一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶及其制备方法与应用与流程

文档序号:25992696发布日期:2021-07-23 21:05阅读:273来源:国知局
一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶及其制备方法与应用与流程

本发明属于肿瘤治疗技术领域,尤其涉及一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶及其制备方法与应用。



背景技术:

目前,纳米酶是近年来中国科学家发现的一类自身蕴含酶学特性的纳米材料。作为一种新型的人工模拟酶,纳米酶具有经济、稳定、易于大批量生产的优势,更重要的是,纳米酶是一个双功能或者多功能的分子,它不仅具有催化活性,还兼有纳米材料特有的物理和化学性质,如磁性、荧光、光热特性等。纳米酶的出现为酶催化反应在疾病诊治中的应用提供了新思路。

基于化学动力学的肿瘤治疗疗法就是利用纳米酶的酶学特性通过芬顿反应产生羟基自由基,从而引起肿瘤细胞蛋白变性、dna断裂、磷脂膜损伤和线粒体破坏等一系列氧化损伤,最终引起癌细胞的凋亡。但是现有的用于肿瘤靶向的复合纳米酶在肿瘤部位的富集效果较差,进行治疗的效果较差。因此,亟需一种新的用于肿瘤靶向的复合纳米酶。

通过上述分析,现有技术存在的问题及缺陷为:现有的用于肿瘤靶向的复合纳米酶在肿瘤部位的富集效果较差,进行治疗的效果较差。



技术实现要素:

针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶及其制备方法与应用。

本发明是这样实现的,一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法,所述用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法包括以下步骤:

步骤一,使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备:按照质量份数依次称取乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶;将称取的乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合并搅拌均匀,得到混合液;将混合液置于超声装置中进行超声分散,得到混合酶液,备用;

步骤二,进行人血清白蛋白的制备:进行健康人静脉血的采集;从采集的血液中提取总rna合成总cdna;以cdna为模板,采用pcr技术扩增人血清白蛋白基因,通过重组工程宿主细胞表达,即可得到人血清白蛋白,备用;其中,所述重组工程宿主细胞为酵母菌、cho细胞、植物、昆虫、细菌或者动物细胞,所述人血清白蛋白通过质粒dna载体表达、病毒载体表达、或转基因技术转移到植物和动物体内表达;

步骤三,使用人血清白蛋白与谷胱甘肽进行还原型人血清白蛋白的制备:将步骤二制备得到的人血清白蛋白经阳离子交换层析得到初级产物,将初级产物经阴离子交换层析,过膜进行除菌,即可得到还原型人血清白蛋白,备用;其中,所述阳离子交换层析的条件为:使用平衡缓冲液以50~200cm/h的流速平衡层析柱,所述平衡缓冲液组分为10~20mmnaac,30~35mmnacl,0.5~1mmedta-2na,还原型谷胱甘肽,ph为5.0;所述阴离子交换层析条件为:使用平衡缓冲液以50~200cm/h的流速平衡层析柱,所述平衡缓冲液的组分为20~50mm磷酸盐,1~5mmedta-2na,还原型谷胱甘肽,电导为2.5~9ms/cm,ph为6.0~8.0;

步骤四,将混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合制备复合纳米酶:将制备的混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合,搅拌均匀得到混合物;在混合物中滴加去离子水,搅拌均匀后对进行20~30min超声分散得到分散液;在氮气气氛下对分散液进行磁力搅拌;对搅拌后的分散液进行超滤离心,收集离心产物得到复合纳米酶,备用;

步骤五,使用复合纳米酶进行用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备:将步骤三制备得到的复合纳米酶置于水浴加热装置中进行水浴加热;加热过程中对复合纳米酶进行磁力搅拌并在搅拌时添加连氮二铵盐造影剂;磁力搅拌结束后继续进行2~3min加热,结束搅拌,得到复合纳米酶液;将复合纳米酶液置于干燥箱内进行低温干燥,即可得到用于肿瘤靶向的复合纳米酶。

进一步,步骤一中,所述超声分散的频率为50~55khz,超声分散的时间为10~15min。

进一步,步骤二中,所述从采集的血液中提取总rna合成总cdna,包括:对采集的血液进行离心,获取血液中的有核细胞,提取总rna,并通过提取的rna合成总cdna。

进一步,所述对采集的血液进行离心的转速为1200~1500r/min,离心温度为4~8℃,离心时间为10~15min。

进一步,所述提取总rna还包括:进行rna检测并鉴定完整性。

进一步,所述通过提取的rna合成总cdna,包括:通过反转录进行cdna获取。

进一步,步骤五中,所述水浴加热的温度为30~35℃。

进一步,步骤五中,所述低温干燥的温度为18~25℃,干燥时间为6~8h。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法制备得到的用于肿瘤靶向的复合纳米酶,所述用于肿瘤靶向的复合纳米酶按照质量份数计,由乳酸氧化酶6~8份、核糖核酸内切酶3~5份、脱氧核糖核酸内切酶3~6份、人血清白蛋白2~4份、谷胱甘肽1~3份、硫酸亚铁铵3~4份、连氮二铵盐造影剂1~2份组成。

本发明的另一目的在于提供一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶在进行肿瘤治疗中的应用。

结合上述的所有技术方案,本发明所具备的优点及积极效果为:本发明提供的用于肿瘤靶向的复合纳米酶,以人血清白蛋白和酶制剂为载体,内部包裹硫酸亚铁铵作为纳米铁粒子,制备的复合纳米酶可以有效的实现肿瘤穿透;同时复合纳米酶内部包裹的硫酸亚铁铵具有载氧功能,可以将氧气输入肿瘤微环境,便于进行肿瘤的治疗。同时,本发明提供的用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法简单,不需要任何高温、复杂的设备或者是苛刻的反应条件,制备的用于肿瘤靶向的复合纳米酶质地均一,进行肿瘤治疗的效果好。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案,下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍,显而易见地,下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法流程图。

图2是本发明实施例提供的使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备流程图。

图3是本发明实施例提供的进行人血清白蛋白的制备以及使用人血清白蛋白与谷胱甘肽进行还原型人血清白蛋白的制备方法流程图。

图4是本发明实施例提供的将混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合制备复合纳米酶的方法流程图。

图5是本发明实施例提供的使用制备的进行用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于肿瘤靶向的复合纳米酶及其制备方法与应用,下面结合附图对本发明作详细的描述。

本发明实施例提供的用于肿瘤靶向的复合纳米酶按照质量份数计,由乳酸氧化酶6~8份、核糖核酸内切酶3~5份、脱氧核糖核酸内切酶3~6份、人血清白蛋白2~4份、谷胱甘肽1~3份、硫酸亚铁铵3~4份、连氮二铵盐造影剂1~2份组成。

如图1所示,本发明实施例提供的用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备方法包括以下步骤:

s101,使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备;

s102,进行人血清白蛋白的制备;

s103,使用人血清白蛋白与谷胱甘肽进行还原型人血清白蛋白的制备;

s104,将混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合制备复合纳米酶;

s105,使用复合纳米酶进行用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备。

如图2所示,本发明实施例提供的步骤s101中,所述使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备,包括:

s201,按照质量份数称取乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶;

s202,将称取的乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合并搅拌均匀,得到混合液;

s203,将混合液置于超声装置中进行超声分散,得到混合酶液。

本发明实施例提供的步骤s203中,所述超声分散的频率为50~55khz,超声分散的时间为10~15min。

如图3所示,本发明实施例提供的步骤s102中,所述进行人血清白蛋白的制备,包括:

s301,进行健康人静脉血的采集;

s302,从采集的血液中提取总rna合成总cdna;

s303,以cdna为模板,采用pcr技术扩增人血清白蛋白基因,通过重组工程宿主细胞表达,即可得到人血清白蛋白。

本发明实施例提供的步骤s301中,所述从采集的血液中提取总rna合成总cdna,包括:对采集的血液进行离心,获取血液中的有核细胞,提取总rna,并通过提取的rna合成总cdna。

本发明实施例提供的对采集的血液进行离心的转速为1200~1500r/min,离心温度为4~8℃,离心时间为10~15min。

本发明实施例提供的提取总rna还包括:进行rna检测并鉴定完整性。

本发明实施例提供的通过提取的rna合成总cdna,包括:通过反转录进行cdna获取。

本发明实施例提供的步骤s303中,所述重组工程宿主细胞为酵母菌、cho细胞、植物、昆虫、细菌或者动物细胞,所述人血清白蛋白通过质粒dna载体表达、病毒载体表达、或转基因技术转移到植物和动物体内表达。

本发明实施例提供的步骤s103中,所述使用人血清白蛋白与谷胱甘肽进行还原型人血清白蛋白的制备,包括:

(1)将制备的混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合,搅拌均匀得到混合物;

(2)在混合物中滴加去离子水,搅拌均匀后对进行20~30min超声分散得到分散液;

(3)在氮气气氛下对分散液进行磁力搅拌;对搅拌后的分散液进行超滤离心,收集离心产物得到复合纳米酶。

如图4所示,本发明实施例提供的骤s104中,所述将混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合制备复合纳米酶,包括:

s401,将制备的混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合,搅拌均匀得到混合物;

s402,在混合物中滴加去离子水,搅拌均匀后对进行20~30min超声分散得到分散液;

s403,在氮气气氛下对分散液进行磁力搅拌;对搅拌后的分散液进行超滤离心,收集离心产物得到复合纳米酶。

如图5所示,本发明实施例提供的骤s105中,所述使用制备的进行用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备,包括:

s501,将制备的复合纳米酶置于水浴加热装置中进行水浴加热;加热过程中对复合纳米美进行磁力搅拌并在搅拌时添加连氮二铵盐造影剂;

s502,磁力搅拌结束后继续进行2~3min加热,结束搅拌,得到复合纳米酶液;

s503,将复合纳米酶液置于干燥箱内进行低温干燥,得到用于肿瘤靶向的复合纳米酶。

本发明实施例提供的步骤s501中,所述水浴加热的温度为30~35℃。

本发明实施例提供的步骤s503中,所述低温干燥的温度为18~25℃,干燥时间为6~8h。

以上所述,仅为本发明较优的具体的实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

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