一种戒毒用中药组合物

本发明属于药物技术领域，特别涉及一种戒毒用中药组合物。

背景技术：

吸毒成瘾，尤其是阿片类药物成瘾是全球主要的药物滥用问题，已经成为主要的公共危害。吸毒者反复使用毒品会促使他们在戒毒后重新陷入寻求毒品的境地。上瘾的药物包括麻醉药和促进依赖性的精神药物。尽管阿片类药物可以有效治疗疼痛，但它具有很高的成瘾性。上瘾的药物改变中枢神经系统(cns)中的神经元细胞蛋白，包括g蛋白，受体，蛋白激酶，并导致成瘾。此外，去甲肾上腺素，多巴胺(da)，γ-氨基丁酸，谷氨酸、和其他物质也参与了阿片类药物的成瘾过程，并伴随着cns神经元在分子水平上的变化。研究还表明，da系统参与了吗啡的心理依赖性作用，从前额叶皮层和杏仁核到中脑角膜缘的奖励途径的谷氨酸能投射在调节多巴胺神经元中起作用。此外，这些da和谷氨酸系统之间的相互作用对于阿片奖励的发展至关重要。

停止对药物成瘾的行为和心理后果是当前戒毒研究工作者的重点。排毒使用“替代”和“阻断”。“替代”用“合法，低成瘾性”的“药物”(例如美沙酮)替代药物代替海洛因，“阻断”使用的是阿片类拮抗剂，可以阻断阿片类药物的欣快作用并降低药物的正强化作用，但治疗依从性较差。两种方法都有起效快的作用，但是它们的缺点是安全性差，复发率高，固有的成瘾性和不良的副作用。例如，美沙酮替代疗法成功排毒后的复发率高达93.4％，这可能导致终身依赖。

尚未有研究表明，木瓜、银杏叶及蜂胶其组合中药制剂在戒毒动物模型中具有一定的药理作用。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种新的戒毒用中药组合物。本发明提供的戒毒用中药组合物，按照质量份的组成为：木瓜总皂苷1～6份、银杏叶提取物1～6份、蜂胶1～6份。

戒毒用中药组合物按照质量份的组成优选为：木瓜总皂苷3份、银杏叶提取物3份、蜂胶1份。

木瓜总皂苷的制备方法步骤如下：

(1)以木瓜成熟干燥的果实为原料，破碎至24目以下后投入提取罐中；加入乙醇，采取减压加热回流提取，真空度-0.08～-0.1mpa，温度60℃，进行提取；溶媒体积用量为原料的5倍，提取两次，每次提取时间60min；

(2)合并提取液减压浓缩，浓缩条件：真空度范围-0.08～-0.1mpa，温度60℃，浓缩至每升含1kg生药；

(3)浓缩后用沉降离心机转速3000r/min，离心时间300min条件下沉降分离；

(4)大孔阴离子交换树脂纯化：沉降分离后的上清液通过树脂柱，用纯化水洗至流出液呈中性，然后以50％乙醇溶液进行洗脱，收集该梯度乙醇洗脱液3倍柱体积；树脂与原料药质量比(1:10)；

(5)浓缩–干燥：将乙醇洗脱液在60℃条件下，真空减压浓缩至相对密度1.08～1.10后，将浓缩液放冷10h，过滤，最后经过70℃以下真空干燥，可得含齐墩果酸量不低于50％的木瓜总皂苷。

银杏叶提取物的制备方法为：取银杏叶，粉碎成最粗粉，用药材10倍量35％乙醇加热回流提取二次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至相对密度含生药1g/ml，加载大孔树脂柱，用2倍柱体积纯化水冲洗后，再用30％、50％、80％乙醇依次洗脱，收集上述醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度1.05～1.10，喷雾干燥，即得。

蜂胶为酒制蜂胶，为原蜂胶的95％乙醇提取物，制备方法为：取原蜂胶，粉碎成最粗粉，加8倍量95％乙醇冷浸24小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷冻干燥，即得。

中药组合物的制备方法：取木瓜总皂苷、银杏叶提取物、酒制蜂胶三种提取物的细粉按照3:3:1(重量比)的比例，混合均匀，即得。

有益效果：中药组合物随着剂量提高，作用也逐渐优于木瓜总皂苷、银杏叶提取物和蜂胶的单味给药，包括改善大鼠戒断症状，升高大鼠ne、5-ht含量，降低内啡肽含量，以及减少吗啡依赖小鼠戒断跳跃反应次数，增加吗啡成瘾小鼠体重及抗氧化水平等。

本发明专利是在江苏省高校自然科学基金资助(编号19kjb360001)下完成的。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明进行详细的说明。

实施例1

中药组合物的制备：取木瓜总皂苷、银杏叶提取物、酒制蜂胶三种提取物的细粉按照3:3:1(重量比)的比例，混合均匀，即得。。

对照品

盐酸可乐定片，常州制药厂有限公司产品，国药准字h32021681，口服，75μg/片，常用剂量为0.3～0.9mg，取每日0.9mg计算，为每日12片，批号11030714。

济泰片，武汉鄂中药业有限公司产品，国药准字z20020046，口服，片重0.4g，每日12片，即每日4.8g，批号110801。

使用时按剂量以蒸馏水配制成所需浓度，4℃冰箱保存。

应用实验

观察中药组合物(口服)对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断的影响，同时考察中药组合物的量效关系。

一、实验试剂及实验仪器

1、试剂

盐酸吗啡注射液，东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号110301-1。

盐酸纳络酮注射液，北京凯因科技股份有限公司，批号20110401。

去甲肾上腺素(norepinephrine)elisa试剂盒，上海西唐生物科技有限公司，批号：1204181。

五羟色胺(serotonin)elisa试剂盒，上海西唐生物科技有限公司，批号：1204271。

内啡肽(endorphin-β)elisa试剂盒，上海西唐生物科技有限公司，批号：1205171。

2、仪器

jj3000动物电子秤，g&g公司产品；bs224s电子天平(1/万)，德国sartorius产品；hh-6数显恒温水浴锅，金坛市富华仪器有限公司；bio-rad680酶标仪，美国伯乐公司。

二、实验方法

1、动物分组

取spf级sd大鼠90只，雌雄各半，体重180～220g，按体重随机分为9组，分别为正常对照组、模型对照组、可乐定组、济泰片组、中药组合物超高、高、中、低、超低剂量组。

2、剂量设置

盐酸可乐定片，根据药品说明书标示以每日0.9mg临床日用量为基础，参考《中药药理研究方法学》中剂量换算方法“体表面积比”换算动物临床等效剂量，以此临床等效剂量作为盐酸可乐定片大鼠药效学实验剂量。盐酸可乐定片大鼠药效学实验剂量为0.081mg·kg^-1，实验时以蒸馏水按剂量配制，4℃冰箱保存。

济泰片，以药品说明书标示每日12片(4.8g)临床日用量为基础，参考《中药药理研究方法学》中剂量换算方法“体表面积比”换算动物临床等效剂量，以此临床等效剂量作为济泰片大鼠药效学实验剂量。济泰片大鼠药效学实验剂量为0.432g·kg^-1，实验时以蒸馏水按剂量配制，4℃冰箱保存。

中药组合物，设计超高、高、中、低、超低剂量组，剂量分别为400、200、100、50、25mg·kg^-1(ig)。实验时以蒸馏水按剂量配制成所需浓度，4℃冰箱保存。

3、实验统计方法

所有计量资料以均数加减标准差表示。多组间均数的比较采用单因素方差分析(one-wayanova)，组间均数两两比较，方差齐时采用snk法；方差不齐时采用dunnett’st3法。由spssl5.0软件完成，α＝0.05。

4、给药方法

供试品药物各剂量组及阳性对照药按剂量灌胃给药，给药体积10ml·kg^-1，每天1次，正常对照组、模型对照组同法灌胃给予蒸馏水10ml·kg^-1。

5、测定方法

5.1吗啡依赖大鼠模型的建立

取spf级sd大鼠90只，雌雄各半，随机分为2组，分别为正常对照组和吗啡依赖模型组，正常对照组10只大鼠，雌雄各半，吗啡依赖模型组80只大鼠，雌雄各半。吗啡依赖模型组大鼠按剂量递增法复制吗啡依赖大鼠模型，皮下注射(sc)盐酸吗啡，每12小时(8:00am，8:00pm)一次，剂量从每次5mg·kg^-1起，逐次增加到每次80mg·kg^-1，续用至第9天，注射量为0.2ml·100g^-1。正常对照组大鼠皮下注射(sc)等体积生理盐水。

5.2药物对吗啡依赖大鼠催促戒断症状的治疗作用

于实验的第10天，吗啡依赖模型组大鼠停用吗啡，进行纳洛酮(4.0mg·kg^-1，ip)催促戒断试验，观察30min内大鼠的戒断反应及催促前后(1h)体重变化情况并进行评分，正常对照组大鼠腹腔注射(ip)等体积生理盐水，同法进行评分，根据评分数值统计分析吗啡依赖模型是否形成。

如模型成功，根据评分数值把吗啡依赖模型组大鼠分为下列各组：模型对照组、可乐定组、济泰片组、中药组合物超高、高、中、低、超低剂量组,每组10只大鼠，雌雄各半。各组分别给予不同处理：①正常对照组，灌胃给予等体积蒸馏水(ig)；②模型对照组，灌胃给予等体积蒸馏水(ig)；③可乐定组，灌胃给予可乐定0.081mg·kg^-1(ig)；④济泰片组，灌胃给予济泰片0.432g·kg^-1(ig)；⑤、⑥、⑦、⑧、⑨组为中药组合物超高、高、中、低、超低剂量组，剂量分别为400、200、100、50、25mg·kg^-1(ig)，按上述剂量灌胃给予中药组合物(ig)。各组连续给药5天。大鼠饮水、进食自由。在治疗d1、d3、d5给药2h后给予纳洛酮(4.0mg·kg^-1，ip)催瘾,观察30min内大鼠的戒断反应及催促前后(1h)体重变化情况并进行评分。

5.3戒断症状评分

大鼠催促戒断出现的各种戒断症状分别按改进的柳田知司评分标准进行评分：异常姿势(2分)；高度激惹：触碰(1分)、靠近(2分)；意向性震颤：间断性(1分)、连续性(2分)；咬牙：间断性(0.5分)、连续性(1分)；烦躁不安：轻度(0.5分)、明显(1分)；流泪(4分)；腹泻：软便(4分)、不成形(8分)；流口水：轻度(1分)、明显(2分)；体重减轻：2％(0分)、2％-4％(5分)、4％-6％(10分)、6％-8％(15分)。

5.4每只大鼠戒断症状分值为各项症状分值总和。

脑部额叶皮质(pfc)ne、5-ht、内啡肽含量测定

d5给药观察后大鼠迅速断头处死，参照大鼠脑立体定位图谱，冰台上迅速分离额叶皮质(pfc)脑组织，精确称质量，置入组织匀浆器中，加入0.1mol·l^-1高氯酸溶液冰浴下制备10％匀浆液，高速冷冻离心机15000r·min^-14℃离心30min，取上清液置入1.5ml离心管，于-80℃备用。按ne、5-ht、内啡肽试剂盒说明书进行测定。

三、实验结果

1、中药组合物对吗啡依赖大鼠戒断评分值的影响

表1给药前吗啡依赖大鼠戒断评分值(n＝10)

注：与正常对照组相比，*p<0.05，**p<0.01；与模型对照组比较，#p<0.05，##p<0.01。

表1显示，与正常对照组比较，其余各组给药前大鼠戒断评分值均显著增大(p<0.01)；与模型对照组比较，各药物组给药前大鼠戒断评分值均基本一致无明显差异(p>0.05)。提示吗啡依赖大鼠模型形成。

表2中药组合物对吗啡依赖大鼠戒断评分值的影响(n＝10)

注：与正常对照组相比，*p<0.05，**p<0.01；

与模型对照组比较，#p<0.05，##p<0.01；

与可乐定片组比较，△p<0.05，△△p<0.01；

与济泰片组比较，☆p<0.05，☆☆p<0.01。

表2表明，与正常对照组比较，d1、d3、d5期模型对照组戒断评分值均显著升高(p<0.01)；与模型对照组比较，中药组合物超高、高、中、低、超低剂量组大鼠在d1、d3、d5期戒断评分值均明显降低(p<0.01或p<0.05)。

与可乐定片组比较，d1期中药组合物中、低、超低剂量组大鼠戒断评分值均明显升高(p<0.01)，d3、d5期中药组合物超低剂量组大鼠戒断评分值明显升高(p<0.05或p<0.01)，其余组别无明显差异(p>0.05)。

与济泰片组比较，d1期中药组合物超高、高、中剂量组大鼠戒断评分值均明显降低(p<0.01或p<0.05)，d3期中药组合物超高剂量组大鼠戒断评分值明显降低(p<0.05)。中药组合物随着剂量提高，作用逐渐优于济泰片。

中药组合物随着剂量提高，作用也逐渐优于木瓜总皂苷、银杏叶提取物和蜂胶的单味给药。说明配伍组合对大鼠戒断的治疗作用具有一定的改善效果。

2、中药组合物对吗啡依赖大鼠额叶皮质ne、5-ht、内啡肽含量的影响

表3中药组合物对吗啡依赖大鼠额叶皮质ne、5-ht、内啡肽含量的影响(n＝10)

注：与正常对照组相比，*p<0.05，**p<0.01；

与模型对照组比较，#p<0.05，##p<0.01；

与可乐定片组比较，△p<0.05，△△p<0.01；

与济泰片组比较，☆p<0.05，☆☆p<0.01。

表3表明，与正常对照组比较，模型对照组大鼠ne、5-ht含量显著升高(p<0.01)，内啡肽含量显著减少(p<0.01)。与模型对照组比较，中药组合物超高、高、中、低、超低剂量组大鼠ne、5-ht含量明显降低(p<0.01或p<0.05)，内啡肽含量显著增加(p<0.01)。

与可乐定片组比较，中药组合物低、超低剂量组大鼠ne含量明显升高(p<0.01)，其余均无明显差异(p>0.05)。

与济泰片组比较，中药组合物超高、高、中剂量组大鼠ne含量均明显降低(p<0.01或p<0.05)，其余均无明显差异(p>0.05)。但随剂量提高作用逐渐优于济泰片。

与木瓜总皂苷、银杏叶提取物和蜂胶单味给药组相比，中药组合物的ne、5-ht含量显著升高，内啡肽含量也明显降低。说明配伍后对ne、5-ht、内啡肽含量指标的改善具有一定的效果。

实施例2

中药组合物的制备：取木瓜总皂苷、银杏叶提取物、酒制蜂胶三种提取物的细粉按照3:3:1(重量比)的比例，混合均匀，即得。

应用实验

观察中药组合物(口服)对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断的影响，同时考察中药组合物的量效关系。

一、实验试剂及仪器同实施例1。

二、实验方法

1、动物分组

取spf级nih小鼠70只，雌雄各半，体重18～22g，按体重随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、可乐定组、济泰片组、中药组合物高、中、低剂量组。

2、剂量设置

盐酸可乐定片，根据药品说明书标示以每日0.9mg临床日用量为基础，参考《中药药理研究方法学》中剂量换算方法“体表面积比”换算动物临床等效剂量，以此临床等效剂量作为盐酸可乐定片小鼠药效学实验剂量。盐酸可乐定片小鼠药效学实验剂量为0.117mg·kg^-1，实验时以蒸馏水按剂量配制，4℃冰箱保存。

济泰片，以药品说明书标示每日12片(4.8g)临床日用量为基础，参考《中药药理研究方法学》中剂量换算方法“体表面积比”换算动物临床等效剂量，以此临床等效剂量作为济泰片小鼠药效学实验剂量。济泰片小鼠药效学实验剂量为0.624g·kg^-1，实验时以蒸馏水按剂量配制，4℃冰箱保存。

中药组合物，设计中药组合物小鼠药效学高剂量为200、100、50mg·kg^-1。实验时以蒸馏水按剂量配制成所需浓度，4℃冰箱保存。

3实验统计方法

所有计量资料以均数加减标准差(x±s)表示。多组间均数的比较采用单因素方差分析(one-wayanova)，组间均数两两比较，方差齐时采用snk法；方差不齐时采用dunnett’st3法。由spssl5.0软件完成，α＝0.05。

4给药方法

供试品药物各剂量组及阳性对照药按剂量灌胃给药，给药体积20ml·kg^-1，每天1次，正常对照组、模型对照组同法灌胃给予蒸馏水20ml·kg^-1。

5测定方法

取spf级nih小鼠70只，雌雄各半，18～22g，随机分为7组，为正常对照组、模型对照组、可乐定片组、济泰片组、中药组合物高、中、低剂量组。除正常对照组外其余各组小鼠均皮下注射吗啡，正常对照组皮下注射等体积0.9％氯化纳注射液，连续6天，第1天剂量5mg/kg，以后每天递增一倍量，第6天达到160mg/kg，建立小鼠吗啡依赖模型。同时，各给药组按剂量灌胃给药，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水。末次给药45min后各组小鼠均腹腔注射纳洛酮6mg/kg，测定30min内小鼠出现的跳跃反应次数，并比较跳跃反应前后1h的体质量变化。

体质量下降＝注射纳洛酮前小鼠体质量-跳跃反应后小鼠体质量

6血清sod、mda、gsh-px含量

末次给药后24h，取小鼠血清，保存备用。按照试剂盒方法(elisa法)测定血清中的超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，sod)、丙二醛(malonicdialdehyde，mda)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase，gsh-px)含量。

三、实验结果

表4中药组合物对吗啡依赖小鼠催促戒断的影响(n＝10)

注：与正常对照组相比，*p<0.05，**p<0.01；

与模型对照组比较，#p<0.05，##p<0.01；

与可乐定片组比较，△p<0.05，△△p<0.01；

与济泰片组比较，☆p<0.05，☆☆p<0.01。

表4表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠跳跃反应次数显著增多(p<0.01)，体质量下降显著增大(p<0.01)；与模型对照组比较，中药组合物高、中、低剂量组小鼠跳跃反应次数明显减少(p<0.01或p<0.05)，体质量下降明显减少(p<0.01)。

与可乐定片组比较，中药组合物高剂量组小鼠跳跃反应次数明显减少(p<0.05)，体质量下降明显减少(p<0.01)。

与济泰片组比较，中药组合物高剂量组小鼠跳跃反应次数明显减少(p<0.05)，体质量下降明显减少(p<0.01)。

结果表明，中药组合物高、中、低剂量对减少吗啡依赖小鼠戒断跳跃反应次数、减少体质量下降有一定量效关系，作用优于可乐定片和济泰片。

中药组合物高、中、低剂量对减少吗啡依赖小鼠戒断跳跃反应次数、减少体质量下降的影响明显优于木瓜总皂苷、银杏叶提取物和蜂胶的单味给药。说明配伍后的中药组合物对戒毒具有一定的治疗效果。

表5各小组小鼠血清中sod、mda、gsh-px水平比较

注：与正常对照组相比，*p<0.05，**p<0.01；

与模型对照组比较，#p<0.05，##p<0.01；

与可乐定片组比较，△p<0.05，△△p<0.01；

与济泰片组比较，☆p<0.05，☆☆p<0.01。

表5表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠sod、gsh-px活性降低，而使mda含量明显升高；与模型对照组比较，中药组合物高、中、低剂量组sod、gsh-px活性明显升高，而使mda含量明显降低。

与可乐定片组比较，中药组合物高、中、低剂量组sod、gsh-px活性明显升高(p<0.05)，而使mda含量明显降低(p<0.05)。

与济泰片组比较，中药组合物高、中、低剂量组sod、gsh-px活性明显升高(p<0.05)，而使mda含量明显降低(p<0.05)。

结果表明，中药组合物高、中、低剂量对升高sod、gsh-px活性，而降低mda含量作用有一定量效关系，其作用优于可乐定片和济泰片。

同时，由表5可以看出，中药组合物高、中、低剂量组的sod、gsh-px活性高于单用木瓜总皂苷或银杏叶提取物或蜂胶，而mda含量明显低于单用木瓜总皂苷或银杏叶提取物或蜂胶，说明配伍后的中药组合物在抗氧化水平上明显具有优势。