胰岛素表达、翻译后修饰和分泌；和减少来自胰腺的胰高血糖素分泌。为了降低血浆葡萄糖水平的目的用于补充胰岛素治疗的其它药物包括dpp-iv抑制剂、二甲双胍、sglt-2抑制剂和磺酰脲。
长期使用胰岛素带来某些缺点，诸如体重增加以及增加的癌症和低血糖的风险。因此，在本领域中对新型非胰岛素化合物的需求日益增长，所述化合物不仅能够通过解决胰岛素抗性和高血糖症来治疗糖尿病，而且能够减少相关的和随之而来的并发症。
因此，可以恢复葡萄糖代谢并治疗糖尿病和相关病症的新型化合物的鉴定是高度有关的。可以构想多种方法，尽管对于本领域技术人员而言都不是显而易见的。
技术实现要素：
本发明的发明人已经发现，刺激β-细胞增殖的肽具有挽救β-细胞免于由葡萄糖毒性条件诱导的细胞凋亡和刺激来自大鼠ins-1β-细胞以及分离的小鼠胰岛的胰岛素分泌的能力。此外，本发明的发明人发现，在葡萄糖耐量测试中，所述肽降低了体内血浆葡萄糖水平并延迟了bblyp/lyp大鼠(1型糖尿病的一种模型)中糖尿病疾病的发作。因此，本公开内容的肽适合用于治疗内分泌、营养和代谢疾病和病症。
在一个方面，本公开内容涉及包含肽或肽类似物或者由肽或肽类似物组成的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下通式的氨基酸序列：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸；且
前提条件是，如果x1是e且x2是s，则所述肽或肽类似物包含不超过85个氨基酸残基。
在一个方面，本公开内容涉及包含肽或肽类似物的药剂，所述肽或肽类似物包含以下氨基酸序列或由其组成：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)；
在一个方面，本公开内容涉及包含上文所述药剂的组合物。
在一个方面，本公开内容涉及一种多核苷酸，其在表达后编码如本文中所述的肽或肽类似物。
在一个方面，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸的载体。
在一个方面，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸或载体的细胞。
在一个方面，本公开内容涉及如本文中所述的药剂、多核苷酸、载体、细胞或组合物，其用作药物。
在一个方面，本公开内容涉及药剂，其包含：
a)选自以下的肽或肽类似物：
(i)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x10是e或g；
x12是s或t；
前提条件是，如果x12是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸残基；
(ii)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a；和
(iii)包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的肽：vdtydgdisvvygl(seqidno:3)vdtydgdisvvyg(seqidno:6)，vdtydgdisvvy(seqidno:10)，vdtydgdisvv(seqidno:15)，vdtydgdisv(seqidno:21)和vdtydgdis(seqidno:28)；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞，
所述药剂用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞用于制备药物的用途，所述药物用于治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于延迟糖尿病发作的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于降低血液葡萄糖水平的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及用于改善β细胞形态学的方法，例如体外方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于改善β细胞生存力的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及本文描述的药剂用于制备诊断组合物的用途，所述诊断组合物用于诊断个体中的胰腺的疾病、病症或损伤。
附图说明
图1.fol-005和fol-014诱导的β-细胞增殖
递增浓度的fol-005在溶液中的添加在48小时后诱导了ins-1细胞的递增增殖(图1a)。与仅bsa包被的对照(ctrl)孔相比，用fol-005包被并用牛血清白蛋白(bsa)封闭的孔诱导了β-细胞的更多增殖(图1b)。与仅bsa包被的孔相比，用fol-014预包被并用bsa封闭的孔诱导了更多增殖(图1c)。将数据呈现为相对于未刺激的对照(ctrl)细胞的每分钟计数(cpm)。呈现了每组中的10-12次不同观察的平均值±sd。
图2.fol-005保护β-细胞免于葡萄糖毒性
与在5mm葡萄糖中温育的细胞相比，在20mm葡萄糖中温育48h的ins-1细胞表现出更多的凋亡细胞(膜联蛋白v阳性)。与单独的20mm葡萄糖相比，fol-005向与20mm葡萄糖温育的细胞的添加降低了凋亡细胞的水平(图2a)。与5mm葡萄糖相比，在20mm时在ins-1细胞中通过胱天蛋白酶-3活性测量的细胞凋亡增加。fol-005的添加降低了葡萄糖毒性诱导的胱天蛋白酶(caspse)-3活性的比率(图2b)。呈现了每组中的4-8次不同观察的平均值±sd。
图3.在fol-005刺激后来自胰岛和β-细胞的胰岛素分泌增加
fol-005刺激β-细胞和胰岛的胰岛素分泌。与非刺激对照(ctrl)和乱序对照肽(fol-015)相比，在不含葡萄糖的培养基中在fol-005(6μm)刺激后来自ins-1的胰岛素释放增加(图3a)。在低(5mm)和高(20mm)葡萄糖两者，fol-005刺激来自ins-1的胰岛素释放(图3b)。与未刺激的对照胰岛相比，用fol-005(6μm)或glp-1(100nm)刺激的分离的小鼠胰岛分泌更多的胰岛素(图3c)。呈现了每组中的5-6次不同观察的平均值±sd。
图4.在fol-014刺激后来自胰岛和β-细胞的胰岛素分泌增加
fol-014刺激来自β-细胞和胰岛的胰岛素分泌。与未刺激的对照细胞相比，用fol-014(6μm)刺激的ins-1细胞分泌更多的胰岛素(图4a)。与对照胰岛相比，用fol-014(6μm)刺激的分离的小鼠胰岛分泌更多的胰岛素(图4b)。glp-1(100nm)或fol-014(0.6μm)的添加对胰岛素分泌没有影响。呈现了每组中的5-6次不同观察的平均值±sd。
图5.fol-014对胰岛素分泌的影响是剂量依赖性的。对于所有测试浓度，递增剂量的fol-014对ins-1细胞的刺激导致胰岛素分泌的显著增加。在有0.6nm至60nm范围内的fol-014存在下，胰岛素分泌以线性方式增加。较高的浓度似乎导致对胰岛素分泌的不太显著的影响。此外，fol-014诱导的胰岛素分泌与100nmglp-1的作用是相当的。条代表平均值和平均值的标准误差(sem)。
图6.对fol-014的胰岛素分泌的影响是葡萄糖浓度依赖性的。在有递增葡萄糖浓度存在下测量了来自未处理的或fol-014暴露的ins-1细胞的胰岛素分泌。与未经处理的对照细胞相比，在5.5mm或更高的葡萄糖水平，胰岛素分泌在fol-014处理的细胞中显著更高。条代表平均值和平均值的标准误差(sem)。
图7.与天然glp-1一起给药的fol-005和fol-014引起了对胰岛素分泌的累加效应。在glp-1分别与fol-005和fol-014(所有三种肽在100nm的浓度)一起的组合处理后测量了来自ins-1细胞的胰岛素释放，并与单独每种肽的作用进行对比。与单独每种肽相比，glp-1和fol-014的组合显著增加了胰岛素分泌。对于fol-005和glp-1的组合，也观察到了增加。条代表平均值和平均值的标准误差(sem)。
图8.fol-014影响胰岛中的胰岛素和胰高血糖素分泌。测试了fol-014的两种不同浓度，并与在低(2.8mm)(a,c)和高(16.7mm)(b,d)葡萄糖浓度下100nmglp-1对分离的小鼠胰岛的影响进行对比。与对照和glp-1相比，在低葡萄糖样品中，fol-014的存在没有增加胰岛素分泌，但是降低了胰高血糖素分泌。在高葡萄糖样品中，600nmfol-014和glp-1显著增加了胰岛素分泌，但是6μmfol-014没有(b)，并且glp-1以及两种浓度的fol-014有效降低了胰高血糖素分泌(d)。条代表平均值和平均值的标准误差(sem)。
图9.在葡萄糖注射后fol-014降低了体内血浆葡萄糖水平。在野生型c57bl/6小鼠上进行了腹膜内葡萄糖耐量测试(ipgtt)。在15分钟、30分钟和45分钟，以200nmol/kg给药的fol-014与对照相比显著降低了血浆葡萄糖水平(p＝0.0027)。在30nmol/kg剂量，fol-014降低了葡萄糖水平，在葡萄糖注射后45分钟具有显著影响。虚线对应于平均非禁食葡萄糖水平。数据代表平均值和平均值的标准误差(sem)。使用student氏t-检验进行统计分析。
图10.fol-014延迟了bblyp/lyp大鼠中的1型糖尿病的发作。用fol-014处理的bblyp/lyp大鼠显示糖尿病(定义为血浆葡萄糖<11.1mmol/l)的发作的显著延迟。在(a)中描绘了每只大鼠的糖尿病的发作日龄，显示了未治疗和治疗组之间的显著差异。在(b)中描绘了每天发生1型糖尿病的动物的百分比，显示了组之间的显著差异。在(a)中的误差条代表平均值的标准误差(sem)。
图11.从fol-005或fol-014衍生出的肽类似物对胰岛素分泌的影响.在两种单独的ins-1细胞系(a和b)中测试了新型肽类似物在高葡萄糖(16.7mm)条件下诱导胰岛素分泌的能力。将作用与天然glp-1、fol-005和fol-014的作用以及单独高葡萄糖的作用进行了对比。诱导低于高葡萄糖对照的平均值的胰岛素释放的类似物被认为是无功能的(未显示)。对于新型的类似物以黑色实心条描绘了胰岛素分泌的水平，且对于对比物以对比模式描绘。条代表平均值和平均值的标准误差(sem)。
图12.fol-005和fol-014在小鼠中表现出在注射后的特异性分布模式。在皮下施用3h-fol-005以后，在注射后1小时(a)和2小时(b)，最高放射性总水平存在于胰腺和注射部位。在肝、肾、唾液腺中也看到3h-fol-005的积累。使用体内pearltrilogy小动物成像系统(pearltrilogysmallanimalimagingsystem)，通过皮下注射研究了cy7.5标记的fol-005(c)和fol-014(d)在nmri裸鼠中的生物分布和组织定位。在初步对照成像后，施用每只小鼠10nmol的剂量，并在5min、20min、50min、60min、2小时、4小时、6小时、24小时和48小时进行活成像。两种肽的高积累在胰腺区域中以及在注射部位处是明显的。
图13.fol-056诱导来自ins-1e细胞的胰岛素分泌。
与用未补充的高葡萄糖缓冲液处理的细胞相比，在高(16.7mm)葡萄糖实验缓冲液中补充给ins-1e细胞的肽fol-056显著增加了胰岛素分泌。对比物肽fol-014的存在也导致胰岛素分泌的显著增加。将所述肽以100nm的浓度加入实验缓冲液。
图14.fol-056保存ins-1e细胞在长期葡萄糖毒性条件中的胰岛素分泌能力。
在有或没有fol-014或fol-056存在下，使ins-1β-细胞暴露于毒性水平的葡萄糖(20mm)72小时。为了参照，包括暴露于低(5mm)葡萄糖的细胞。(a)向毒性水平的葡萄糖的长期暴露显著降低了β-细胞的分泌胰岛素的能力。(b)与单独的高葡萄糖培养基相比，fol-014在高葡萄糖培养基中的存在显著改善了β-细胞的胰岛素分泌能力。fol-056在高葡萄糖培养基中的存在消除了葡萄糖毒性效应并将胰岛素释放保持在与低(5mm)葡萄糖处理组中的β-细胞相同的水平。
图15.与天然glp-1一起给药的fol-056引起了对胰岛素分泌的累加效应。
在glp-1与fol-056一起的组合处理(两种肽在100nm的浓度)后测量了来自ins-1细胞的胰岛素释放，并与单独每种肽的作用进行了对比。与单独每种肽相比(与glp-1相比p＝0.0037，和与fol-056相比p＝0.0003)，glp-1和fol-056的组合显著增加了胰岛素分泌。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图16.新型的肽类似物诱导来自ins-1e细胞的胰岛素分泌。
与用未补充的高葡萄糖缓冲液处理的细胞相比，在高(16.7mm)葡萄糖实验缓冲液中补充给ins-1e细胞的肽fol-057、fol-058和fol-059增加了胰岛素分泌。包括了利拉糖肽(liraglutide)用于对比。将肽以100nm的浓度加入实验缓冲液。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图17.新型的肽类似物保留了ins-1e细胞在长期葡萄糖毒性条件中的胰岛素分泌能力。
在有或没有几种新型的肽类似物存在下将ins-1eβ-细胞暴露于毒性水平的葡萄糖(20mm)72小时。为了参照，包括了暴露于低(5mm)葡萄糖的细胞(未显示)。与单独的高葡萄糖培养基相比，肽类似物在高葡萄糖培养基中的存在改善了β-细胞的胰岛素分泌能力。诱导低于高葡萄糖对照的平均值的胰岛素释放的类似物被视为无功能的(未显示)。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图18.fol-056和fol-014诱导来自1.2b4人β-细胞的胰岛素分泌。
与用未补充的高葡萄糖缓冲液处理的细胞相比，在高(16.7mm)葡萄糖实验缓冲液中补充给1.2b4细胞的肽fol-056和fol-014显著增加了胰岛素分泌。包括了利拉糖肽用于对比。将肽以100nm的浓度加入实验缓冲液。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图19.fol-056诱导来自人胰岛的胰岛素分泌。
与用未补充的高葡萄糖缓冲液处理的细胞相比，在高(16.7mm)葡萄糖实验缓冲液中补充给来自两个单独供体的新鲜分离的人胰岛的肽fol-056显著增加了胰岛素分泌。为了对比，测试了利拉糖肽的作用。将fol-056和利拉糖肽分别以1和100nm的浓度加入实验缓冲液。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图20.fol-056在饮食诱导的肥胖小鼠模型中保留响应于葡萄糖水平升高的胰岛素分泌能力。
在高脂肪饮食的c57bl6小鼠中给药12周以后，与未经治疗的对照组相比(p＝0.01)，在用fol-056处理的小鼠中的急性胰岛素应答(air)显著更高，所述急性胰岛素应答测量为葡萄糖注射以后血浆胰岛素的增加。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
图21.用fol-014或fol-056的给药降低了糖尿病小鼠模型中的hba1c。
在给药4周后从db/db小鼠收集的全血样品的分析显示与未经处理的对照动物相比在用fol-014(p＝0.0015)或fol-056(p＝0.0028)处理的动物中显著降低的hba1c。数据代表平均值；将误差条呈现为sem。
详细描述
公开内容如在权利要求中所定义。
在一个方面，本公开内容涉及包含以下对象或由其组成的药剂：
a)肽或肽类似物，其中所述肽或肽类似物包含以下通式的氨基酸序列：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸；且
前提条件是，如果x1是e且x2是s，则所述肽或肽类似物包含不超过85个氨基酸残基；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含以下通式的氨基酸序列的肽或肽类似物：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸；且
前提条件是，如果x1是e且x2是s，则所述肽或肽类似物包含不超过85个氨基酸残基。
在一个实施方案中，本公开内容涉及在表达后编码如本文中所述的肽或肽类似物的多核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸的载体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸的细胞。在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的载体的细胞。
在一个实施方案中，本公开内容涉及一种药剂，其包含：
a)肽，其中所述肽选自：
i)包含seqidno:170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183和184的氨基酸序列或由其组成的肽；
ii)i)的任一种肽的生物活性序列变体，其中任一个氨基酸已经改变为另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，前提条件是，如此改变不超过5个氨基酸；
iii)i)或ii)中的任一项的肽的生物活性片段，其中所述片段包含i)或ii)中的任一项的至少10个连续氨基酸；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞。
在一个实施方案中，本公开内容涉及一种包含肽的药剂，其中所述肽选自包含seqidno:170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183和184的氨基酸序列或由其组成的肽。
在一个实施方案中，本公开内容涉及本文描述的任一种肽的生物活性序列变体，其中任一个氨基酸已经改变为另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，前提条件是，如此改变不超过5个氨基酸。
在一个实施方案中，本公开内容涉及一种药剂，其包含:
a)肽，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；和
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞。
在一个实施方案中，本公开内容涉及一种包含肽的药剂，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)和disvvyglr(seqidno:34)。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含以下通式的氨基酸序列的肽：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a。
本文中使用的术语“不存在”(例如“x6是c、i或不存在”)应理解为，与不存在的氨基酸直接相邻的氨基酸残基通过常规酰胺键彼此直接连接。
本文描述的术语“肽类似物”表示非天然存在的氨基酸序列，或已经被修饰的天然存在的氨基酸序列。
本文中使用的术语“氨基酸”包括标准的二十种基因编码的氨基酸及其“d”形式(与天然的“l”形式相比)的相应立体异构体，ω-氨基酸和其它天然存在的氨基酸，非常规氨基酸(例如，α,α-二取代的氨基酸、n-烷基氨基酸等)和化学衍生化的氨基酸(参见下文)。
当特别列举氨基酸诸如“丙氨酸”或“ala”或“a”时，除非另外明确地阐明，否则该术语表示l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其它非常规氨基酸也可以是本公开内容的肽的合适组分，只要该肽保留了期望的功能特性即可。对于显示的肽，每种编码的氨基酸残基在适当的情况下用单字母名称表示，所述单字母名称对应于常规氨基酸的俗名。
通过与官能性侧基的反应可以实现一个或多个氨基酸的化学衍生物。这样的衍生物包括，例如，其中游离氨基已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基、羧基苯甲酰基、叔丁基氧基羰基、氯乙酰基或甲酰基的那些分子。游离羧基可以被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其它类型的酯和酰肼。游离羟基可以被衍生化以形成o-酰基或o-烷基衍生物。还包括含有20种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的那些肽作为化学衍生物。例如：可以用4-羟脯氨酸替代脯氨酸；可以用5-羟赖氨酸替代赖氨酸；可以用3-甲基组氨酸替代组氨酸；可以用高丝氨酸替代丝氨酸，并且用鸟氨酸替代赖氨酸。衍生物还包括含有一个或多个添加或缺失的肽，只要必要的活性得到维持。其它包括的修饰是酰胺化、氨基端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如用氨或甲胺)和类似的末端修饰。
本公开内容的一些肽与天然存在的骨桥蛋白的亚区域共有氨基酸序列相似性。在一些实施方案中，所述肽可以被视作天然存在的骨桥蛋白的活性片段或此类片段的变体。
本公开内容的一些肽与天然存在的腱糖蛋白的亚区域共有氨基酸序列相似性。在一些实施方案中，所述肽可以被视作天然存在的腱糖蛋白的活性片段或此类片段的变体。
“片段”包括氨基酸序列的至少5个连续氨基酸，例如氨基酸序列的至少6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续氨基酸。因而，片段可以是15个或更少氨基酸的长度，例如14、13、12、11、10、9、8、7、6或5个氨基酸的长度。
在一个实施方案中，所述肽具有不超过85个、诸如不超过80个、诸如不超过75个、诸如不超过70个、诸如不超过65个、诸如不超过60个、诸如不超过55个、诸如不超过50个、诸如不超过55个、诸如不超过40个氨基酸、诸如不超过35个、诸如不超过30个、诸如不超过28个、诸如不超过26个、诸如不超过24个、诸如不超过22个、诸如不超过20个、诸如不超过19个、诸如不超过18个、诸如不超过17个、诸如不超过16个、诸如不超过15个、诸如不超过14个、诸如不超过13个、诸如不超过12个、诸如不超过11个、诸如不超过10个氨基酸的长度。
在另一个实施方案中，所述肽具有5-30之间的氨基酸的长度，诸如5-20之间、诸如8-20之间、诸如8-16之间、诸如10-15之间的氨基酸的长度。
在另一个实施方案中，所述片段包含15个或更少氨基酸的长度，诸如少于14个氨基酸、诸如少于13个氨基酸、诸如少于12个氨基酸、诸如少于11个氨基酸、诸如少于10个氨基酸、诸如少于9个氨基酸、诸如少于8个氨基酸、诸如少于7个氨基酸、诸如少于6个氨基酸、诸如少于5个氨基酸的长度。
术语“变体”表示与亲本肽不共有100％氨基酸序列同一性的肽，即一个或多个氨基酸必须被突变。“突变”表示改变亲本肽中指定位置的氨基酸。例如，在指定位置的氨基酸可以被缺失、改变、置换，或可以是一个或多个氨基酸的插入/添加的位点。本领域技术人员将理解，置换可以是保守的或非保守的。
在一个实施方案中，所述肽变体包含这样的序列或由其组成：其中不超过5个氨基酸被改变成另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，诸如不超过4个氨基酸、诸如不超过3个氨基酸、诸如不超过2个氨基酸、诸如不超过1个氨基酸被改变。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸被保守地置换。“保守地置换”表示一个氨基酸被另一个具有相似特性(大小、疏水性等)的氨基酸置换，使得肽的功能没有显著改变。因而，“保守置换”意指组合诸如gly、ala；val、ile、leu；asp、glu；asn、gln；ser、thr；lys、arg；和phe、tyr。
在另一个实施方案中，所述肽包含一个或多个另外的氨基酸或由其组成，所述另外的氨基酸插入在所述序列内的n-和/或c-端和/或内部。在一个实施方案中，插入至少2个另外的氨基酸，诸如至少3个、诸如至少4个、诸如至少5个、诸如至少6个、诸如至少7个、诸如至少8个、诸如至少9个、诸如至少10个、诸如至少15个或诸如至少20个另外的氨基酸。另外的氨基酸可以是来自野生型人骨桥蛋白(seqidno:66)的对应位置或来自野生型鼠骨桥蛋白(seqidno:134)的对应位置的氨基酸。术语野生型骨桥蛋白的“对应位置”是指，另外的氨基酸与上述野生型骨桥蛋白的等效位置中存在的那些相同(如果人们想象seqidno:1的氨基酸序列替换seqidno:66中以斜体和下划线显示的序列。
在另一个实施方案中，所述肽选自seqidno:1、136、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、137、138、139、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、167、168、169、171、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183和184；
i.15-氨基酸肽：
vdtydgdisvvyglrseqidno:1
vdtydgdisvvyglsseqidno:2
ii.14-氨基酸肽：
vdtydgdisvvyglseqidno:3
dtydgdisvvyglrseqidno:4
tydgdisvvyglrsseqidno:5
iii.13-氨基酸肽：
vdtydgdisvvygseqidno:6
dtydgdisvvyglseqidno:7
tydgdisvvyglrseqidno:8
ydgdisvvyglrsseqidno:9
iv.12-氨基酸肽：
vdtydgdisvvyseqidno:10
dtydgdisvvygseqidno:11
tydgdisvvyglseqidno:12
ydgdisvvyglrseqidno:13
dgdisvvyglrsseqidno:14
v.11-氨基酸肽：
vdtydgdisvvseqidno:15
dtydgdisvvyseqidno:16
tydgdisvvygseqidno:17
ydgdisvvyglseqidno:18
dgdisvvyglrseqidno:19
gdisvvyglrsseqidno:20
vi.10-氨基酸肽：
vdtydgdisvseqidno:21
dtydgdisvvseqidno:22
tydgdisvvyseqidno:23
ydgdisvvygseqidno:24
dgdisvvyglseqidno:25
gdisvvyglrseqidno:26
disvvyglrsseqidno:27
vii.9-氨基酸肽：
vdtydgdisseqidno:28
dtydgdisvseqidno:29
tydgdisvvseqidno:30
ydgdisvvyseqidno:31
dgdisvvygseqidno:32
gdisvvyglseqidno:33
disvvyglrseqidno:34
isvvyglrsseqidno:35
viii.8-氨基酸肽：
vdtydgdiseqidno:36
dtydgdisseqidno:37
tydgdisvseqidno:38
ydgdisvvseqidno:39
dgdisvvyseqidno:40
gdisvvygseqidno:41
disvvyglseqidno:42
isvvyglrseqidno:43
ix.7-氨基酸肽：
vdtydgdseqidno:44
dtydgdiseqidno:45
tydgdisseqidno:46
ydgdisvseqidno:47
dgdisvvseqidno:48
gdisvvyseqidno:49
disvvygseqidno:50
isvvyglseqidno:51
x.6-氨基酸肽：
dtydgdseqidno:52
tydgdiseqidno:53
ydgdisseqidno:54
dgdisvseqidno:55
gdisvvseqidno:56
disvvyseqidno:57
isvvygseqidno:58
xi.5-氨基酸肽：
tydgdseqidno:59
ydgdiseqidno:60
dgdisseqidno:61
gdisvseqidno:62
disvvseqidno:63
isvvyseqidno:64
svvygseqidno:65
xii.16-氨基酸肽：
vdtydgrgdsvvyglrseqidno:67
xiii.15-氨基酸肽：
vdvpngdislayglrseqidno:69
dvpngdislayglrsseqidno:70
xiv.14-氨基酸肽：
vdvpngdislayglseqidno:71
dvpngdislayglrseqidno:72
vpngdislayglrsseqidno:73
xv.13-氨基酸肽：
vdvpngdislaygseqidno:74
dvpngdislayglseqidno:75
vpngdislayglrseqidno:76
pngdislayglrsseqidno:77
xvi.12-氨基酸肽：
vdvpngdislayseqidno:78
dvpngdislaygseqidno:79
vpngdislayglseqidno:80
pngdislayglrseqidno:81
ngdislayglrsseqidno:82
xvii.11-氨基酸肽：
vdvpngdislaseqidno:83
dvpngdislayseqidno:84
vpngdislaygseqidno:85
pngdislayglseqidno:86
ngdislayglrseqidno:87
gdislayglrsseqidno:88
xviii.10-氨基酸肽：
vdvpngdislseqidno:89
dvpngdislaseqidno:90
vpngdislayseqidno:91
pngdislaygseqidno:92
ngdislayglseqidno:93
gdislayglrseqidno:94
dislayglrsseqidno:95
xix.9-氨基酸肽：
vdvpngdisseqidno:96
dvpngdislseqidno:97
vpngdislaseqidno:98
pngdislayseqidno:99
ngdislaygseqidno:100
gdislayglseqidno:101
dislayglrseqidno:102
islayglrsseqidno:103
xx.8-氨基酸肽：
vdvpngdiseqidno:104
dvpngdisseqidno:105
vpngdislseqidno:106
pngdislaseqidno:107
ngdislayseqidno:108
gdislaygseqidno:109
dislayglseqidno:110
islayglrseqidno:111
xxi.7-氨基酸肽：
vdvpngdseqidno:112
dvpngdiseqidno:113
vpngdisseqidno:114
pngdislseqidno:115
ngdislaseqidno:116
gdislayseqidno:117
dislaygseqidno:118
islayglseqidno:119
xxii.6-氨基酸肽：
dvpngdseqidno:120
vpngdiseqidno:121
pngdisseqidno:122
ngdislseqidno:123
gdislaseqidno:124
dislayseqidno:125
islaygseqidno:126
xxiii.5-氨基酸肽：
vpngdseqidno:127
pngdiseqidno:128
ngdisseqidno:129
gdislseqidno:130
dislaseqidno:131
islayseqidno:132
slaygseqidno:133
xxiv.16-氨基酸肽：
kplaeidsielsygikseqidno:136
gdpndgrgdsvvyglrseqidno:137
xxv.15--氨基酸肽：
vdtydggisvvyglrseqidno:138
vdtydgdgsvvyglrseqidno:139
xxvi.16-氨基酸肽：
kclaecdsielsygikseqidno:141
xxvii.8--氨基酸肽：
claeidscseqidno:142
xxviii.18-氨基酸肽：
cfkplaeidsiecsygikseqidno:143
xxix.16--氨基酸肽：
kplaedisielsygikseqidno:144
kplaeisdielsygikseqidno:145
kplaeigdielsygikseqidno:146
xxx.15-氨基酸肽：
kplaegdielsygikseqidno:147
xxxi.13--氨基酸肽：
kplaeielsygikseqidno:148
xxxii.16--氨基酸肽：
kplaeidsieltygikseqidno:149
kplaeidgielsygikseqidno:150
kplaeidgieltygikseqidno:151
kplaeigsielsygikseqidno:152
kglaeidsielsygikseqidno:153
kplagidsiglsygikseqidno:154
kclaeidscelsygikseqidno:155
xxxiii.13--氨基酸肽：
cfkplaeidsiecseqidno:156
xxxiv.15-氨基酸肽：
vdvpegdislayglrseqidno:157
ldglvraydnispvgseqidno:158
xxxv.14-氨基酸肽：
gdpngdisvvyglrseqidno:159
xxxvi.15-氨基酸肽：
vdvpngdislayrlrseqidno:160
vdvpegdislayrlrseqidno:161
v(β-d)tydgdisvvyglrseqidno:167
vdty(β-d)gdisvvyglrseqidno:168
vdtydg(β-d)isvvyglrseqidno:169
xxxvii.14-氨基酸肽：
laeidsielsygikseqidno:170
xxxviii.13-氨基酸肽：
aeidsielsygikseqidno:171
xxxix.12-氨基酸肽：
eidsielsygikseqidno:172
xl.11-氨基酸肽：
idsielsygikseqidno:173
xli.10-氨基酸肽：
dsielsygikseqidno:174
xlii.9-氨基酸肽：
sielsygikseqidno:175
xliii.8-氨基酸肽：
ielsygikseqidno:176
xliv.15-氨基酸肽：
kplaeidsielsygiseqidno:179
xlv.14-氨基酸肽：
kplaeidsielsygseqidno:180
xlvi.13-氨基酸肽：
kplaeidsielsyseqidno:181
xlvii.12-氨基酸肽：
kplaeidsielsseqidno:182
xlviii.10-氨基酸肽：
kplaeidsielseqidno:183
xlix.9-氨基酸肽：
kplaeidsieseqidno:184
在一个实施方案中，所述肽衍生自骨桥蛋白，诸如哺乳动物骨桥蛋白变体和/或片段。
在一个实施方案中，所述肽是非天然存在的，诸如包含非蛋白形成性氨基酸残基的肽。
在一些实施方案中，所述肽进一步缀合至一个部分，该部分可以选自peg、单糖、荧光团、生色团、放射性化合物和细胞穿透肽。在一个实施方案中，所述荧光团选自萤光黄,生物素,5,6-羧基四甲基罗丹明(tamra),吲哚二羰花青(c5)alexa
在另一个实施方案中，所述肽进一步被修饰，诸如被糖基化或聚乙二醇化、酰胺化、酯化、酰化、乙酰化和/或烷基化。
在一个实施方案中，所述肽包含串联重复或由串联重复组成，所述串联重复可以包含如本文中所述的任意一种或多种序列的氨基酸序列或由其组成。
在一个实施方案中，所述肽是环状的。环状结构可以通过任何合适的合成方法来实现。因此，杂键(heterodeticlinkages)可以包括、但不限于经由二硫键、半胱氨酸、亚烷基或硫桥形成。
在另一个实施方案中，所述肽包含融合体或由融合体组成。例如，该肽可包含seqidno:1或136的氨基酸序列的融合体。
术语肽的“融合体”涉及氨基酸序列，其对应于例如与任何其它肽融合的seqidno:1或136(或其片段或变体)。例如，为了促进所述肽的纯化，所述肽可以融合至多肽诸如谷胱甘肽-s-转移酶(gst)或蛋白a。这样的融合体的例子是本领域技术人员众所周知的。类似地，所述肽可以融合至寡-组氨酸标签诸如his6，或融合至被抗体识别的表位诸如众所周知的myc标签表位。在本公开内容的范围内也包括与所述肽的任何变体或衍生物的融合体。
可替换地，如本领域技术人员已知的，融合的部分可以是能够促进多肽的细胞摄取的亲脂分子或肽结构域。
新型的肽
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的肽：laeidsielsygik(seqidno:170)，aeidsielsygik(seqidno:171)，eidsielsygik(seqidno:172)，idsielsygik(seqidno:173)，dsielsygik(seqidno:174)，sielsygik(seqidno:175)，ielsygik(seqidno:148)，kplaeidsieltygik(seqidno:176)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，所述肽或肽类似物包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kplaeidsielsygi(seqidno:179)，kplaeidsielsyg(seqidno:180)，kplaeidsielsy(seqidno:181)，kplaeidsiels(seqidno:182)，kplaeidsiel(seqidno:183)，kplaeidsie(seqidno:184)，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列laeidsielsygik(seqidno:170)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列aeidsielsygik(seqidno:171)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列eidsielsygik(seqidno:172)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列idsielsygik(seqidno:173)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列dsielsygik(seqidno:174)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列sielsygik(seqidno:175)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列ielsygik(seqidno:176)，或其变体或片段。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列kplaeidsielsygi(seqidno:179)，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列,kplaeidsielsyg(seqidno:180)，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列kplaeidsielsy(seqidno:181)，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列kplaeidsiels(seqidno:182)，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸序列kplaeidsiel(seqidno:183)，或其片段的变体，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含肽的药剂，其中所述肽包含以下对象或由其组成：氨基酸kplaeidsie(seqidno:184)，或其片段的变体，或其片段的变体。
在一个实施方案中，本公开内容涉及药剂，其包含：
a)包含以下氨基酸序列或由其组成的肽或肽类似物：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞。
在一个实施方案中，本公开内容涉及一种药剂，其包含含有以下氨基酸序列或由其组成的肽或肽类似物：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)。
在一些实施方案中，所述变体包含这样的序列或由其组成：其中任一个氨基酸已经改变为另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，前提条件是，如此改变不超过5个氨基酸，改变诸如不超过4个氨基酸，诸如不超过3个氨基酸，诸如不超过2个氨基酸，诸如不超过1氨基酸。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸被保守地置换。
在一些实施方案中，所述肽包含一个或多个另外的氨基酸或由其组成，所述另外的氨基酸插入在所述序列内的n-和/或c-端和/或内部。在一个实施方案中，插入至少2个另外的氨基酸，诸如至少3个、诸如至少4个、诸如至少5个、诸如至少6个、诸如至少7个、诸如至少8个、诸如至少9个、诸如至少10个、诸如至少15个或诸如至少20个另外的氨基酸。
在一个实施方案中，所述肽或肽类似物包含在n-端的氨基酸残基p。
在一些实施方案中，所述肽是不超过85个、诸如不超过80个、诸如不超过75个、诸如不超过70个、诸如不超过65个、诸如不超过60个、诸如不超过55个、诸如不超过50个、诸如不超过55个、诸如不超过40个氨基酸、诸如不超过35个、诸如不超过30个、诸如不超过28个、诸如不超过26个、诸如不超过24个、诸如不超过22个、诸如不超过20个、诸如不超过19个、诸如不超过18个、诸如不超过17个、诸如不超过16个、诸如不超过15个、诸如不超过14个、诸如不超过13个、诸如不超过12个、诸如不超过11个、诸如不超过10个氨基酸的长度。
在一些实施方案中，所述肽进一步缀合至一个部分，该部分可以选自peg、单糖、荧光团、生色团、放射性化合物和细胞穿透肽。
在一个实施方案中，所述肽进一步被修饰，诸如被糖基化或聚乙二醇化、酰胺化、酯化、酰化、乙酰化和/或烷基化。
在一些实施方案中，所述肽包含串联重复或由串联重复组成，所述串联重复可以包含如本文中所述的任意一种或多种序列的氨基酸序列或由其组成。
在一个实施方案中，所述肽是环状的。环状结构可以通过任何合适的合成方法来实现。因此，杂键(heterodeticlinkages)可以包括、但不限于经由半胱氨酸、二硫化物、亚烷基或硫桥形成。
适应症
本公开内容的药剂、肽或肽类似物、组合物、多核苷酸、载体或细胞适合用于治疗内分泌、营养和代谢疾病和病症。
在一个实施方案中，需要治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病的哺乳动物是人。
在一些实施方案中，所述内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病选自糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、营养不良相关的糖尿病、葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症、胰岛素抵抗综合征、葡萄糖耐量受损、高血糖症、高胰岛素血症、及它们的任意组合。
在一些实施方案中，所述内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病选自糖尿病、甲状腺病症、葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症、内分泌腺病症、营养不良、营养缺乏、肥胖、营养过度和代谢病症。
在一个实施方案中，糖尿病选自1型糖尿病、2型糖尿病、营养不良相关的糖尿病、特定糖尿病和非特定糖尿病。
在一个实施方案中，葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症选自非糖尿病低血糖昏迷和胰腺内分泌的病症。
在一个实施方案中，肥胖和营养过度的病症选自局限性肥胖、营养过度和营养过度的后遗症。
在一个实施方案中，营养缺乏病症选自芳族氨基酸代谢病症、支链氨基酸代谢病症和脂肪酸代谢、氨基酸代谢病症、乳糖不耐受性、碳水化合物代谢病症、鞘脂代谢病症、脂质贮存病症、糖胺聚糖代谢病症、糖蛋白代谢病症、脂蛋白代谢病症、脂血症、嘌呤和嘧啶代谢病症、卟啉和胆红素代谢病症、矿物质代谢病症、囊性纤维化、淀粉样变性、血容不足、流体、电解质和酸-碱平衡病症和手术后内分泌和代谢病症。
组合物
在一个方面，本公开内容涉及包含本文描述的药剂的组合物。所述组合物可以是药物组合物。
在一个方面，本公开内容涉及包含以下对象或由其组成的药剂：
a)选自以下的肽或肽类似物：
(i)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸残基；
(ii)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a；和
(iii)包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的肽：vdtydgdisvvygl(seqidno:3)vdtydgdisvvyg(seqidno:6)，vdtydgdisvvy(seqidno:10)，vdtydgdisvv(seqidno:15)，vdtydgdisv(seqidno:21)和vdtydgdis(seqidno:28)；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞，
所述药剂用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及包含肽或肽类似物或者由肽或肽类似物组成的药剂，所述肽或肽类似物包含以下通式的氨基酸序列或由其组成：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸残基，
所述药剂用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及包含肽或肽类似物或者由肽或肽类似物组成的药剂，所述肽或肽类似物包含以下通式的氨基酸序列或由其组成：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a，
所述药剂用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的肽：vdtydgdisvvygl(seqidno:3)vdtydgdisvvyg(seqidno:6)，vdtydgdisvvy(seqidno:10)，vdtydgdisvv(seqidno:15)，vdtydgdisv(seqidno:21)和vdtydgdis(seqidno:28)，
所述肽用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个实施方案中，本公开内容涉及在表达后编码如本文中所述的肽的多核苷酸，其用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸的载体，其用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的多核苷酸的细胞，其用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含如本文中所述的载体的细胞，其用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及用于治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病的组合物，其包含本文描述的药剂。在一个实施方案中，所述组合物是药物组合物。
在一个实施方案中，所述药剂进一步包含第二活性成分。所述第二活性成分可以选自胰岛素、胰高血糖素-样肽-1(glp-1)、双胍类、福司柯林化合物、磺酰脲、二肽基肽酶-4(dpp4)抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮、meglitidine和钠-葡萄糖协同转运蛋白-2(sglt2)抑制剂。
其它方法
在一个方面，本公开内容涉及治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞用于制备药物的用途，所述药物用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
在一个方面，本公开内容涉及一种多核苷酸，其在表达后编码如本文中所述的肽。在一个方面，本公开内容涉及一种载体，其包含在表达后编码如本文中所述的肽的所述多核苷酸。在一个方面，本公开内容涉及一种细胞，其包含在表达后编码如本文中所述的肽的所述多核苷酸或所述载体。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于增加胰岛素分泌的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的本文描述的肽或肽类似物。在一个实施方案中，所述方法是体外方法。在一个方面，本公开内容涉及一种用于增加胰岛素分泌的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。在一个实施方案中，所述方法是体外方法。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于降低血液葡萄糖水平的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的肽或肽类似物、药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。在一个实施方案中，所述方法是体外方法。在一个实施方案中，增加胰岛素分泌。在另一个实施方案中，增加葡萄糖的细胞摄取。在另一个实施方案中，增加胰岛素产生。在另一个实施方案中，降低胰高血糖素产生。
在一个方面，本公开内容涉及用于改善β-细胞形态学的方法，例如体外方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的肽或肽类似物、药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于改善β-细胞生存力的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的肽或肽类似物、药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在一个方面，本公开内容涉及一种用于延迟糖尿病和糖尿病相关的病症和疾病的发作的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如本文中所述的肽或肽类似物、药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞。
在本公开内容的一个实施方案中，所述药剂可以进一步包含可检测部分。例如，可检测部分可以包含放射性同位素或由放射性同位素组成，所述放射性同位素诸如选自下组的放射性同位素：99mtc、111in、67ga、68ga、72as、89zr、123i和201tl。因而，可以将结合部分与纳米颗粒偶联，所述纳米颗粒具有多成像(例如，spect、pet、mri、光学或超声)的能力。可替换地，所述可检测部分可以包含顺磁性同位素或由顺磁性同位素组成，诸如顺磁性同位素选自157gd、55mn、162dy、52cr和56fe。
在所述药剂包含可检测部分的情况下，则可检测部分可以通过成像技术诸如spect、pet、mri、光学或超声成像检测到。
在一个方面，本公开内容涉及如本文中所述的药剂、组合物、多核苷酸、载体或细胞用于制备诊断组合物的用途，所述诊断组合物用于诊断个体中的胰腺的疾病、病症或损伤。
项目
1.包含肽或肽类似物的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下通式的氨基酸序列：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸残基；且
前提条件是，如果x1是e且x2是s，则所述肽或肽类似物包含不超过85个氨基酸残基。
2.包含肽的药剂，其中所述肽包含以下通式的氨基酸序列：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a。
3.根据项目2的药剂，其中所述药剂包含肽，其中所述肽包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13)，和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)。
4.一种药剂，其包含含有以下氨基酸序列或由其组成的肽或肽类似物：dtydgdisvvyglr(seqidno:4)，tydgdisvvyglr(seqidno:8)，ydgdisvvyglr(seqidno:13),和dgdisvvyglr(seqidno:19)，gdisvvyglr(seqidno:26)，disvvyglr(seqidno:34)；
5.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂包含非天然存在的(例如非蛋白形成性的)氨基酸残基。
6.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂缀合至一个部分。
7.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述部分选自聚乙二醇(peg)、单糖、荧光团、生色团、放射性化合物和细胞穿透肽。
8.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂被进一步修饰，诸如被糖基化或聚乙二醇化、酰胺化、酯化、酰化、乙酰化和/或烷基化。
9.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂包含串联重复或由串联重复组成。
10.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述串联重复包含在上述项目中所述的序列中的任意一个或多个的氨基酸序列或由其组成。
11.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂融合至另一种多肽。
12.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述多肽选自谷胱甘肽-s-转移酶(gst)和蛋白a。
13.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂融合至标签。
14.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述标签是寡-组氨酸标签。
15.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂是环状的，诸如其中所述肽是环状的。
16.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物能够形成至少一个分子内半胱氨酸桥，例如以形成环状的或部分地环状的肽。
17.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：laeidsielsygik(seqidno:170)，aeidsielsygik(seqidno:171)，eidsielsygik(seqidno:172)，idsielsygik(seqidno:173)，dsielsygik(seqidno:174)，sielsygik(seqidno:175)，ielsygik(seqidno:148)，kplaeidsieltygik(seqidno:176)，或其变体或片段。
18.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kplaeidsielsygi(seqidno:179)，kplaeidsielsyg(seqidno:180)，kplaeidsielsy(seqidno:181)，kplaeidsiels(seqidno:182)，kplaeidsiel(seqidno:183)，kplaeidsie(seqidno:184)，或其片段的变体。
19.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列laeidsielsygik(seqidno:170)，或其变体或片段。
20.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列aeidsielsygik(seqidno:171)，或其变体或片段。
21.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列eidsielsygik(seqidno:172)，或其变体或片段。
22.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列idsielsygik(seqidno:173)，或其变体或片段。
23.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列dsielsygik(seqidno:174)，或其变体或片段。
24.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列sielsygik(seqidno:175)，或其变体或片段。
25.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含以下对象或由其组成：氨基酸序列ielsygik(seqidno:176)，或其变体或片段。
26.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述变体包含这样的序列或由其组成：其中任一个氨基酸已经改变为另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，前提条件是，如此改变不超过5个氨基酸。
27.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述变体包含这样的序列或由其组成：其中不超过5个氨基酸被改变为另一种蛋白形成性或非蛋白形成性氨基酸，改变诸如不超过4个氨基酸，诸如不超过3个氨基酸，诸如不超过2个氨基酸，诸如不超过1氨基酸。
28.根据上述项目中的任一项的药剂，其中一个或多个氨基酸被保守地置换。
29.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含一个或多个另外的氨基酸或由其组成，所述另外的氨基酸插入在所述序列内的n-和/或c-端和/或内部。
30.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含1个缀合至n-或c-端的另外的氨基酸。
31.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述肽或肽类似物包含插入在n-端的一个脯氨酸或由其组成。
32.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂包含不超过85个、诸如不超过80个、诸如不超过75个、诸如不超过70个、诸如不超过65个、诸如不超过60个、诸如不超过55个、诸如不超过50个、诸如不超过55个、诸如不超过40个氨基酸、诸如不超过35个、诸如不超过30个、诸如不超过28个、诸如不超过26个、诸如不超过24个、诸如不超过22个、诸如不超过20个、诸如不超过19个、诸如不超过18个、诸如不超过17个、诸如不超过16个、诸如不超过15个、诸如不超过14个、诸如不超过13个、诸如不超过12个、诸如不超过11个、诸如不超过10个氨基酸。
33.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂包含至少2个另外的氨基酸，诸如至少3个、诸如至少4个、诸如至少5个、诸如至少6个、诸如至少7个、诸如至少8个、诸如至少9个、诸如至少10个、诸如至少15或诸如至少20个缀合至所述肽或所述肽类似物的n-或c-端的氨基酸。
34.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述药剂进一步包含可检测部分。
35.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述可检测部分包含放射性同位素或由其组成。
36.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述放射性同位素选自99mtc、111in、67ga、68ga、72as、89zr、123i和201tl。
37.根据上述项目中的任一项的药剂，其中所述可检测部分可通过成像技术诸如spect、pet、mri、光学或超声成像检测到。
38.上述项目中的任一项的药剂用于制备诊断组合物的用途，所述诊断组合物用于诊断个体中的胰腺的疾病、病症或损伤。
39.一种多核苷酸，其在表达后编码根据前述权利要求中的任一项的肽或肽类似物。
40.一种载体，其包含根据权利要求39的多核苷酸。
41.一种细胞，其包含根据权利要求39的多核苷酸或根据权利要求40的载体。
42.一种组合物，其包含根据上述项目中的任一项的药剂。
43.根据上述项目中的任一项的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
44.根据权利要求1-37的药剂、根据权利要求39的多核苷酸、根据权利要求40的载体、根据权利要求41的细胞或根据权利要求42-43的组合物，其用作药物。
45.药剂，其选自：
a)选自以下的肽：
(i)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
x1lx2ygik(seqidno:177)
其中：
x1是e或g；
x2是s或t；
前提条件是，如果x2是t，则所述肽或肽类似物包含不超过25个氨基酸残基；
(ii)包含以下通式的氨基酸序列或由其组成的肽：
z1z2sz3z4yglr(seqidno:178)
其中：
z1是d或g；
z2是i或g；
z3是v或l；
z4是v或a；或者
(iii)包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的肽：vdtydgdisvvygl(seqidno:3)vdtydgdisvvyg(seqidno:6)，vdtydgdisvvy(seqidno:10)，vdtydgdisvv(seqidno:15)，vdtydgdisv(seqidno:21)和vdtydgdis(seqidno:28)；
b)在表达后编码a)的肽的多核苷酸；
c)包含b)的多核苷酸的载体；或者
d)包含b)的多核苷酸或c)的载体的细胞，
所述药剂用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
46.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述肽选自seqidno:141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155和156。
47.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述肽选自seqidno:1、136、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、137、138、139、157、158、159、160、161、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183和184。
48.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述药剂包含第二种或另一种活性成分。
49.根据项目48所用的药剂或组合物，其中所述第二种或另一种活性成分选自胰岛素、胰高血糖素-样肽-1(glp-1)、磺酰脲、二肽基肽酶-4(dpp4)抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮、meglitidine和钠-葡萄糖协同转运蛋白-2(sglt2)抑制剂。
50.根据上述项目中的任一种的药剂或组合物，其用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
51.根据项目50所用的药剂或组合物，其中所述哺乳动物是人。
52.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病选自糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病、营养不良相关的糖尿病、葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症、胰岛素抵抗综合征、葡萄糖耐量受损、高血糖症、高胰岛素血症、及它们的任意组合。
53.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病选自糖尿病、甲状腺病症、葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症、内分泌腺病症、营养不良、营养缺乏、肥胖、营养过度和代谢病症。
54.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述糖尿病选自1型糖尿病、2型糖尿病、营养不良相关的糖尿病、特定糖尿病和非特定糖尿病。
55.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述葡萄糖调节和胰腺内分泌的病症选自非糖尿病低血糖昏迷和胰腺内分泌的病症。
56.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述肥胖和营养过度的病症选自局限性肥胖、营养过度和营养过度的后遗症。
57.根据上述项目中的任一项所用的药剂或组合物，其中所述营养缺乏病症选自芳族氨基酸代谢病症、支链氨基酸代谢病症和脂肪酸代谢、氨基酸代谢病症、乳糖不耐受性、碳水化合物代谢病症、鞘脂代谢病症、脂质贮存病症、糖胺聚糖代谢病症、糖蛋白代谢病症、脂蛋白代谢病症、脂血症、嘌呤和嘧啶代谢病症、卟啉和胆红素代谢病症、矿物质代谢病症、囊性纤维化、淀粉样变性、血容不足、流体、电解质和酸-碱平衡病症和手术后内分泌和代谢病症。
58.一种治疗内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用根据上述项目中的任一项的药剂。
59.根据上述项目中的任一项的药剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗哺乳动物中的内分泌疾病、营养疾病和/或代谢疾病。
60.一种延迟糖尿病和糖尿病相关的病症和疾病的发作的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的如上述项目中的任一项中定义的药剂。
61.一种用于降低血液葡萄糖水平的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的上述项目中的任一项的药剂。
62.根据项目61的方法，其中增加胰岛素分泌。
63.根据项目61的方法，其中增加葡萄糖的细胞摄取。
64.根据项目61的方法，其中增加胰岛素产生。
65.根据项目61的方法，其中降低胰高血糖素产生。
66.一种用于改善β细胞生存力的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的上述项目中的任一项的药剂。
67.一种用于改善β细胞形态学的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的上述项目中的任一项的药剂。
68.一种用于稳定或改善胰岛的生存力和/或形态学的方法，所述方法包括给有此需要的个体施用治疗有效量的上述项目中的任一项的药剂。
实施例
通过以下实施例进一步说明本公开内容，但是，不应将其解释为对本公开内容的限制。这些实施例证实，本公开内容的示例性肽刺激β-细胞增殖，并具有保护和拯救β-细胞免于由葡萄糖毒性条件诱导的细胞凋亡的能力。还证实，示例性的肽具有刺激大鼠β-细胞以及分离的小鼠胰岛分泌胰岛素的能力，其中还证实所述肽降低胰高血糖素水平。此外，实施例证实，所述肽在葡萄糖耐量测试中降低体内血浆葡萄糖水平，并且所述肽延迟bblyp/lyp大鼠中的1型糖尿病的发作。
实施例1:肽设计
遵循合理的结构活性研究设计了新型的肽。对于fol-005(seqidno:1)，在rgd位点周围设计了肽，但对其进行了突变以生成可能与不同整联蛋白相互作用的不同结构。在腱糖蛋白-c的第三个纤连蛋白iii型重复结构域(tnfn3)中鉴定出类似于fol-005的序列，并发现其合理地类似于fol-005的突变rgd位点。从该序列设计肽，称为fol-014。分析了腱糖蛋白-3tnfn3结构域的x-射线晶体结构(pdb代码1ten,leahy等人(1992)science258(5084):987-91)。fol-014(seqidno:136)序列跨整个第三个β折叠以及之前的β转角。设计fol-014变体以允许3-维分子结构的结构修饰和稳定化。具体地，肽变体覆盖了具有暴露侧链和一些环化变体的β转角区域以维持几何形状。
使用几个肽制造商通过固相肽合成来合成所有肽。肽变体主要由加利福尼亚的biopeptideinc.提供。
实施例2:fol-005和fol-014诱导ins-1细胞的增殖
为了研究fol-005和fol-014是否可以诱导β-细胞的增殖，我们使用ins-1细胞。将大鼠ins-1细胞接种在96孔板内的具有补充剂的rpmi培养基中，并在2小时后将培养基改变为不具有补充剂的rpmi。在增殖实验期间，将细胞在不同的测试条件下温育(fol-005，fol-014，包被或在溶液中，温育48小时)，并在培养阶段的最后20小时期间，将细胞用1μci/孔的[甲基-3h]胸苷脉冲处理。然后使用filtermate收集器将细胞收获到玻璃纤维过滤器上。将过滤器风干，并使用液体闪烁计数器测量结合的放射性。为了研究fol-005是否影响β-细胞增殖，在48小时期间用递增量的可溶性的fol-005(0.06-6μm)处理ins-1细胞，并通过将放射性标记的胸苷掺入新合成的dna中来测量增殖。fol-005刺激ins-1细胞增殖(图1a)。与对照(ctrl)包被的孔相比，用fol-005或fol-014包被并随后用牛血清白蛋白(bsa)封闭然后添加ins-1细胞的孔也刺激了增殖(图1b-c)。
这证实，fol-005和fol-014与β-细胞相互作用并诱导增殖。
实施例3:fol-005保护β-细胞免于葡萄糖毒性
由于胰腺β-细胞中的葡萄糖毒性是2型糖尿病中非常确定的过程，因此我们接下来研究了fol-005在葡萄糖毒性条件期间对β-细胞的保护作用。首先，我们证实了20mm葡萄糖在暴露48小时后诱导了ins细胞中的细胞凋亡。与用含有5mm葡萄糖的培养基温育的细胞相比，含有高葡萄糖(20mm)的rpmi培养基在ins细胞中诱导了更多膜联蛋白v阳性细胞和更多胱天蛋白酶-3活性(图2a-b)。通过膜联蛋白v染色和通过胱天蛋白酶-3活性检测到，与fol-005同时ins-1细胞向20mm葡萄糖的暴露降低了细胞凋亡(图2a-b)。用胱天蛋白酶-3测定试剂盒或含有7-aad的膜联蛋白v细胞凋亡检测试剂盒染色，测量了ins-1细胞中的细胞凋亡率。用具有380nm的激发波长和440nm的发射波长的荧光测量了胱天蛋白酶-3活性。然后将胱天蛋白酶-3活性针对每个孔中的蛋白浓度归一化。使用cyanadp流式细胞仪进行膜联蛋白v染色的细胞的测量，并用summitv4.3软件分析。
综上所述，众所周知，葡萄糖毒性诱导β-细胞凋亡，但是在有fol-005存在下，葡萄糖毒性诱导的细胞凋亡减少。
实施例4:fol-005诱导来自ins-1细胞的胰岛素分泌
为了研究fol-005对胰岛素分泌的刺激作用，在以下实验中使用了ins-1β-细胞。将细胞接种在crpmi中过夜，且然后用pbs洗涤，然后在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(krb)(ph7.4)中于37℃预温育60分钟。预温育后，更换缓冲液，并将ins-1细胞在不同的测试条件(0mm,5mm或20mm葡萄糖)下温育，并用肽fol-005或fol-015(seqidno:158)刺激或在37℃不处理60分钟。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻，用于随后用胰岛素放射免疫测定试剂盒进行胰岛素测定。
结果证实，在没有葡萄糖的条件下，与未刺激的对照细胞相比或与用fol-015对照肽刺激的细胞相比，用fol-005肽刺激的β-细胞分泌更多的胰岛素(图3a)。在fol-005肽(6μm)刺激后，暴露于葡萄糖(5mm或20mm)的ins-1β-细胞以胰岛素分泌做出应答(图3b)。与用5mm葡萄糖温育的、fol-005刺激的细胞相比，在有20mm葡萄糖存在下用6μmfol-005肽刺激的ins-1细胞以更多的胰岛素分泌做出应答(图3b)。
实施例5:fol-005诱导来自小鼠胰岛的胰岛素分泌
从8-周龄c57bl/6j雄性小鼠(taconic)分离小鼠胰岛。通过剂量过量的异氟烷和颈椎脱位将小鼠处死。将3ml的0.9u/ml胶原酶p注入胰管以使胰腺膨胀。然后取出胰腺，并在37℃消化胶原19分钟。剧烈摇动样品以破坏组织。将消化物转移到含ca2+和mg2+的冰冷的汉克平衡盐溶液(hbss)中。将悬浮液静置10分钟以使胰岛下沉，并且将胰岛在新鲜的hbss中洗涤四次。然后手工挑选胰岛，并根据大小分选。将胰岛(n＝3/孔，在96孔板中)在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的krb缓冲液中预温育10分钟，37℃,ph7.4。预温育后，更换缓冲液，并将胰岛在含有0.1％牛血清白蛋白的新krb缓冲液(非处理对照、fol-005肽或glp-1)中在不同的测试条件下在37℃温育60分钟。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻以用于随后的胰岛素测定。
结果证实，与未刺激的对照胰岛相比，用glp-1(100nm)或fol-005(6μm)刺激的分离的小鼠胰岛分泌更多的胰岛素(图3c)。
实施例6:fol-014诱导来自ins-1细胞的胰岛素分泌
将ins-1β-细胞用于研究fol-014对胰岛素分泌的刺激作用。将细胞接种过夜，且然后用pbs洗涤，然后在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(krb)(ph7.4)中在37℃预温育60分钟。预温育后，更换缓冲液，并将ins-1细胞在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的新krb缓冲液中温育，并用肽fol-014刺激或在37℃不处理60min。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻以用于随后的胰岛素测定。
结果证实，与未刺激的对照细胞相比，用fol-014肽刺激的β-细胞分泌更多的胰岛素(图4a)。
实施例7:fol-014诱导来自小鼠胰岛的胰岛素分泌
如在实施例5下所述，从8-周龄c57bl/6j雄性小鼠分离小鼠胰岛。然后手工挑选胰岛，并根据大小分选。将胰岛(n＝5/孔，在96孔板中)在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的200μlkrb缓冲液中预温育10分钟，37℃,ph7.4。预温育后，更换缓冲液，并将胰岛在含有0.1％牛血清白蛋白的新krb缓冲液(非处理对照、fol-014肽和glp-1)中在不同的测试条件下在37℃温育60分钟。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻以用于随后的胰岛素测定。
结果显示，与未刺激的对照胰岛相比，用fol-014(6μm)刺激的小鼠胰岛分泌更多的胰岛素(图4b)。glp-1(100nm)或fol-014(0.6μm)没有影响胰岛素分泌(图4b)。
实施例8-11；20-21:fol-014、fol-005和有关肽刺激来自ins-1细胞系的胰岛素分泌
材料和方法:除非另有说明，否则在crpmi培养基(补充有10％胎牛血清、50iu/ml青霉素、50mg/l链霉素、10mmhepes、2mml-谷氨酰胺、1mm丙酮酸钠和50μmβ-巯基乙醇的rpmi1640)中在37℃和5％co2下培养大鼠ins-1β-细胞(第60-70代)。将ins-1细胞接种在96-孔平板(2×103个细胞/孔)内的crpmi培养基中，并在过夜温育后，将细胞在pbs中洗涤，然后在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白和2.8mm葡萄糖的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(ph7.4)中在37℃预温育120分钟。预温育后，用如上所述的新鲜krebs-ringer缓冲液更换缓冲液，并为如下所述的各个实验补充特定葡萄糖浓度和肽。在37℃温育60分钟以后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻用于随后的胰岛素eliza测定。
实施例8.fol-014诱导的胰岛素分泌是非线性方式剂量依赖性的
在暴露于递增浓度的fol-014后测量来自ins-1细胞的胰岛素释放，并与在高葡萄糖浓度(16.7mm)期间的glp-1和未经处理的对照的刺激作用进行对比。与未经处理的对照相比，所有测试的fol-014浓度均引起显著更高的胰岛素释放。在6nm或更高，fol-014触发了在与100nmglp-1相同范围内的胰岛素释放。在0.6-60nm范围内的浓度，随着递增的fol-014浓度，胰岛素分泌以线性方式增加。向≥600nm的fol-014浓度的暴露没有增加胰岛素分泌(图5)。
结果证实，fol-014以非线性的剂量依赖性方式显著增加了来自体外ins-1β-细胞的胰岛素分泌。
实施例9.fol-014的诱导胰岛素分泌的能力是葡萄糖依赖性的
在递增浓度的葡萄糖下暴露于60nmfol-014后测量了来自ins-1细胞的胰岛素释放。在未经处理的对照样品中，在11.1mm葡萄糖或更高，升高的葡萄糖浓度增加了胰岛素分泌。在有fol-014存在下，早在从5.5mm葡萄糖开始，胰岛素分泌以葡萄糖依赖性的方式显著增加(图6)。
结果证实，fol-014的存在以葡萄糖浓度依赖性方式显著增加了来自体外ins-1β-细胞的胰岛素分泌，并且fol-014在边缘升高的葡萄糖水平也是有效的。
实施例10.与任一种单独的肽相比，与glp-1组合的fol-014或fol-005增加了胰岛素分泌.
在暴露于fol-005、fol-014、glp-1或那些的组合后，测量来自ins-1细胞的胰岛素分泌，表示为未经处理的对照的百分比。与单独的glp-1或fol-014相比，glp-1和fol-014的组合效应导致显著更高的胰岛素释放。fol-005和glp-1的组合的累加效应不太明显，但是与单独的glp-1相比，确实增加了胰岛素分泌。在有16.7mm葡萄糖存在下进行了实验(图7)。
结果证实，与单独每种肽相比，glp-1和fol-014的组合可以进一步增强来自体外ins-1细胞的胰岛素分泌。此外，fol-005和glp-1的组合切向地(tangentially)增加胰岛素分泌。
实施例11.研究了新型的肽类似物在胰腺β-细胞系中诱导胰岛素分泌的能力
关于它们在有16.7mm葡萄糖存在下在两种单独的ins-1细胞系中诱导胰岛素分泌的能力，测试了从fol-005或fol-014衍生的新型的肽类似物。在每个实验中包括了fol-005、fol-014和glp-1以及高葡萄糖(16.7mm)和低葡萄糖(2.8mm)对照(未显示)，且肽浓度为100nm。为了校正实验之间的差异，将所有值均归一化，并表示为各个实验中高葡萄糖对照的平均值的百分比。随后根据性能对类似物进行排序(图11a和11b)。引起低于高葡萄糖对照平均值的胰岛素应答的肽类似物被视为无功能的，且因此被排除(未显示)。
结果证实了几种新型的肽类似物增强来自体外ins-1β-细胞的胰岛素分泌的能力。
实施例12.fol-014增加来自小鼠衍生的胰岛的胰岛素分泌
将12-周龄雄性c57/bl6小鼠用异氟烷和颈椎脱位进行安乐死。夹紧肝管后，将3ml0.9u/ml胶原酶p注入胆管以使胰腺膨胀。然后取出胰腺，并在37℃消化19分钟。剧烈摇动样品以破坏组织。将消化物快速地转移到含ca2+和mg2+的冰冷的汉克平衡盐溶液中。将悬浮液静置8分钟以使胰岛下沉，并且将胰岛以相同方式洗涤四次。然后手工挑选胰岛，并根据大小分选。
将新鲜分离的胰岛以5个的组的形式接种在96孔板中，并在37℃在krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(ph7.4)中预温育1h。将胰岛在补充有0.6或6μmfol-014或100nmglp-1的krebs-ringer缓冲溶液中在37℃温育1小时，或保持不补充用于对照。温育后，立即使用mercodia的elisa试剂盒取出培养基以进行胰岛素和胰高血糖素的测定。在有低葡萄糖(2.8mm；图8a和c)或高葡萄糖(16.7mm；图8b和d)浓度存在下，测量了fol-014对来自分离的小鼠胰岛的胰岛素(图8a和b)和胰高血糖素(图8c和d)分泌的影响。在有高葡萄糖存在下关于胰岛素和在有高和低葡萄糖存在下关于胰高血糖素，观察到fol-014的显著影响。fol-014的影响不同于glp-1的影响，glp-1也在低葡萄糖样品中增强胰岛素分泌，但是在低葡萄糖条件下没有抑制胰高血糖素分泌。
结果证实，fol-014增强胰岛素分泌并抑制胰岛中的胰高血糖素分泌。
实施例13.fol-014在小鼠中的腹膜内葡萄糖耐量测试(ipgtt)中降低血浆葡萄糖水平
从10-周龄野生型雄性c57bl/6小鼠收集全血用于葡萄糖和胰岛素测量。在禁食4小时后，将小鼠分为三组，并腹膜内注射(ip)盐水、30nmol/kg肽(图9a)或200nmol/kg肽(图9b)。在fol-014或盐水(对照)注射后15分钟，给小鼠腹膜内施用2g葡萄糖/kg。在葡萄糖注射后5、15、30、45和60分钟测量血液葡萄糖浓度。使用student氏t-检验进行统计计算。当测量为曲线下面积时，与对照相比，以200nmol/kg给药的fol-014显著降低了血浆葡萄糖水平。此外，差异在15、30和45分钟是显著的。在30nmol/kg剂量，fol-014降低了血浆葡萄糖水平，并在葡萄糖注射后45分钟具有显著影响。
结果证实，在健康野生型小鼠中进行的葡萄糖耐量测试中，fol-014可以降低血浆葡萄糖水平。
实施例14.fol-014在bblyp/lyp大鼠中延迟1型糖尿病的发作
从第40天起直到1型糖尿病的发作(定义为血浆葡萄糖水平≥11.1mm)，bblyp/lyp大鼠随机接受安慰剂(氯化钠,9mg/ml)或fol-014治疗，每周3次。皮下施用在盐水中的100nmol/kg的fol-014肽剂量或安慰剂(盐水)，并且一旦超过临界血浆葡萄糖水平就立即终止动物。当表示为1型糖尿病发作的平均日龄时(图10a)，和当描述为每天发生1型糖尿病的动物的百分比时(图10b)，fol-014治疗的动物与接受安慰剂治疗的动物之间的差异是显著的。
结果证实，fol-014治疗显著延迟了bblyp/lyp大鼠中的1型糖尿病的发作。
实施例15.fol-005和fol-014在小鼠中显示出器官特异性分布模式。
给c57bl/6小鼠皮下注射h3标记的fol-005，并在注射后1h(图12a)或2h(图12b)安乐死。在全身切片后，观察标记肽的分布。强结合在胰腺和注射部位是明显的。使用pearltrilogy小动物成像系统，通过皮下注射研究了两种cy7.5标记的肽fol-005(图12c)和fol-014(图12d)在nmri裸鼠中的体内生物分布和组织定位。该肽的高积累在胰腺组织区域中是明显的。在静脉施用后发现了相同的分布模式(未显示)。每种肽的剂量为每只小鼠10nmol。在注射前，在标记肽施用后5min、20min、50min、60min、2小时、4小时、6小时、24小时和48小时，对小鼠成像。
实施例16.用于诊断用途的组织特异性成像
使用本领域技术人员已知的方法，通过缀合至合适的成像探针或部分来标记如上文定义的制备的试剂。随后将缀合的肽-探针试剂施用给受试者，并随后监测生物分布，例如直到施用后48小时。因此，缀合的试剂用作研究胰腺状况的诊断或预后工具。这样，缀合的试剂适合用于检测、诊断或监测疾病、疾病过程和进展、易感性以及确定治疗的效力。所述药剂特别适合用于监测受试者的糖尿病状态。缀合的试剂还用于监测和/或预测发生疾病、特别是糖尿病的风险。该测试单独使用或与本领域技术人员已知的其它测试(诸如血液测试、基因测试、尿测试和活组织检查)组合使用。
实施例17:序列概述
通过以下两个实施例进一步说明本发明，但是，不应将其解释为对本发明的限制。这些实施例证实，本发明的示例性肽具有刺激大鼠β-细胞分泌胰岛素和通过保持其分泌胰岛素的能力而保护β-细胞免于葡萄糖毒性条件的影响的能力。
实施例18:fol-056诱导来自ins-1e细胞的胰岛素分泌
为了研究fol-056对胰岛素分泌的刺激作用，我们使用了ins-1e细胞。将细胞接种过夜并用pbs洗涤，然后在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(krb)(ph7.4)中在37℃预温育60分钟。预温育后，弃去缓冲液，并将ins-1e细胞在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白(含或不含肽fol-056)的新鲜krb缓冲液中温育。为了对比目的，包括用fol-014处理的细胞。在37℃温育60分钟后，将缓冲液取出并冷冻用于随后的胰岛素测定。结果证实，与未刺激的对照细胞相比，用肽fol-056刺激的β-细胞分泌显著更多的胰岛素(图13)。
实施例19:fol-056在长期葡萄糖毒性条件下保持ins-1e细胞的胰岛素分泌能力
为了研究fol-056的β-细胞保护作用，我们将ins-1e暴露于细胞毒性水平的葡萄糖72小时。将大鼠ins-1e细胞接种在96-孔平板(2×103个细胞/孔)内的crpmi培养基中。温育72小时后，将培养基更换为含有20mm葡萄糖的rpmi，其有或没有fol-056或fol-014，并在37℃培养另外的72小时以诱导葡萄糖毒性。包括含有5mm葡萄糖的rpmi作为低葡萄糖对照。72小时后，除去培养基，并将ins-1e细胞在krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(kreb)(ph7.4)(补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白和2.8mm葡萄糖)中平衡2小时。平衡后，更换缓冲液，并将ins-1e细胞在含16.7mm葡萄糖的kreb中温育1小时。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻以用于随后的胰岛素含量测定。
结果证实，在葡萄糖毒性条件下，fol-056的存在保留了β-细胞功能，如保留的葡萄糖诱导的胰岛素分泌所证实的。
实施例20.与单独的任一种肽相比，与glp-1组合的fol-056增加胰岛素分泌
暴露于fol-056、glp-1或它们的组合后，测量来自ins-1细胞的胰岛素分泌，表示为未经处理的对照的百分比。与单独的glp-1或fol-056相比，glp-1和fol-056的组合效应导致显著更高的胰岛素释放。在有16.7mm葡萄糖存在下进行实验(图15)。
结果证实，与单独每种肽相比，glp-1和fol-肽的片段的组合进一步增强了来自体外ins-1细胞的胰岛素分泌。
实施例21.新型的肽类似物诱导胰腺β-细胞系中的胰岛素分泌
测试了新型的肽类似物以研究在有20mm葡萄糖存在下它们在ins-1细胞系中诱导胰岛素分泌的能力。在每个实验中包括利拉糖肽以及高葡萄糖(20mm)和低葡萄糖(5mm)对照(肽浓度为100nm)。为了校正实验之间的差异，将所有值均归一化，并表示为在各个实验中高葡萄糖对照的平均值的百分比。随后根据性能对类似物进行排序(图16)。
结果证实了新型的肽类似物增强来自体外ins-1β-细胞的胰岛素分泌的能力。
实施例22:从fol-005和fol-014衍生出的新型肽在长期葡萄糖毒性条件中保留ins-1细胞的胰岛素分泌能力
为了研究从fol-005和fol-014衍生出的几种新型的肽片段的β-细胞保护作用，将ins-1细胞暴露于细胞毒性水平的葡萄糖72小时。将大鼠ins-1细胞接种在96-孔平板(2×103个细胞/孔)内的crpmi培养基中。温育72小时后，将培养基更换为含有20mm葡萄糖的rpmi，其有或没有肽，并将细胞在37℃培养另外的72小时以诱导葡萄糖毒性。包括含有5mm葡萄糖的rpmi作为低葡萄糖对照(未显示)，并包括利拉糖肽用于对比。72小时后，除去培养基，并将ins-1细胞在krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(kreb)(ph7.4)(补充有10mmhepes,0.1％牛血清白蛋白和2.8mm葡萄糖)中平衡2小时。平衡后，更换缓冲液，并将ins-1细胞在含16.7mm葡萄糖的kreb中温育1小时。温育后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻以用于随后的胰岛素含量测定。为了校正实验之间的差异,将所有值均归一化，并表示为在各个实验中高葡萄糖对照的平均值的百分比。随后根据性能对类似物进行排序(图17)。
结果证实，在葡萄糖毒性条件下，几种新型的肽的存在保留了β-细胞功能，如保留的葡萄糖诱导的胰岛素分泌所证实的。
实施例23:fol-056肽刺激来自人胰腺β-细胞的胰岛素分泌
为了测试fol-014和fol-056在人细胞中的作用，在补充有10％胎牛血清、50iu/ml青霉素、50mg/l链霉素、1mml-谷氨酰胺的rpmi1640中在37℃和5％co2下培养人胰腺β-细胞系1.2b4。将1.2b4细胞接种在24-孔平板内的rpmi培养基中，并在过夜温育后，除去培养基，然后在补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白和1.0mm葡萄糖的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(ph7.4)中在37℃预温育40分钟。预温育后，将缓冲液更换为如上所述的新鲜krebs-ringer缓冲液，并补充特定的葡萄糖浓度1mm或16.7mm。在有16.7mm葡萄糖存在下，以100nm的浓度添加fol-014、fol-056或利拉糖肽。在37℃温育60分钟后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻用于随后的胰岛素elisa测定(图18)。
结果证实，在有16.7mm葡萄糖存在下，肽fol-014和fol-056增加了1.2b4人β-细胞中的胰岛素分泌能力。
实施例24:fol-056肽刺激来自人胰岛的胰岛素分泌
为了研究fol-056在人原代组织中的功能，使用了来自两个非糖尿病人供体的胰岛。挑选胰岛，等分成12个的组，并在37℃在1ml补充有10mmhepes、0.1％牛血清白蛋白和1.0mm葡萄糖的krebs-ringer碳酸氢盐缓冲液(ph7.4)温育。预温育后，将缓冲液更换为如上所述的新鲜krebs-ringer缓冲液，并补充特定的葡萄糖浓度(1mm或16.7mm)、fol-056肽(1nm)或利拉糖肽(100nm)。在37℃温育60分钟后，立即取出缓冲液的等分试样并冷冻用于随后的胰岛素elisa测定(图19)。
结果证实，fol-056增强了原代人胰岛响应于高葡萄糖水平而分泌胰岛素的能力。
实施例25和26:饮食的长期给药诱导肥胖的c57bl6小鼠
材料和方法:为了研究fol-056在高脂肪饮食模型中的体内作用，给野生型c57bl6小鼠皮下给药300nmol/kgfol-056，每周5天，同时喂养高脂肪饮食12周。给对照动物给药pbs。
实施例25:fol-056的长期给药增加体内急性胰岛素应答
在未经治疗或给药fol-056的饮食诱导的肥胖的c57bl6小鼠中，在静脉内注射1g/kg的葡萄糖之前和之后1分钟测量禁食血浆胰岛素水平。从每只单独小鼠在注射后测量的值减去在葡萄糖注射前测量的胰岛素值，以获得急性胰岛素应答(air)(图20)。
结果证实，与未经治疗的对照小鼠相比，在用fol-056治疗的小鼠中的急性胰岛素应答(air)显著改善。
实施例26:在给药4周后糖尿病小鼠中的hba1c的减少
为了研究fol-014和fol-056在糖尿病小鼠中的长期作用，给db/db小鼠皮下给药100nmol/kg肽，每周5天，共4周。给对照小鼠注射pbs。治疗4周后，将小鼠处死，并立即冷冻25μl全血用于随后的hba1c分析(图21)。
结果证实，与未经治疗的对照组相比，用fol-014和fol-056治疗4周降低db/db小鼠中的hba1c。
序列表
<110>富力卡姆股份公司
<120>用于治疗糖尿病的肽片段
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1510
<210>21
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
<400>21
valaspthrtyraspglyaspileserval
1510
<210>22
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
<400>22
aspthrtyraspglyaspileservalval
1510
<210>23
<211>10
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
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thrtyraspglyaspileservalvaltyr
1510
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<211>10
<212>prt
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<220>
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<220>
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<222>(1)..(10)
<223>肽
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tyraspglyaspileservalvaltyrgly
1510
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<212>prt
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<220>
<223>合成序列
<220>
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<222>(1)..(10)
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<220>
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<220>
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aspthrtyraspglyaspileserval
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
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<223>肽
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thrtyraspglyaspileservalval
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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tyraspglyaspileservalvaltyr
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
<400>32
aspglyaspileservalvaltyrgly
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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glyaspileservalvaltyrglyleu
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
<400>34
aspileservalvaltyrglyleuarg
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
<400>35
ileservalvaltyrglyleuargser
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
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<223>肽
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valaspthrtyraspglyaspile
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
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aspthrtyraspglyaspileser
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>38
thrtyraspglyaspileserval
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
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tyraspglyaspileservalval
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>40
aspglyaspileservalvaltyr
15
<210>41
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
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glyaspileservalvaltyrgly
15
<210>42
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>42
aspileservalvaltyrglyleu
15
<210>43
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>43
ileservalvaltyrglyleuarg
15
<210>44
<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>44
valaspthrtyraspglyasp
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>45
aspthrtyraspglyaspile
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>46
thrtyraspglyaspileser
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>47
tyraspglyaspileserval
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>48
aspglyaspileservalval
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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glyaspileservalvaltyr
15
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<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>50
aspileservalvaltyrgly
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>51
ileservalvaltyrglyleu
15
<210>52
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>52
aspthrtyraspglyasp
15
<210>53
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>53
thrtyraspglyaspile
15
<210>54
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>54
tyraspglyaspileser
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>55
aspglyaspileserval
15
<210>56
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>56
glyaspileservalval
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>57
aspileservalvaltyr
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>58
ileservalvaltyrgly
15
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<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>59
thrtyraspglyasp
15
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<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>60
tyraspglyaspile
15
<210>61
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>61
aspglyaspileser
15
<210>62
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>62
glyaspileserval
15
<210>63
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>63
aspileservalval
15
<210>64
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>64
ileservalvaltyr
15
<210>65
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>65
servalvaltyrgly
15
<210>66
<211>300
<212>prt
<213>智人
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(300)
<223>野生型人骨桥蛋白
<400>66
metargilealavalilecysphecysleuleuglyilethrcysala
151015
ileprovallysglnalaaspserglysersergluglulysglnleu
202530
tyrasnlystyrproaspalavalalathrtrpleuasnproasppro
354045
serglnlysglnasnleuleualaproglnthrleuproserlysser
505560
asngluserhisasphismetaspaspmetaspaspgluaspaspasp
65707580
asphisvalaspserglnaspserileaspserasnaspseraspasp
859095
valaspaspthraspaspserhisglnseraspgluserhishisser
100105110
aspgluseraspgluleuvalthrasppheprothraspleuproala
115120125
thrgluvalphethrprovalvalprothrvalaspthrtyraspgly
130135140
argglyaspservalvaltyrglyleuargserlysserlyslysphe
145150155160
argargproaspileglntyrproaspalathraspgluaspilethr
165170175
serhismetgluserglugluleuasnglyalatyrlysalailepro
180185190
valalaglnaspleuasnalaproserasptrpaspserargglylys
195200205
aspsertyrgluthrserglnleuaspaspglnseralagluthrhis
210215220
serhislysglnserargleutyrlysarglysalaasnaspgluser
225230235240
asngluhisseraspvalileaspserglngluleuserlysvalser
245250255
arggluphehisserhisgluphehisserhisgluaspmetleuval
260265270
valaspprolysserlysglugluasplyshisleulyspheargile
275280285
serhisgluleuaspseralasersergluvalasn
290295300
<210>67
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
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<400>67
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151015
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<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(15)
<223>肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>z是t或v
<220>
<221>misc_feature
<222>(4)..(4)
<223>z是y或p
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>z是d或n
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>z是d或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(8)
<223>z是i或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(10)..(10)
<223>z是v或l
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>z是v或a
<400>68
valaspglxglxglxglyglxglxserglxglxtyrglyleuarg
151015
<210>69
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(15)
<223>肽,fol-004
<400>69
valaspvalproasnglyaspileserleualatyrglyleuarg
151015
<210>70
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(15)
<223>肽
<400>70
aspvalproasnglyaspileserleualatyrglyleuargser
151015
<210>71
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(14)
<223>肽
<400>71
valaspvalproasnglyaspileserleualatyrglyleu
1510
<210>72
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(14)
<223>肽
<400>72
aspvalproasnglyaspileserleualatyrglyleuarg
1510
<210>73
<211>14
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(14)
<223>肽
<400>73
valproasnglyaspileserleualatyrglyleuargser
1510
<210>74
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(13)
<223>肽,fol-017
<400>74
valaspvalproasnglyaspileserleualatyrgly
1510
<210>75
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(13)
<223>肽
<400>75
aspvalproasnglyaspileserleualatyrglyleu
1510
<210>76
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(13)
<223>肽
<400>76
valproasnglyaspileserleualatyrglyleuarg
1510
<210>77
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(13)
<223>肽
<400>77
proasnglyaspileserleualatyrglyleuargser
1510
<210>78
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(12)
<223>肽
<400>78
valaspvalproasnglyaspileserleualatyr
1510
<210>79
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(12)
<223>肽
<400>79
aspvalproasnglyaspileserleualatyrgly
1510
<210>80
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(12)
<223>肽
<400>80
valproasnglyaspileserleualatyrglyleu
1510
<210>81
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(12)
<223>肽
<400>81
proasnglyaspileserleualatyrglyleuarg
1510
<210>82
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(12)
<223>肽
<400>82
asnglyaspileserleualatyrglyleuargser
1510
<210>83
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(11)
<223>肽
<400>83
valaspvalproasnglyaspileserleuala
1510
<210>84
<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(11)
<223>肽
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aspvalproasnglyaspileserleualatyr
1510
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<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(11)
<223>肽
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1510
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<211>11
<212>prt
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<220>
<223>合成序列
<220>
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<222>(1)..(11)
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<220>
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<222>(1)..(11)
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<222>(1)..(10)
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valaspvalproasnglyaspileserleu
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<211>10
<212>prt
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<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
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aspvalproasnglyaspileserleuala
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<211>10
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<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
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valproasnglyaspileserleualatyr
1510
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<212>prt
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<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
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proasnglyaspileserleualatyrgly
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(10)
<223>肽
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asnglyaspileserleualatyrglyleu
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<222>(1)..(10)
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<223>合成序列
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1510
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
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valaspvalproasnglyaspileser
15
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<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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aspvalproasnglyaspileserleu
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
<400>98
valproasnglyaspileserleuala
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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proasnglyaspileserleualatyr
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
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<223>肽
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asnglyaspileserleualatyrgly
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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glyaspileserleualatyrglyleu
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
<400>102
aspileserleualatyrglyleuarg
15
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<211>9
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(9)
<223>肽
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ileserleualatyrglyleuargser
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
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<220>
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valaspvalproasnglyaspile
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
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<223>肽
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aspvalproasnglyaspileser
15
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<211>8
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<220>
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<220>
<221>misc_feature
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<223>肽
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valproasnglyaspileserleu
15
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<211>8
<212>prt
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<220>
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<220>
<221>misc_feature
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<223>肽
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proasnglyaspileserleuala
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
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asnglyaspileserleualatyr
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
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glyaspileserleualatyrgly
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>110
aspileserleualatyrglyleu
15
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<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>111
ileserleualatyrglyleuarg
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>112
valaspvalproasnglyasp
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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aspvalproasnglyaspile
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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valproasnglyaspileser
15
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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proasnglyaspileserleu
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
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<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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asnglyaspileserleuala
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
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glyaspileserleualatyr
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>118
aspileserleualatyrgly
15
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<211>7
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(7)
<223>肽
<400>119
ileserleualatyrglyleu
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>120
aspvalproasnglyasp
15
<210>121
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>121
valproasnglyaspile
15
<210>122
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>122
proasnglyaspileser
15
<210>123
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>123
asnglyaspileserleu
15
<210>124
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>124
glyaspileserleuala
15
<210>125
<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>125
aspileserleualatyr
15
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<211>6
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(6)
<223>肽
<400>126
ileserleualatyrgly
15
<210>127
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>127
valproasnglyasp
15
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<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>128
proasnglyaspile
15
<210>129
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>129
asnglyaspileser
15
<210>130
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>130
glyaspileserleu
15
<210>131
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>131
aspileserleuala
15
<210>132
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>132
ileserleualatyr
15
<210>133
<211>5
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(5)
<223>肽
<400>133
serleualatyrgly
15
<210>134
<211>294
<212>prt
<213>小家鼠
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(294)
<223>野生型鼠骨桥蛋白
<400>134
metargleualavalilecysphecysleupheglyilealaserser
151015
leuprovallysvalthraspserglysersergluglulysleutyr
202530
serleuhisproaspproilealathrtrpleuvalproaspproser
354045
glnlysglnasnleuleualaproglnasnalavalsersergluglu
505560
lysaspaspphelysglngluthrleuproserasnserasngluser
65707580
hisasphismetaspaspaspaspaspaspaspaspaspaspglyasp
859095
hisalaglusergluaspservalaspseraspgluseraspgluser
100105110
hishisseraspgluseraspgluthrvalthralaserthrglnala
115120125
aspthrphethrproilevalprothrvalaspvalproasnglyarg
130135140
glyaspserleualatyrglyleuargserlysserargserphegln
145150155160
valseraspgluglntyrproaspalathraspgluaspleuthrser
165170175
hismetlysserglygluserlysgluserleuaspvalileproval
180185190
alaglnleuleusermetproseraspglnaspasnasnglylysgly
195200205
serhisgluserserglnleuaspgluproserleugluthrhisarg
210215220
leugluhisserlysgluserglngluseralaaspglnseraspval
225230235240
ileaspserglnalaserserlysalaserleugluhisglnserhis
245250255
lysphehisserhislysasplysleuvalleuaspprolysserlys
260265270
gluaspaspargtyrleulyspheargileserhisgluleugluser
275280285
sersersergluvalasn
290
<210>135
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽,fol-001
<400>135
valaspvalproasnglyargglyaspserleualatyrglyleuarg
151015
<210>136
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽,fol-014
<400>136
lysproleualagluileaspserilegluleusertyrglyilelys
151015
<210>137
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽,fol-003
<400>137
glyaspproasnaspglyargglyaspservalvaltyrglyleuarg
151015
<210>138
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(15)
<223>肽,fol-026
<400>138
valaspthrtyraspglyglyileservalvaltyrglyleuarg
151015
<210>139
<211>15
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(15)
<223>肽,fol-027
<400>139
valaspthrtyraspglyaspglyservalvaltyrglyleuarg
151015
<210>140
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>x是c,p或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>x是e或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(6)..(6)
<223>x是c,d或i
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>x是d,i,s或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(8)
<223>x是s,d或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(10)..(10)
<223>x是e或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(12)..(12)
<223>x是s或t
<400>140
lysxaaleualaxaaxaaxaaxaailexaaleuxaatyrglyilelys
151015
<210>141
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
<400>141
lyscysleualaglucysaspserilegluleusertyrglyilelys
151015
<210>142
<211>8
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(8)
<223>肽
<400>142
cysleualagluileaspsercys
15
<210>143
<211>18
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(18)
<223>肽
<400>143
cysphelysproleualagluileaspserileglucyssertyrgly
151015
ilelys
<210>144
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
<400>144
lysproleualagluaspileserilegluleusertyrglyilelys
151015
<210>145
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
<400>145
lysproleualagluileseraspilegluleusertyrglyilelys
151015
<210>146
<211>16
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
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lysproleualagluglyaspilegluleusertyrglyilelys
151015
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<223>合成序列
<220>
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<220>
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<222>(5)..(5)
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lysxaaleualaxaailexaaleusertyrglyilelys
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<212>prt
<213>人工序列
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<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(16)
<223>肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>z是d或g
<220>
<221>misc_feature
<222>(6)..(6)
<223>z是d或g
<220>
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<220>
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<220>
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glyaspproasnglxglxglxglxglxservalvaltyrglyleuarg
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<213>人工序列
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<223>肽
<220>
<221>misc_feature
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<223>肽
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alagluileaspserilegluleusertyrglyilelys
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<220>
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<223>肽
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gluileaspserilegluleusertyrglyilelys
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<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
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<223>肽
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ileaspserilegluleusertyrglyilelys
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
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<223>肽
<400>174
aspserilegluleusertyrglyilelys
1510
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<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
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<223>肽
<400>175
serilegluleusertyrglyilelys
15
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<211>8
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<213>人工序列
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<220>
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ilegluleusertyrglyilelys
15
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xaaleuxaatyrglyilelys
15
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<213>人工序列
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<222>(1)..(1)
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<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
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<220>
<221>misc_feature
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<220>
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glxglxserglxglxtyrglyleuarg
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<213>人工序列
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<223>肽
<400>179
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151015
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<211>14
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<213>人工序列
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<223>合成的肽
<220>
<221>misc_feature
<223>肽
<400>180
lysproleualagluileaspserilegluleusertyrgly
1510
<210>181
<211>13
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
<221>misc_feature
<223>肽
<400>181
lysproleualagluileaspserilegluleusertyr
1510
<210>182
<211>12
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
<221>misc_feature
<223>肽
<400>182
lysproleualagluileaspserilegluleuser
1510
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<211>11
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
<221>misc_feature
<223>肽
<400>183
lysproleualagluileaspserilegluleu
1510
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<213>人工序列
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<223>合成的肽
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<223>肽
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lysproleualagluileaspserileglu
1510
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