本发明涉及一种喷剂及其制备方法与应用，尤其涉及一种口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂及其制备方法与应用。属于化学消毒剂
技术领域：
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背景技术：
：有害微生物的存在会给人类带来很多疾病，严重时还会危及人类生命。消毒杀菌是维护人类生命安全的有效措施。日常生活中，经常会用到各类消毒剂。目前，常用的消毒剂其有效成分主要具有以下几类物质：氧化类物质、醛类、酚类、醇类、碱盐类、卤素类、表面活性剂类等，但均存在缺点。理想的消毒剂应具备杀菌谱广、杀菌能力强、作用速度快、稳定性好、毒性低、腐蚀性、刺激性小(应该是无毒、无残留、无腐蚀、无刺激)、易溶于水、对人和动物安全、价廉易得、对环境污染程度低等特点。最近广泛关注的新型冠状病毒存在人传人的现象，有人群普遍易感的特性，传播途径包括飞沫传播、接触传播、气溶胶和消化道等传播。经呼吸道飞沫传播是主要的传播途径，病毒存在于飞沫中，通过打喷嚏、咳嗽、讲话进入空气中，小的飞沫以飞沫核的形式漂流在空气中，可随时进入口、鼻、眼的黏膜导致病毒感染。因此口腔和面部的防疫尤为重要，特别是在医院、银行、超市、机关企事业单位、影剧院、部队、娱乐场所、大中小学校、幼儿园、家庭、宾馆、餐厅、机场、码头、火车站等场所，极容易引起病毒和细菌的传播，造成公众交叉感染。同时，生活中不注意口腔卫生、使用未消毒的牙具、被动吸入带有细菌病毒的飞沫等，也是引起口腔感染、呼吸道传染病的重要因素。鉴于此，开发新型快速有效且无毒的口腔和面部杀菌抗病毒用品尤为迫切。口腔喷剂具有使用后无需漱口，节约宝贵的水资源，同时还可用于面部消毒，安全无刺激的特点，目前已有相关产品的报道。但多数口腔护理产品都是以口腔除臭或抑制幽门螺旋菌等消化道致病菌为主，很少涉及抗病毒的作用，尤其是利用口腔和面部杀菌抗病毒喷剂来防疫新型冠状病毒的作用。经检索，有关利用溶菌酶、四吡氯铵、病毒蛋白受体ace2抑制剂甘草酸和富氢水配伍，联合安赛蜜、薄荷脑制备防疫新型冠状病毒的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂还未见报道。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂及其制备方法与应用。本发明所述的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂，是由溶菌酶、四吡氯铵、甘草酸、安赛蜜、薄荷脑、富氢水制成，其特征在于：所述喷剂的ph值为5.5～7，其组分含量以100ml溶液计，含溶菌酶300～500万单位，四吡氯铵0.08～0.12g、甘草酸0.005g～0.02g，安赛蜜0.02g～0.05g，薄荷脑0.05g～0.2g，富氢水定容至100ml。上述的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂，优选的实施方是：所述喷剂的ph值为6.0～6.8，其组分含量以100ml溶液计，含质量浓度为0.2g的溶菌酶，即400万单位/100ml，四吡氯铵0.1g，甘草酸0.01g，安赛蜜0.03g，薄荷脑0.1g，富氢水定容至100ml。其中：所述喷剂的ph值进一步优选为6.3。本发明所述口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的制备方法，步骤是：(1)在常温下向搅拌罐中加入70％～80％配方体积量的富氢水，再分别加入配方量的溶菌酶、四吡氯铵、甘草酸、安赛蜜和薄荷脑，再补齐余量的富氢水，搅拌均匀；(2)测试ph值，确定ph值是否达到5.5～7，若ph值为5.5-7之间，即可灌装；若ph值未达标用柠檬酸调节ph值至5.5～7。上述口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的制备方法优选以如下步骤和方式制备：(1)以制备100ml量的喷剂计，在常温下向搅拌罐中加入70ml的富氢水，再依次分别加入溶菌酶0.2g达到400万单位/100ml，四吡氯铵0.1g、甘草酸0.01g，安赛蜜0.03g，薄荷脑0.1g，富氢水定容至100ml，搅拌均匀；(2)测试ph值，确定ph值是否达到6.0～6.8，若ph值为6.0～6.8之间，即可灌装；若ph值未达标用柠檬酸调节ph值至6.0～6.8。或进一步优选为6.3。本发明提供的喷剂可以应用于在口腔、咽部、面部、皮肤尤其是手表面的杀菌消毒。本发明所述口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂作为口咽部、面部和/或皮肤表面杀菌抗病毒药物制品的应用。优选的，本发明所述口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂作为口咽部、面部或手表面杀菌抗病毒药物制品的应用。上述的应用中，所述菌是指大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌atcc6538、铜绿假单胞菌atcc15442和白色念珠菌atcc10231；所述病毒是指呼吸道病毒或消化道病毒。其中：所述病毒优选是新型冠状病毒sars-cov-2。本发明公开的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的组分中，溶菌酶、四吡氯铵是杀菌抗病毒主要组分。其中溶菌酶主要作用于n-乙酰胞壁酸(nam)及n-乙酰葡萄糖胺(nac)之间的β-1,4糖苷键的糖苷水解酶，通过作用于细菌细胞壁的肽聚糖，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，造成细胞因渗透压不平衡引起破裂，从而死亡。其抗病毒机理是：溶菌酶可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与dna、rna、脱辅基蛋白形成复盐，从而使病毒失活。另外，通过激活机体免疫系统，调节淋巴细胞和巨噬细胞介导的细胞毒作用杀伤病毒。其中四吡氯铵为阳离子季铵化合物,作为表面活性剂,主要通过降低表面张力而起到抑制和杀灭作用。阳离子通过静电力、氢键力以及表面活性剂分子与蛋白质分子间的疏水结合等作用，吸附带负电的细菌体，聚集在细胞壁上，产生室阻效应，导致细菌生长受抑而死亡；同时其憎水烷基还能与细菌的亲水基作用，改变膜的通透性，继而发生溶胞作用，破坏细胞结构，引起细胞的溶解和死亡。该产品具有高效、低毒、不易受ph值变化的影响、使用方便、对粘液层有较强的剥离作用、化学性能稳定、分散及缓蚀作用较好等特点,体外实验结果表明其对多种口腔致病菌和非致病菌有显著抑制和杀灭效果。甘草酸是一种新型冠状病毒(sars-cov-2)蛋白受体ace2抑制剂，可与血管紧张素转换酶2(ace2)结合，阻断病毒s蛋白与ace2受体结合，减少病毒入侵人体表皮细胞，从而降低病毒对人体的伤害。美国斯坦福大学医学院神经外科与香港大学中医药学院联合发表论文，也证实甘草酸可以与ace2结合，因此可以得出用甘草酸是潜在的抗sars-cov-2化合物，对预防新型冠状病毒(sars-cov-2)感染治疗sars具有重要价值。安赛蜜和薄荷脑用于改善口腔杀菌喷剂的口感。在本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂中病毒蛋白受体ace2抑制剂甘草酸的加入协同溶菌酶和四吡氯铵，能够极大的发挥两者的杀菌抗病毒能力，非常好的起到了防疫新型冠状病毒的作用。富氢水中含有丰富的氢分子，氢气是唯一可以通过细胞膜和血脑屏障的抗氧化物质，具有其它抗氧化物无法比拟的优势。进入人体后，被体内的氢分解为氢分子，即：活性氢。活性氢与人体内的活性氧(氧自由基)发生还原反应，生成对人体有益无害的水。活性氢被清除掉，细胞恢复活力，健康得到改善。具有选择性抗氧化活性的富氢水可通过多种机制发挥抗炎作用。与传统的炎症治疗药物相比，富氢水具有以下优点：(1)在临床和动物实验中不存在使用过量的情况，目前尚未发现氢气不良反应的相关报道；(2)氢气可选择性清除细胞毒性较强的·oh、onoo等ros，而不影响细胞毒性较弱的o2·和h2o2；(3)氢气的相对分子质量很小，可以自由穿越各种细胞膜，快速聚集到目标器官或细胞器发挥作用；(4)对机体的血流动力学及体温、血压、ph值、氧分压等常规生化指标没有影响。本发明采用特制铝罐密封包装能够明显提高氢在水中的稳定性，从而延长保存时间。该喷剂具有广谱性杀毒、渗透力极强、作用速度快、稳定性好、毒性低、无腐蚀性、刺激性小的特点，尤其特别易于在口腔黏膜、面部、皮肤尤其是手表面形成一层“隐形保护膜”，有效阻止了细菌和病毒感染口腔和人体，起到长时间抑菌和抗病毒的效果。本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂使用方便，易于形成均匀喷雾，特别适于口腔内喷射和面部或手消毒使用。综上，本发明的优点及显著效果是：1.突破性通过阴、阳离子双重作用，利用溶菌酶和四吡氯胺同时作用于不同细菌和病毒表面，达到广谱抗菌和广泛抗病毒的效果，尤其是新型冠状病毒sars-cov-2；未见到相同机理的其它产品报道。2.渗透力极强、作用速度快，五分钟见效；3.效果持续时间长，可达4-5小时，最长可达6小时；4.在口腔黏膜、面部、皮肤尤其是手表面形成一层“隐形保护膜”，有效阻断了细菌、病毒感染；5.完全无毒、可降解，环保特性好；6.适用于口腔、面部、皮肤等各个环境方面的消毒杀菌。具体实施方式下面结合具体实施例对本
发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。实施例1：口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的制备具体的，以制备100ml口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂为例：(1)以制备100ml量的喷剂计，在常温下向搅拌罐中加入70ml的富氢水，再依次分别加入溶菌酶0.2g达到400万单位/100ml，四吡氯铵0.1g、甘草酸0.01g，安赛蜜0.03g，薄荷脑0.1g，富氢水定容至100ml，搅拌至完全均匀后待用；(2)测试ph值，确定ph值是否达到6.0～6.8，若ph值为6.0～6.8之间，即可灌装；若ph值未达标用柠檬酸调节ph值至6.0～6.8。或进一步优选为6.3。实施例2：口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的消毒评价2.1杀灭微生物试验2.1.1菌悬液与菌片的制备菌种：大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌atcc6538、铜绿假单胞菌atcc15442、白色念珠菌atcc10231。2.1.2按照《消毒技术规范》2002年版规定的杀菌试验方法进行试验，应用口腔面部杀菌抗病毒喷剂的实验结果见表1。表1：杀灭微生物效果评价2.2口腔面部杀菌抗病毒喷剂对口腔消毒现场实验2.2.1在使用现场，随机选定受试者。试验不少于30人次。2.2.2消毒前，受试者洗净双手，清水漱口，用无菌棉拭在含10ml稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，伸进口腔左内侧颊粘膜处稍用力反复擦拭10下，边擦拭边转动棉拭，采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入含中和试剂的管内，作为阳性对照组样本。2.2.3根据杀菌喷剂使用方法对口腔进行消毒，对口腔的卫生消毒一般设定作用时间为5min。消毒后用中和剂代替稀释液，采用与阳性对照组同样的方法对受试者口腔右内侧颊粘膜上残留的自然物采样一次，作为试验组样本。2.2.4分别将未用过的同批中和剂、稀释液各1.0ml、棉拭1份～2份作为阴性对照组样本。2.2.5分别取试验组、阳性对照组和阴性对照组样本各1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37℃恒温箱中培养48h，观察最终结果。3.3评价测定阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对照组应无菌生长，以对30人次口腔内自然菌的平均杀灭对数值≥1.00可判为消毒合格。杀菌效果见表2。表2：30人喷涂消毒剂后杀菌效果实施例3：口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的防护评价3.1抑菌圈法测试口腔面部杀菌抗病毒喷剂的杀菌抑菌作用3.1.1制备100mllb液体培养基2瓶(酵母膏5g/l，胰蛋白胨10g/l，nacl10g/l，琼脂粉15g/l)，121℃高压灭菌20min，冷却后分别接入大肠杆菌斜面菌种1支，金黄色葡萄球菌斜面菌种1支。摇匀，37℃培养1～2天，至浑浊为止。3.1.2在超净工作台内，放入100ml约45℃营养琼脂培养基中，摇匀，然后将培养基注皿，待凝固，倒4个培养皿。用无菌吸管吸取大肠杆菌菌(8099)悬液0.2ml和金黄色葡萄球菌(atcc6538)0.2ml，涂布于培养基中。3.1.3取用口腔面部杀菌抗病毒喷剂完全浸湿的无菌圆形滤纸片(5mm)分别水平放入含大肠杆菌培养皿和金黄色葡萄球菌培养皿中，37℃培养中静置培养，24h/48h/72h取出测定抑菌圈大小。结果见表3。表3：抑菌圈测试实验从抑菌圈大小可见，本发明提供的口腔面部杀菌抗病毒喷剂可以有效抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的生长，并且可以持续稳定的发挥抑菌作用。实施例4：口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂的批量制备喷剂组分含量以100ml溶液计，含溶菌酶300～500万单位，四吡氯铵0.08～0.12g、甘草酸0.005g～0.02g，安赛蜜0.02g～0.05g，薄荷脑0.05g～0.2g，富氢水定容至100ml。(1)在常温下向搅拌罐中加入70％～80％配方体积量的富氢水，再分别加入配方量的溶菌酶、四吡氯铵、甘草酸、安赛蜜和薄荷脑，再补齐余量的富氢水，搅拌均匀；(2)测试ph值，确定ph值是否达到5.5～7，若ph值为5.5-7之间，即可灌装；若ph值未达标用柠檬酸调节ph值至5.5～7。实施例5：口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂应用于新型冠状病毒核酸检测验证为检测本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂对病毒类的消毒效果，利用济南市传染病医院新型冠状病毒(sars-cov-2)核酸阳性患者提取的核酸样本5例，每例sars-cov-2阳性rna中加入5％体积量的本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂混匀。并再次采用新型冠状病毒(sars-cov-2)核酸检测试剂盒(恒温核酸扩增法)(山东莱博生物科技有限公司，批号：202002001)与核酸快速增强液(山东莱博生物科技有限公司，批号：202002094)配套使用，检测每例sars-cov-2阳性rna中的rna含量，并验证消毒后低浓度的病毒rna是否存在。具体操作方法：5.1向反应管中加入2.5μl核酸模板(阳性对照、阴性对照各加5ul)。5.2每个反应管加入2.5μlbbuffer，盖好管盖(对于多个反应，建议将bbuffer加至反应管的盖子内侧)；上下颠倒反应管8-10次充分混匀；混匀后，将反应液甩(或快速离心)至管子底部，转移至扩增区。5.3若使用rochelightcycler480，应将上述反应液转移至与罗氏适配的专用反应管中再行扩增反应。步骤温度时间循环次数①孵育42℃1min1cycle②扩增/检测荧光42℃30s40ycle5.4核酸扩增5.5用移液器吹吸或涡旋混匀上述混合液，瞬时离心除气泡；可预混后分装；无需置冰上操作。将上述混匀的体系在qpcr仪上进行反应。反应程序：48℃，20min，每30s检测一次fam荧光。针对阴性(ct≥40)样本的复检，建议将反应时间设为60min，扩大增敏效果。5.6每个样本采集20组以上荧光值，以循环次数为x轴，荧光值为y轴做直线拟合，求直线斜率k值。(k值<500为阴性)表4阳性rna样本核酸检测结果样本编号未加入本发明的喷剂前ct加入本发明的喷剂后ct加入本发明的喷剂后k131未检出45232未检出51329未检出45433未检出56531未检出63从以上结果看出，新型冠状病毒(sars-cov-2)核酸阳性样本经过本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂处理后pcr检测及后续加入增强液提高灵敏度后的检测后，结果均为阴性。说明本发明的口咽面手表面杀菌抗病毒喷剂对sars-cov-2具有极强的破坏作用，可以用于消杀sars-cov-2。这为该病毒的防护工作提供了良好的基础。当前第1页12