一种治疗高尿酸血症的中药组合物及制备方法

本发明属于中医药领域，具体涉及一种治疗高尿酸血症的中药组合物及制备方法。

背景技术：

高尿酸血症(hua)通常是指嘌呤代谢异常导致尿酸生成增多和(或)尿酸排泄减少引起血尿酸水平异常升高的一种代谢综合征，最新诊断标准为无论男女在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次血尿酸水平超过420μmol/l。当尿酸饱和时在组织液或血液中可析出尿酸盐结晶，沉积在以肾脏、关节滑膜为主的多种组织中，导致局部的炎症和组织损伤，最终演变成尿酸性肾病或痛风(冯文文，崔岱，杨涛.《中国高尿酸血症与痛风治疗指南(2019)》要点解读.临床内科杂志,2020,37(7):528-531.)。

hua除了与痛风关系密切外，它也是慢性肾病、糖尿病、高血压及代谢综合征等疾病的独立危险因素，是过早死亡的独立预测因子(borghic,agabiti-roseie,johnsonrj,etal.hyperuricaemiaandgoutincardiovascular,metabolicandkidneydisease.eurjintmed,2020.https://doi.org/10.1016/j.ejim.2020.07.006)。因此，治疗hua对控制以上疾病的发展具有重要的意义。

对hua的治疗策略一般是抑制尿酸合成、促进尿酸肾脏排泄和增加尿酸降解三种途径。目前临床上较为常用的药物为黄嘌呤氧化酶抑制剂和尿酸肾脏重摄取转运体抑制剂，前者抑制尿酸合成，代表药物为别嘌醇和非布司他等；后者促进尿酸排泄，代表药物为丙磺舒和苯溴马隆。尽管这些药物的疗效显著，但是存在着严重的不良反应，别嘌醇能引起严重的皮肤损害，潜伏期长，药疹严重(袁华，李静华，封宇飞.114例别嘌醇不良反应文献分析.中国药物应用与监测,2016,13(6):359-362.)，非布司他则存在不可预知的心血管风险进而增加患者的死亡风险(美国fda网站。美国警告非布司他心血管和全因死亡风险.中国医药导刊,2019,21(5):320.)，而苯溴马隆会导致严重的肝毒性(国家药品不良反应监测中心.药品不良反应信息通报-警惕苯溴马隆的肝损害风险.中国药物警戒,2016,13(1):59-60.)。此外hua在病程发展的过程中可以导致肾损伤，一般认为hua水平越高，肾损伤的发生率就越高(cheungpasitpornw,thongprayoonc,harrisonam,etal.admissionhyperuricemiaincreasestheriskofacutekidneyinjuryinhospitalizedpatients.clinkidneyj,2016,9(1):51-56.)，但是临床目前应用的药物非但没有肾保护作用，反而会加剧肾脏损伤程度(别嘌醇等)。

鉴于以上原因，临床上对治疗hua且具有肾保护作用的药物的开发有着较高的需求。因其多成分多靶点、整体调理、副作用较小的特点，中药在hua的治疗方面有着较大的优势。

中国发明专利cn107519270b公开了一种中药及其提取组合物在治疗痛风中的应用，所述中药由如下重量份配比的原料组成：制附子0.5-2份，栀子2-8份，苦苣根2-8份，川楝子1-5份，车前子1-5份，葛根1-6份。但是该处方药味较多，制备工艺复杂，临床适应性不强，且未解决高尿酸致肾脏损伤的问题。

中国发明专利cn105287748b公开了一种治疗高尿酸血症的中药制剂，所述制剂原料包括秦皮5-15份，车前草25-75份，车前子15-45份，金钱草15-45份，海金沙15-45份，桑白皮5-15份。制备方法采用一定浓度的乙醇提取。该发明药味较多，提取工艺需要醇提，不便于临床患者直接抓药煎服，也未解决由痛风带来的肾损伤问题。

中国发明专利cn104173458b公开了一种具有防治高尿酸血症作用的中药组合物及其制备方法，原料药组成按重量份数计为：白凤菜5-15份、女贞子4-10份、鸡血藤3-10份、车前子3-10份。该发明组合物药物毒性低，对肾、肝脏副作用小。但其药效有待进一步提高，且未明确是否可以保护肾脏。

虽然目前临床上在治疗hua方面有几种疗效较为显著的药物，包括非布司他、别嘌醇和苯溴马隆等，但是它们都存在着严重的安全性问题，包括皮肤损害、肝毒性和肾损害等，严重可引起患者死亡。此外hua病程发展过程中引起的肾损伤作用也是一个亟待解决的难题。因此临床上对于开发有一定肾保护作用的抗hua的药物有着较高的需求。本发明拟凭借中药多成分多靶点、整体调理和副作用相对较小的特点开发一种有效治疗hua且具有肾保护作用的中药组合物以及制备方法。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明欲解决的问题是开发一种有效治疗hua且具有肾保护作用的中药组合物，同时提供其制备方法，组合物具有多靶点、整体调理、副作用小的特点。

本发明的一个目的在于提供一种治疗高尿酸血症的中药组合物，所述组合物的原料由如下组分组成：车前子、怀牛膝和桑白皮。

2020版《中国药典》对本发明中三味药的性味归经和功能主治均记载详细。车前子，性寒味甘，归肝、肾、肺和小肠经，有清热利尿、通淋渗湿的功效；牛膝，性平味苦、酸、甘，归肝、肾经，有利尿通淋，补肝肾、逐瘀通经的功效；桑白皮，性寒味甘，归肺经，有利水消肿的功效。

优选地，所述组合物的原料由如下重量份数的组分组成：车前子1-5份、怀牛膝1-5份和桑白皮5-15份。

优选地，所述组合物的原料由如下重量份数的组分组成：车前子3-5份、怀牛膝3-5份和桑白皮6-15份。

优选地，所述组合物的原料由如下重量份数的组分组成：车前子3-5份、怀牛膝3-5份和桑白皮10-15份。

优选地，所述组合物的原料包括如下重量份数的组分组成：车前子3-5份、怀牛膝3-4份和桑白皮10-15份。

优选地，所述车前子为盐炙车前子。

优选地，所述桑白皮为生桑白皮。

优选地，所述桑白皮与怀牛膝的质量比为3-5:1；优选3-4:1。

本发明的另一目的是提供上述中药组合物的制备方法，包括如下步骤：将药材车前子、怀牛膝和桑白皮加水煎煮，过滤，浓缩得浓缩液即得。

优选地，药材煎煮前浸泡20min以上；

优选地，所述煎煮为煎煮1-3次，每次煎煮0.5-2h，所述车前子、怀牛膝和桑白皮药材总质量与水的质量比为1:6-10g/ml。

优选地，所述浓缩液的体积与车前子、怀牛膝和桑白皮药材总质量的比为0.8-3ml/g；优选为2-3:1ml/g；

本发明的再一目的是提供一种上述任意一项的中药组合物在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。

本发明的有益效果：

1、本发明中的中药组合物将怀牛膝与车前子和桑白皮配伍，对高尿酸血症有明显的改善作用，并且在降尿酸的同时具有明显的肾脏保护作用，三味药在治疗高尿酸血症中发挥了良好的协同作用。

2、本发明组合物中三味药的配比经过严格的选择，其对药效的发挥具有比较明显的影响。

附图说明

图1为空白对照组大鼠肾脏组织观察图；

图2为模型对照组大鼠肾脏组织病理学观察图；

图3为实施例1组大鼠肾脏组织病理学观察图；

图4为实施例2组大鼠肾脏组织病理学观察图；

图5为对比例2组大鼠肾脏组织病理学观察图；

图6为阳性组大鼠肾脏组织病理学观察图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明技术方案作进一步说明。

以下实施例所用组合物原料及配比如下表1

表1实施例1-3与对比例1-5原料及配比表

实施例1

本实施例组合物的制备方如下：

将表1实施例1组合物分别按照1：10的体积比加入蒸馏水，浸泡20分钟后进行煎煮，武火烧开，文火煎煮，煎煮2小时后，以文火煎煮药液浓缩得浓缩液，生药与浓缩液的质量体积为1:2g/ml，将煎煮好的药液放入冰箱4℃保存，每日现用现取。

实施例2

本实施例组合物的制备方如下：

将表1实施例2组合物分别按照1：8的体积比加入蒸馏水，浸泡30分钟后进行煎煮，武火烧开，文火煎煮，煎煮半个小时后，倒出煎液，再次加入8倍体积蒸馏水按上述方法再次煎煮，煎煮后合并水煎液以文火煎煮药液浓缩得浓缩液，生药与浓缩液的质量体积为1:2.3g/ml，将煎煮好的药液放入冰箱4℃保存，每日现用现取。

实施例3

本实施例组合物的制备方如下：

将表1实施例3组合物分别按照1：8的体积比加入蒸馏水，浸泡30分钟后进行煎煮，武火烧开，文火煎煮，煎煮半个小时后，倒出煎液，再次加入6倍体积蒸馏水按上述方法再次煎煮，煎煮后合并水煎液以文火煎煮药液浓缩得浓缩液，生药与浓缩液的质量体积为1:2.5g/ml，煎煮好的药液放入冰箱4℃保存，每日现用现取。

对比例1

本对比例与实施例2的区别是怀牛膝与桑白皮的比例调整为5：8，其余与实施例2保持一致。

对比例2

本对比例与实施例2的区别是三味药的份数不同，所取份数不在最佳范围内，其余与实施例2保持一致。

对比例3

本对比例与实施例2的区别是，将怀牛膝去掉，将桑白皮调整为11.5份，将车前子调整为4.5份，其余与实施例2保持一致。

对比例4

本对比例与实施例2的区别是，将怀牛膝用杜仲替代，其余与实施例2保持一致。

对比例5

本对比例与实施例2的区别是将桑白皮用薏苡仁代替，其余与实施例2保持一致。

试验例1组合物对腺嘌呤联合乙胺丁醇诱导的大鼠高尿酸血症的改善作用以及肾脏保护作用

1.1动物分组及给药方式

雄性spf级sd大鼠，体重为200-220g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号为scxk(京)2016-0006。饲养于中国中医科学院中药研究所和平里动物房，实验设施许可证为syxk(京)2019-0003，屏障系统。按照随机数表法随机分组，分别为空白对照组(n)、模型对照组(m)、中药组合物实施例1-3组、对比例1-5组以及西药对照药组。每组8只动物。实施例1-3与对比例1-5组灌胃给药，每天1次，连续给药7天，给药体积为5ml/kg。西药对照药组动物给予20mg/kg别嘌呤醇溶液。n组和m组分别给予与实施例1-3组等量的蒸馏水。

1.2腺嘌呤联合乙胺丁醇诱导大鼠高尿酸血症合并肾脏损伤模型

腺嘌呤购自sigma-aldrich(usa)，wxbd0910v，用0.5％cmc-na配制成浓度为20mg/ml的混悬液，现用现配，给药体积为5ml/kg，给药剂量为100mg/kg。

盐酸乙胺丁醇片(成都锦华药业有限责任公司，批号200901)，用0.5％cmc-na配制成浓度为50mg/ml的混悬液，现用现配，给药体积为5ml/kg，给药剂量为250mg/kg。

从第1天起，除空白对照组外，其余各组灌胃给予造模剂腺嘌呤100mg/kg+乙胺丁醇250mg/kg，两者均每天给予1次，连续给予7天，制备高尿酸血症合并肾脏损伤大鼠模型。n组灌胃给予等量体积的0.5％cmc-na。

1.3给药过程中大鼠的状态及体重趋势变化

在给药过程中，各组均未见动物死亡。各组动物的一般状况均未见明显异常，一般行为、摄食饮水和排尿排便均未见显著异常，且各组动物的体重均未见异常的升高或降低。实施例1-3与对比例1-5各组均未见明显的毒性反应。

1.4中药组合物对大鼠高尿酸血症的降尿酸作用

各组模型动物给药第7天结束后，禁食16小时。经腹主动脉取血，静置后3500rpm离心15分钟，分离收集血清，利用全自动生化仪检测血清中尿酸的含量，结果见表2。

各组模型动物给药3天和给药6天后，均将大鼠放入代谢笼，每笼一只动物，收集每只动物10h内的尿量。结果见表3。将收集得到尿液静置后3500rpm离心10分钟，取上清液，利用全自动生化仪监测尿液中尿酸的含量，结果见表4。

表2中药组合物对大鼠高尿酸血症的降尿酸作用

注：尿酸降低百分率(％)＝(m组尿酸值-实验组尿酸值)/m组尿酸值×100

与n组比较^**p<0.01，与m组比较^#p<0.05；与实施例2比较^ap<0.05。

实验结果：m组造模后，出现显著的高尿酸血症。m组血清中尿酸水平与n组相比显著升高(p<0.01)。给予中药组合物实施例1-3组都对高尿酸血症动物的血液尿酸水平有降低作用，降低百分率分别为40.70％、44.00％、37.25％。治疗后血尿酸水平显著降低有统计学显著意义(p<0.05)；结果提示，本发明中药组合物具有显著的降低血尿酸的作用。而阳性组d组治疗后血尿酸水平与m组比较无统计学显著差异(p＝0.22)，说明d在较短时间内对高尿酸血症的降尿酸作用较弱(26.54％)。

表3中药组合物对大鼠尿量的影响

表4中药组合物对大鼠尿液中尿酸含量的影响

由实验结果表3和4可知，实施例1-3组均无明显利尿作用，尿量和尿液中的尿酸均无显著变化，说明本发明组合物对血清尿酸的降低并非因为促进尿液中尿酸的排泄及增加尿量而产生的，初步判断是通过减少尿酸的形成或促进尿酸的分解来降低血液中尿酸的水平。

1.5本发明中药组合物对高尿酸血症大鼠伴有的肾损伤的改善作用

采用两种方法观察了本发明中药组合物对高尿酸血症大鼠伴有的肾损伤的改善作用：

(1)通过检测尿液中的肾损伤标志物“肾损伤分子-1(kim-1)的含量，如果检测组的kim-1含量较m组降低，说明对肾损伤有改善效果。结果见表5。

表5中药组合物对大鼠高尿酸血症大鼠的肾小管损伤因子1(kim-1)的降低作用

注：与n组比较^***p<0.001，与m组比较^#p<0.05,；与实施例2比较^ap<0.05。

实验结果：与n组相比，m组尿液中的kim-1水平显著升高(p<0.001)，提示高尿酸血症大鼠存在一定的肾损伤。给予实施例2组合物后，该组尿液kim-1较m组的kim-1显著降低(p<0.05)，降低了45.05％。结果提示，中药组合物对高尿酸血症造成的肾损伤具有明显的改善作用，实施例2组组合物作用最优。

(2)通过将各组肾脏组织切片、染色，进行病理学检查，观察组合物组与m组比较肾脏组织细胞损伤的改善效果。

取血后将动物处死，取出肾脏，置于10％甲醛溶液中固定，脱水，用石蜡包埋，切片并进行he(苏木素&伊红)染色，在显微镜下面进行组织病理学观察。结果见图1-6。

实验结果：空白对照组n组的肾小球、肾小管以及肾间质等组织结构基本正常，细胞排列整齐；未见肾小管变性、坏死或肾小管扩张等改变。

模型对照组m组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，但可见肾小管严重扩张、肾小管管壁变薄，肾小管上皮细胞脱落及嗜酸性变性，局部可见炎性细胞浸润等病理改变。

实施例1组的肾小球形态基本正常，与m组相比肾小管扩张现象有所缓解，可见少量的肾小管扩张及管壁变薄的现象，局部可见少量的上皮细胞脱落以及局部管腔内渗出，点灶性炎性细胞浸润等病理改变。

实施例2组肾小球形态正常，与m组相比肾小管扩张现象明显减轻，偶见肾小管上皮细胞脱落及渗出。

对比例2组肾小球形态正常，与模型组相比肾小管扩张略有缓解，但管壁变薄现象较为明显，偶见炎症细胞浸润。

西药对照药d组肾小球形态较为完整，偶见萎缩现象，但与m组相比其肾小管扩张现象并未有明显的改善，肾小管管壁变薄，上皮细胞脱落及嗜酸变性，可见炎性细胞浸润。

综上，结合肾小管损伤因子kim-1和病理学结果分析，证明本发明中药组合物对高尿酸血症合并的肾脏损伤具有明显的保护作用，其中实施例2组的效果最优。

上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。