本发明涉及中药提取及应用技术领域，尤其涉及一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物及其制备方法。
背景技术：
幽门螺杆菌是一种呈螺旋形的、革兰染色阴性的微需氧细菌。它是慢性胃炎的主要致病菌，同时也与消化性溃疡、胃黏膜相关性淋巴瘤以及胃癌的发生密切相关，被列为一级致癌因子。该菌致病特性在于它可以抵抗胃酸的作用，在胃液中生存并定植于胃粘膜的隐窝。其主要致病物质有多种侵袭因子和毒素，包括鞭毛、菌毛以及细胞毒素相关蛋白a(caga)、空泡毒素a(vaca)等。
临床实践针对幽门螺杆菌感染多采用质子泵抑制剂加两种抗生素的三联疗法，也有根治效果更好的质子泵抑制剂加铋剂加两种抗生素的四联疗法。但随着人们对抗生素的长时间、大剂量使用，细菌的耐药性也逐渐凸显出来。
与化学药物相比，中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，具有作用靶点多、无细菌耐药性等优势；但是针对幽门螺杆菌感染的中药研究却相对较少。
综上可知，现有技术在实际使用上显然存在不便与缺陷，所以有必要加以改进。
技术实现要素：
针对上述的缺陷，本发明的目的在于提供一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物及其制备方法，其能够代替抗生素，治疗和/或预防因幽门螺旋杆菌导致的各种胃部疾病，解决了细菌对抗生素的耐药性的问题，能够广泛应用到临床中。
为了实现上述目的，本发明提供一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物，包括如下重量份数的原料：
沙棘0.1～0.2份、金银花0.08～0.12份、酸角0.1～0.2份、槐米0.08～0.12份、茯苓0.1～0.2份、肉桂0.05～0.1份、陈皮0.08～0.12份、砂仁0.05～0.15份、广藿香0.08～0.12份、佛手0.08～0.12份。
进一步的，所述中药复方提取物的药液使用浓度大于50mg/ml。
进一步的，所述中药复方提取物制备的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、丸剂、片剂、水蜜丸、口服液。
本发明还提供一种制备抗幽门螺旋杆菌中药复方提取物的方法，包括如下步骤：
步骤一
将沙棘、金银花、酸角、槐米、茯苓混合后，加8～12倍重量的去离子水，浸泡30～60min后，煎煮60～90min，过滤，分别得到一次滤液和一次滤渣；
将所述一次滤渣加6～8倍重量的去离子水，煎煮30～60min后，过滤，得到二次滤液和二次滤渣；
合并一次滤液和二次滤液，减压浓缩、干燥，即得中间产物一；
步骤二
将肉桂粉碎过40目筛，加8～12倍重量的去离子水，连接重油挥发油提取装置，浸泡30～60min，提取90～120min，收集肉桂挥发油；
取β-环糊精，加入8～12倍重量的去离子水，加热溶解，降至40～70℃，恒温下搅拌，得到β-环糊精溶液；
将所述肉桂挥发油溶于1～2倍体积的无水乙醇，得到一次混合溶液；向所述一次混合溶液中加入所述β-环糊精溶液，保持30～60min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥4～12h，得到中间产物二；
步骤三
将陈皮、砂仁、广藿香、佛手混合粉碎过40目筛，加8～12倍重量的去离子水，连接轻油挥发油提取装置，浸泡30～60min，提取90～120min，分别得到混合挥发油和水煎液；将所述水煎液过滤，得到三次滤液和三次滤渣；
将所述三次滤渣加6～10倍重量的去离子水，煎煮20～40min后，过滤，得到四次滤液和四次滤渣；
合并所述三次滤液和四次滤液，减压浓缩、干燥，得浸膏粉；
将所述混合挥发油溶于1～2倍体积的无水乙醇，得到二次混合溶液；向所述二次混合溶液中加入步骤二中制备的β-环糊精溶液，保持30～60min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥4～12h，得到挥发油包合物；
将所述浸膏粉和挥发油包合物混合，然后粉碎，得到中间产物三；
步骤四
将所述中间产物一、中间产物二和中间产物三进行充分混合，得到中药复方提取物。
进一步的，所述步骤二中，所述肉桂挥发油与所述β-环糊精的添加量为：1ml肉桂挥发油用6～10gβ-环糊精。
进一步的，所述步骤三中，所述混合挥发油与所述β-环糊精的添加量为：1ml混合发油用5～8gβ-环糊精。
本发明的目的在于提供一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物及其制备方法，通过药物性能测试，进行多种中药组份的配比，选择出合理的中药复方，并对中药复方中各种组份的有效成分进行提取，得到中药复方提取物；使配伍后的中药复方提取物，由于其作用靶点多、无细菌耐药性，在各种组份所具有的原始药用功能的基础之上，又具有抗幽门螺旋杆菌的新的功效和能力；使中药复方提取物能够代替抗生素，治疗和/或预防因幽门螺旋杆菌导致的各种胃部疾病，解决了细菌对抗生素的耐药性的问题，能够广泛应用到临床中。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物，包括如下重量份数的原料：沙棘0.1～0.2份、金银花0.08～0.12份、酸角0.1～0.2份、槐米0.08～0.12份、茯苓0.1～0.2份、肉桂0.05～0.1份、陈皮0.08～0.12份、砂仁0.05～0.15份、广藿香0.08～0.12份、佛手0.08～0.12份。
沙棘果和油具有很高的药用价值，可降低胆固醇，治愈心绞痛等作用，还有防治冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用；有祛痰、止咳、平喘和治疗慢性气管炎的作用；能治疗胃和十二指肠溃疡以及消化不良等，对慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、结肠炎等病症疗效显著。
金银花，清热解毒，消炎退肿。主治外感风热或温病发热，中暑，热毒血痢，痈肿疔疮，喉痹，多种感染性疾病。
酸角具有清热解暑，消食化积的功能。
槐米具有抗炎、抗病毒的作用，其还能抑制醛糖还原酶，有利于糖尿病型白内障的治疗，此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性、降血脂，扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。
茯苓具有宁心安神，败毒抗癌的作用，同时还具有增强免疫力、抗肿瘤以及镇静、降血糖等的作用；可松弛消化道平滑肌，抑制胃酸分泌，防止肝细胞坏死，抗菌。
肉桂，常用治肾阳不足，命门火衰的阳痿宫冷，腰膝冷痛，夜尿频多，滑精遗尿等，外敷可治疗胃痛、胃肠胀气绞痛等。内服可作健胃和驱风剂。也有明显的杀真菌作用。
陈皮用于胸腹胀满、湿阻中焦、脘腹痞胀、便溏泄泻，以及痰多咳嗽，脾虚饮食减少、消化不良、恶心呕吐。
砂仁，主治脾胃气滞，宿食不消，腹痛痞胀，噎膈呕吐，寒泻冷痢。
广藿香酮体久对白色含珠菌、新型隐球菌、黑根霉等真菌有明显的抑制作用，对甲型溶血性链球菌等细菌也有一定的抑制作用。广藿香叶鲜汁对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌及枯草杆菌的生长也有定的抑制作用。
佛手有理气化痰、止呕消胀、舒肝健脾、和胃更多种药用功能。对老年人的气管炎、哮喘病有明显的缓解作用；对一般人的消化不良、胸腹胀闷，有更为显著的疗效。
本发明还提供了一种抗幽门螺旋杆菌的中药复方提取物的制备方法，包括如下步骤：
步骤一
将沙棘、金银花、酸角、槐米、茯苓按照比例混合后，加8～12倍重量的去离子水，浸泡30～60min后，煎煮60～90min，过滤，分别得到一次滤液和一次滤渣。
将上述一次滤渣加6～8倍重量的去离子水，煎煮30～60min后，过滤，得到二次滤液和二次滤渣；合并一次滤液和二次滤液，减压浓缩、干燥，即得中间产物一。
步骤二
将肉桂粉碎过40目筛，加8～12倍重量的去离子水，连接重油挥发油提取装置(挥发油密度>1.0)，浸泡30～60min，提取90～120min，收集肉桂挥发油。
取β-环糊精，加入8～12倍重量的去离子水，加热使之溶解，降至40～70℃，在恒温下搅拌，搅拌速度为10～30rpm，得到β-环糊精溶液。
将上述肉桂挥发油溶于1～2倍体积的无水乙醇，得到一次混合溶液；向上述一次混合溶液中缓慢加入上述β-环糊精溶液，保持30～60min，冷却至室温后，4℃冷藏静置12～48h，过滤，40℃低温干燥4～12h，得到中间产物二。
本发明中，肉桂挥发油与β-环糊精的添加量为1份肉桂挥发油(ml)用6～10份β-环糊精(g)。
步骤三
将陈皮、砂仁、广藿香、佛手混合粉碎过40目筛，加8～12倍重量的去离子水，连接轻油挥发油提取装置(挥发油密度<1.0)，浸泡30～60min，提取90～120min，分别得到混合挥发油和水煎液；将水煎液过滤，得到三次滤液和三次滤渣。
将上述三次滤渣加6～10倍重量的去离子水，煎煮20～40min后，过滤，得到四次滤液和四次滤渣。合并三次滤液和四次滤液，减压浓缩、干燥，得浸膏粉。
将上述混合挥发油溶于1～2倍体积的无水乙醇，得到二次混合溶液；向上述二次混合溶液中缓缓加入上述步骤二中制备的β-环糊精溶液，保持30～60min，冷却至室温后，4℃冷藏静置12～48h，过滤，40℃低温干燥4～12h，得到挥发油包合物。
本发明中，混合挥发油与β-环糊精的添加量为1份混合发油(ml)用5～8份β-环糊精(g)。
将上述浸膏粉和挥发油包合物混合，然后粉碎，得到中间产物三。
步骤四
将中间产物一、中间产物二和中间产物三进行充分混合，得到中药复方提取物。
本发明的中药复方提取物可根据实际需求和服用方式，将中药复方提取物进一步制备成不同的剂型，如颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、丸剂、片剂、水蜜丸、口服液等，为了得到这些剂型，本领域技术人员可将所述中药复方提取物与药学领域中的药用辅料进行常规加工，药用辅料可为赋形剂、甜味剂等，这些都是本领域中的常规技术手段，在此不再进行详细描述。
根据上述制备方法，本发明设置如下若干实施例，对中药复方提取物进行制备。
实施例1
中药复方提取物，包括如下重量份数的原料：沙棘0.12份、金银花0.09份、酸角0.12份、槐米0.10份、茯苓0.14份、肉桂0.08份、陈皮0.10份、砂仁0.06份、广藿香0.12份、佛手0.08份。
制备例1(制备实施例1中的中药复方提取物)
包括如下步骤：
步骤一
将沙棘、金银花、酸角、槐米、茯苓混合后，加8倍重量的去离子水，浸泡35min后，煎煮68min，过滤，分别得到一次滤液和一次滤渣；
将所述一次滤渣加6.2倍重量的去离子水，煎煮32min后，过滤，得到二次滤液和二次滤渣；
合并一次滤液和二次滤液，减压浓缩、干燥，即得中间产物一；
步骤二
将肉桂粉碎过40目筛，加8倍重量的去离子水，连接重油挥发油提取装置，浸泡36min，提取98min，收集肉桂挥发油；
取β-环糊精，加入8倍重量的去离子水，加热溶解，降至49℃，恒温下搅拌，得到β-环糊精溶液；
将所述肉桂挥发油溶于1倍体积的无水乙醇，得到一次混合溶液；向所述一次混合溶液中加入所述β-环糊精溶液，保持36min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥5h，得到中间产物二；
步骤三
将陈皮、砂仁、广藿香、佛手混合粉碎过40目筛，加8倍重量的去离子水，连接轻油挥发油提取装置，浸泡34min，提取97min，分别得到混合挥发油和水煎液；将所述水煎液过滤，得到三次滤液和三次滤渣；
将所述三次滤渣加6倍重量的去离子水，煎煮23min后，过滤，得到四次滤液和四次滤渣；
合并所述三次滤液和四次滤液，减压浓缩、干燥，得浸膏粉；
将所述混合挥发油溶于1倍体积的无水乙醇，得到二次混合溶液；向所述二次混合溶液中加入步骤二中制备的β-环糊精溶液，保持38min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥5h，得到挥发油包合物；
将所述浸膏粉和挥发油包合物混合，然后粉碎，得到中间产物三；
步骤四
将所述中间产物一、中间产物二和中间产物三进行充分混合，得到中药复方提取物。
实施例2
中药复方提取物，包括如下重量份数的原料：沙棘0.1份、金银花0.10份、酸角0.16份、槐米0.10份、茯苓0.15份、肉桂0.07份、陈皮0.10份、砂仁0.11份、广藿香0.09份、佛手0.11份。
制备例2(制备实施例2中的中药复方提取物)
包括如下步骤：
步骤一
将沙棘、金银花、酸角、槐米、茯苓混合后，加10倍重量的去离子水，浸泡45min后，煎煮72min，过滤，分别得到一次滤液和一次滤渣；
将所述一次滤渣加7倍重量的去离子水，煎煮49min后，过滤，得到二次滤液和二次滤渣；
合并一次滤液和二次滤液，减压浓缩、干燥，即得中间产物一；
步骤二
将肉桂粉碎过40目筛，加10倍重量的去离子水，连接重油挥发油提取装置，浸泡47min，提取103min，收集肉桂挥发油；
取β-环糊精，加入10倍重量的去离子水，加热溶解，降65℃，恒温下搅拌，得到β-环糊精溶液；
将所述肉桂挥发油溶于2倍体积的无水乙醇，得到一次混合溶液；向所述一次混合溶液中加入所述β-环糊精溶液，保持40min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥8h，得到中间产物二；
步骤三
将陈皮、砂仁、广藿香、佛手混合粉碎过40目筛，加10倍重量的去离子水，连接轻油挥发油提取装置，浸泡47min，提取108min，分别得到混合挥发油和水煎液；将所述水煎液过滤，得到三次滤液和三次滤渣；
将所述三次滤渣加8倍重量的去离子水，煎煮32min后，过滤，得到四次滤液和四次滤渣；
合并所述三次滤液和四次滤液，减压浓缩、干燥，得浸膏粉；
将所述混合挥发油溶于1.5倍体积的无水乙醇，得到二次混合溶液；向所述二次混合溶液中加入步骤二中制备的β-环糊精溶液，保持46min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥10h，得到挥发油包合物；
将所述浸膏粉和挥发油包合物混合，然后粉碎，得到中间产物三；
步骤四
将所述中间产物一、中间产物二和中间产物三进行充分混合，得到中药复方提取物。
实施例3
中药复方提取物，包括如下重量份数的原料：沙棘0.18份、金银花0.12份、酸角0.17份、槐米0.12份、茯苓0.18份、肉桂0.09份、陈皮0.11份、砂仁0.15份、广藿香0.12份、佛手0.10份。
制备例3(制备实施例3中的中药复方提取物)
包括如下步骤：
步骤一
将沙棘、金银花、酸角、槐米、茯苓混合后，加12倍重量的去离子水，浸泡56min后，煎煮83min，过滤，分别得到一次滤液和一次滤渣；
将所述一次滤渣加8倍重量的去离子水，煎煮60min后，过滤，得到二次滤液和二次滤渣；
合并一次滤液和二次滤液，减压浓缩、干燥，即得中间产物一；
步骤二
将肉桂粉碎过40目筛，加11倍重量的去离子水，连接重油挥发油提取装置，浸泡55min，提取118min，收集肉桂挥发油；
取β-环糊精，加入12倍重量的去离子水，加热溶解，降至66℃，恒温下搅拌，得到β-环糊精溶液；
将所述肉桂挥发油溶于2倍体积的无水乙醇，得到一次混合溶液；向所述一次混合溶液中加入所述β-环糊精溶液，保持57min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥12h，得到中间产物二；
步骤三
将陈皮、砂仁、广藿香、佛手混合粉碎过40目筛，加12倍重量的去离子水，连接轻油挥发油提取装置，浸泡60min，提取117min，分别得到混合挥发油和水煎液；将所述水煎液过滤，得到三次滤液和三次滤渣；
将所述三次滤渣加10倍重量的去离子水，煎煮38min后，过滤，得到四次滤液和四次滤渣；
合并所述三次滤液和四次滤液，减压浓缩、干燥，得浸膏粉；
将所述混合挥发油溶于2倍体积的无水乙醇，得到二次混合溶液；向所述二次混合溶液中加入步骤二中制备的β-环糊精溶液，保持60min，冷却至室温后，过滤，40℃低温干燥11h，得到挥发油包合物；
将所述浸膏粉和挥发油包合物混合，然后粉碎，得到中间产物三；
步骤四
将所述中间产物一、中间产物二和中间产物三进行充分混合，得到中药复方提取物。
当然，为了获得中药复方提取物的最佳配比，本发明进行了大量的配比实验，其他实验数据本发明不再列出，仅列出上述三个较好的实施例。
为了验证本发明中药复方提取物的性能，本发明针对上述三个实施例中制得的中药复方提取物进行药物性能测试。另外，为了对比验证中药复方提取物的性能，还设置对比例。药物性能测试中所用菌株为幽门螺杆菌(hp)atcc43504标准菌株；所用培养基为hp选择性固体培养基。
对比例1
其他药物性能测试条件均相同，仅将中药复方提取物改为青霉素钠药液。
对比例2
其他药物性能测试条件均相同，仅将中药复方提取物改为盐酸左氧氟沙星药液。
对比例3
其他药物性能测试条件均相同，仅将中药复方提取物改为无菌生理盐水。
hp选择性固体培养基采用哥伦比亚血琼脂基础配制，配制方法为：
称取一定量的琼脂粉，加入去离子水，加热搅拌至溶解，用nahco3调节溶液ph至7.2～7.6之间，得到一次混合溶液。
将一次混合溶液倒入洁净三角瓶中，115～125℃高压灭菌10～20min。待一次混合溶液冷却至50～60℃取出，在无菌条件下，向一次混合溶液中加入脱纤维羊血和幽门螺杆菌专用抗生素添加剂，混合均匀，得到二次混合溶液。
将二次混合溶液倒入无菌培养皿中，凝固后置于超净工作台中紫外灯照射15min，用保鲜膜包好放入冰箱4℃保存。
hp液体培养基采用布氏肉汤同法配制，本实验为便于观察，液体培养基采用新生牛血清代替脱纤维羊血，配制好的液体培养基放于冰箱4℃保存，使用时再倒入平皿即可。
中药复方提取物的抗幽门螺杆菌效果研究方法包括如下步骤：
s1接种与培养
将在-80℃超低温冰箱中冻存的幽门螺杆菌菌种保存管取出，立即投入37℃水中，使其迅速融化。
在超净台内吸取200μl菌液，滴到配制好的hp固体培养基表面，涂布均匀，使菌液铺满培养皿。
将已接种的固体培养基的培养皿倒置放入灭菌的真空干燥器中；将干燥器放入35～39℃恒温培养箱中，对菌种进行微需氧培养；隔3d打开干燥器观察菌落生长情况，采用触酶试验、革兰染色法进行鉴定。
真空干燥器中进行耗氧处理，耗氧方法为：在真空干燥器上下各放短蜡烛，以保证蜡烛燃烧能够充分消耗缸内氧气，底部放一灭菌的蘸水棉球以保持湿度。真空干燥器的器口一周涂抹凡士林进行密封。
s2转种
取灭菌好的hp液体培养基倒入培养皿中，从固体培养基表面刮取幽门螺杆菌菌株，将幽门螺杆菌菌株接种到hp液体培养基中；将hp液体培养基的培养皿放置到真空干燥器中，将干燥器放入35～39℃恒温培养箱中，对菌种进行微需氧培养。
s3药液的配制
本发明得到的中药复方提取物，用生理盐水配制成浓度为50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml的药液，超声溶解5min。在无菌条件下过滤除菌，分装备用。盐酸左氧氟沙星、青霉素钠用生理盐水稀释至10μg/ml。
s4琼脂打孔法体外抑菌试验
幽门螺杆菌以固体培养基接种培养3～5d，刮取菌株转移至液体培养基，37℃培养箱培养3d。
取配制好的固体培养基，放37℃烘箱烘干4h，有助于药液的扩散。然后用灭菌打孔器在培养皿上打4个孔，间距为20～30mm，孔内的琼脂用无菌针头挑出。
向打孔的培养基上分别加入上述三个实施例中的中药复方提取物药液和对比例1、对比例2、对比例3中的药液。
将加完药液的培养皿放置于冰箱2～5℃保存4h，使药液充分扩散。
将以液体培养基培养3d的幽门螺杆菌菌液以比浊法测定菌液浓度，用生理盐水调节幽门螺杆菌菌液浓度为106cfu/ml。
向加三个实施例的中药复方提取物药液、三个对比例的药液且扩散4h的培养皿中，分别滴加幽门螺杆菌菌液，用灭菌棉签涂布均匀。将涂好菌液的培养皿37℃培养3d，待培养基表面菌落生长至加药孔周围出现抑菌圈，用游标卡尺测量抑菌圈的直径。抑菌圈直径的统计结果见表1。
表1药液对幽门螺杆菌的抑菌结果(抑菌圈直径：mm)
说明：抑菌圈直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。抑菌圈直径大于7mm者，判为有抑菌作用。大于7mm小于10mm判为钝敏；大于10mm小于20mm判为中敏；大于20mm为高敏。3次重复试验均有抑菌作用结果者，判定为合格。
由上述实验可知，本发明得到的中药复方提取物具有良好的抗幽门螺旋杆菌能力，当中药复方提取物的浓度达到50mg/ml时，其对幽门螺旋杆菌的抑菌能力能够达到青霉素钠的水平，因此，本发明的中药复方提取物的药液浓度大于50mg/ml时，其抗幽门螺旋杆菌能力较好。
本发明得到的中药复方提取物可以用来治疗和/或预防因幽门螺旋杆菌导致的各种胃部疾病，在临床上具有广阔的研究价值和应用前景。
综上所述，本发明通过药物性能测试，进行多种中药组份的配比，选择出合理的中药复方，并对中药复方中各种组份的有效成分进行提取，得到中药复方提取物；使配伍后的中药复方提取物，由于其作用靶点多、无细菌耐药性，在各种组份所具有的原始药用功能的基础之上，又具有抗幽门螺旋杆菌的新的功效和能力；使中药复方提取物能够代替抗生素，治疗和/或预防因幽门螺旋杆菌导致的各种胃部疾病，解决了细菌对抗生素的耐药性的问题，能够广泛应用到临床中。
当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员当可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。