改善表皮衰老的化妆品组合及应用的制作方法

本发明涉及日用化工领域，尤其涉及一种抗衰老的化妆品及其制备方法和应用。

背景技术：

皮肤由表皮层，真皮层和皮下脂肪组织组成。表皮层位于真皮层上方，更直接与外部环境和化妆品接触。表皮层衰老已引起皮肤学领域越来越多的重视。表皮层衰老的重要特征包括(1)角质细胞分裂能力变差，活表皮层厚度减少，和(2)屏障修复功能变差。类视黄醇除了能改善真皮层衰老，还具有改善表皮层衰老的效果(如增厚活表皮层)。更重要的是，类视黄醇前6个月的抗老效果主要源自其对表皮层老化的改善，这契合了消费者希望快速改善问题的心态。然而，类视黄醇虽然功效优异，但是其非常不稳定，在配方中降解很快，保存难度大。

因此，本领域迫切需要提供一种新的可改善表皮层皮肤衰老的产品。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种改善表皮层皮肤衰老的产品和方法。

在本发明的第一方面，提供一种用于改善表皮衰老的组合物，所述组合物包括0.01-2.5重量份l-乳酸。

在另一实施方式中，所述组合物中还包括0.01-1.0重量份l-岩藻糖或0.1-5.0重量份水解大米蛋白。

在另一实施方式中，所述组合物中l-乳酸与l-岩藻糖的重量比为1:0.1-5。

在另一实施方式中，所述组合物中l-乳酸与水解大米蛋白的重量比为1:0.5-10。

在另一实施方式中，所述的组合物由l-乳酸和l-岩藻糖组成；或所述的组合物由l-乳酸和水解大米蛋白组成。

在本发明的第二方面，提供一种皮肤用产品，所述产品含有如上所述的本发明提供的组合物以及化妆品学上可接受的载体。

在另一实施方式中，以所述产品的总重量计，其中含有0.5-3wt％的如上所述的本发明提供的包括l-乳酸与l-岩藻糖的组合物；或

以所述产品的总重量计，其中含有1-5wt％的如上所述的本发明提供的包括l-乳酸与水解大米蛋白的组合物。

在另一实施方式中，所述产品形式选自溶液、凝胶、霜剂、搽剂、微乳液喷雾剂、悬浮液或乳剂。

在本发明的第三方面，提供一种如上所述的本发明提供的皮肤用产品的制备方法，所述方法包括步骤：将如上所述的本发明提供的组合物和化妆品学上可接受的载体混合，得到如上所述的本发明提供的皮肤用产品。

在本发明的第四方面，提供一种如上所述的本发明提供的组合物的用途，所述组合物用作化妆品功能成分；优选地，所述功能包括抗表皮衰老。

在本发明的第五方面，提供一种抗皮肤衰老的方法，包括使用有效量的如上所述的本发明提供的组合物。

据此，本发明提供了一种新的可改善表皮层皮肤衰老的产品。

附图说明

图1显示试验实施例1中的组合物促进角质细胞中pcna(增殖细胞核抗原，proliferatingcellnuclearantigen)表达的效果。

图2显示试验实施例2中的组合物促进角质细胞中pcna表达的效果。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现将l-乳酸分别与l-岩藻糖及水解大米蛋白合用可以有效改善表皮层的衰老状况。在此基础上，完成了本发明。

如本发明所用，“l-乳酸”是一种左旋结构的小分子α-羟基酸。结构如下式ⅰ所示：

如本发明所用，“l-岩藻糖”是一种6-脱氧-半乳糖。结构如下式ⅱ所示：

如本发明所用，“水解大米蛋白”是指一种通过酶切工艺获得的大米二肽和/或三肽(＞4％)的物质。在本发明的一种实施方式中，使用来自silab公司的大米寡肽作为水解大米蛋白。

在本文中，“表皮”或“表皮层”可以互换使用，都是指位于皮肤最外层的角化复层鳞状上皮，由外胚层分化而来，皮肤附属器借此发生。表皮包括角质形成细胞、黑素细胞、朗格汉斯细胞及梅克尔细胞。

在本文中，“改善”一词包括促进或帮助表皮的新陈代谢，例如促进和帮助角质形成细胞的分裂以形成新的角质形成细胞。在本发明的一种实施方式中，是指促进角质形成细胞中pcna表达。

在本文中，“角质形成细胞”或“角质细胞”可以互换使用，都是指表皮的主要构成细胞，数量占表皮细胞的80％以上，在分化过程中可产生角蛋白。

本文中，“更新”是指表皮层新的角质细胞分裂，上移，使得老废角质细胞脱落的过程。

“有效量(aneffectiveamount)”一词意将对于改善表皮衰老目的，此一用量在经过适当的使用期间后，能够达成促进和帮助角质形成细胞的分裂以形成新的角质形成细胞的作用。

“组合物(composition)”是指当施用于一个体(一般指人)时，能够透过皮肤而诱发所亟求的改善表皮衰老作用的一种组合物。

如本文所用，术语“化妆品学上可接受的载体”指使化妆品或个人洗护产品可施用的载体，包括各种赋形剂和稀释剂，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在化妆品卫生规范2015版中可找到关于化妆品学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中这类载体可包括保湿剂、乳化剂、增稠剂、螯合剂、润肤剂等。例如但不限于，水、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、丁二醇、泛醇、甘草酸二钾、精氨酸、甘油、甜菜碱、透明质酸钠、丙二醇、甘油硬脂酸酯/peg-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、黄原胶、羟乙基纤维素、卡波姆、edta二钠、异构十六烷、棕榈酸异辛酯、十六十八醇、鲸蜡硬脂醇、聚二甲基硅氧烷、柠檬酸或其盐、山嵛醇、山嵛醇聚醚、鲸蜡醇聚醚、季戊四醇四(乙基己酸)酯、角鲨烷、鲸蜡醇乙基己酸酯等。

“施用”一词在此是指直接施用所述的组合物，而可在施用个体皮肤上形成该组合物的一相当用量者。

本文中使用“个体”或“个人”等词，是指可接受所述组合物和/或方法用于皮肤上的人。

如本发明所用，“室温”是指15-45℃，优选为20-35℃。

本发明提供一组合物，其中含有0.01-2.5重量份l-乳酸，例如可以是0.02-1.0重量份、0.03-0.05重量份、0.1-1.5重量份、0.3-0.5重量份、0.05-2.0重量份等。

本发明提供的组合物中除了含有0.01-2.5重量份l-乳酸，还需含有0.01-1.0重量份l-岩藻糖，例如所含有的l-岩藻糖是0.07-0.5重量份、0.1-0.3重量份、0.2-0.8重量份、0.05-0.14重量份等。

在本发明的一种实施方式中，以组合物的总重量计，其中含有的l-乳酸和l-岩藻糖的重量百分比为0.1-100wt％。

在本发明的一种实施方式中，以组合物的总重量计，其中含有的l-乳酸和l-岩藻糖的重量百分比为0.1-3.0wt％，例如但不限于，0.13-1.3wt％、0.15-2.5wt％、0.8-2.3wt％、0.7-2.0wt％等。

本发明提供的组合物中l-乳酸与l-岩藻糖的重量比为1:0.1-5，例如但不限于，1:0.3-1.6、1:0.4-3.0、1:0.6-1.0、1:1.1-1.7、1:2-4等。

在本发明的一种实施方式中，本发明提供的组合物由l-乳酸和l-岩藻糖构成。

本发明提供的组合物中除了含有0.01-2.5重量份l-乳酸，还需含有0.1-5.0重量份水解大米蛋白，例如所含有的水解大米蛋白是0.3-1.0重量份、0.2-3.0重量份、0.5-4.0重量份、2.0-3.5重量份等。

在本发明的一种实施方式中，以组合物的总重量计，其中含有的l-乳酸和水解大米蛋白的重量百分比为0.1-100wt％。

在本发明的一种实施方式中，以组合物的总重量计，其中含有的l-乳酸和水解大米蛋白的重量百分比为0.1-5.0wt％，例如但不限于，0.2-1.5wt％、0.25-3.5wt％、0.23-1.0wt％等。

本发明提供的组合物中l-乳酸与水解大米蛋白的重量比为1:0.5-10，例如但不限于，1:0.7-1.0、1:1.3-7.0、1:1.0-6.0、1:2.0-8.0等。

在本发明的一种实施方式中，本发明提供的组合物由l-乳酸和水解大米蛋白构成。

一般通过将l-乳酸与l-岩藻糖或与水解大米蛋白混合以获得本发明提供的组合物。

进一步地，可以将本发明提供的组合物与化妆品学上可接受的载体混合，得到各种可施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品，包括但不限于，隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜、乳液、精华液、化妆水、啫喱等。

在本发明提供的化妆品或个人洗护产品的总重量计，其中含有0.5-3.0wt％的l-乳酸和l-岩藻糖，例如但不限于，0.7-1.3wt％、0.8-2.0wt％等。

在本发明提供的化妆品或个人洗护产品的总重量计，其中含有1-5wt％的l-乳酸和水解大米蛋白，例如但不限于，1.2-3.5wt％、1.5-4.5wt％等。

在本发明的一些实施例中，将本发明提供的组合物与可用于形成水相的化妆品学上可接受的载体混合得到所述化妆品或个人洗护产品。所述可用于形成水相的化妆品学上可接受的载体包括但不限于，甘油、丁二醇、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、丙二醇、泛醇、甘草酸二钾、精氨酸、卡波姆、edta2na、透明质酸钠、黄原胶、甜菜碱、羟乙基纤维素、柠檬酸或其盐、和水中的一种或两种以上。

在本发明的一种实施方式中，是将本发明提供的组合物与水混合形成水相后，再与油相的化妆品学上可接受的载体混合、乳化得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在乳化后降温至室温加入防腐剂、香精等形成所述化妆品或个人洗护产品。

在本发明的另一种实施方式中，是在将油相的化妆品学上可接受的载体和水相的化妆品学上可接受的载体混合、乳化后，加入本发明提供的组合物而得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在乳化后降温至室温，加入本发明提供的组合物形成所述化妆品或个人洗护产品。

在本发明的另一种实施方式中，也可以在水相的化妆品学上可接受的载体均质化后，加入本发明提供的组合物而得到所述化妆品或个人洗护产品。较佳地，可以在均质化后降温至室温，加入本发明提供的组合物形成所述化妆品或个人洗护产品。

在本发明的一些实施例中，用于形成油相的化妆品学上可接受的载体包括但不限于，甘油硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯/peg-100硬脂酸酯复合物、异构十六烷、棕榈酸异辛酯、棕榈酸乙基己酯、鲸蜡硬脂醇、山嵛醇、十六十八醇、山嵛醇聚醚、鲸蜡醇聚醚、聚二甲基硅氧烷、季戊四醇四(乙基己酸)酯、角鲨烷、鲸蜡醇乙基己酸酯矿脂、乳木果油、角鲨烷、卵磷脂中的一种或两种以上。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。

除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。

为使本领域技术人员可了解本发明的特点及效果，以下谨就说明书及权利要求书中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，均为本领域技术人员对于本发明所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。

本文描述和公开的理论或机制，无论是对或错，均不应以任何方式限制本发明的范围，即本发明内容可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。

在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征，如数值、数量、含量与浓度仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值(包括整数与分数)。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，只要这些特征的组合不存在矛盾，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：本发明提供的组合物可有效促进角质细胞分裂。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例中所有百分比都为wt％

试验实施例1

l-乳酸与l-岩藻糖协同促进角质细胞分裂更新

材料

测试系统：

p4代角质形成细胞(人原代皮肤细胞，批号：ep20200519，ep20200708)，由广东博溪生物科技有限公司生产提供。

主要试剂：

pbs(索莱宝)、mtt(sigma)、dmso(sigma)、kc2500(广东博溪生物)、rnaisoplus(takara)、氯仿(国药集团)、无水乙醇(国药集团)、depc水(beyotime)、反转录试剂盒(takara)、荧光染料(takara)。

主要设备：

co2培养箱(thermo，150i)、超净工作台(苏州安泰，sw-cj-1f)、倒置显微镜(olympus，ckx41)、酶标仪(biotek，epoch)、高速冷冻离心机(长沙湘仪，h1850r)、普通pcr仪(bio-rad，tc-xp-g)、实时荧光定量pcr仪(bio-rad，cfx96)

l-乳酸购自corbion

l-岩藻糖购自jenneweinbiotechnologiegmbh

方法

细胞接种：

按2.5e5个/孔的接种密度接种角质形成细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中孵育过夜。

准备工作液：

控制组：角质细胞在正常状态下，即为接种有细胞的培养基(培养基购自测试系统供应商)。

0.03wt％l-乳酸：使l-乳酸溶解在为细胞接种的培养基里使l-乳酸稀释到工作浓度0.03wt％。

0.1wt％l-岩藻糖：使l-岩藻糖溶解在为细胞接种的培养基里使l-岩藻糖稀释到工作浓度0.1wt％。

给药：待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，控制组不使用任何成分，0.03wt％l-乳酸组、0.1wt％l-岩藻糖组和0.03wt％l-乳酸+0.1wt％l-岩藻糖组均是以每孔2ml上述配置好的工作液给药，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中孵育培养24小时。

收样：孵育结束后，2ml/孔pbs清洗两次，每孔加入1mlrnaisoplus，吹打裂解细胞后，收样。

基因检测：按照rna反转录试剂盒(takaradrr037a)产品说明书，以rna为模板合成cdna，进行实时pcr反应，将加好的反应物体系放入实时荧光定量pcr仪(bio-rad)中，同时根据sybrpremixextaq^tmii荧光染料产品说明书设置反应程序，确认信息无误后运行程序检测基因表达。qrt-pcr数据导出后按照qrt-pcr数据分析文件采用2^-△△ct计算方法进行数据处理、分析与汇总。最终结果以qrt-pcr数据汇总文件的图表形式展示。

具体计算公式为：

结果统计分析：应用graphpadprismprogram软件作图，样品组与对照组采用t-test统计分析，p<0.05表示差异显著，p<0.01表示差异极显著。

结果

见附图1。

控制组中角质细胞pcna的表达归为1。l-乳酸和l-岩藻糖对角质细胞中pcna的表达有微弱的提升效果，但没有统计学显著差异。然而，当二者结合使用，pcna的表达增加了305％(p<0.01)，表明二者协同促进了角质细胞的分裂更新，即促进角质细胞分裂，以促进表皮层更新。

试验实施例2

l-乳酸与水解大米蛋白协同促进角质细胞分裂更新

材料

测试系统：

p4代角质形成细胞(人原代皮肤细胞，批号：ep20200519，ep20200708)，由广东博溪生物科技有限公司生产提供。

主要试剂：

pbs(索莱宝)、mtt(sigma)、dmso(sigma)、kc2500(广东博溪生物)、rnaisoplus(takara)、氯仿(国药集团)、无水乙醇(国药集团)、depc水(beyotime)、反转录试剂盒(takara)、荧光染料(takara)。

主要设备：

co2培养箱(thermo，150i)、超净工作台(苏州安泰，sw-cj-1f)、倒置显微镜(olympus，ckx41)、酶标仪(biotek，epoch)、高速冷冻离心机(长沙湘仪，h1850r)、普通pcr仪(bio-rad，tc-xp-g)、实时荧光定量pcr仪(bio-rad，cfx96)

l-乳酸购自corbion

水解大米蛋白购自silab公司，大米寡肽

方法

细胞接种

按2.5e5个/孔的接种密度接种角质形成细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中孵育过夜。

准备工作液：

控制组：角质细胞在正常状态下，即为接种有细胞的培养基(培养基购自测试系统供应商)。

0.03wt％l-乳酸：使l-乳酸溶解在为细胞接种的培养基里使l-乳酸稀释到工作浓度0.03wt％。

0.2wt％水解大米蛋白：使水解大米蛋白溶解在为细胞接种的培养基里使水解大米蛋白稀释到工作浓度0.2wt％。

给药：待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，控制组不使用任何成分，0.03wt％l-乳酸组、0.2wt％水解大米蛋白组和0.03wt％l-乳酸+0.2wt％水解大米蛋白组均是以每孔2ml上述配置好的工作液给药，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中孵育培养24小时。

收样：孵育结束后，2ml/孔pbs清洗两次，每孔加入1mlrnaisoplus，吹打裂解细胞后，收样。

基因检测：按照rna反转录试剂盒(takaradrr037a)产品说明书，以rna为模板合成cdna，进行实时pcr反应，将加好的反应物体系放入实时荧光定量pcr仪(bio-rad)中，同时根据sybrpremixextaq^tmii荧光染料产品说明书设置反应程序，确认信息无误后运行程序检测基因表达。qrt-pcr数据导出后按照qrt-pcr数据分析文件采用2^-△△ct计算方法进行数据处理、分析与汇总。最终结果以qrt-pcr数据汇总文件的图表形式展示。

具体计算公式为：

结果统计分析：应用graphpadprismprogram软件作图，样品组与对照组采用t-test统计分析，p<0.05表示差异显著，p<0.01表示差异极显著。

结果

见附图2。

控制组中角质细胞pcna的表达归为1。l-乳酸对角质细胞中pcna的表达有微弱的提升效果，但没有统计学显著差异。水解大米蛋白提升了43.9％的pcna的表达；当二者结合使用，pcna的表达增加了606％(p<0.01)，表明二者协同促进了角质细胞的分裂更新，即促进角质细胞分裂，以促进表皮层更新。

使用实施例1

精华水

上述配方1-4，分别在5℃、常温(25℃)和45℃放置3个月，均可通过本领域普遍使用的稳定性测试。

使用实施例2

面霜

上述配方1-4，分别在5℃、常温(25℃)和45℃放置3个月，均可通过本领域普遍使用的稳定性测试。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。