本发明属于医药配制品技术领域，具体涉及一种含有奥贝胆酸、甲钴胺、冰片的药物组合物及在治疗肝病药物中的应用。
背景技术：
非酒精性脂肪性肝(non-alcoholicfattyliverdisease，简称nafld)是一种与胰岛素抵抗(insulinresistance，ir)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，其病理学改变与酒精性肝病相似，但患者无过量饮酒史，疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝(nafl)、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，nash)及其相关肝硬化和肝细胞癌。nafl定义为有肝脏脂肪变性但无肝细胞受损(肝细胞气球样变)的证据；nash定义为有肝脏脂肪变性和肝细胞炎症损害伴或不伴有纤维化。
nafld不仅通过nash进展至纤维化和肝硬化，10～15年内肝硬化发生率高达15％～25％，可进一步发展为肝衰竭和原发性肝癌，增加了肝病相关的死亡率，更重要的是作为代谢综合征的组分，显著增加了代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉粥样硬化和心血管疾病的死亡率以及2型糖尿病的发病率。这些综合征为影响nash患者生活质量和预期寿命的重要因素。
奥贝胆酸(obeticholicacid)，又称int747或6α-乙基鹅去氧胆酸，化学名3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸，结构如式1所示，是intercept制药公司研制的新药，是半合成的鹅去氧胆酸(cdca)的衍生物，可激活法尼酯x受体(fxr)，具有抗淤胆、抗纤维化的效果，其在研适应症包括原发性胆汁性肝硬化(pbc)，非酒精性脂肪肝(nash)，原发性硬化性胆管炎(psc)，门静脉高压症和腹泻。其中原发性胆汁性肝硬化(pbc)fda于2016年5月29日批准上市，非酒精性脂肪肝(nash)ⅲ期临床试验结果显示具有良好的治疗效果。
甲钴胺是一种内源性的辅酶b12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用。化学名为：coα-[α-(5,6-二甲基苯并咪唑基)]-coβ-甲基钴酰胺，结构式如式2所示。甲钴胺比氰钴胺易于进入神经元细胞器，参与脑细胞和脊髓神经元胸腺嘧啶核苷的合成，促进叶酸的利用和核酸代谢，且促进核酸和蛋白质合成作用较氰钴胺强，能促进轴突运输功能和轴突再生，使链脲霉素诱导的糖尿病大鼠坐骨神经轴突骨架蛋白的运输正常化，对药物引起的神经退变具有抑制作用，如阿霉素、丙烯酰胺、长春新碱引起的神经退变及自发高血压大鼠神经疾病等。甲钴胺可以促进卵磷脂合成和神经元髓鞘形成，延迟的神经突触传递和神经递质减少恢复正常，通过提高神经纤维兴奋性恢复终板电位诱导，能使饲以胆碱缺乏饲料的大鼠脑内乙酰胆碱恢复到正常水平。
冰片，又称龙脑，分子式c10h18o，分子量154.25，结构式如式3所示:
冰片是一味常用的中药，为樟科植物樟新鲜枝、叶的提取加工品，主要成分为右旋龙脑(borneo1um)，其右旋龙脑含量不少于96％；艾片为菊科植物艾纳香新鲜叶提取物的结晶，主要为左旋龙脑，其左旋龙脑含量以龙脑计不少于85％；合成冰片是以松节油为原料经化学方法合成的精制品(又称为机制冰片)，为消旋体，含一定异龙脑(isoborneo1)，其龙脑含量不少于55％。
另外，右旋龙脑又称为(+)-2-莰醇，左旋龙脑又称为(-)-2-莰醇。
冰片味辛、苦，性微寒，归心、脾、肺经，具有开窍醒神、清热止痛的功能，用于热病神昏、痉厥、中风痰厥、喉痹齿痛、口疮痈疡、目赤等症。冰片具有“回苏开窍”、“芳香走帘”、“引药上行”之功，常作“引药”，以增加其他药物的治疗效果；《本草衍义》指出冰片“独行则势弱，佐使则有功”。
冰片中以天然冰片效果最佳，但由于资源限制，目前中成药中多使用合成冰片替代天然冰片。另外，由于天然冰片中右旋龙脑含量低限为96％，仍含有一定量杂质，可能对用药安全性产生影响，因此，人们又对天然冰片进行了提纯，目前市售有纯度≥98％的(+)-2-莰醇。
药典规定冰片的日服剂量为每天150-300mg，大剂量服用冰片可能引起烧心、恶心、腹痛、呕吐等胃肠道不良反应。
临床试验结果表明：奥贝胆酸的不良反应中，瘙痒是最为常见的，在一项临床试验中，口服10mg治疗组有68％、滴定10mg治疗组有56％的患者出现瘙痒。口服10mg治疗组有12％、滴定10mg治疗组有9％的患者停止使用研究药物。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种药物组合物，活性成分由奥贝胆酸、冰片或奥贝胆酸、冰片、甲钴胺组成，该药物组合物联合使用时具有协同作用，可以显著提高治疗效果，同时减少瘙痒等不良反应。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种药物组合物，活性成分由奥贝胆酸、冰片或奥贝胆酸、冰片、甲钴胺组成。
所述的药物组合物中，冰片含有任意含量的龙脑，优选为天然冰片、艾片、合成冰片、纯度≥98％的(+)-2-莰醇和(-)-2-莰醇，更优选为天然冰片和纯度≥98％的(+)-2-莰醇。
所述的药物组合物中，当活性成分，当活性成分由奥贝胆酸、冰片组成时，奥贝胆酸、冰片的重量比为5：(0.1-0.2)，优选重量比为5：(0.12-0.18)；更优选重量比5：(0.14-0.16)；最优选的重量比是5:0.14、5:0.15、5:0.16。
所述药物组合物中，当活性成分由奥贝胆酸、冰片、甲钴胺组成时，奥贝胆酸、冰片、甲钴胺的重量比为5：(0.1-0.2)：(0.02-0.04)优选重量比为5：(0.12-0.18)：(0.024-0.036)；更优选重量比5：(0.14-0.16)：(0.028-0.032)；最优选的重量比是5:0.14:0.028、5:0.15:0.03、5:0.16:0.032。
更进一步地，上述药物组合物还可以包含药学上可接受辅料，制备成口服制剂或注射剂；所述口服制剂包括但不限于胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液；所述注射剂包括但不限于注射用无菌粉末、水针注射液、氯化钠或葡萄糖静脉输液。
上述的药物组合物中，所述的口服制剂中包括添加剂，所述添加剂选自填充剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂、溶剂，矫味剂、稳定剂、着色剂、防腐剂中的至少一种。
所述的填充剂或稀释剂，包括糖类如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、糊精；淀粉类如淀粉、预胶化淀粉、α-淀粉、糊精；纤维素类如微晶纤维素、阿拉伯树胶、葫芦巴胶、右旋糖酐；无机盐类如硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙、轻质无水硅酸、合成硅酸铝、硅酸钙、硅铝酸镁。
所述的润滑剂或助流剂或抗粘剂，包括硬脂酸；硬脂酸金属盐如硬脂酸钙或硬脂酸镁；滑石粉；胶态氧化硅；微粉硅胶等。
所述的粘合剂，包括蒸馏水、不同浓度的乙醇、淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮以及类似于上述赋形剂的化合物。
所述的崩解剂，包括纤维素衍生物如低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙或交联羧甲基纤维素钠；交联聚乙烯吡咯烷酮；以及化学改性淀粉/纤维素，例如羧甲基淀粉或羧甲基淀粉钠。
所述的表面活性剂，包括吐温-80、卵磷脂、十二烷基硫酸钠、硬脂酸磺酸钠等。
所述的抗氧剂，包括亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、干燥亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、硫脲、磷酸、枸橼酸等。
所述的防腐剂或抗菌剂，包括苯甲酸与苯甲酸钠、山梨酸、乙醇、对羟基苯甲酸酯类(尼泊金类)、苯扎溴铵、邻苯基苯酚、苯甲醇、苯乙醇、山梨酸、桉叶油、桂皮油和薄荷油等。
所述的矫味剂，包括甜味剂如糖精钠、阿司帕坦、糖浆、甜菊甙、甘露醇、山梨醇、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、葡萄糖、蔗糖等；酸味调味剂如柠檬酸、苹果酸或酒石酸；以及芳香剂如小茴香油、薄荷油、薄荷醇、薄荷水、桂皮油、柠檬香精、柠檬油及各种味道的香料等。
本发明的上述药物组合物可以按照药剂学领域公知的惯常使用的任何方法利用所适宜的辅料制成上述适于临床给药的各种剂型。
本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的应用，即所述药物组合物在制备用于治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
进一步的，所述药物组合物在制备用于治疗非酒精性脂肪肝炎药物中的应用。
进一步的，所述的药物组合物在奥贝胆酸引发的瘙痒药物中的应用。
具体实施方式
本发明公开了一种药物组合物及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本发明的内容，结合药理学的相关原理，适当改进工艺参数来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
试验例1：nash治疗效果
1、动物及试验材料
1.1、试验动物：104只spf级雄性c57bl/6小鼠，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。实验动物饲养在spf动物房内，动物房通风良好，装备空调，温度保持在20～25℃，湿度保持在40％～70％，换气次数12～15次/h，明暗照明各12小时，实验动物自由进食和饮水，每只小鼠均用耳标标记。
1.2、受试药品：奥贝胆酸、冰片、甲钴胺、奥贝胆酸+冰片组合物、奥贝胆酸+冰片+甲钴胺组合物，模型对照为0.9％生理盐水。
1.3、试验分组：
随机取8只作为空白对照组，给予mcs(methionine-andcystinesupplementdiet蛋氨酸-胆碱缺乏对照饲料，购自南通特洛菲饲料科技有限公司)饲料配对饲养，空白对照组小鼠饲料按照模型组前48小时食量给予。
其余96只小鼠给予mcd(methionine-andcystinedeficientdiet，蛋氨酸-胆碱缺乏饲料，购自南通特洛菲饲料科技有限公司)饲料复制非酒精性脂肪肝炎模型。模型复制给予第一周适应性饲养，实验开始第1、2天(mcd饲料：mcs饲料＝1:2)，实验开始第3、4天(mcd饲料：mcs饲料＝1:1)，实验开始第5、6天(mcd饲料：mcs饲料＝2:1)，实验开始第7天及以后完全给以mcd饲料。所有48小时后未食用完实验饲料丢弃处理。
造模2周后，将96只动物根据体重采用随机区组方法分成12组：即①模型对照组、②奥贝胆酸5mg·kg-1组、③冰片0.15mg·kg-1组、④甲钴胺0.03mg·kg-1组、⑤奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、⑥奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、⑦奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、⑧奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组、⑨奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、(10)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、(11)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、(12)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组。空白对照组和模型组灌胃给予0.9％生理盐水。
1.4、试验设计：
每日一次，给药4周后，用2％戊巴比妥钠麻醉动物，下腔静脉取血后分离血清，测定ast(谷草转氨酶)和alt(谷丙转氨酶)。采集的肝脏组织右叶沿正中线剖开，一部分沿外缘切取2块约5mm×5mm大小的组织块置于10％中性缓冲福尔马林溶液中固定，将所有组动物的肝脏组织从10％中性缓冲福尔马林溶液固定液中移出，进行取材、脱水、石蜡包埋、切片，he染色和镜检。另一部分沿外缘切取2块约5mm×5mm大小的组织块于液氮中固定，将所有组动物的肝脏组织从液氮中取出，进行冰冻切片(10μm厚)，依照常规方法，60％异丙醇漂洗2min、油红工作液染色10min、60％异丙醇分化漂洗，水洗、fluoromount-g水溶性封片剂封片。
1.5、评分标准：
组织病理学评分标准依据美国国立卫生研究院非酒精性脂肪性肝炎临床研究网病理工作组2005年所制定的标准，即非酒精性脂肪性肝病(nafld)活动度积分(nafldactivityscore，nas)。具体评分标准：该组织学评分系统包括14项病理改变，其中4项指标进行了半定量评估：肝脂肪变(steatosis)：0～3分、小叶内炎症(hepatocyteballooning)：0～2分、肝细胞气球样变(lobularinflammation)：0～2分、肝纤维化：0～4分，其余指标“有或无(1/0)”表示。根据前3项计算nas值。使用spss软件的单因素方差分析(anova)进行组间比较。
2、试验结果
2.1、alt水平
4周之后，alt水平结果见表1。
表1：alt水平结果表
注：※※p<0.01，与正常对照组(野生型c57bl/6)相比较
注：*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组相比较
注：#p<0.05，##p<0.01，与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较
注：&p<0.05，&&p<0.01，与相同剂量的奥贝胆酸+冰片组相比较，如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.030mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组相比
由表1可知：
(1)与正常对照组(野生型c57bl/6)比较，模型对照组alt水平显著增高(p<0.01)，具有非常显著的差异，说明nash模型成功。
(2)冰片0.15mg·kg-1组、甲钴胺0.03mg·kg-1组对nash模型小鼠的alt水平无影响，与模型对照组相比较，不具有显著性差异(p>0.05)，说明冰片0.15mg·kg-1或甲钴胺0.03mg·kg-1对nash无治疗作用。
(3)奥贝胆酸5mg·kg-1显著降低nash模型小鼠的alt水平，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1对nash具有治疗作用。
(4)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的alt水平，与nash小鼠模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物对nash具有治疗作用。
(5)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组不显著性差异(p＞0.05)；奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1与冰片0.10mg·kg-1不具有协同作用，而与与冰片0.14-0.16mg·kg-1具有协同作用，显著提高奥贝胆酸的降低alt水平的治疗效果。
(6)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的alt水平，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)。
(7)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组不具有显著性差异(p＞0.05)，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)。
(8)与相同剂量的奥贝胆酸+冰片的组合物组相比较，奥贝胆酸+冰片+甲钴胺组合物组均不具有显著性差异(p＞0.05)，如与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组相比，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组在降低alt水平方面不具有显著性差异((p＞0.05)。
2.2、ast水平
4周之后，ast水平结果见表2。
表2：ast水平结果表
注：※※p<0.01，与正常对照组(野生型c57bl/6)相比较
注：*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组相比较
注：#p<0.05，##p<0.01，与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较
注：&p<0.05，&&p<0.01，与相同剂量的奥贝胆酸+冰片组相比较；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.030mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组相比
由表2可知：
(1)与正常对照组(野生型c57bl/6)比较，模型对照组ast水平显著增高(p<0.01)，具有非常显著的差异，说明nash模型成功。
(2)冰片0.15mg·kg-1组、甲钴胺0.03mg·kg-1组对nash模型小鼠的ast水平无影响，与模型对照组相比较，不具有显著性差异(p>0.05，说明冰片0.15mg·kg-1或甲钴胺0.03mg·kg-1对nash无治疗作用。
(3)奥贝胆酸5mg·kg-1显著降低nash模型小鼠的ast水平，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1对nash具有治疗作用。
(4)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的ast水平，与nash小鼠模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物对nash具有治疗作用。
(5)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组不显著性差异(p＞0.05)；奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1与冰片0.10mg·kg-1不具有协同作用，而与与冰片0.14-0.16mg·kg-1具有协同作用，显著提高奥贝胆酸的降低ast水平的治疗效果。
(6)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的ast水平，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)。
(7)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组不具有显著性差异(p＞0.05)，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)。
(8)与相同剂量的奥贝胆酸+冰片的组合物组相比较，奥贝胆酸+冰片+甲钴胺组合物组均不具有显著性差异(p＞0.05)。
2.3、nash评分
4周之后，nash评分结果见表3。
表3：nash水平结果表
注：※※p<0.01，与正常对照组(野生型c57bl/6)相比较
注：*p<0.05，**p<0.01，与模型对照组相比较
注：#p<0.05，##p<0.01，与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较
注：&p<0.05，&&p<0.01，与相同剂量的奥贝胆酸+冰片组相比较；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.030mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组相比
由表3可知：
(1)与正常对照组(野生型c57bl/6)比较，模型对照组nash评分显著增高(p<0.01)，具有非常显著的差异，说明nash模型成功。
(2)冰片0.15mg·kg-1组、甲钴胺0.03mg·kg-1组对nash模型小鼠的nash评分无影响，与模型对照组相比较，不具有显著性差异(p>0.05，说明冰片0.15mg·kg-1或甲钴胺0.03mg·kg-1对nash无治疗作用。
(3)奥贝胆酸5mg·kg-1显著降低nash模型小鼠的nash评分，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1对nash具有治疗作用。
(4)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的nash评分，与nash小鼠模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物对nash具有治疗作用。
(5)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组不显著性差异(p＞0.05)；奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸5mg·kg-1与冰片0.10mg·kg-1不具有协同作用，而与与冰片0.14-0.16mg·kg-1具有协同作用，显著提高奥贝胆酸对nash的治疗效果。
(6)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组显著降低nash模型小鼠的nash评分，与模型对照组相比较，具有显著性差异(p<0.01)。
(7)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组不具有显著性差异(p＞0.05)，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)。
(8)与相同剂量的奥贝胆酸+冰片的组合物组相比较，奥贝胆酸+冰片+甲钴胺组合物组均不具有显著性差异(p＞0.05)。
试验例2：瘙痒模型
1.1、试验动物：同试验例1。
1.2、受试药品：同试验例1。
1.3、试验分组：
将104只小鼠随机分成12组，分别为即①模型对照组、②奥贝胆酸5mg·kg-1组、③冰片0.15mg·kg-1组、④甲钴胺0.03mg·kg-1组、⑤奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、⑥奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、⑦奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、⑧奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组、⑨奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、(10)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、(11)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、(12)奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组、(13)空白对照组。空白对照组和模型组灌胃给予0.9％生理盐水。
1.4、试验设计：
1.4、试验设计：
每天给药1次，连续给药28天。
于给药第14日和第28日给药2h后，除空白对照组外，颈背部皮下注射48/80化合物(刺激肥大细胞脱颗粒)10μg/只，空白对照组颈背部注射同样体积pbs缓冲液。皮下注射48/80化合物后，每只小鼠单笼录像30min，记录搔抓次数，并进行统计分析。
注意：录像时注意房间关闭，杜绝任何干扰，以免影响小鼠行为。使用spss软件的单因素方差分析(anova)进行组间比较。
2、实验结果
注：※※p<0.01，与正常对照组(野生型c57bl/6)相比较
注：#p<0.05，##p<0.01，与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较
注：&p<0.05，&&p<0.01，与相同剂量的奥贝胆酸+冰片组相比较；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.030mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组相比；如奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组与奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组相比
由表4可知：
(1)与正常对照组(野生型c57bl/6)比较，模型对照组第14天和第17天的抓挠次数显著增高(p<0.01)，具有非常显著的差异，说明瘙痒模型成功。
(2)冰片0.15mg·kg-1组、甲钴胺0.03mg·kg-1组对瘙痒模型小鼠的抓挠次数无影响，与模型对照组相比较，不具有显著性差异(p>0.05)。
(3)奥贝胆酸5mg·kg-1增加了，与模型对照组相比较，奥贝胆酸5mg·kg-1第14天和第17天的抓挠次数增加，说明奥贝胆酸5mg·kg-1有引发瘙痒的副作用。
(4)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)组合物组均不具有显著的差异(p＞0.05)。说明奥贝胆酸与冰片的组合物并不能减少奥贝胆酸引发的瘙痒。
(5)与奥贝胆酸5mg·kg-1组相比较，奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.10mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.14mg·kg-1)+甲钴胺(0.028mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.15mg·kg-1)+甲钴胺(0.03mg·kg-1)组合物组、奥贝胆酸(5mg·kg-1)+冰片(0.16mg·kg-1)+甲钴胺(0.032mg·kg-1)组合物组具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)：说明奥贝胆酸、冰片、甲钴胺的组合物能能显著降低奥贝胆酸引发的瘙痒，具有显著的差异。
(6)与相同剂量的奥贝胆酸+冰片的组合物组相比较，奥贝胆酸+冰片+甲钴胺组合物组均具有具有显著(p<0.05)或非常显著的差异(p<0.01)，说明奥贝胆酸、冰片、甲钴胺的组合物能能显著降低奥贝胆酸、冰片组合物引发的瘙痒，具有显著的差异。